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Red de Revistas Cientficas de Amrica Latina, el Caribe, Espaa y Portugal
Tavira Montalvn, Carlos Alberto; Ortega Garca, Anglica; Dvila Gonzlez, Idalia;
Estrada Mondaca, Sandino; Meneses Acosta, Anglica
Alcances y perspectivas del cultivo de clulas animales en la biotecnologa
farmacutica
Revista Mexicana de Ciencias Farmacuticas, Vol. 40, Nm. 4, octubre-diciembre,
2009, pp. 35-46
Asociacin Farmacutica Mexicana, A.C.
Mxico
Cmo citar? Nmero completo Ms informacin del artculo Pgina de la revista
Revista Mexicana de Ciencias Farmacuticas
ISSN (Versin impresa): 1870-0195
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Asociacin Farmacutica Mexicana, A.C.
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35
Alcances y perspectivas del cultivo de clulas
animales en la biotecnologa farmacutica
Animal cell culture in pharmaceutical biotechnology: research and perspectives
Carlos Alberto Tavira Montalvn
1
, Anglica Ortega Garca
1
, Idalia Dvila Gonzlez
1
,
Sandino Estrada Mondaca
2
, Anglica Meneses Acosta
1
1
Facultad de Farmacia. Universidad Autnoma del Estado de Morelos
2
Saint-Gobain Mxico, S.A. de C.V. Gerencia de Calidad
Resumen
En la actualidad, el cultivo de clulas animales es uno de los sistemas ms utilizados en la produccin de biofrmacos ya que
ha demostrado tener ventajas con respecto a la expresin de protenas recombinantes en bacterias u otros organismos eu-
cariotes, tales como levaduras o cultivos de clulas vegetales. Sin embargo, su utilidad no es conocida totalmente dentro del
mbito farmacutico ya que ha sido considerado como un sistema de produccin costoso, de bajo rendimiento y difcil de
manipular. Por ello, en esta revisin se presenta de manera general el desarrollo de los cultivos de clulas animales como sis-
temas productores de biofrmacos y se hace hincapi de sus ventajas y limitantes as como en las aplicaciones actuales y fu-
turas de este sistema dentro de la industria biofarmacutica.
Abstract
Animal cell culture is one of the most important systems used for the production of biopharmaceuticals. It has important ad-
vantages compared to bacterial, yeast and plant cell expression systems. However, it is not widely utilized in the pharmaceuti-
cal industry owing to the high cost, diculties and low yield associated with its use. This review focuses on the use of animal
cell culture as an alternative producing system for biopharmaceuticals and highlights its advantages, restrictions and applica-
tions in the biopharmaceutical industry.
Palabras clave: cultivo de clulas animales, biotecnologa far-
macutica, protenas recombinantes.
Keywords: animal cell culture, pharmaceutical biotechnolo-
gy, recombinant proteins.
Correspondencia:
Dra. Anglica Meneses Acosta
Facultad de Farmacia
Universidad Autnoma del Estado de Morelos
Av. Universidad 1001, Col. Chamilpa
CP 62010Cuernavaca, Morelos
Telfono: (52) (777) 329 7000. Ext 336
e- mail: angelica_meneses@uaem.mx
Fecha de recepcin: 6 de enero de 2009
Fecha de recepcin de modifcaciones: 14 de febrero de 2010
Fecha de aceptacin: 15 de febrero de 2010
Revisin Bibliogrca
Volumen 40 Nmero 4 Octubre - Diciembre 2009
36
Introduccin
La clula, considerada como la unidad estructural bsica de la
vida constituye a todos los organismos vivos
1
. Los organismos
multicelulares superiores estn formados por diferentes tipos de
clulas eucariticas, las cuales tienen diversos tamaos, formas
y funciones especializadas, y, cuya coordinacin y funcin espe-
cfca lleva al desarrollo de los mismos mediante la formacin de
tejidos y/u rganos, para dar como resultado un organismo ms
complejo con capacidades mayores a las de sus componentes
2,3
.
La sobrevivencia del organismo completo depende de la coor-
dinacin del metabolismo de millones de clulas, las cuales in-
dividualmente llevan a cabo funciones especfcas tales como:
1) Nutricin, la cual se basa en la sntesis de sustancias primor-
diales para el metabolismo primario a partir de los nutrientes
obtenidos del exterior; 2) Relacin intercelular, en la cual las
clulas interaccionan y se comunican entre s a travs de sea-
les que determinan la funcin del tejido, y 3) Reproduccin, la
cual permite la multiplicacin a partir de una clula precursora
trayendo como consecuencia la obtencin de clulas hijas con
informacin gentica semejante a sus progenitoras. Esta ltima
funcin se caracteriza por poseer memoria
2,3,4
. Estas similitudes
fundamentales entre los diferentes tipos de clulas proporcio-
nan un marco comn para la biologa celular, permitiendo que
los principios bsicos puedan ser extrapolados y generalizados
a otros tipos de clulas. Es por ello que diversos tipos de clulas
y organismos son extensamente utilizados en cultivos celulares
debido a su fcil crecimiento y manipulacin experimental
2,4
.
Cultivo de clulas animales es el trmino general que se le ha dado
al aislamiento de un tipo especfco de clulas provenientes de
tejidos u rganos animales, que posteriormente son colocadas
en un ambiente artifcial que favorece su divisin, crecimiento,
multiplicacin y en algunos casos, diferenciacin
5
. El cultivo de
clulas animales ha permitido estudiar la actividad intracelular,
los fujos metablicos, las interacciones con el medio ambiente,
las interacciones clula-clula, la gentica y la generacin de me-
tabolitos de inters
5
. Estos principios bsicos han sido aplicados
en muy diversas disciplinas de la ciencias naturales, abarcando
desde la biologa celular, biologa del desarrollo y la fsiologa
(donde la generacin de conocimiento bsico est relacionada
con la estructura y funcin celular) hasta ciencias como la toxi-
cologa y farmacologa (donde el conocimiento es aplicado a las
ciencias farmacuticas).
Por otra parte, el uso de cultivos celulares animales dentro de
la biotecnologa farmacutica se ha incrementado en los lti-
mos aos, ya que stos permiten la produccin de manera casi
exclusiva de biolgicos y biofrmacos complejos (tales como va-
cunas tradicionales y recombinantes, protenas recombinantes
glicosiladas, anticuerpos monoclonales, vectores virales para
terapia gnica, etc.). Esto es debido a que brindan dos caracte-
rsticas fundamentales para la actividad de un biofrmaco como
son el plegamiento correcto de las protenas y la glicosilacin
compleja, adems de que es posible que secreten el biofrmaco
al medio de cultivo. Adems, la generacin in vitro de rganos
y tejidos (ingeniera de tejidos) cuyo potencial econmico est
rebasando las expectativas en los ltimos aos est marcando
otra lnea divisoria en el tratamiento de transplantes y medicina
reconstructiva
6
.
Por ello, y dada la importancia de este tipo de cultivos dentro del
rea farmacutica, en esta revisin se presentan los aspectos fun-
damentales del cultivo de clulas as como su aplicacin para la
produccin de biolgicos y biofrmacos de alto valor agregado.
