Biorremediacin de suelos contaminados con

hidrocarburos.
En la actualidad los suelos contaminados con hidrocarburos representan el
70% del total de los ecosistemas impactados. A partir del aislamiento,
seleccin y conservacin de bacterias marinas degradadoras
de hidrocarburos y productoras de sustancias tensioactivas se formul un
producto denominado BIOIL-FC. Este producto ha sido aplicado
satisfactoriamente en derrames de hidrocarburos en el mar.
La biorremediacin por bioestimulacin de suelo contaminado
con hidrocarburos empleando el producto BIOIL-FC es superior a la tcnica de
bioestimulacin tradicional con nutrientes, lo cual evidencian las
potencialidades de este bioproducto para el saneamiento de ambientes
terrestres impactados con petrleo y sus derivados.

La Contaminacin con hidrocarburos
La contaminacin con hidrocarburos en diferentes ecosistemas se ha
incrementado en los ltimos aos debido al aumento en la actividad de
exploracin y produccin de la industria petrolera. En la actualidad los suelos
contaminados con estos compuestos representan el 70% del total de los
ecosistemas impactados.
[1]

Los derrames de petrleo y sus derivados son considerados de gran impacto al
ambiente por los nefastos daos que ocasionan en los ecosistemas impactados.
Las investigaciones relacionadas con la biorremediacin como alternativa
eficiente para la recuperacin de los mismos cobran cada vez mayor
importancia.
La bioorremediacin
La biorremediacin est basada en la capacidad que tienen
los microorganismos de crecer a partir de la utilizacin de sustancias
recalcitrantes al medio ambiente
[2]
. Algunos de ellos son capaces de degradar
estos compuestos hasta dixido de carbono, sales, agua y otros productos
inocuos al medio ambiente
[3]
los cuales se integran posteriormente a los ciclos
biogeoqumicos naturales
[4]
. Esta tcnica permite tratar grandes volmenes
de contaminantes con un impacto ambiental mnimo, a diferencia de otros
procedimientos de descontaminacin
[5]
.
La biorremediacin puede ser aplicada in situ o ex situ. Las tecnologas in
situ se refieren a las que se aplican en el rea a tratar, mientras que en las
ex situ los productos son aplicados al material contaminado donde pueda ser
tratado
[6]
.
Los procesos de biorremediacin clasifican en tcnicas de bioestimulacin y
bioaumentacin. La tcnica de bioestimulacin se basa en el uso de nutrientes,
sustratos o aditivos con actividad superficial para estimular el crecimiento y
desarrollo de organismos capaces de biodegradar compuestos contaminantes
del medio ambiente
[7]
).
Las tcnicas de bioaumentacin describe la adicin de organismos o enzimas a
un material con el propsito de eliminar sustancias indeseables
[8]
. La
bioaumentacin asegura que estn presentes los microorganismos especficos
capaces de degradar al compuesto contaminante no deseado hasta sus
molculas bsicas
[9]
. Las bacterias son los microorganismos ms comnmente
utilizados para la bioaumentacin
[10]
.
A partir de un programa de aislamiento, seleccin y conservacin de bacterias
marinas hidrocarbonoclastas y productoras de sustancias tensioactivas se han
formulados diferentes bioproductos para su aplicacin en derrames
de hidrocarburos, teniendo en cuenta que la extensin y diversidad taxonmica
de los microorganismos marinos representan un potencial para obtener
productos naturales bioactivos que garanticen la conservacin del medio
ambiente.
El cultivo mixto A-5, compuesto por bacterias marinas hidrocarbonoclastas
forma parte del bioproducto BIOIL-FC
[11]
. Este bioproducto presenta una alta
capacidad de oxidacin del petrleo y sus derivados como resultado de la
actividad metablica de las cepas que lo integran.
Materiales y Mtodos
Se dise un experimento con tres bloques, donde se evaluaron las tcnicas de
bioestimulacin y bioaumentacin con el producto BIOIL-FC, el cual est
formado por bacterias degradadoras dehidrocarburos aisladas de la
plataforma cubana y que forman parte de la coleccin de bacterias marinas
del Centro de Bioproductos Marinos.
Los estudios fueron realizados en parcelas (41 cm de largo x 30 cm de ancho x
2,5 cm de profundidad) de 3 Kg de suelos contaminados con un 10% de fuel oil
o gasolina regular (85% o 96% de octanaje). Las parcelas fueron arreadas
semanalmente y la humedad fue controlada a un 20%, adems se aadi
inicialmente 6% (w/w) de (NH4)2HPO4. Se tomaron muestras integradas de
las parcelas cada 7 das para las determinaciones de concentracin
de bacterias hetertrofas, biodegradadores de petrleo, ndice
de respirometra y concentracin hidrocarburos totales.
Concentracin de hetrtrofos totales presentes en el suelo (ISO 4833:
1991 e ISO 6837: 1993): A partir de muestras de suelo se realizaron
diluciones seriadas, las cuales fueron inoculadas a razn de 100L en placas,
que fueron incubadas a 30
0
C durante 48 horas. Luego del tiempo de
incubacin se realiz el conteo directo de las colonias viables formadas
expresado en UFCg-1 de suelo.
Determinacin de microorganismos degradadores: Se utiliz el conteo de
viables expresados en UFC g-1 de suelo en el medio propuesto por Finnerty
(1994) y utilizando petrleo crudo Varadero de 11 API como nica fuente
de carbono y energa.
Produccin de CO2 (Respirometra): Se determin la cantidad de
CO2 producido como indicador indirecto de la actividad microbiana,
expresado en mg de CO2 producidos por m2 de suelo por das
[12]
.
Velocidad especfica de crecimiento (): Se determin en la fase
exponencial del crecimiento, utilizando el modelo de crecimiento no
restringido
[13]
.
Determinaciones analticas Gravimetra: Se realiz por la metodologa
descrita en el Standard Methods, segn la norma internacional APHA
5520.
[14]
.
Espectroscopia Infrarroja: El extracto obtenido por gravimetra, fue
resuspendido en 10 mL de nhexano y sometido a espectroscopa infrarroja
en un espectrmetro Konik, en celdas de Bak con separador de tefln de
0,025 mm.
Cromatografa gaseosa de alta resolucin: Para la determinacin
