GUIA de BiologiaCelMol2014-I

1
ASOCIACIN
UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

SEMESTRE 2014 I

I CICLO

GUIA DE PRCTICA DE BIOLOGIA CELULAR Y
MOLECULAR

PROFESOR COORDINADOR:
Mg. EDITH RODRIGUEZ QUISPE

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ASOCIACIN UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
CURSO DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

PRACTICA N1

APLICACIN DEL MTODO CIENTFICO

I. OBJETIVOS:

Dar a conocer los lineamientos bsicos del mtodo cientfico y su aplicacin
Adiestrar al estudiante en el uso del mtodo cientfico para usarlos en el campo de la medicina.

II. MATERIALES:

Lectura (s )seleccionada (s) a partir de revista especializada.

III PROCEDIMIENTO.
- Hacer una descripcin de las diferentes etapas que comprende en mtodo cientfico.
- Leer el artculo seleccionado rpidamente para tener una idea general del mismo.
- Proceda a leer el artculo cuidadosamente y analizarlo con el propsito de establecer lo siguiente:
1.Reconocimiento del problema planteado
2. Formulacin de la hiptesis
3.Formulacin de objetivos y mtodos
4.Prueba de hiptesis mediante la experimentacin
5.Anlisis de resultados y conclusiones.

IV.RESULTADO
- Entregar el reporte del artculo evaluado considerando todos los pasos del mtodo cientfico.

Artculo de la Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud
Pblica 2013 30(4):616-20.
Artculo de la Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud
Pblica 2008 25(2):250-52.

3


PRACTICA N2

LABORATORIO: INSTRUMENTAL Y BIOSEGURIDAD

III. OBJETIVOS:

Dar a conocer los lineamientos bsicos de organizacin, instrumental y seguridad en el laboratorio sea de
anlisis clnico o de investigacin.

IV. MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO:

Tubos de ensayo
Placas de Petri
Pipetas
Baguetas o varilla de vidrio
Matraces(Erlenmeyer, Fiolas)
Probetas
Propipeta
Beaker (vasos de precipitacin)
Pipetas (graduadas y volumtricas
Mecheros de Bunsen y de alcohol
Asas de Kolle o asa de siembra
Balanza analtica
Estufa o incubadora
Espectrofotmetros o colormetros
pH metros

4

5

V. PROCEDIMIENTO:
A) Descripcin de tipos de Laboratorio : clnico, investigacin y acadmico

1. ORGANIZACIN:
Generalmente los laboratorios funcionan de acuerdo a las actividades que ha de realizar se debe
considerar reas, estructura y diseo interior, considerando lo siguiente:
Mesas de trabajo y repisa sobre la mesa
Mesa para instrumentales (balanza, microscopio, pH metro, etc.)
Armarios para reactivos y material de vidrio
Extractor de gases.

2. SECCIONES:

Cada laboratorio puede presentar una o varias secciones dependiendo de la naturaleza de la actividad.
En forma general el laboratorio debe contar reas fsicas o secciones:
Toma de muestra
Separacin y clasificacin de muestras
Lavado y esterilizacin
Almacn
Sala de trabajo

B) Clasificacin y Descripcin y Cuidados de los Materiales de ms Uso en el Laboratorio.
Con la ayuda del docente proceda a la descripcin y clasificacin y dibujo de la mesa; los materiales
pueden ser clasificados como: Volumtricos, Recipiente, Soporte, de uso especfico.

.1. Cuidado del material de vidrio:
Todo material de vidrio debe estar ubicado en una zona especfica y codificados. El material a guardar
debe estar completamente limpio, para lo cual debe ser sometido a un riguroso lavado, dependiendo del
caso se usar mezcla sulfocrmica o agua regia debiendo ser sometidos posteriormente a numerosos
enjuagues con agua corriente y finalmente con agua destilada o bidestilada, y otros podrn ser
autoclavados. Los materiales sern sometidos a temperaturas de 37- 45 C para el secado respectivo.

3.2. Cuidado de equipos:
Todo equipo o instrumental debe estar ubicado en una zona de poco transito, alta iluminacin y en una
mesa slida. Para el manejo de los mismos se debe tener conocimiento de la manipulacin debindose
contar con el manual respectivo. Antes de comenzar a operar un equipo verificar el voltaje, resistencia y
amperaje del equipo.
Terminado el trabajo el instrumental debe quedar limpio y apagado. Anotar en el cuaderno de control la
fecha, hora de inicio y trmino de uso del equipo.

C)BIOSEGURIDAD:

La seguridad en el laboratorio es de alta responsabilidad. Cualquier actividad en un laboratorio tiene
riesgos potenciales. Las reglas generales son:
1. El laboratorio NO es un lugar para correr, empujar y bromear.
2. Aprende donde esta y como se usa el equipo de seguridad.
3. Lee todas las instrucciones para la actividad ANTES de empezar a trabajar. Pon atencin a las
notas que indican PRECAUCION.
4. Cualquier accidente, informar inmediatamente al responsable del laboratorio.
5. No comer ni beber en el laboratorio. No probar ninguna sustancia que se use en el laboratorio.
Lavarse las manos antes y despus de cualquier actividad.
6. Llevar a cabo solamente aquellas actividades que se nos asigna. Nunca trabajes solo en el
laboratorio
7. Mantener el rea de trabajo limpia: sin libros, ni papeles, ni equipo alguno innecesario.
8. Asegurarse de apagar las salida de gas, mecheros, hornillas y de cerrar todas las llaves de agua al
terminar la clase.
9. Sigue las instrucciones del profesor acerca de la forma adecuada de limpiar y recoger los
materiales.

6

10. Usar MANDIL para cubrir la ropa cuando se esta trabajando en el laboratorio.
11. Al calentar materiales, inclinar el tubo de ensayo en direccin fuera de uno y de los dems.

C.1 SMBOLOS y PICTOGRAMAS DE SEGURIDAD :
1-Reconocer y ubicar los smbolos de bioseguridad segn la clasificacin de: advertencia,
prohibicin, salvamento y de obligatoriedad.
2- Significado de los pictogramas en las etiquetas de los reactivos.