Historia del cultivo de clulas animales en la produccin
de biolgicos y biofrmacos
Los orgenes del cultivo de clulas animales se remontan a me-
diados del siglo XIX, donde el desarrollo de las tcnicas micro-
biolgicas y del cultivo de bacterias empezaron a ofrecer a los
cientfcos de aquella poca la posibilidad y la visin de realizar
cultivos de cepas especfcas de manera aislada. No obstante la
historia formal de ste comenz a fnales del siglo XIX cuando
se hicieron los primeros intentos para promover el crecimiento
de rganos de diferentes animales sumergindolos en fuidos
biolgicos. Sin embargo, no es hasta 1907 cuando se considera
al cultivo celular como un mtodo para estudiar el comporta-
miento de las clulas animales independientemente de las va-
riaciones sistmicas
7
. En estos aos se realizaron los primeros
experimentos exitosos para mantener viables ciertos conjuntos de
clulas no disgregadas o explantes de diferentes tejidos, pero el
crecimiento solamente se limit a la migracin de clulas desde
el tejido con la ocasional presencia de mitosis
7, 8
.
A partir de la dcada de 1920 se inici el subcultivo de fbroblas-
tos, pero no es hasta 1943 cuando se estableci la primera lnea
celular continua de fbroblastos de ratn
9
. En 1952 se gener la
primera lnea celular de origen humano (HeLa) a partir de un
carcinoma cervical derivado de la presencia del virus de papi-
loma serotipo 18 siendo actualmente una de las lneas celulares
mas ampliamente utilizada con diferentes fnes
10
. Lo anterior,
junto con el desarrollo de otras lneas celulares en cultivo, dio
pauta para iniciar la propagacin viral en lneas celulares
11
, cul-
minando en la produccin a gran escala de vacunas tales como
la de la polio (1954), y, posteriormente, las de la rabia y la rubola
(1964-1969) entre otras aplicaciones
12
. Dado que el cultivo de
clulas a partir de un tejido primario se us ampliamente en esta
poca y por ms de 50 aos, ste recibi el nombre genrico de
cultivo de tejidos, aunque actualmente el uso del cultivo de c-
lulas dispersas de un solo linaje celular es mucho ms utilizado.
Innovaciones tales como el desarrollo de medios de cultivo
13
, el
uso de antibiticos, las tcnicas de tripsinizacin para el pasaje
de clulas
14
y el suplemento con suero fetal bovino del medio de
cultivo, permitieron el desarrollo de cultivos de clulas animales
de diferentes orgenes.
37
En los aos 1960s se establecieron las dos lneas celulares ms
utilizadas para la produccin de biofrmacos en la actualidad,
las cuales son las clulas CHO (Chinese Hamster Ovarium) y
la lnea BHK21 (Baby Hamster Kidney), la cual proviene de
rin de cra de hmster
15
. Sin embargo, su uso para este fn fue
explotado principalmente a partir de los aos 1980s. El desa-
rrollo de diferentes lneas celulares continuas de origen linfo-
blstico
16
empez a refejar los riesgos en el manejo de lneas
celulares dndose a conocer la posible contaminacin cruzada
con clulas HeLa en varios linajes celulares. A partir de los aos
1970s y con los logros obtenidos manipulando el ADN, los m-
todos que posteriormente conformaran lo que hoy conocemos
como tecnologa del ADN recombinante, se realizaron los pri-
meros ensayos de transferencia de ADN en clulas animales
17
.
En esta dcada, tambin se desarroll el primer linaje celular
artifcial proveniente de clulas murinas denominado hibrido-
ma
18
, el cual fue diseado originalmente para la produccin de
anticuerpos monoclonales con aplicacin teraputica. Sin em-
bargo, la presencia de virus murinos endgenos en el sistema
biolgico limitaron en aquella poca esta aplicacin, desarro-
llndose primeramente su uso como herramienta diagnstica la
cual es explotada ampliamente hasta nuestros das. Asimismo,
se inici el estudio de la totipotencialidad de las clulas madre
embrionarias, cuyo desarrollo actual se ve de manifesto en la
Ingeniera de rganos y Tejidos
19
.
En los aos 1980s, el avance en investigacin bsica a lo largo de
dcadas de estudio se puso de manifesto cuando se identifcaron
los mecanismos de regulacin de la expresin gentica, dndose
a conocer la regulacin del ciclo celular, y desarrollndose lneas
celulares especializadas as como los primeros cultivos para re-
constitucin de piel. En esta poca se llev a cabo, por primera
vez, la produccin de la primer protena recombinante en clulas
de mamfero
20
, constituyndose en el primer biofrmaco produ-
cido por ingeniera gentica en este tipo de sistemas.
A partir de la dcada de 1990, el incremento en la produccin
de biofrmacos utilizando la tecnologa del cultivo de clulas
animales modifcadas por medio de la tecnologa del ADN re-
combinante aument de manera exponencial debido a que las
protenas recombinantes generadas en sistemas bacterianos, de
levaduras por medio del cultivo de clulas vegetales no tenan
la calidad requerida por la industria biofarmacutica en com-
paracin con el producto generado por medio del cultivo de
clulas animales. En esta dcada, se ponen de manifesto las
ventajas fundamentales que ofrece la generacin de biofrmacos
por medio de esta tecnologa sobre otros sistemas de produccin
para la produccin de protenas de inters farmacutico. Tales
ventajas son: el plegamiento correcto de la protena (la pro-
tena traducida adquiere su estructura tridimensional correcta
en el interior del retculo endoplsmico y en el citoplasma); la
glicosilacin compleja (en el retculo endoplsmico y aparato
de Golgi de las clulas animales se agregan cadenas complejas
de azcar en sitios especfcos, producindose la O, la S la N
glicosilaciones, lo que brinda actividad a la protena, dirige a
sitios blanco y permite un mayor tiempo de vida media de sta
en el torrente sanguneo), y, la secrecin del producto al me-
dio de cultivo en la mayora de los casos (facilitando el proceso
de purifcacin posterior). As, el estudio de las condiciones,
parmetros y medios de cultivo para lograr que el sistema de
expresin en clulas animales fuera competitivo impuls el co-
nocimiento en el rea de la bioingeniera, ayudando al diseo
de nuevos tipos de reactores y modos de operacin que permi-
tieron incrementar las productividades, con lo cual los cultivos
celulares se convirtieron en una alternativa para la industria
biofarmacutica. Asimismo, el uso de clulas de insecto como
sistema de produccin de protenas recombinantes por medio de
la infeccin con baculovirus es al da de hoy una realidad como
sistema de expresin recombinante
21
.
Por otra parte, el cultivo de rganos, la ingeniera de tejidos y
el cultivo de clulas embrionarias eran ya actividades rutinarias
a fnales del siglo pasado a nivel de ciencia bsica. Ya en el siglo
XXI, con la genmica y el desarrollo del Proyecto del Genoma
Humano, se ha despertado el inters por otras micas: como
son la protemica, metabolmica, farmacogenmica, transcrip-
tmica, glicmica, interactmica, etc. La necesidad de cultivos
de clulas animales como base ineludible de la ingeniera de
tejidos, de rganos y en terapia gnica, impulsa a una recon-
ceptualizacin de la medicina y de la farmacia actuales. Dado
que este tema marca todo un novedoso desarrollo, se conside-
ra que es materia de otro artculo por lo que no se desarrollar
ampliamente aqu.