cuantitativa y cualitativa el petrleo residual despus de interactuar con las
bacterias, el hidrocarburo fue inyectado en un cromatgrafo de gases
HP6890 con detector inico de llama (GC/FID), con columna capilar HP-
5MS 5% Phenyl Methyl Siloxane de 30 m de longitud y 0,25 mm de
dimetro interno impregnada con 0v-101. Se utiliz helio como gas portador.
El gradiente de temperatura programado fue de 45-100oC a 3
0
C min-1 y de
100-300
0
C a 5
0
C min-1.
Tratamiento estadstico de los resultados
Todas las experiencias se realizaron con tres repeticiones y una vez que se
verific el cumplimiento de la distribucin normal de los datos segn
Kolmogorov y Smirnov y la homogeneidad de varianzas por el mtodo de
Bartlett, se realiz el anlisis de varianza de clasificacin simple y la prueba de
comparacin de medias de rangos mltiples de Duncan (12) (Lerch, 1977) en la
cual las medias que se diferencian se expresan con diferente letra. Todos los
resultados fueron procesados con el paquete estadstico Statistica 4.0 y/o
Excel 7.0 para Windows.
Consecuencias de la contaminacin con hidrocarburos
La manipulacin y transporte de crudo y sus derivados ha incrementado
notablemente los derrames de stos en diferentes ecosistemas.
Los suelos contaminados requieren de tratamientos eficientes que permitan su
recuperacin y su posible reutilizacin.
Para las parcelas donde se evalu el producto BIOIL-FC se obtuvo mayores
de hetertrofos totales y degradadores de hidrocarburos con respecto a las
alcanzadas en el mtodo tradicional de biorremediacin (bioestimulacin). Este
comportamiento debe estar determinado por la adicin
de microorganismos degradadores de crudo que garantizan la multiplicacin
celular en estas condiciones y que son los responsables de la degradacin de los
hidrocarburos a diferencia de la variante de bioestimulacin donde la actividad
metablica de la microbiota autctona se inhibe por la presencia de estos
contaminantes.
Para todas las variantes se detect la disminucin de los hidrocarburos en el
tiempo, aunque en los casos donde se evalu la bioestimulacin tradicional el
porcentaje de remocin fue significativamente inferior a las parcelas con
BIOIL-FC, ya que la microbiota autctona no debe presentar una alta velocidad
de biotransformacin.
En las parcelas con BIOIL-FC se logr una mayor eficiencia en la oxidacin de
los hidrocarburos aunque para cada uno se alcanzaron diferentes porcentajes
de remocin, de manera que para el fuel oil y gasolina de 85% de octanaje se
alcanzaron 50 y 61% de remocin respectivamente en 28 das, mientras que
para gasolina de 96% se alcanz un 98% en solo 15 das. Es conocido que las
diferencias en la composicin y concentracin de hidrocarburos en
el petrleo influyen en su biodegradacin. As, un mismo microorganismo, puede
presentar diferentes porcentajes de degradacin ante crudos de diferente
procedencia o composicin qumica en iguales condiciones experimentales.
La adicin de microorganismos degradadores de crudo en las parcelas con
BIOIL-FC facilita los procesos de bioconversin de estos en compuestos no
txicos y biodegradables, an cuando pudiera existir un agotamiento de algn
nutriente. Estudios realizados por Nez (2003) demostraron que una de las
cepas integrante de ese biopreparado (Bacillus alcalophilus CBM-225) puede
llevar a cabo la bioconversin de diferentes hidrocarburos presentes en el
petrleo hasta CO2 y H2O.
Adems, es importante destacar que en la formulacin del bioproducto se
incluye un biotensioactivo de tipo emulgente producido por una de las cepas que
lo integran (Bacillus licheniformis CBM-60), que favorece los procesos de
emulsificacin de hidrocarburos y por tanto una mayor disponibilidad de este
sustrato como fuente de carbono (Ortiz, 2004).
La presencia de tensioactivos debe modular la hidrofobicidad de la superficie
celular facilitando la adhesin y colonizacin de la interfase (Khler et
al, 2000). Esto permite la incorporacin del hidrocarburo a la clula para llevar
a cabo los procesos metablicos que conduzcan a la multiplicacin celular a
partir de los hidrocarburos como nica fuente
de carbono y energa (balos, 2001), sin que se produzcan reacciones adversas
que inhiban la permeabilidad de la membrana celular como ocurre para
tensioactivos obtenidos por sntesis qumica (Ducreux et al, 1994).
En cuanto al comportamiento de la concentracin de CO2 se detectaron
fluctuaciones a lo largo de la experiencia para cada hidrocarburo evaluado,
aunque en general los mximos valores se alcanzaron en la parcela con BIOIL-
FC, lo cual nos indica que en dicha parcela existi una mayor actividad
microbiana pues existe un mayor porcentaje de remocin de hidrocarburos que
no slo debe estar relacionado con su oxidacin; sino tambin por reacciones
de biotransformacin de este sustrato que facilitan su biodegradacin
posterior hasta CO2 y H2O.
El anlisis cualitativo de la degradacin de la gasolina de 96% de octanaje
demostr las diferencias entre los perfiles cromatogrficos de este
hidrocarburo sin degradar y los residuos luego del contacto con el bioproducto
BIOIL-FC.
Fuentes
Abalos, A. (2001). Produccin de ramnolpidos por Pseudomonas aeruginosa
AT10 aplican-do la Metodologa de Superficie de Respuesta.
Caracterizacin y aplicacin del producto. Tesis de Doctorado. Facultad de
Farmacia. Departamento de Microbiologa y Parasitologa
Sanitarias. Universidad de Barcelona.
(2000). Why add microbes? Advanced BioTech, California, USA. Advanced
BioTech
APHA (1995). Standard Methods for the examination of water and
wastewater. Grasas y aceites. 18th ed. APHA_AWWA-WEF. 5520, pp: 534-
540.
Baheri, H. y Meysami, P. (2002). Feasibility of Fungi Bioaugmentation in
Composting a Flare Pit Soil. Journal of Hazardous Materials. 89: 2-3: 279-
286
Ducreux, J., Ballerini, D. y Bocard, C. (1994). The role of surfactants in
enhanced in situ bioremediation. Hydrocarbon Bioremediation. Ed. Lewis
Publishers. Boca Raton. pp 237-242.