SMBOLO SIGNIFICADO SMBOLO SIGNIFICADO
T+ Muy Txico. O Comburente.
T Txico. C Corrosivo.
Xn Nocivo. Xi Irritante.
F Fcilmente Inflamable. E Explosivo.
F+ Extremadamente
Inflamable.
N Peligroso para medio
ambiente.

VI.CUESTIONARIO:(entregar al inicio de la prctica incluir referencias bibliogrficas)
1. El vidrio es un material de amplio uso en el laboratorio qu propiedades debe tener este material?
2. Dibuje los smbolos de radiacin, riesgo biolgico, producto cancergeno.
3. Cules son las caractersticas de los smbolos de obligatoriedad y de advertencia. Dibuje 1 cada uno
de ellos.
4.Qu son los materiales corrosivos y comburentes, de dos ejemplos de cada uno de ellos.
5. Qu es y cul es su importancia del espectrofotmetro y centrifuga en la medicina.

V.REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

7


INFORME PRACTICA N2: LABORATORIO: INSTRUMENTAL Y BIOSEGURIDAD

ESTUDIANTE:..

PROFESOR:.

INTRODUCCION

8

II. MARCO TEORICO (2 Carrillas)

9

III. OBSERVACIONES:
3.1 Materiales de Recipiente

1.a)Nombre:
b) Caractersticas-uso.

2.a) Nombre
b)Caractersticas-uso

3.a) Nombre
b)Caracteristicas-uso

4.a) Nombre

3.2 Materiales Volumtricos

1.a) Nombre

2..a) Nombre
b)Caracteristicas-uso

3. .a) Nombre

10

3.3 Materiales de uso Especfico:

1.a) Nombre

2..a) Nombre

3.a) Nombre

4.a) Nombre

5a) Nombre

6. a) Nombre

7. .a) Nombre

8.a) Nombre

11

4.SIMBOLOS de SEGURIDAD

4.1 Salvamento

4.2 Obligatoriedad

4.3 Advertencia

4. Prohibicin

12

CONCLUSIONES :


PRACTICA N 3

RECONOCIMIENTO EN MATERIAL BIOLGICO DE LOS CARBOHIDRATOS

I. OBJETIVO

Reconocer las unidades monomricas y macromoleculares como componentes fundamentales de todos los seres
vivos.

II. MATERIALES POR MESA

Solucin de Glucosa al 1% (Monosacrido)
Solucin de fructuosa al 1%(Monosacrido)
Solucin de Sacarosa al 1% (Disacrido, azcar comn)
Solucin de Maltosa al 1% (Disacrido)
Solucin de Almidn al 1% (Polisacrido)
Solucin de Lugol
cido sulfrico concentrado
Reactivo de Molish
Reactivo de Benedict
Tubos de 13x100
Tubos de 16x150
Pipeta de vidrio de 5 ml. graduada
Propipeta
Pinzas de madera
Mecheros, trpode, rejilla de asbesto
Guantes
Plumn marcador
III. PROCEDIMIENTO

3.1. Determinacin General de Glcidos (reaccin de Molish):

Los Glcidos o Hidratos de carbono por accin deshidratante del cido sulfrico originan compuestos derivados
del furfural, los que en presencia del alfa-naftol presente en el Reactivo de Molish, formarn un compuesto
coloreado.

Preparacin:

1. Colocar 1 ml. De cada solucin del glcido al 1% (Glucosa, Fructuosa, Sacarosa y Almidn) en un tubo de
13x100 y roturarlo.

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2. Adicionar a cada tubo con glcido una (1) gota del Reactivo de Molish, agitar suavemente.
3. Agregar lentamente por la pared del tubo sin agitar 1 ml. de cido sulfrico concentrado.
4. Observar la formacin de un anillo coloreado en la zona de interfase.

3.2. Determinacin de Azcares Reductores:

Un Azcar reductor al ser sometido a la accin del calor en el medio alcalino del Reactivo de Benedict, sufre
fenmenos de enolizacin y se fragmenta formando cuerpo fuertemente reductores para el cobre del Reactivo de
Benedict que se transforma en Ion cuproso (Cu
+
) el que reaccionar con los iones OH
-
del medio para formar
Oxido cuproso (Cu2O) que es de color rojo ladrillo.

Preparacin:

1. Colocar 2 ml. de cada solucin de glcido al 1% (Glucosa, Fructuosa, Sacarosa, Maltosa y Almidn) en
un tubo de 16x150 mm y roturarlo.
2. Adicionar 1 ml. de Reactivo de Benedict a cada tubo.
3. Someter los tubos a ebullicin en agua hirviendo en un beaker por 5 minutos.Retirarlos con ayuda de una
pinza.
4. Observar la formacin de color (rojo ladrillo si es positivo)

3.3. Determinacin de Almidn:

El yodo del Lugol es absorbido por el almidn a nivel de los enlaces glucosidicos y forma con l compuestos
complejos de color azul negruzco (yoduro de almidn).

Preparacin:

1. Colocar 2 ml. de solucin de Almidn al 1% en un tubo de 16x150 mm.
2. Adicionar 3 gotas de Lugol y agitar.
3. Observar la formacin de color (azul negro si es positivo)
4. Calentar el tubo hasta perder el color y luego enfriar el tubo.

IV. CUESTIONARIO: (entregar al inicio de la prctica -incluir referencias bibliogrficas)

1. Diga cuales son las principales fuentes de carbohidratos en nuestra dieta y cul es el requerimiento diario?
2. Definir azcares reductor y no reductor, de 2 ejemplos.
3. Explique el significado de deficiencia de disacaridasa, de un ejemplo.
4. Establezca las diferencias estructurales y funcionales entre el almidn y el glucgeno

14


INFORME PRACTICA N3 RECONOCIMIENTO EN MATERIAL BIOLGICO DE LOS CARBOHIDRATO

ESTUDIANTE:..

PROFESOR:.