Es necesario aclarar que an cuando en la actualidad el cultivo
de clulas animales ha ofrecido las ventajas en la produccin de
protenas glicosiladas complejas, tambin presenta limitantes
importantes al compararlo con otros sistemas de expresin de
biofrmacos, tales como bacterias y levaduras recombinantes.
Dichas limitantes son los largos tiempos de cultivo, ocasionados
por las bajas velocidades de crecimiento; el uso de suplementos
(tales como el suero de diferentes mamferos) y medios de cultivo
costosos (principalmente aqullos que son defnidos); la fragili-
dad de las clulas a los esfuerzos de corte por lo que los reactores
utilizados tienen diseos especiales en los sistemas de agitacin
y aireacin, los cuales estn en constante optimizacin. Si bien
la baja cantidad de producto obtenido por las bajas densidades
celulares alcanzadas al da de hoy es una limitante parcial debi-
do a que con el uso de sistemas en perfusin se llegan a obtener
densidades celulares del orden de 1.5 X 10
7
cel/ml, todava la
cantidad de protena recombinante sigue siendo menor a la ge-
nerada en bacterias recombinantes, aunque el sistema de clu-
las de insecto-baculovirus es una buena alternativa cuando las
protenas a obtener no requiere glicosilaciones complejas. Otra
limitante parcial es la potencial presencia de virus animales en
los productos biofrmacuticos, los cuales son principalmente
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38
hespedes endgenos de las lneas celulares productoras, al da
de hoy, este problema se ha resuelto mediante el uso de sistemas
de deteccin viral confables, restringiendo el uso de suplemen-
tos potencialmente contaminados como es el suero de orgen
animal y por la operacin unitaria de inactivacin viral al fnal
del proceso de produccin
5
.
Clasicacin del cultivo celular
El cultivo celular se defne como el conjunto de tcnicas que per-
miten el mantenimiento, la supervivencia y/o multiplicacin in
vitro de clulas provenientes de rganos especfcos o de linajes
celulares tratando de conservar al mximo sus propiedades f-
siolgicas, bioqumicas y genticas. Una de estas propiedades es
la capacidad de adherencia a superfcies, lo que permite que las
clulas crezcan ya sea en monocapa o en suspensin. Esta propie-
dad de adherencia est en general asociada con el tipo de clula
de la cual derivan y depende del tipo de protenas presentes en su
superfcie. Se sabe que muchos cultivos celulares se encuentran
anclados a una superfcie celular debido a que sintetizan protenas
relacionadas con la matriz extracelular la cual est encargada de
mantener unidas a las clulas y posee un papel regulador sobre
las mismas in vivo. Algunas de las macromolculas involucradas
son la colgena, la fbronectina, la laminina y el proteoglucano,
las cuales establecen interacciones con las protenas de la mem-
brana citoplsmica de la clula, denominadas integrinas, CAMs
y cadherinas. Estas protenas adems de mantener unidas a las
clulas tambin participan en la transmisin de seales del ex-
terior hacia el interior de las clulas. En cultivos en monocapa,
la interaccin de este conjunto de protenas se da por medio de
las adhesiones focales
4
.
Los cultivos en monocapa (Figura 1A) representan una de las
formas de crecimiento in vitro de las clulas provenientes de
cultivos primarios o de lneas celulares dependientes de an-
claje. En general, las clulas que se desarrollan de esta manera
son estables genticamente y tienen una naturaleza diploide
normal. La monocapa celular crece (confuencia) cubriendo la
superfcie de soporte hasta que se establece contacto entre las
clulas, lo que causa que stas detengan su crecimiento (quies-
cencia). Existen algunas lneas celulares que tienen la capacidad
de crecer tanto en monocapa como en suspensin (clulas de
insecto, BHK21, hibridomas), sin embargo son muy pocas las
que tienen esta dualidad
5
.
El crecimiento en suspensin se presenta en clulas cuya natu-
raleza es de ese tipo como en el caso de clulas hematopoyti-
cas o en aqullas que han perdido o disminuido la sntesis de
protenas de anclaje y no desarrollan el proceso de quiascencia
como es el caso de algunas lneas celulares transformadas ar-
tifcialmente o de clulas procedentes de tumores. Las clulas
que provienen de cultivos primarios con requerimiento de an-
claje a superfcies pueden ser adaptadas a crecer en suspensin
despus de ser sometidas a una serie de subcultivos, al hacer
modifcaciones genticas o cambiando el medio de cultivo. Los
cultivos continuo
21
y de perfusin ofrecen ventajas econmicas
decisivas cuando se trata de aumentar la escala de operacin en
clulas en suspensin.
Con los cultivos tridimensionales se busca mantener la arquitectu-
ra in vivo del tejido de origen. En el caso del epitelio, los sistemas
tridimensionales permiten estudiar la proliferacin, morfologa
e interacciones intra e inter celulares. De igual forma se puede
evaluar el efecto de sustancias que pueden afectar tales inte-
racciones. En este tipo de cultivo es posible mantener los tipos
celulares diferenciados y es por ello una buena rplica del tejido
de origen, sin embargo, la propagacin celular es dependiente
de las caractersticas de la biomatrz o soporte
22,23
.
Por otro lado, el cultivo de clulas animales presenta principal-
mente tres morfologas (Figura 1B) las cuales son linfoblstica,
fbroblstica y epitelial (polihdrica). Estas morfologas estn
relacionadas con el origen del tejido primario. Las lneas con
morfologa linfoblstica crecen en suspensin mientras que las
dos ltimas crecen en forma adherente. Sin embargo, la morfo-
loga de la clula propia depende de las caractersticas tambin
del soporte. Es decir, cuando las clulas se despegan, tienden
a formar esferas, sin embargo, en el momento que se adhieren
vuelven a adquirir una forma especfca. En biotecnologa, las
Figura 1. A) Tipo de crecimiento de los cultivo celulares. De
acuerdo a las caractersticas del soporte y el origen celular,
los cultivos se pueden clasicar en monocapa, en suspensin
o tridimiensionales. B) Esquema de las morfologas de las
clulas en cultivo.
39
lneas de origen linfoblstico, como son los hibridomas, ofrecen
grandes ventajas dada su facilidad de crecer en suspensin, ya
que la manipulacin de ellas es mucho ms sencilla. De hecho,
a nivel industrial, el uso de lneas modifcadas genticamente
para subsanar el problema de la adherencia ha sido muy soco-
rrido en los ltimos aos permitiendo el desarrollo de lneas en
suspensin con crecimiento a altas densidades celulares.
Por otra parte, el mantenimiento a corto plazo de un cultivo
celular se realiza por el subcultivo del mismo en cual puede
conducir a modifcaciones genticas que pueden repercutir en
su fenotipo, sin embargo, esto no siempre sucede. Adems, estas
modifcaciones tambin pueden ser inducidas por medio de la
insercin de plsmidos especfcos, lo que da origen a cultivos
con diferentes propiedades. Este cambio en el fenotipo puede
explotarse para un fn comn considerando la maquinaria bio-
lgica de las clulas, abarcando desde el anlisis propio de la
funcin biolgica, el estudio de enfermedades o el desarrollo
de plataformas biotecnolgicas para la produccin de protenas
recombinantes y vacunas. Los diferentes tipos de cultivos celu-
lares se muestran en la Figura 2.
