ESPECTROSCOPIA

El trmino espectroscopia significa la observacin y el estudio del espectro, o registro

que se tiene de una especie tal como una molcula, un ion o un tomo, cuando estas
especies son excitadas por alguna fuente de energa que sea apropiada para el caso.

Gracias al desarrollo de la espectroscopia cuando se daba la noticia de haber encontrado
algn elemento nuevo, se observaba su espectro. Si este ya coincida con los elementos
ya conocidos se descartaba la novedad del elemento, si por el contrario no coincida con
ninguno de los espectros de elementos ya conocidos la prueba era inobjetable y se
consideraba uno ms de la lista de elementos qumicos.

Aunque las aplicaciones de la espectroscopia en el anlisis cualitativo fueron casi
inmediatas, su utilidad en el aspecto cuantitativo tuvo que esperar muchos aos, ya que
el desarrollo cientfico y tecnolgico de ese momento era insuficiente.

En espectroscopia se estudian las interacciones de la radiacin electromagntica (luz)
con la materia. Entre los fenmenos que producen estas interacciones estn la
absorcin, emisin y dispersin de luz por la materia.

La mayora de nuestra informacin experimental sobre los niveles de energa de los
tomos y molculas proviene de la espectroscopia. A nivel molecular, las diferentes
tcnicasespectroscpicastambin nos permiten conocer las estructuras moleculares
(conformaciones, longitudes y ngulos de enlace), las frecuencias moleculares de
vibracin, descubrir la composicin de una muestra, seguir la concentracin de especies
reactivas en funcin del tiempo en una reaccinqumica, determinar intermedios de
reaccin y un largo etc.

En este bloque utilizaremos tres tcnicas diferentes: absorcin ultravioleta-visible (UV
visible),emisin de fluorescencia y absorcin infrarroja (IR) para caracterizar la foto
fisicoqumica de un alcaloide denominado norharmano de gran inters farmacolgico
cuya presencia se ha detectado en diferentes tipos de plantas e incluso en el cuerpo
humano.

Esta compuesta de un anillo piridinico deficiente en electrones unido a otro anillo indo
lico con exceso de electrones . Las interesantes propiedades foto fsica que este
derivado presenta son debidas a cambios foto inducidos en la distribucion electrnica que
originan un fuerte incremento en la basicidad del ncleopiridinico en el primer estado
electrnico excitado y que, consecuentemente, modifican la reactividad de esta molcula.

La tcnicas de absorcin y emisin de luz en la regin UV-visible se encuadran dentro de
la espectroscopia electrnica y la tcnica de absorcin IR se encuadra dentro de la
espectroscopia de vibracin.

Mediante la absorcin y la emisin de radiacin en la regin UV-visible Caracterizaremos
los espectros de absorcin y fluorescencia de las dos formas que pueden existir (neutra y
catinica) en disolucin acuosa en el intervalo de pH entre 1 y 10. Obtendremos el
rendimiento cuntico de fluorescencia de la forma catinica y la constante de acidez de
este alcaloide una vez pro tonado, tanto en el estado fundamental como en el primer
estado excitado. Utilizando la espectroscopia de absorcin infrarroja obtendremos la
constante de formacin de un complejo de tipo NH- entre este alcaloide y el derivado
fenantreno

.
SPECTROSCOPIA DE ABSORCIN DE RADIACIN INFRARROJO


La espectroscopia de absorcin de infrarrojo es una tcnica analtica de gran importancia
para los qumicos. Est basada en las vibraciones de los tomos en las molculas.

Un espectro de infrarrojo consiste en un espectro de absorcin que implica transiciones
entre niveles vibraciones. Dado que una molcula poli atmica tiene 3N-6 ( 3N-5 si es
lineal) grados de libertad vibraciones, su espectro de infrarrojo puedepresentar dicho
nmero de bandas de absorcin, cuyas energas correspondern a la frecuencia de cada
modo vibraciones. Para que una vibracin de lugar a una absorcin de infrarrojo, debe
causar un cambio en el momento dipolar de la molcula. As, la intensidad de una banda
de infrarrojo sera mayor cuanto mayor sea el cambio en el momento dipolar con la
vibracin.