I.INTRODUCCION

15

II.MARCO TEORICO

16

III.OBSERVACIONES RESULTADO e INTERPRETACIN

1. Determinacin General de Glcidos (reaccin de Molish):

Reactivos usados:

a-Muestras:

b-Resultado y Explicacin fundamentada de lo ocurrido.:

2. Determinacin de Azcares Reductores (Reaccin Benedict)
Reactivos usados:

a. Muestras: + +

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b. Resultado y Explicacin o fundamentada de lo ocurrido.:

3.Determinacin del Almidn :
Reactivos usados:

a. Muestras: + +

b. Resultado y Explicacin o fundamentada de lo ocurrido.:

IV.CONCLUSIONES

18


PRACTICA N 4

RECONOCIMIENTO EN MATERIAL BIOLOGICO DE LIPIDOS , PROTEINAS y ADN

I. OBJETIVO
Reconocer que compuestos orgnicos como los lpidos y protenas son constituyentes importantes en todos los
seres vivos.


Aceite comestible
Albmina al 2%
Alcohol
Cloroformo
ter etlico
Solucin alcohlica de Sudam III
Hidrxido de sodio al 40%
Hidrxido de sodio al 20%
Sulfato de cobre al 1%
cido ntrico concentrado
Etanol FRIO
Solucin de Lisis: EDTA,SDS,NACl
Azul de metileno
Tinta roja
6 Fresas
Gasas
Baguetas
Tubos de 16 x 150 mm.
Pipetas graduadas de 5 ml.
Morteros
Embudos
Guantes
Propipetas
Probeta de 10ml

III. PROCEDIMIENTO

1.DETERMINACION DE LIPIDOS

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A. Solubilidad de los Lpidos
Los lpidos son insolubles en agua y solubles en solventes orgnicos como el ter y cloroformo.

Preparacin:

1. Colocar 1 ml. de Aceite en cada tubo y agitar
2. Agregar:
En el tubo N 1: 1 ml de agua destilada
En el tubo N 2: 1 ml. de Alcohol
En el tubo N 3: 1 ml. de cloroformo
En el tubo N 4: 1 ml. de ter etlico
3. Agitar (con la misma intensidad a c/u) los tubos..
4. Observarlos y determinar el grado de solubilidad de mayor a menor.

B. Solubilidad y Tincin en Sudam III
El Sudam III es un tinte diazo del tipo lisocromo altamente soluble en lpidos tiindolos en la gama
del del rojo cereza al anaranjado.

Preparacin:

1. Colocar 1 ml. de aceite comestible en dos tubos de 13x100 mm.
2. Adicionar 1 ml. de Sudam III a uno de ellos y al otro agregar 1ml de tinta roja, agitar dejar reposar .
3. Observar la coloracin producida en en la zona del aceite en uno de los tubos.

C. Saponificacin.
Las grasas reaccionan en caliente con hidrxido sdico o potsico descomponindose en glicerina y cidos
grasos. stos se combinan con iones sodio o potasio del hidrxido para dar jabones, que son por ende las
sales sdicas o potsicas de los cidos grasos.

1. Colocar en un tubo 16x150mm 2ml de aceite y 2ml de NaOH 20%.
2.Agitar enrgicamente y colocar el tubo en bao mara de 20 a 25 minutos.
3. Observe en el tubo las 3 fases: inferior que contiene la solucin de soda sobrante junto con glicerina formada,

Otra intermedia semislida que es el jabn formado y la superior lpidica de aceite inalterado.

2.DETERMINACION DE PROTEINAS

A. REACCION DE BIURET
Los compuestos que contienen dos o ms enlaces peptdicos forman un complejo con las sales de cobre
en un medio fuertemente alcalino, dando un color prpura o violeta.

Preparacin:

1. Colocar 2 ml. de la solucin de Albmina al 1% o solucin Clara de huevo al 10% en un tubo de
16x150 mm.
2. Agregar 2 ml. de la solucin de Hidrxido de sodio al 40% y mezclar.
3. Aadir 2 gotas de Sulfato de cobre al 1%.
4. Incubar a 37 C por 10 minutos.
5. Observar la coloracin producida.

20

B. REACCIN XANTOPROTECA
Se emplea para determinar la presencia de protenas solubles en una solucin, empleando cido ntrico
concentrado (HNO3). Las protenas que presentan aminocidos con anillos bencnicos, dan derivados
nitrogenados que se colorean de amarillo.

Preparacin:

1. Colocar 2 ml. de la solucin de Albmina al 1% o Clara de huevo al 10% en un tubo de 16x150
2. Adicionar 2 ml. de cido ntrico concentrado.
3. Observar la formacin de un precipitado blanco y hervir por 3 minutos.
4. Observar la coloracin producida.

3. EXTRACCIN DE ADN
1.Colocar 4 ml de solucin de lisis adicionar tres fresas (sin hoja) en un mortero, proceder a triturar
por
6minutos.
2. Seguidamente filtre lo triturado con la ayuda de un embudo con gasa en un tubo de 16x150.
3. Aadir al filtrado 5 ml .de etanol frio e introducir rpidamente una bagueta delgada y girar sobre su
mismo
eje a fin para recuperar el ADN .
4. Reconocer el carcter cido del material obtenido usando un colorante bsico como el azul de metileno.

IV. CUESTIONARIO:

1. Qu son los disolventes orgnicos?
2. Cul es la composicin bsica de ADN
3. Qu es la obesidad y la proteinuria
4. Qu supone la desnaturalizacin de una protena?

21


INFORME PRACTICA N4 RECONOCIMIENTO EN MATERIAL BIOLGICO DE LIPIDOS, PROTEINA
Y ADN

ESTUDIANTE:..

PROFESOR:.

I.INTRODUCCION

22

II. MARCO TEORICO

23

III. .OBSERVACIONES RESULTADO e INTERPRETACIN
1.Lpidos
a. Solubilidad (total, parcial, insoluble)
Muestra:
Solventes usados:

Resultado y Fundamento:

1.b Solubilidad y tincin en Sudan III
Muestra:
Reactivo usado:

Resultado y Fundamento:

24

1.c Saponificacin:
Muestra:
Rectivos:
Fundamento:

2. Proteinas
2.a Reaccin de Biuret
Muestra:
Reactivos usados:
Resultados y Fundamento

2b. Reaccin Xantoproteica
Muestra:
Reactivos usados:

25

3.Extraccin ADN
Muestra:
Reactivos usados:

IV.CONCLUSIONES DE LA PRACTICA


26


PRACTICA N5

MICROSCOPIA: ESTUDIO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO

I. OBJETIVO

1. Conocer e identificar correctamente las partes pticas y mecnicas del microscopio compuesto.
2. Familiarizar al alumno con el uso correcto, cuidado y conservacin del microscopio.