Cultivo Primario y subcultivo. Cuando el cultivo proviene de
clulas que han sido disgregadas de un tejido original tomado
de algn rgano de un animal reciben el nombre de Cultivo Pri-
mario. Es decir, representa el cultivo de clulas de un fragmento
de tejido obtenido a partir de un organismo. Estas clulas son
consideradas como cultivo primario hasta que se subcultiven con
xito (es decir, sean transferidas, con o sin dilucin, de un reci-
piente de cultivo a otro). Los cultivos primarios se caracterizan
por estar constituidos por diferentes tipos de clulas (por lo que
a veces pueden recibir el nombre de cocultivos) cuya morfologa
es predominantemente la de las clulas del rgano del que fueron
aisladas, sus cromosomas tienen un nmero diploide, su creci-
miento in vitro es limitado y presentan inhibicin por contacto
generada por vas de sealizacin intra e intercelulares.
En el caso del aislamiento y propagacin de virus silvestres, se
ha observado una mayor sensibilidad de los cultivos primarios
que de las lneas celulares
24
. Anteriormente para la produccin
de vacunas los cultivos primarios eran recomendables por tener
una baja probabilidad de que se transformaran en malignos. Su
principal desventaja resida en la probabilidad de presentar virus
adventicios o latentes, lo que implic el desarrollo de tecnologas
sensibles para el control de calidad
12
.
El cultivo secundario se establece cuando se hace el subcultivo
exitoso a partir de un cultivo primario. Las clulas dependien-
tes de anclaje forman una monocapa que puede llegar a cubrir
el soporte en el que crecen, el grado de cobertura del soporte se
llama grado de confuencia. El subcultivo implica el despren-
dimiento de las clulas adheridas, la dilucin de la densidad
celular y su reinoculacin en medio fresco. Las clulas pueden
crecer a una velocidad constante en diversos subcultivos sucesi-
vos, recibiendo cada uno de ellos el nombre relacionado con el
pase. Es necesario aclarar que en este tipo de pases, el nmero
de subcultivos no necesariamente corresponde al nmero de ge-
neraciones celulares por lo que siempre es importante considerar
el tiempo en el que cada una de las clulas tarda en replicarse
5
.
Cultivo Celular. . Un cultivo celular es aquel cultivo de clulas
que tiene alta capacidad de multiplicarse in vitro, el cual es es-
tablecido a partir del primer subcultivo de un cultivo primario
y que tiene las mismas caractersticas que el tejido de origen.
Su principal caracterstica es que tiene un nmero limitado de
posibles subcultivos, cuyo nmero generalmente se encuentra
entre 60 y 70 pases. Al da de hoy algunos cultivos ampliamente
utilizados son los de clulas 293HEK o Wi38
5
.
Lnea Celular Continua. Una lnea celular continua consiste de
clulas que se diferencian gentica y morfolgicamente de las
clulas de las cuales se originaron. Pueden provenir de tumores
o de un proceso de transformacin de un cultivo primario por
medio de una prdida de regulacin debido al subcultivo con-
tinuo o mediante transfeccin con oncogenes, o el tratamiento
con agentes carcinognicos. Las lneas celulares continuas son
aquellas que han demostrado posibilidades de ser subcultivadas
in vitro por lo menos 70 pases indefnidamente y que presentan
caractersticas genotpicas diferentes al tejido del cual fueron
originadas. Las lneas celulares continuas pueden ser trans-
fectadas con genes especfcos para la produccin de protenas
de inters, se les conoce como lneas celulares transformadas
genticamente. En general, algunas de estas lneas se caracte-
rizan por no tener inhibicin por contacto y crecer de manera
indefnida e independiente del nmero de pases o subcultivos.
Las lneas celulares ms utilizadas en el mbito farmacutico se
enlistan en la Tabla 1
5
.
Figura 2. Diferentes cultivos celulares de acuerdo a su origen y
modicacin gentica y fenotpica.
Volumen 40 Nmero 4 Octubre - Diciembre 2009
40
El cultivo celular y sus productos
Una de las aplicaciones ms interesantes del cultivo celular ha
consistido en la obtencin de productos de uso teraputico que
ya han alcanzado el mercado farmacutico. Los avances logrados
en la tecnologa de cultivo celular han permitido que productos
cada vez ms complejos se pongan al alcance del pblico
usuario. En esta seccin se presentan los diferentes productos
del cultivo celular en orden creciente de complejidad del proceso
involucrado. De este modo primero se abordar la produccin
de virus, necesarios en la fabricacin de vacunas. En seguida se
presentar la produccin de anticuerpos monoclonales, usados
como herramienta tanto diagnstica como teraputica. Por
ltimo, se presentar a las protenas recombinantes, mismas
que representan productos denominados no nativos, al derivarse
directamente de tecnologas de ingeniera gentica aplicadas a
clulas en cultivo.
Produccin de vacunas virales
Las primeras vacunas producidas en cultivos de clulas de ma-
mfero fueron aquellas contra la viruela y la febre amarilla en los
aos 1930s. El aislamiento de virus solamente pudo ser posible
gracias al descubrimiento de la posibilidad de propagar clulas
humanas in vitro; al control de la contaminacin con antibiticos
y al diseo y construccin de equipos de limpieza de aire. Altos
ttulos virales son alcanzados cuando los virus son crecidos en
clulas susceptibles y, actualmente, son muchos los tipos celulares
que pueden ser cultivados, adicionalmente, es ms fcil inspec-
cionar un cultivo celular al microscopio buscando evidencias de
proliferacin viral, que usar huevos o animales completos. En la
Tabla 2 se enlistan vacunas virales comercializadas en Europa y
los Estados Unidos que se producen usando cultivos de clulas
de mamfero. Actualmente, la disponibilidad de anticuerpos
monoclonales y tcnicas moleculares para la deteccin de ADN
y ARN viral, ha facilitado la identifcacin de virus en proce-
sos infecciosos, evitando las etapas de incubacin en clulas en
cultivo y permitiendo adems la identifcacin de virus que no
proliferan en cultivos tradicionales
25
.
El desarrollo de una vacuna que poda prevenir la infeccin por
el virus de la poliomielitis solamente pudo lograrse en cultivos,
primero, in vitro y segundo, en clulas que no pertenecen al sis-
tema nervioso central. Inicialmente, en 1908, se propagaba el
virus al infectar primates sensibles. En el ao 1913 se propagaba
el virus al infectar tejido nervioso de primate mantenido en cul-
tivo por 21 das
26
. En los aos que siguieron, no se haba obteni-
do evidencia sufciente que permitiera pensar que el virus de la
poliomielitis no se multiplicaba en tejido extraneural humano.
En 1949, Enders en conjunto con Tom Weller y Fred Robbins,
reportaron el crecimiento de virus de la polio (cepa Lansing)
en cultivos extraneurales
11
. Posteriormente, en 1952, se publi-
c el uso de cultivos en suspensin de piel, msculo, intestino
y tejido nervioso embrinicos humanos para la propagacin del
virus
27
. Adicionalmente, con adelantos tecnolgicos se pudieron
obtener ttulos virales muchas veces superiores a los obtenidos
en cultivos tradicionales. Uno de tales adelantos consisti en
el desarrollo de fermentadores de 300 y 1000 litros en los que
clulas de rin de mono crecen sobre microacarreadores, con
lo que la superfcie de cultivo es incrementada
28
. De este modo
se consigui la produccin masiva de una vacuna que cambiara
la historia de la salud pblica.