La principal utilidad de la espectroscopia de infrarrojo deriva del hecho de que los grupos
funcionales mantienen cierta individualidad dentro de las molculas, afectando sus
vibraciones fundamentalmente al enlace considerado. Segn el modelo clsico del
oscilador armnico, la frecuencia vibraciones de dos tomos unidos por un enlace viene
dada por la expresin

donde K es la constante de fuerza del enlace y la masa reducida del sistema. Como
resultado, se encuentra que los diferentes grupos funcionales se caracterizan
pordiferentes frecuencias vibraciones, que naturalmente van asociadas a bandas
distintas en el espectro de infrarrojo.



INTERPRETACIN DEL ESPECTRO DE INFRARROJO DEL AIRE

Entre los componentes mayoritarios de la atmosfera terrestre, los gases de N2 y O2 no
producen absorcin de radiacin infrarroja, ya que son molculas diatnicas apolares. En
cambio, el vapor de agua y el dixido de carbono absorben radiacin infrarroja y por tanto
sern observados siempre que se realicen medidas de absorcin de infrarrojo en
presencia de aire, y deben corregirse (espectro de referencia) a la hora de estudiar una
muestra problema.


La molcula de agua tiene una estructura no lineal y por tanto presenta tresmodos
vibraciones: una tensin simtrica (v1), una flexin simtrica (v2) y una tensin asimtrica
(v3). Generalmente se requiere menos energa para deformar un ngulo entretres
tomos que para estirar un enlace, por lo que la banda v2 debe aparecer a menores
frecuencias que v1 y v3. Las vibraciones v1 y v3 cambian el mdulo del momento dipolar
(vibraciones paralelas) mientras que la vibracin v2 cambia la orientacin de dicho
momento (vibracin perpendicular). Como consecuencia, estas tres vibraciones deben
dar lugar a bandas vibraciones activas en infrarrojo.

La molcula de CO2 presenta una estructura lineal y por tanto sus grados de libertad
vibraciones son cuatro. Dado que el momento dipolar permanente de la molcula es nulo,
la vibracin de tensin simtrica no ser activa en el espectro de infrarrojo.

En cambio la vibracin de tensin asimtrica (vibracin paralela) producir una banda de
absorcin, as como las dos vibraciones de flexin (vibraciones perpendiculares), que son
degeneradas en energa y por tanto aparecen como una sola seal en el espectro. Por
otra parte, como las molculas de H2O y CO2 pueden girar libremente en su estado
gaseoso, sus absorciones de infrarrojo implican transiciones entre los distintos niveles
rotacionales de los estados vibraciones implicados.

De ah que las bandas de infrarrojo de estos compuestos sean bandas de vibracin-
rotacin, es decir, que sus bandas de vibracin presentan estructura fina de rotacin. As
una molcula poli atmica como H2O o CO2 presenta bandas paralelas con un contorno
PR, mientras que sus bandas perpendiculares tienen contornos PQR.


ASIGNACIN DE LAS BANDAS CARACTERSTICAS DE UNA PELCULA DE POLI
ESTIRENO

El espectro de infrarrojo de una molcula puede contener datos correspondientes a 3N-6
(o 3N-5) valores distintos de frecuencia e intensidad de las bandas vibraciones.

Por tanto, puede esperarse que, para unas condiciones dadas, el espectro de una
sustancia sea nico y caracterstico. De ah que la espectroscopia de infrarrojo sea una
tcnica muy segura para identificar compuestos. Adems, como resultado de que los
distintos grupos atmicos poseen diferentes bandas caractersticas, se han desarrollado
tablas de correlacin que renen las frecuencias e intensidades de dichas bandas. Estas
tablas son de gran utilidad para elucidar la estructura molecular de los compuestos
qumicos.