II. MATERIALES

Microscopios
Lminas o portaobjetos
Laminillas cubreobjetos
Lminas artrpodo (piojo, pulga, )
Suero fisiolgico
Pipeta Pasteur
1 Plumn indeleble
Papel lente
Fibra de pelo y lana

.

III. PARTES DEL MICROSCOPIO

Reconocer cada una de las siguientes partes del microscopio:

PARTE MECANICA

Tubo portalentes y cremallera
Tornillos macro y micromtrico
Revolver
Platina
Condensador
Brazo y Pie

PARTE OPTICA

Ocular

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Objetivos
Espejo
Lentes de condensador
Diafragma
IV. SISTEMAS QUE COMPRENDE EL MICROSCOPIO

1. Sistema de soporte: comprende el brazo, el pie, el tubo ocular, el revolver y la platina.
2. Sistema de Iluminacin: comprende el foco, condensador y diafragma.
3. Sistema de Ajuste: comprende el macromtrico, micromtrico y cremallera
4. Sistema de Aumento: comprende el ocular generalmente de 10 x , 15 x y los objetivos de 5x, 10, 40, y
100x.

V. PROCEDIMIENTO.

1.Preparar lminas hmedas (gota de suero fisiolgico mas la muestra) con hebra de algodn, hebra de cabello, letra
e en posicin de lectura .

28

2. Realizar las observaciones de dichas muestras con los objetivos4x, 10x y 40x
3. Verificar con la lmina de la letra e, que los movimientos en estos sistemas son invertidos.
4.Observar con los objetivos de 4x y 10x las lminas de artrpodos.

VI. CUESTIONARIO

1. Definir que es una imagen real y que una imagen virtual
2. Cules son las unidades de medida de longitud empleadas en microscopia?
3. Defina aumento y, resolucin del microscopio.
4. Cmo se define un microscopio electrnico y cules son sus aplicaciones mdicas.

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

29


INFORME PRACTICA N5 MICROSCOPIA: ESTUDIO Y MANEJO DEL
MICROSCOPIO

ESTUDIANTE:..

PROFESOR:.

I. INTRODUCCION

30

II.MARCO TEORICO

31

III.OBSERVACIONES

1. Muestra de Algodn

4X 10X

Aumento Total: Aumento Total:
Caractersticas: Caractersticas:

32

Aumento total:
40x
Caractersticas:

2.Muestra de Cabello

4X 10X


33

Aumento total:
40x
Caractersticas:

3.Muestra de letra e

4X 10X


34

Aumento total:
40x
Caractersticas:

4.Muestra de Pediculus humanus Piojo

4X 10X


35

5.Muestra de Pulex irritans Pulga

4X 10X


IV.CONCLUSIONES


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PRACTICA N 6

OBSERVACIONES CELULARES: PROCARIOTES (BACTERIAS) Y EUCARIOTES (HONGOS, PARSITO ).

I. OBJETIVO

Conocer diversos organismos microbianos denominados Bacterias, Protozoarios, hongos y parsitos que estn
formados por una sola o varias clulas y que habitan diversos medios naturales.
Visualizar ciertas caractersticas estructurales en ellas.

MATERIALES POR MESA

Laminas con tincin de Gram de Escherichia coli (bacilos) y Streptococcus (cocos)
Lminas con Tincin de Ziehl Neesel de Mycobacterium
Laminas de muestra fungales (Hongos): Penicillium
Muestra de Tenia
Palitos mondadientes
Solucin fisiolgica al 0.85%
Solucin Mercurio cromo
Solucin de Violeta de genciana
Alcohol yodado
Lamina portaobjetos
Lamina cubreobjeto
Aceite de inmersin
Depsito para eliminar lminas y laminillas.
Microscpios
Guantes
Placas Petri

PROCEDIMIENTO
1.Observacin de Microflora bacteriana en cavidad bucal (Tincin de Vag)

1. Colocar una gota de solucin fisiolgica sobre una lmina.
2. Con el mondadientes obtener una muestra de sarro dental y esparcir con movimientos circulares
en la gota de solucin fisiolgica.
3. Secar a temperatura ambiente y luego cubrir con colorante Mercurio de cromo por 5 minutos.
4. Enjuagar y aplicar inmediatamente el colorante Violeta de genciana, dejar por 3 minutos, para
luego lavar con agua de cao.
5. Dejar secar la muestra preparada por accin del calor o al medio ambiente.
6. Observar la lmina de 100x. e identifique las diferentes formas bacterianas.

2.. Observacin de organismo procarionte en la lmina de E. coli (tincin de Gran) con el objetivo de
100x.

37

3.Observacin de organismo procarionte en Lmina de Streptococcus(tincin de Gram) con el objetivo de
100x.

4.Observacin de Mycobacterium turbeculosus (tincin Ziehl Neesel) con el objetivo de 100x

5. Observacin de organismo eucarionte del reino fungi con los objetivos de 4x y 10x (lminas
coloreadas con azul de lactofenol)
6. Observacin de un parsito (identifique sus partes). Use Guantes.

CUESTIONARIO
1. Establezca diferencias entre un organismo Procarionte y eucarionte.
2. Qu es la tincin o coloracin de Gram, como se realiza?
3. Cules son las dos formas tpicas de los hongos
4. Describa 5 enfermedades producidas en el hombre por bacterias y hongos

BACTERIAS (Procarionte)

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HONGOS (Eucarionte)

Penicillium

PARASITO (EUCARIONTE)

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PRACTICA N 7

OBSERVACION DE MEMBRANA Y PARED CELULAR: CELULA ANIMAL Y VEGETAL

I. OBJETIVO

Poder diferenciar al microscopio las caractersticas que presentan la membrana celular de la clula animal y la
pared celular de la clula vegetal.