Una aplicacin actual del cultivo de virus en clulas de mam-
fero es el diagnstico de infecciones virales. Dicho diagnstico
es posible al buscar seales de cambios degenerativos conocidos
colectivamente como efecto citoptico en cultivos en monoca-
pa de diferentes lneas celulares. El observador experto puede
Tabla 1. Lneas celulares ms utilizadas en el mbito
biofarmacutico
Lnea
celular
Origen Caracterstica
BHK21 Rin de cra
hmster Sirio
Fibroblasto dependiente del
anclaje, pero puede inducirse en
suspensin
CHO Ovario de
hmster Chino
Clulas en suspensin semejantes
a las epiteliales
HeLa Carcinoma
cervical Humano
Clulas en suspensin semejantes
a las epiteliales
IMR-90 Pulmn de
embrin
Humano
Fibroblasto diploide con lapso de
vida limitado
L Tejido conectivo
de ratn
Fibroblastos, clulas en
suspensin
McCoy Origen de ratn
similar a las
clulas L
Fibroblastos dependientes de
anclaje
MDCK Rin canino Semejantes a las epiteliales,
dependientes de anclaje
MRC-5 Pulmn de
embrin Humano
Fibroblastos diploides, vida
limitada
MPC-11 Mieloma de
ratn
Clulas en suspensin semejante
a los linfoblastos
Namalwa Linfoblastoide
humano
Clulas en suspensin semejantes
a los linfoblastos
3T3 Tejido conectivo
del ratn
Fibroblastos dependientes de
anclaje
WI-38 Pulmn de
embrin humano
Fibroblastos diploides, vida
limitada
WISH Amnin
Humano
Semejantes a las epiteliales, vida
limitada
Vero Mono verde
africano
Fibroblastos dependientes de
anclaje
41
Tabla 2. Vacunas virales producidas en cultivo celular y disponibles en los mercados
de Estados Unidos y Europa (www.Biopharma.com)
Virus Nombre comercial Caractersticas
Adenovirus Adenovirus vaccine Oral, tipo 4. Obtenidos por cultivos en fbroblastos diploides humanos WI-38
Adenovirus vaccine Oral, tipo 7. Obtenidos por cultivos en fbroblastos diploides humanos WI-38
Hepatitis A VAQTA Formulacin acuosa de virus completo inactivado proveniente de virus atenuado (con formaldehido)
cultivado en clulas MRC-5 (fbroblastos humanos diploides).
Havrix Virus inactivado con formaldehido, cepa HM-175, cultivado en clulas MRC-5.
Epaxal Berna Formulacin virosomal (estructura fosfolipdica similar a membrana celular) de virus de hepatitis A de la
cepa RG-SB, inactivado con formaldehdo y crecido en clulas MRC-5, estas clulas son adsorbidas en
virosomas reconstituidos de infuenza inmunopotenciadores con dos antgenos del virus de la infuenza
anclados a la membrana del virosoma.
Avaxim Virus de la cepa GBM cultivado en clulas humanas diploides MRC-5, inactivado con formaldehido
Hepatitis B Hapacare-Hepagene ADN recombinante, triple antgeno (antgeno de superfcie, pre S-1, pre S-2)
Infuenza Flumist ADN recombinante, virus atenuado adaptado al fro, vacuna trivalente A y B producida en embriones de pollo.
CAIV-T ADN recombinante, lquido, vacuna trivalente A y B. Virus de infuenza no patognico con protenas de
cubierta inmunognicas de cepas epidmicas, y con el ncleo del virus atenuado por mutaciones genticas.
Fluvirin Antgenos de superfcie provenientes de virus cultivado en embriones de pollo, los virus se inactivan con
beta-propiolactona, los antgenos se recuperan usando Triton N-101.
Begrivac Contiene fragmentos inactivados de tres virus causantes de infuenza.
Fluvax Antgenos de superfcie provenientes de virus inactivados de tres cepas patognicas diferentes cultivado
en embriones de pollo.
Fluarix, Infusplit SSW,
Alpharix
Virus completos cultivados en embrin de pollo, inactivados y fragmentados. Vacuna trivalente tipos A y B
Infuenza FluLaval, Fluviral Vacuna trivalente, cultivos en embrin de pollo.
Fluogen Vacuna trivalente tipos A y B, antgenos de supefcie de virus cultivados en embrin de pollo, extrados con ter.
Flu-Immune Subviriones aislados a partir de virus cultivados en embrin de pollo.
Flushield Vacuna trivalente tipos A y B, antgeno del subvirin purifcado por cromatografa y fltracin
Fluzone Vacuna trivalente tipos A y B, subviriones aislados a partir de virus cultivados en embrin de pollo.
Rotavirus RotaShield, Rotamune Atenuado naturalmente por recombinacin, administracin oral, vacuna tetravalente contra los 4
serotipos ms frecuentes en los EEUU, cultivado en clulas de rin de mono verde africano y una lnea
celular de mono rhesus fetal diploide.
Rotarix, RIX-4414 Formulacin de un rotavirus recombinante natural (89-12C2) cepa G1P[8], cultivado en clulas VERO.
RotaTeq, WC3 Vacuna generada a partir de un recombinante natural de cinco cepas de rotavirus. Cada uno de los
recombinantes consiste del esqueleto de ARN del rotavirus bovino G6 cepa WC-3 con una insercin gentica
de un rotavirus humano que codifca para una protena de superfcie -ya sea VP7 de los rotavirus humanos G1,
G2, G3 o G4, o bien VP4 del rotavirus humano P1A. Los virus son cultivados en clulas Vero.
Encefalitis
japonesa
JE-VAX Virus inactivado con formaldehido (cepa Nakayama-NIH) cultivado in vivo en cerebros de ratn infectado.
Sarampin Attenuvax Virus de la cepa Moraten propagado en cultivos de clulas de embrin de pollo.
Paperas Mumpsvax Virus de la cepa Jeryl Lynn (nivel B) cultivado en embriones de pollo.
Poliomielitis IPOL Virus de tres cepas (Mahoney, MEF-1 y Saukett) inactivados con formalina crecidos en clulas Vero.
Poliovax Virus de tres cepas (Mahoney, MEF-1 y Saukett) inactivados crecidos en clulas MRC-5.
IPV Virus de la poliomielitis inactivado cultivado en clulas Vero.
Rabia Imovax Virus de la cepa Pitman-Moore (PM 1503-3M) cultivados en clulas MRC-5 e inactivado con beta propiolactona
Rabie-Vax, Imovax Virus inactivado con beta propiolactona cultivado en fbroblastos humanos diploides MRC-5
RVA Virus inactivado cultivado en clulas pulmonares de mono rhesus fetal (FRhL-2)
RabAvert Virus de la cepa Flury LEP C25 propagado en cultivos primarios de fbroblastos de embrin de pollo
inactivado, inactivado con beta propiolactona.