OBTENCIN DE LA CONSTANTE DE EQUILIBRIO CETO-ENLICO DE DOS
COMPUESTOS A PARTIR
DE MEDIDAS DE ABSORCIN DE INFRARROJO

Ciertas sustancias orgnicas, como los compuestos acetil acetona y acetoacetatode etilo,
se presentan como dos especies ismeras (denominadas forma enol y ceto) que
coexisten en equilibrio.


Por tanto, el espectro de IR de estos compuestos consiste en la superposicin de los
espectros de las formas enol y ceto, que naturalmente presentan diferentes bandas
caractersticas asociadas a sus grupos funcionales. Dado que, segun la Ley de Lambert-
Beer, intensidad de las bandas de absorcin es proporcional a la concentracin
respectiva de cada especie, la constante de equilibrio ceto-enolico se puede obtener a
partir de la expresin:

K = [ Enol ] / [ Ceto ] = (AEnol/ e EnolL) / (ACeto/ eCetoL)


Para determinar dicha constante se debe, en primer lugar, identificar dos bandas
claramente diferenciadas caractersticas respectivamente de las formas enol y ceto.

Posteriormente, deberan realizarse las rectas de calibrado (absorcin frente a
concentracin) para determinar los coeficientes de absorcin molar (e ) de las bandas
enol y ceto. Sin embargo, en esta practica haremos la aproximacin de considerarambos
coeficientes iguales (e Enol= eCeto), de esta forma se obtiene una constante deequilibrio
relativa, que nos describe la relacin entre las poblaciones enol y ceto de los compuestos
estudiados. Esta constante relativa, por tanto, esta relacionada con el valor real mediante
un factor correspondiente al cociente entre las asertividad molar (e Enol/ eCeto).


Espectroscopia molecular de absorcin infrarroja


Se basa en los cambios que se producen en los niveles de vibracin y rotacin de las
molculas. Es conveniente subdividir el espectro de infrarrojo en tres regiones: cercano,
medio y lejano.


En cuanto a la instrumentacin cabe destacar que como fuente de radiacin utiliza un
slido que se calienta y se lleva a incandescencia (lmpara incandescente de Nerst,
fuente Globar y filamento incandescente). Utiliza detectores sensibles a; calor como
termopares, bolmetros y clulas de Golay.



Sus aplicaciones


Tiene gran aplicacin en el anlisis cualitativo y cuantitativo:


Determinacin de sustancias. Cada sustancia da un espectro caracterstico en el
infrarrojo como si fuera huellas dactilares

Determinacin de estructuras qumicas (grupos funcionales)

Determinacin de la concentracin de sustancias

Determinacin de parmetros fsico -qumicos













ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN DE RADIACION ULTRAVIOLETA
VISIBLE


La espectroscopia UV-Vis se basa en el anlisis de la
cantidad de radiacin electromagntica (en el rango de longitudes
de onda del ultravioleta y visible) que puede absorber o transmitir
una muestra en funcin de la cantidad de sustancia presente.

Todas las tcnicas de absorcin suponen que cuando una
radiacin incide sobre una muestra se produce una absorcin
parcial de esta radiacin, lo que hace que se produzca una
transicin entre los niveles energticos de la sustancia: tomo,
molcula o in, X, pasando esta al estado excitado, X
*
, el resto de
radiacin es transmitida. As analizando una u otra podemos
relacionar la cantidad de especie activa presente en la muestra.




Utilizacin



La utilizacin de tcnicas espectroscpicas permite estudiar la absorcin y emisin de la
radiacin electromagntica por la materia. La serie de frecuencias absorbidas por una
muestra se denomina espectro de absorcin y las frecuencias emitidas constituyen el
espectro de emisin.