Muestra de clula epitelial de la mucosa bucal
Muestra de catfila de cebolla (Allium cepa)
Lmina de hongos: Penicillium y Aspergillius
Microscopios
Lminas portaobjetos
Bistur
Pinza de punta recta
Mechero de alcohol
Colorante Azul de metileno
Colorante Lugol
Alcohol yodado
Solucin fisiolgica
Papel secante
Papel lente

III. PROCEDIMIENTO
A) OBSERVACION DE CELULA ANIMAL (RASPADO DE MUCOSA BUCAL)

1. Colocar una gota de solucin fisiolgica sobre dos lminas portaobjetos.
2. Con la ayuda de un hisopo hacer un raspado de la mucosa bucal.
3. Colocar la muestra obtenida sobre las lminas que tienen la gota de solucin fisiolgica,
4. Agregar a una lmina una gota de suero fisiolgico y a la otra aplicar una gota del colorante azul de
metileno.
5. Cubrir las preparacines con una laminilla cubreobjeto.
6. Observar las lminas con objetivo de 10X y 40X.

40

1- Membrana plasmtica, 2- Mitocondria,
3- Retculo endoplsmico rugoso, 4- Ribosomas,
5- Nucleolo, 6- Cromatina,
7- Citosol (=hialoplasma), 8- Diplosoma (=centriolos),
9- Retculo endoplsmico liso, 10- Aparato de Golgi

B) OBSERVACION DE CELULA VEGETAL (CATAFILA DE CEBOLLA)

1. Con ayuda de la pinza separe una de las catfila de la cebolla y extindalo sobre la lmina portaobjeto.
2. Con el bistur corte cuadritos de medio centmetro de catfila.
3. Disponga de dos lminas y coloque en ella un cuadradito de catfila.
4. Agregar a una lmina una gota de suero fisiolgico y en l otra una gota del colorante lugol
4. Cubrir las preparacines con una laminilla cubreobjeto.
5. Observar con objetivos de 10x y 40x

C) OBSERVACION DE UNA CELULA FUNGICA

41

1. En una lmina preparada observar un cultivo de hongo coloreada con Azul de Lactofenol.
2. Observar con objetivos de menor y mayor aumento
3. Reconocer sus partes y precisar su pared celular. .

HONGOS PLURICELULARES

Aspergillius

Penicillium :
1. Conidiforo 2. Mtula 3. Filide 4. Esporas

42

IV. CUESTIONARIO

1. Qu es una clula epitelial, qu funcin tienen y cuantos tipos se reconocen.
2. Cules son los componentes de las paredes celulares de las bacterias, hongos y vegetales
3. Defina tincin vital y supravital
4. Qu es el lugol , cual es formula y cules son sus aplicaciones..

43


PRACTICA N 8

FENOMENOS FISICOS DE LA CELULA: DIFUSION, OSMOSIS

OBJETIVO

Observar los fenmenos de difusin y smosis y su importancia
para la clula.

II. MATERIALES

Lminas portaobjeto
Tubos de prueba
Lancetas hematolgicas
Solucin de NaCl al 0.4% (medio HIPOTONICO)
Solucin de NaCl al 0.9% (medio ISOTONICO)
Solucin de NaCl al 2.0% (medio HIPERTONICO)
Agua destilada
Alcohol corriente
Algodn estril
Pipetas de 1 ml.
Gradillas
Microscopios
Papel lente

III. PROCEDIMIENTO

A) Experimento con eritrocitos (clula animal):
1. Recepcionar tubos de prueba perfectamente rotulados
conteniendo:
En el 1er. tubo: 3 ml. de Sol. NaCl al 0.4 %
En el 2do. tubo: 3ml. de Sol. NaCl al 0.9 %
En el 3er. tubo: 3ml. de Sol. NaCl al 2.0 %

2. Colocar 1 gota de cada concentracin de la sol.NaCl en
lminas portaobjetos., previamente rotular.
3. Desinfectar el dedo cordial (tercero) con algodn
humedecido en alcohol y realizar una puncin con ayuda de
la lanceta descartable, en el pulpejo del dedo.
4. Dejar caer 1 gotas de sangre a cada lmina y con la ayuda
de la laminilla mezclar suavemente, dejar en reposo por 2
minutos.
5. Colocar el cubreobjeto o laminilla y observar en el

44

microscopio.

B) Experimento con catfila de cebolla (clula vegetales:
1. Colocar 1 gota de cada concentracin de NaCl en lminas
portaobjeto previamente rotuladas.
2. Agregar a cada lmina trocitos de catafila de cebolla.
3. Dejar en reposo dos minutos, para luego cubrirla con
una laminilla.
4. Observar al microscopio 10x y 40x

IV. RESULTADO:

MUESTRA MEDIO FENOMENO

1

Sol.NaCl0.4% + sangre

2

Sol.NaCl 0.9 % + sangre

Isotnica

3

Sol. NaCl 2 % + sangre

Hipertnica

4

Sol,NaCl 0.4 + vegetal

Hipotnica

5

Sol.NaCl 0.9 + vegetal

Isotnica

6

Sol.NaCl 2 + vegetal

Hipertnica

VI. CUESTIONARIO

1. Qu tipo de difusin es la osmosis y qu es presin osmtica?.
2. Defina que es: Dilisis, Turgencia y Plasmlisis.
3. Qu significa homeostasis?
4. En qu consiste los fenmenos de crenacin y citlisis

45


PRACTICA N9

ORGANISMOS MOVILES: PSEUDOPODOS, CILIOS Y FLAGELOS.

I. OBJETIVOS

1. Verificar y comprender el movimiento de la clula de vida libre.
2. Observar y comprobar la existencia de estructuras para el movimiento celular.
3. Llegar a diferenciar las diferentes estructuras que intervienen en el movimiento celular, hacer una
comparacin entre ellas.