Rubeola Meruvax II Virus atenuado de la rubola (cepa Wistar Institute RA 27/3) cultivado en fbroblastos humanos
diploides de pulmn WI-38
Viruela ACAM2000 Virus de la cepa Conn-Master 17633 crecido en clulas Vero
Imvamune, MVA 3000 Modifcacin del virus no infeccioso de la cepa Ankara cultivados en fbroblastos de embrin de pollo
Varicela Varivax II Virus varicela zoster atenuado de la cepa OKA/Merck cultivado en fbroblastos humanos MRC-5
Zostavax Virus varicela zoster atenuado de la cepa OKA/Merck cultivado en fbroblastos humanos MRC-5
Fiebre amarilla Arilvax Virus atenuado de la cepa 17D cultivado en embriones de pollo
YF-VAX Virus atenuado de la cepa 17D en embriones de pollo.
Volumen 40 Nmero 4 Octubre - Diciembre 2009
42
emitir un diagnstico preliminar basndose en la lnea celular
implicada, en el tiempo de incubacin y en la magnitud del efec-
to citoptico, aunque pruebas adicionales son necesarias para la
identifcacin defnitiva del virus (el lector interesado puede re-
mitirse a Leland y Ginocchio, 2007, para una completa revisin
de las diferentes tcnicas para la identifcacin de virus).
Produccin de anticuerpos
Los anticuerpos son molculas proteicas compuestas de cuatro
cadenas, dos ligeras y dos pesadas unidas por puentes disulfuro,
los cuales tienen diversas funciones tales como reconocimiento y
neutralizacin de antgenos, opsonizacin, presentacin de ant-
genos a clulas efectoras y activacin del sistema de complemento.
Desde el punto de vista funcional, los anticuerpos presentan una
fraccin que reconoce al antgeno y otra fraccin cristalizable que
meda funciones efectoras como la respuesta citotxica dependiente
del anticuerpo y aquella que depende del complemento. La fraccin
que reconoce al antgeno tiene una regin variable y una regin
constante, la primera de estas dos es muy diversa en virtud de la
variedad de antgenos, la segunda permite la estabilizacin de la
fraccin variable. Los anticuerpos son producidos por clulas B del
sistema inmune y responden a un solo determinante antignico.
Los anticuerpos son herramientas muy importantes de la inves-
tigacin cientfca al poderse localizar, identifcar y cuantifcar
niveles de expresin de productos gnicos, se han usado tam-
bin en la caracterizacin y tipifcacin de clulas particulares;
mediante su uso, se pueden tambin conocer interacciones mo-
leculares y celulares. En la prctica clnica, los anticuerpos son
tiles en diagnstico y tratamiento de padecimientos
29
.
La produccin de anticuerpos monoclonales (provenientes de
una sola clona de linfocitos B) surgi con la tecnologa creada por
Milstein y Khler en 1975
18
que permiti la fusin de linfocitos
B, productores de inmunoglobulinas especfcas, con clulas de
mieloma tumoral que se encuentran permanentemente en creci-
miento. Con esta fusin se obtienen los hibridomas que crecen de
manera casi ilimitada produciendo anticuerpos especfcos contra
un antgeno particular. Con el advenimiento de las tcnicas de
biologa molecular la produccin de hibridomas ha llegado ms
lejos y se han logrado reducir las respuestas de rechazo que se
producen cuando los anticuerpos son producidos en ratn. Con
el objeto de reducir el rechazo, se incluyen secuencias humanas
en los anticuerpos, en un proceso que se ha llamado quimeri-
zacin, a pesar del cual el 40% de los anticuerpos quimricos
producen cierto tipo de rechazo
29
. El siguiente paso tecnolgico
ha consistido en la humanizacin de los anticuerpos, una etapa
importante en este proceso fue el establecimiento en Cambridge
de una lnea de hibridoma totalmente humana
30
.
La mayora de los anticuerpos comercializados (Tabla 3) son pro-
ducidos por dos vas, usando tecnologa de ADN recombinante
en clulas de mamfero (como las CHO) o clulas linfoides mu-
rinas (como NSO, Sp2/0-Ag14), o bien en hibridomas
31
.
Tabla 3. Anticuerpos producidos usando clulas de mamfero cultivadas,
y comercializados en los EE UU y en Europa (www.Biopharma.com)
Antgeno Nombre Comercial Caractersticas
CD11a Efalizumab-Raptiva Anticuerpo monoclonal recombinante usado n el tratamiento de psoriasis
CD20 Rituximab-Rituxan Anticuerpo monoclonal quimrico recombinante para el tratamiento de linfoma tipo no-Hodgkin
agresivos, usado tambin para el tratamiento de artritis reumatoide
Ibritumomab Tiuxetan-
Zevalin
Anticuerpo monoclonal recombinante antineoplsico, conjugado radio inmune para el tratamiento de
linfoma folicular
CD33 Gemtuzumab ozogamicin-
Myotarg
Tratamiento de leucemia mieloide aguda, anticuerpo recombinante humanizado conjugado con citocina
calicheamicina
CD52 Alentuzumab-Campath Tratamiento de leucemia linfoctica crnica de clulas B. Anticuerpo monoclonal recombinante de rata
humanizado
CTAA16.88 Votumumab-HumaSPECT Anticuerpo monoclonal conjugado con tectenio 99 (Tc99m) para el tratamiento de cncer
Epidermal
Growth Factor
receptor (EGFr)
Cetuximab-Erbitux Anticuerpo monoclonal quimrico recombinante expresado en clulas mieloides murinas
transformadas. Usado para el tratamiento de tumores que expresan EGFr. Se une especfcamente al
extremo N-terminal del receptor celular del EGF.
Panitumumab ABX-EGF Tratamiento de estados avanzados de cncer colorectal. Anticuerpo monoclonal humano especfco para
EGFr, expresado en clulas CHO
Receptor de Her2 Trastuzumab-Herceptin Anticuerpo monoclonal humanizado producido en clulas CHO que se une al dominio extracelular del
receptor tipo 2 del factor epidrmico de crecimiento humano (HER-2) expresado por el proto-oncogen c-erbB2
Inmunoglobulina
E
Omalizumab-Xolair Anticuerpo monoclonal glicoproteico recombinante humanizado, especfco para inmunoglobulina E
humana. Expresado en clulas CHO. Tratamiento de asma
Integrina Natalizumab-Tysabri Anticuerpo monoclonal murino humanizado expresado en clulas de mieloma murino. Especfco para
integrina alfa 4 beta 1 y alfa 4 beta 7. Tratamiento de esclerosis mltiple
43
Una muy interesante perspectiva se abre para la produccin de
anticuerpos, como lo dice Nathan Blow
32
, los avances en ge-
nmica han revelado poco ms de 20 mil genes tan slo en el
hombre, sin embargo slo existen anticuerpos para un escaso
porcentaje de los productos de dichos genes.