Al igual que sucede en los espectros atmicos, cuando un haz de luz de radiacin
electromagntica compuesto por fotones de energa h<, incide sobre una muestra de
materia, las molculas de dicha muestra pasarn a un estado de energa superior,
absorbiendo as energa. Cuando un tomo absorbe un fotn, se produce un cambio de
niveles energticos; correspondientes a los diferentes estados electrnicos. Sin embargo
en una molcula la situacin es ms complicada, dado que la absorcin de energa
puede provocar no slo las transiciones electrnicas correspondientes a los electrones
de la molcula, sino tambin cambios en los estados de rotacin y vibracin de la
molcula, puesto que en una molcula, la energa de rotacin y de vibracin se
encuentran cuantizadas al igual que la electrnica.

De todo esto se deduce que la espectroscopia molecular es ms complicada de
interpretar que la espectroscopia
atmica.Las tcnicas experimentales de espectroscopia molecular se denominan en
funcin de la regin del espectro electromagntico a la que corresponde la radiacin
absorbida por la muestra. Existen as tcnicas espectroscpicas de ultravioleta (UV),
visible, infrarrojo (IR) y microondas. Las transiciones entre estados electrnicos
moleculares, corresponden a una absorcin en las regiones del ultravioleta (UV) y del
visible. Las transiciones vibracionales corresponden a la absorcin de energa en la
regin del IR, mientras que las transiciones rotacionales corresponden
a la regin de microondas El equipo del que se dispone en el laboratorio, es un
espectrofotmetro de VIS-UV cercano


Los electrones absorbentes de la radiacin

La absorcin de radiacin ultravioleta o visible se puede considerar que es un proceso en
dos etapas, primero hay una impaciencia electrnica y posteriormente re produce una
relajacin.
Todos los compuestos orgnicos La absorcin de radiacin ultravioleta o visible proviene
de la excitacin de los electrones enlazantes, la espectroscopia de absorcin molecular
es por tanto valiosa para la identificacin de los grupos funcionales de una molcula. Es
importantes las aplicaciones de la espectroscopia de absorcin ultravioleta y visible para
la determinacin cuantitativa de compuestos.
son capases de absorber radiacin electromagntica ya que contiene electrones de
valencia que pueden ser excitados. La la absorcin de radiacin ultravioleta y visible de
longitud de onda larga se restringe a un grupo funcional llamado cromforo. Los
electrones que inter vienen en la absorcin de las molculas orgnicas son los que se
encuentran en la formacin de enlaces. Las regiones entre los tomos en la que se
encuentran los electrones enlazantes se denominan orbitales moleculares. Al cambiarse
dos orbitales atmicos se forma un orbital molecular enlazantes de baja energa o un
orbital molecular antienlazantes de alta energa

La espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible (UV/V) se basa en la absorcin de
radiacin por la materia en el rango de longitudes de onda comprendido entre el
ultravioleta cercano y el infrarrojo cercano (180-1100 nm). Cuando una especie qumica
absorbe radiacin pasa a un estado excitado que posteriormente elimina ese exceso de
energa en forma de calor
LEY DE LAMBERT-BEER


Es el resumen de dos leyes que nos permiten relacionar
la fraccin de radiacin absorbida con la concentracin del
analito y el espesor del medio. Se cumple para cualquier proceso
de absorcin en cualquier zona del espectro y se basa en que
cada unidad de longitud a travs de la cual pasa la radiacin
absorbe la misma fraccin de radiacin.

Si tenemos un haz de luz monocromtica, I
0
, que pasa a
travs de un material de espesor, l, la disminucin de la
intensidad de luz transmitida, I
t
, ser proporcional al camino
recorrido y a la concentracin de la sustancia absorbente, c.

I = I
o
e
.l .c

El factor de proporcionalidad, , se denomina absortividad
molar y est relacionado con la probabilidad de absorcin de
radiacin por parte de la sustancia en anlisis.
Tomando logaritmos y reorganizando la ecuacin tenemos:

I

log
0

I


= lc