II. MATERIALES

A. MATERIAL DE LABORATORIO
Microscopios
Placas Petri
Pipetas pasteur 1ml
Guantes
Lminas portaobjetos
Gotero o Pipeta de 1 ml.
Colorantes: -Lugol al 4%
-Verde de metilo
- rojo neutro

B. MATERIAL BIOLOGICO
Cultivo de Protozoarios.

III. PROCEDIMIENTO

Cultivo de Protozoarios:

En un frasco mediano de boca ancha, con agua estancada, preparar: arroz, zanahoria, lechuga
picada y levadura
Mantener abierto al aire libre durante 6 das, en un lugar donde no haya luz directa.

46

IV. OBSERVACION

A) Movimiento ameboideo por seudpodos: Amoeba proteus (Clase Sarcodina)

1. Sobre una lmina portaobjetos, con un gotero coloque una gota del cultivo de protozoarios que contenga
Amoeba, cubrirlo luego con una laminilla cubreobjetos.
2. Aadir despus de haber observado una gota de Verde de metilo o Lugol.
3. Dibujar las observaciones realizadas a 10x, 20x y 40x.

B) Movimiento flagelar por flagelos: Euglena viridis (Clase Mastigophora)

1. Sobre una lmina portaobjetos, colocar una gota de cultivo que contenga Euglena y cubrir con una
laminilla cubreobjetos.
2. Aadir despus de haber observado una gota de verde de metilo o Lugol.
3. Dibujar las observaciones realizadas.

47

C). Movimiento ciliar por cilios: Paramecium caudatum (Clase Ciliophora)

1. Sobre una lmina portaobjetos, colocar una gota de cultivo que contenga Paramecium, y cubrirlo con
una laminilla cubreobjeto.
2. Aadir despus de haber observado la muestra anterior, una gota de verde de metilo o Lugol.
3. Dibujar las observaciones realizadas.

V. PROTOCOLO: REALIZAR ESQUEMAS DE LO OBSERVADO

48

AUMENTO

Amoeba proteus
(Sarcodina)

Euglena viridis
(Mastigophora)

Paramecium caudatum
(Ciliophora)

10 X

20 X

40 X

VI. CUESTIONARIO

1. A que atribuye la gran movilidad de los Protozoarios.

2. Explique las diferencias entre los diferentes tipos de movimientos: por seudpodos, flagelos, cilios.

3. Que es el Sndrome de Kartagener y su importancia mdica.

4. Explique tres enfermedades producidos por protozoarios, flagelados y no flagelados.

49

ASOCIACINUNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

PRACTICA N 10

ESTUDIO DE ORGANELOS CELULARES: MITOCONDRIAS, LISOSOMAS, CLOROPLASTOS Y
PLASTIDOS.

I. OBJETIVO:

Mediante el empleo de la tcnica de coloracin vital se observarn las mitocondrias presentes slo en el
citoplasma de las clulas Eucariotas, que vienen a constituir las centrales de energa porque producen
y almacenan energa bajo la forma de ATP.
Las clulas tienen vesculas membranosas que contienen enzimas hidrolticas que permiten la digestin
intracelular y que corresponden a los lisosomas los cuales pueden pueden ser identificados en
protozoarios con una tincin vital.
Con el uso de suero fisiolgico observar plastidos en las clulas vegetales eucariticas, los que
contienen pigmentos y pueden sintetizar y acumular diversas sustancias, como los Leucoplastos que son
plastidos incoloros, los Amiloplastos que acumulan almidn, los Proteinoplastos que acumulan
protenas, los Elaioplastos que acumulan grasas y aceites esenciales. Los Cromoplastos son plastidos
coloreados como el Caroteno que presenta un pigmento de color naranja, el Licopeno de color rojo, la
Xantofila de color amarillo y los Cloroplastos que presentan un pigmento de color verde y cuya
funcin principal es realizar la fotosntesis.

II. MATERIALES POR MESA:

Muestra de:
Clulas de epitelio bucal
Hoja de Elodea (Cloroplastos)
Aj amarillo (Xantofila)
Zanahoria (caroteno)
Papa (Amiloplastos)
Betarraga (Antocianina)
Cultivo de protozoarios con rojo neutro
Microscopios
Hoja de bisturi
Pinzas en punta
Laminas portaobjeto
Laminillas cubreobjeto
Solucin Verde Janus 1/10,000
Frascos con Lugol
Frasco con Suero Fisiolgico
Goteros con chupn de jebe
Hisopos
Mecheros de alcohol

III. PROCEDIMIENTO:

A) OBSERVACION DE MITOCONDRIA EN EPITELIO BUCAL:

1. Con una lmina limpia y mediante un raspado suave obtener una muestra de la mucosa bucal,
2. Realizar un frotis extendiendo la muestra sobre otra lmina,
3. Dejar secar la lmina con la muestra al medio ambiente,

50

4. Cubrir la muestra con Verde Janus durante 5 minutos,
5. Eliminar el exceso de colorante y dejar secar al medio ambiente,
6. Observar al microscopio con objetivos de 10x y 40x.

B) OBSERVACION DE LISOSOMAS en PROTOZOARIOS
1. Colocar en una lmina dos gotas cultivo de protozoarios.
2. Cubrir con una laminilla y observar los lisosomas a 10x y 40x.

C.OBSERVACION DE PLASTIDOS EN VEGETALES:

CLOROPLASTOS: Se localizan en las hojas debajo de la epidermis superior.

1. Seleccionar una hoja joven de Elodea, colocarla sobre una gota de agua en una lamina portaobjeto.
2. Cubrir la muestra con una laminilla.
3. Observar al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento.

CROMOPLASTOS: Son organelas coloreados y presentan formas variadas (redondas, elpticas, o
aciculares).

1. Realizar cortes finos de zanahoria, aj amarillo, betarraga sobre una lmina portaobjetos
2. Colocar una gota de agua sobre el corte.
3. Cubrir con una laminilla.
4. Observar al microscopio con objetivos de menor y mayor aumento.

AMILOPLASTO: Son organelas que contienen almidn como sustancia de reserva.

1. Sobre una lmina portaobjetos colocar una gota de Lugol.
2. Agregar un corte transversal fino de papa .
3. Cubrir con una laminilla.
4. Observar al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento.