Antgeno Nombre Comercial Caractersticas
Receptor de
interleucina 2
Basiliximab-Simulect Anticuerpo monoclonal glicoproteico quimrico (humano-murino) especfco para la subunidad alfa del
receptor de interleucina 2 de alta afnidad, expresado en clulas de mieloma murino. Usado como agente
inmunosupresor
Daclizumab-Zenapax Anticuerpo monoclonal glicoproteico quimrico (humano-murino) especfco para la subunidad alfa del
receptor de interleucina 2 de alta afnidad, expresado en clulas de mieloma murino. Usado como agente
inmunosupresor
LFA-3/IgG1 Alefacept-Amevive Protena de fusin conformada por el antgeno 3 asociado a la funcin leucocitaria y la inmunoglobulina
G humana. Selecciona como blanco a las clulas T con memoria. Tratamiento de psoriasis
Plaquetas Abciximab-ReoPro Fragmento de un anticuerpo monoclonal glicoproteico quimrico /humano-murino) producido por
la lnea ceular de mieloma murino Sp2/0. Especfco contra el receptor glicoproteico IIb/IIIa del
fbringeno en plaquetas humanas, inhibiendo agregacin de plaquetas
Respiratory
sincitial virus
(RSV)
Palivizumab Anticuerpo monoclonal glicoproteico recombinante humanizado especfco contra un eptope en el
sitio antognico A de la protena de fusin de RSV. Expresado en clulas de mieloma murino (NSO).
Tratamiento de infecciones pulmonares causadas por RSV
Tumor Necrosis
Factor alpha
(TNF-alpha)
Infiximab-Remicade Anticuerpo monoclonal glicoproteico recombinante parcialmente humanizado, especfco contra TNF-
alpha humano Producido en la lnea celular c168A. Tratamiento de procesos infamatorios en los que
TNF est implicado
Adalimumab-Humira Anticuerpo monoclonal recombinante humano especfco contra TNF-alpha. Tratamiento de los
sntomas de artritis reumatoide, artritis psoritica, espondolitis anquilosante, enfermedad de Crohn
Tumor Necrosis
Factor receptor
2/IgG1
Etanercept-Enbrel Protena de fusin dimrica recombinante similar a anticuerpo, consistente en dos cadenas unidas
covalentemente de una protena de fusin compuesta del dominio extracelular soluble del receptor 2 de
TNF (TNFR2) con la inmunoglobulina humana G1. La protena de fusin se expresa en clulas CHO
Vascular
Endothelial
Growth Factor
(VEGF)
Bevacizumab-Avastin Anticuerpo monoclonal recombinante humanizado especfco contra VEGF humano. Compite e inhibe
la proliferacin de clulas endoteliales limitando la vascularizacin de tumores
CD3 Muromonab-CD3.
Orthoclone OKT 3
Anticuerpo monoclonal murino especfco contra el receptor de CD3 en la superfcie de clulas T
humanas. Uado para reducir la inmunidad natural en pacientes transplantados
CA125 Igovomab-Indimacis 125 Diagnstico de adenocarcinoma ovrico. Especfco contra el antgeno CA125 asociado a tumores
humanos. Anticuerpo quimrico
CD15 Fanolesomab Neutrospec Anticuerpo monoclonal IgM murino especfco para el antgeno CD15 en membranas de granulocitos/
neutrflos humanos. Radioconjugado con tectenio 99 para diagnstico de apendicitis no convencional
CD20 Tositumomab-Bexxar Anticuerpo monoclonal especfco contra CD20 en la superfcie de clulas B, conjugado con Yodo 131.
Tratamiento de linfoma tipo no-Hodgkin
Carcino
Embryonic
Antigen (CEA)
Aratumomab-CEA-Scan Anticuerpo monoclonal con especifcidad por el antgeno carcinoembrinico, expresado en mltiples
tumores. Radioconjugado con tectenio 99m se usa en radio diagnstico detumores colorectales
Granulocitos Sulesomab-Leuko-Scan Anticuerpo monoclonal murino especfco contra el fragmento Fab de NCA-90 en granulocitos.
Diagnstico de apendicitis no clsica
Miosina Imcicromab Pentetate-
Myoscint
Fragmento Fab derivado enzimticamente de anticuerpo monoclonal murino con especifcidad por
miosina. Radioconjugado con indio 111 se usa en diagnstico de tejido cardiaco muerto
NR-LU-10 Nofetumomab-Verluma NR-LU-10 fragmento Fab derivado enzimtico de un anticuerpo monoclonal murino especfco por la
glicoprotena CD20 expresada en la superfcie de clulas tumorales. Conjugado con tectenio 99m para
el radio diagnstico de tumores
Antgeno
especfco
prosttico de
membrana
Capromab Pendetide-
ProstaScint
El anticuerpo monoclonal 7E11-C5.3, especfco contra el antgeno prosttico de membrana conjugado
con indio 111 es usado para el diagnstico de tumores prostticos y su metstasis
Tumor-associated
glycoprotein 72
(TAG72)
Satumomab Pendetide-
OncoScint
Inmunoconjugado formado por un anticuerpo monoclonal murino especfco por TAG72 unido a
molcula queladora. Conjugado con indio 111 es usado para radiodiagnstico de tumores que expresan
TAG72
CD34 Stem cell concentration
system-Isolex 300
Sistema automatizado para la seleccin de clulas troncales CD34+ usando perlas magnticas cubiertas
con anticuerpos monoclonales murinos. Uso en transplante de clulas troncales de sangre perifrica
Volumen 40 Nmero 4 Octubre - Diciembre 2009
44
Produccin de protenas recombinantes
El uso de la tecnologa recombinante para la produccin de
protenas tiene cerca de 20 aos
33
y, hoy en da, cerca del 70%
de aquellas usadas con fnes teraputicos (Tabla 4) provienen de
cultivos de clulas de mamfero
34
en virtud de que son las nicas
clulas que pueden realizar una serie de modifcaciones complejas
que las protenas de inters teraputico requieren.
Algunas protenas glicosiladas, producidas por cultivo de clulas
animales han constituido conos de la tecnologa recombinante, tal
es el caso de los factores de coagulacin, de gran importancia en pa-
cientes hemoflicos. La eritropoyetina (EPO), la cual es ampliamente
glicosilada ha tenido un gran xito comercial al ser la citocina de
mayor uso en el mundo para el tratamiento de anemias y las clulas
CHO son las empleadas a nivel industrial. Como potenciador de la
respuesta inmune, la interleucina 2 es ampliamente utilizada en pa-
cientes con VIH. Un problema nada reciente pero al que la tecnologa
del ADN recombinante ha podido atender de manera precisa, es la
infertilidad, misma que a travs de la produccin de la hormona esti-
mulante de folculos ha podido responder a las necesidades de parejas
con problemas reproductivos. En la Tabla 5 se enlistan algunas de las
hormonas que se comercializan en Europa y en los Estados Unidos
que son producidas en cultivos de clulas de mamfero.
Una de las principales inquietudes que derivan de la produccin
en gran escala y grandes concentraciones de polipptidos re-
combinantes tiene que ver con la posibilidad de agregacin y de
desnaturalizacin. Morozova-Roche y Malizauskas
35
llaman la
atencin sobre una estructura altamente ordenada, caracterizada
por un ncleo de hojas beta cruzadas, adoptada por diversos po-
lipptidos y que comprometera la actividad de macromolculas
teraputicas, es la estructura amiloide. Entre los productos far-
Tabla 4. Enzimas producidas en cultivos celulares y comercializadas en EE UU y Europa (www.Biopharma.com)
Enzima Nombre Comercial Caractersticas
Arilsulfatasa B Galsulfase-Naglazyme N-acetilgalactosamina 4-sulfatasa humana recombinante. Glicoprotena
expresada en clulas CHO transformadas (CSL4S-342)
DNAsa Dornase alfa-Pulmozyme
inhalation solution
Deoxiribonucleasa I humana recombinante expresada en clulas CHO que
contienen el ADN complementario de la protena nativa humana. Usada para
adelgazar las secreciones pulmonares de los pacientes con fbrosis qustica
Alfa galactosidasa Agalsidasa alfa-Replagal Enzima glicoproteica recombinante producida en fbroblastos humanos activados.