IV. PROTOCOLO:

MUESTRAS

OBSERVACIN DE MITOCONDRIA, CLOROPLASTOS Y PLASTIDIOS

20 X

40 X

TIPO DE ORGANELA
PLASTIDIO

EPITELIO BUCAL

CULTIVO
PROTOZOARIO

HOJA DE ELODEA

AJI AMARILLO

ZANAHORIA

BETARRAGA

PAPA

51

V. CUESTIONARIO

1. Qu son las patologas mitocondriales?.
2. Qu relacin tiene los lisosomas y la autofagia?
3. Porque las mitocondrias fijan el verde de Janus.
4. Que funcin cumplen los plastidios en las clulas.

52


PRACTICA N 11

ACCION ENZIMATICA

I. OBJETIVO:
Conocer el mecanismo de accin de las enzimas durante una reaccin qumica.
Conocer como acta un catalizador.

II. MATERIALES:
Gradilla
Mortero con piln Hgado de pollo
Tubos de prueba de 16 x150 /13x100 Hisopos
Agua oxigenada Fsforos
Dixido de Manganeso Pipetas pasteurss
Azul de metileno Pipetas1ml
Aceite Cloruro de sodio
Succinato sodio 0,1M Gradilla
Buffer Fosfato pH7.4 Placas Petri
NaCl 0,9%
Bisturi

III. FUNDAMENTACION:
Las Enzimas tienen como funcin acelerar la velocidad de una reaccin qumica. El mecanismo de accin se
realiza de la siguiente manera:
Unin de un Sustrato a la Enzima para formar un Complejo Enzima- Sustrato y desdoblamiento del complejo
formado para liberar los Productos.

E + S E - S E + P

IV. PROCEDIMIENTO:
1. Actividad de la Enzima Catalasa

MnO2 + 2 H2O2 ------ 2 H2O + O2 + MnO2

Catalasa + 2 H2O2 ------ 2 H2O + O2 + Catalasa

1) Numerar los tubos del 1 al 3
2) Colocar en cada tubo 2 ml. de Perxido de hidrgeno (Agua oxigenada).

3) Agregar al:
Tubo 1: cucharita de Hgado de pollo entera
Tubo 2: cucharadita de Higado de pollo triturado

53

Tubo 3: 2 g. Dixido de Manganeso

4) Colocar a cada tubo el palito de Ignicin encendido en la boca del tubo
5) Si el palito de Ignicin aumenta la intensidad del fuego, la reaccin es positiva.

b. Actividad de la Enzima Succinato Deshidrogenasa
1) Preparar homogenizado de hgado con cloruro de sodio.
2) Disponer de 2 tubos de 13x100 y roturarlos(tubo 1 y tubo 2)
3) Colocar en cada tubo 1 ml de Succinato y luego 1 ml de buffer .
4) Aadir 2 gotas de azul de metileno, agitar, anotar el color.
5) Incorporar al tubo 1 0,5ml de aceite las paredes y dejar en la gradilla NO MOVER
6) Agregar al tubo 2 1ml de homogenizado de hgado e inmediatamente aadir 0,5ml de aceite por las paredes,
No MOVER, dejar en la gradilla.
7)Hacer el seguimiento de la decoloracin de los tubos por 20minutos,
8) Analize lo ocurrido .
.

V. CUESTIONARIO:

1) Defina que es un catalizador
2) Qu se entiende por sitio activo.?
3) Qu tipo de enzima es la catalasa, y cul es su importancia en el metabolismo ?
4) Cul es el rol de la deshidrogenasa succnica y porque se relaciona con el sndrome de Kearns
SAyre?

54


PRACTICA N 12

CICLO CELULAR: Dvisin Celular : LA MITOSIS

I. OBJETIVO:

Se estudiar la mitosis y el ciclo de divisin celular en las clulas meristemticas de la raz de Allium cepa
(cebolla).
En este sistema la poblacin celular esta en equilibrio dinmico y los cromosomas son relativamente grandes, con
un nmero diploide ( 2n =16 ).

II. MATERIALES:

Bulbos de cebolla
Placas Petri
Estiletes y pinzas
Papel de Filtro
Portaobjetos
Cubreobjetos
Aceite de inmersin
Mechero de Alcohol
Orcena actica- clorhdrica
Aceite de inmersin
Papel lente
Microscopios

III. PROCEDIMIENTO:

1. Cultivar los bulbos de cebolla en vasos pequeos conteniendo agua corriente, la que deber cambiarse cada 24
horas, mantener los bulbos en oscuridad a 25C y sometidos a aireacin constante.
2. Despus de 48 a 72 horas, arrancar con ayuda de una pinza 2 a 3 races del bulbo, cortar 2 cm. de la parte
apical y colocarla sobre una placa Petri que contenga Orcena.
3. Calentar la placa en la llama de un mechero de alcohol hasta aproximadamente 60C y se observe la emisin
de vapores blancos, evitar la ebullicin del colorante.
4. Dejar enfriar y repetir esta operacin cuatro veces.
5. Enfriar y dejar reposar durante 15 minutos.
6. Colocar la raicilla en la lmina portaobjeto, cortar 2 mm de la punta, aadir una agota de Orcena fra, cubrir la
preparacin con laminilla.
7. Con la punta de un lpiz golpear suavemente la preparacin describiendo crculos concntricos para permitir la
extensin del tejido meristemtico.

55

8. Eliminar el exceso de colorante usando una tira de papel filtro.
9. Observar la preparacin a mayor aumento y lente de inmersin.

IV. PROTOCOLO:

Esquematizar las diferentes fases que se observan:

Interfase: Los cromosomas no se observan al microscopio debido a que son demasiados delgados y no puede
absorber suficiente colorante para ser visible.

Profase: Fase en la cual los cromosomas se observan con sus dos cromtidas.

Metafase: Se observa el huso acromtico, los cromosomas estn mas condensados y cortos.

Anafase: Los cromosomas se dirigen a los polos

Telofase: Los cromosomas estn en los polos, empieza la formacin de la membrana nuclear

V. CUESTIONARIO:

1. Que es mitosis.

2. Que hay de comn entre mitosis y meiosis.

3. Que es Indice mittico e ndice interfsico

4. Defina cariocinesis y citocinesis

REALIZAR ESQUEMAS:

FASE DE LA MITOSIS

ESQUEMAS

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57

ASOCIACION UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

PRACTICA N 13

OBSERVACION DE ELEMENTOS FORMES DE LA SANGRE

I. OBJETIVOS

Determinar la presencia de elementos figurados presentes en una muestra de sangre perifrica humana,
mediante el uso de una coloracin diferencial.
Observar la presencia de ncleos en su interior.