Las clulas productoras estn transformadas con secuencias gnicas promotoras
que incrementan la expresin endgena de alfa-galactosidasa A. Terapias de
remplazo enzimtico en pacientes con enfermedad de Fabry
Beta galactosidasa Agalsidase beta-Fabrazyme Formulacin lioflizada de alfa galactosidasa recombinante producida en clulas
CHO transformadas
Glucocerebrosidasa Imiglucerasa-Cerezyme Formulacin lioflizada de una forma mutada de la beta-glucocerebrosidasa
humana, tiene una sola substitucin aminoacdica (His495Arg), es producida en
clulas CHO transformadas, patrn de glicosilacin modifcado para exponer
manosas
Alglucerase-Ceredase Beta glucocerebrosidasa purifcada de tejido placentario humano, perfl de
glicanos modifcado enzimticamente para dejar manosas terminales
Glucosidasa Alglucosidase alfa-Myozyme Recombinante, glicosilada, degrada glicgeno, expresada en clulas CHO
transformadas. Tratamiento de pacientes con enfermedad de Pompe,
almacenamiento en lisosomas de glicgeno parcialmente degradado
Iduronidasa Laronidasa-Aldurazyme Alfa L-iduronidasa humana recombinante, expresada en clulas CHO
transformadas. Terapia de remplazo enzimtico en pacientes con
mucopolisacaridosis I
Protena C activada Drotrecogin alfa-Xigris Proteasa de serina recombinante humana con actividad tromboltica. Expresada
en clulas Hek293 transformadas con el ADN complementario de la protena C
zimgeno (precursor inactivo de la enzima), activada con trombina bovina
Tissue plasminogen
activator (tPA)
Alteplase-Activase
Cathfo Activase
Glicoprotena recombinante de cadena simple, activador del plasmingeno
tisular humano tipo I, producido en clulas CHO transformadas. Tratamiento de
infartos agudos al miocardio
Tenecteplase-TNKase Forma modifcada de tPA con sustituciones aminoacdicas que conducen a una
mayor afnidad por fbrina
Uroquinasa Abboquinasa Uroquinasa dimrica humana de bajo peso molecular obtenida del cultivo de
clulas de rin de neonato humano. Activa al plasmingeno humano a su forma
fbrinoltica/tromboltica: plasmina
45
macuticos que adoptan estructura amiloide in vitro se encuentran
la insulina, amilina, glucagon, GLP-1, calcitonina y hormona de
crecimiento. Es entonces imperativo que el proceso de produc-
cin provea las condiciones que eviten la formacin de amiloides,
puede ser desde el diseo de la protena misma o bien cambian-
do las condiciones de produccin, almacenamiento y aplicacin.
Como ejemplo del diseo de la protena se puede mencionar la
introduccin de aminocidos hidrofbicos, de puentes disulfuro
o de sal, iones metlicos coordinados o ligandos en las reas don-
de es posible que haya uniones intermoleculares estabilizantes o
bien evitando las interacciones desestabilizantes
35
. En el medio
de produccin es posible agregar sales o azcares que aumentan
la solubilidad de los polipptidos.
Conclusiones
La aplicacin del cultivo de clulas animales dentro de la biotec-
nologa farmacutica se ha incrementado en los ltimos aos ya
que las ventajas ofrecidas por ste son permitir el plegamiento
correcto, brindar una glicosilacin compleja adecuada y total-
mente relacionada con la actividad farmacolgica y en el caso
de su produccin, secretar los productos al medio de cultivo.
En la actualidad, estas ventajas permiten hacer del cultivo de
clulas un sistema competitivo a nivel productivo en los pases
desarrollados ya que por medio de l es posible obtener vacunas,
anticuerpos monoclonales y protenas recombinantes cuyo valor
agregado es considerable. En Mxico, debido a la apertura por
parte de las empresas farmacuticas para la generacin de pro-
ductos de origen biotecnolgico es necesario brindar informacin
bsica a la comunidad farmacutica del desarrollo de este tipo
de cultivos a lo largo de la historia as como de su clasifcacin y
usos ms importantes, para facilitar la comprensin de procesos
farmacuticos que utilicen este tipo de sistemas.
Agradecimientos
A.Meneses-Acosta agradece el apoyo otorgado por PROMEP-
SEP para la realizacin de este artculo. Asimismo, agradecemos
la participacin de la estudiante Anel Prez Rodrguez (UPE-
Mor) en la bsqueda de informacin.
Referencias
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Tabla 5. Hormonas producidas en cultivos de clulas de mamfero y comercializadas en EE UU y Europa (www.Biopharma.com)
Hormona Nombre comercial Caractersticas
Eritropoyetina Epogen
Procrit
Eritropoyetina recombinante humana expresada en clulas CHO
Epex Glicoprotena expresada en clulas CHO, secuencia aminoacdica de la protena humana
Dynepo Eritropoyetina recombinante humana producida en cultivos de clulas R223 humanas
transformadas con secuencias de citomegalovirus para inducir niveles elevados de
expresin de EPO
Aranesp Protena estimulante de la eritropoyesis expresada en clulas CHO. Difere de la EPO
por tener dos sustituciones amioacdicas y 5 sitios de N-glicosilacin (EPO tiene 3) que
mejoran la estabilidad metablica de la molcula
Hormona Estimulante de
Folculos (FSH)
Follistin AQ Hormona estimulante de folculos recombinante expresada en clulas CHO K1
que fueron transferidas con un plsmido que contiene las secuencias de ADN de las
subunidades alfa y beta de la FSH humana
Gonadotropina corinica
(hCG)
Ovidrel Glicprotena recombinante humana producida en clulas CHO transformadas.
Consiste de dos subunidades unidas de manera no covalente, cadena alfa con 2 sitios de
N-glicosilacin, cadena beta con 2 sitios de N-glicosilacin y 4 de O-glicosilacin
Hormona luteinizante
(LH)
Lutropin
alfa-Luveris
Hormona luteinizante recombinante humana glicosilada expresada en clulas
CHO transformadas. Glicoprotena heterodimrica con dos subunidades unidas no
covalentemente, 2 sitios de N-glicosilacin en cadena alfa y 1 en cadena beta
Somatropina Saizen
Zorbtive
Hormona de crecimiento humana recombinante expresada en clulas de tumor murino
C-127 transformadas. Secuencia, estructura, propiedades, actividad y efciencia
terapeutica idnticas a la hormona humana
Hormona estimuladora
de la tiroides (TSH)
Tyrogen Hormona recombinante producida en clulas CHO transformadas. Glicoprotena
heterodimrica con dos pptidos unidos de manera no covalente, subunidad alfa con 2
sitios de N-glicosilacin, cadena beta con 1 sitio de N-glicosilacin, carece de sulfatacin
a diferencia de la hormona nativa
Volumen 40 Nmero 4 Octubre - Diciembre 2009
46
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