II. MATERIALES

Microscopios
Colorante Wright o Giemsa
Alcohol yodado
Agua destilada
Lminas portaobjetos limpias y desengrasadas
Algodn estril
Varillas de coloracin

III. PROCEDIMIENTO

A. Obtencin de sangre capilar

1. Desinfectar el dedo anular con alcohol yodado y algodn y con una lanceta estril punzar el dedo y
dejar caer una gota de sangre sobre un extremo de la lmina portaobjetos.
2. Con ayuda de otra lmina portaobjeto formar un ngulo de 45 y realizar un frotis, tratando de
esparcir homogneamente la gota de sangre sobre la superficie de la lmina.
3. Dejar secar la preparacin y proceder luego a la coloracin con Wright o Giemsa.

B. Coloracin

1. Cubrir el frotis con colorante Wright o Leishman por 1 minuto.
2. Sin eliminar el colorante agregar agua destilada y dejar actuar por 10 minutos.
3. Eliminar luego el colorante y lavar suavemente con agua de cao.
4. Dejar secar la lmina coloreada.
5. Una vez que la lmina coloreada a secado, observar al microscopio con el objetivo de 100 X y aceite
de inmersin.

IV. PROTOCOLO

58

(Esquematice los siguientes elementos que abajo se indican y que sern observados con ayuda del
microscopio).

1. LEUCOCITOS GRANULARES:

a) Neutrfilos segmentados: presenta un ncleo con varios lbulos (2-5) unidas por bandas de
cromatinas.

b) Neutrfilos en banda o abastonado: presenta un ncleo no dividido en forma de S o en cayado O.

c) Eosinfilos: redondos, voluminosos, con granulaciones acidfilas de color anaranjado, ncleo con dos
lbulos.

d) Basfilos: son escasos de 0-1, presenta un ncleo difcil de observar, pues se halla cubierto por una
granulacin de color violeta o morado oscuro .

2. LEUCOCITOS AGRANULARES:

a) Linfocitos: De forma redonda o irregular, su ncleo es morado, voluminoso y ocupa la mayor parte
de la clula, el citoplasma es azul y sin granulaciones. Su nmero aumenta con las infecciones.

b) Monocitos: De forma redonda u ovalada, ncleo variable generalmente en forma de rin, citoplasma
sin grnulos. Presenta una gran actividad fagocitaria.

3. PLAQUETAS:
Las ms pequeas de las clulas de la sangre, de forma redonda y no contienen hemoglobina. Son
esenciales en la coagulacin de la sangre.

4. HEMATIES O ERITROCITOS:
De forma generalmente redonda, sin ncleo, de color rosa intenso, contiene hemoglobina. La protena que
se encarga del transporte de oxgeno y anhdrido carbnico.

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Neutrofilos

Eosinfilos

Basfilo

Monocitos

Linfocitos
VIII. CUESTIONARIO

1. Cul es la diferencia entre plasma y suero?.

60

2. Diga que es la formula leucocitaria, cules son los valores normales en el adulto y qu significado tiene los
valores anormales.
3. Qu es la histidina y cul es su importancia?.
4. Que es la anemia, y cul es su origen

PRACTICA N 14

GRUPO SANGUINEO Y FACTOR Rh

I. OBJETIVO:

Al finalizar la prctica el alumno debe saber qu es el grupo sanguneo, sus aplicaciones en el campo de la
medicina y el grupo sanguneo al que pertenece.

II. GENERALIDADES:

El serlogo Karl Landsteiner, en 1900-1901 fue el primero en demostrar la existencia de grupos sanguneos y en
1938 el Comit de Higiene de la Liga de la ONU, el Congreso de Microbiologa de 1930 en Londres y la
Internacional de Transfusin Sangunea de Pars, se adopt definitivamente la clasificacin de los grupos
sanguneos humanos heredables, designados como A, B, AB, O.

GRUPOS SANGUINEOS RESULTANTES

GRUPO SANGUINEO

ANTIGENO EN GLOBULOS
ROJOS
(AGLUTINOGENOS)

ANTICUERPOS EN PLASMA O
SUERO SANGUINEO
(AGLUTININAS)

A

A

Anti-B

B

B

Anti-A

AB

AB

Ninguno
(Receptor universal)

O

Ninguno

Anti-A + Anti-B
(Dador universal)

III. MATERIAL Y METODOS:

Lminas portaobjetos

Sueros Anti-A, Anti-B, Anti-D o Rh.
Algodn
Alcohol yodado

RECONOCIMIENTO DE GRUPOS SANGUINEOS:

61

La tcnica de reconocimiento de grupos sanguneos se basa en la aglutinacin o no de los hemates cuando se
mezclan con la aglutinina Anti-A o Anti-B.

PROCEDIMIENTO :

1. Limpie con algodn embebido en alcohol la yema del dedo anular.
2. Realizar la puncin utilizando una lanceta hematologa estril.
3. Coloque dos gotas de sangre por separado sobre la lmina portaobjetos, de la persona a la cual se va a realizar
la prueba y en otra lmina otra gota de sangre.
4. Agregar a cada gota de sangre una gota de suero Anti-A y Anti-B y Anti-D o Anti-Rh por separado.
5. Observar la reaccin e identificar a que grupo pertenece y que factor Eh, si es positivo o negativo

METODO DE RECONOCIMIENTO PRACTICO :

GRUPO A GRUPO B

Anti-A Anti-B Anti-A Anti-B

GRUPO AB GRUPO O

Rh: Anti D o Rh (+) Anti- D o Rh (-)

IV: CUESTIONARIO :

1. A quienes se les llama receptores y donadores universales, por qu?
2. Explique la Eritroblastosis fetal.
3. En que se basa el reconocimiento de los grupos sanguneos?
4. Explique como se puede hacer el descarte de paternidad

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