Micropropagacion in vitro en Orquideas

Produccin in vitro, efectiva
tcnica para salvar orqudeas
Publicado el 11/Noviembre/2013 |
00:53

La Universidad de Cuenca ha
codificado 84 tipos de esas planta

En cada produccin se obtiene un
promedio de 50 plantas. Este
mecanismo es empleado con fines
educativos, ambientales y
comerciales. El Ministerio de
Ambiente avala y controla esta
actividad que va tomando fuerza.

Crear nuevas especies de orqudeas y recuperar aquellas en peligro de
extincin son objetivos cumplidos gracias a la produccin in vitro.

En Cuenca, varias instituciones educativas y comerciales emplean ese
mecanismo y obtienen, en promedio, alrededor de 50 plantas en cada
produccin.

Rafaella Ansaloni, responsable del Laboratorio de Micropropagacin de la
Universidad de Cuenca, explic que la donacin de equipos fue clave para
incursionar en este nuevo campo.

La tcnica empez hace 13 aos con el cultivo de varios tipos de orqudeas.
La Universidad de Cuenca lo hace desde 2010.

La mayora de especies de orqudeas
existentes en los bosques est sufriendo un
proceso de disminucin por causa de la tala y
quema de los bosques y de la extraccin de su habitad natural.

Son depredadas y comercializadas ilegalmente y pueden llegar a desaparecer.
Las tcnicas de propagacin in vitro a partir de semillas es una alternativa para
evitarlo, pero sin abusar de ella.

Segn los entendidos, su reproduccin debe ser en cantidades adecuadas y las
plantas deben ser distribuidas a viveros.

En Cuenca, estn en peligro de extincin algunas variedades de las Oncidium.

Hasta el momento, especialistas del Orquideario de la Universidad de Cuenca
han clasificado 84 especies. Algunas son hbridas, es decir, creadas por medio
de la fecundacin cruzada de dos variedades de una misma especie. Otras son
originales o puras.

Tanto las orqudeas hbridas como las naturales han sido sometidas a la
produccin in vitro.

Este es un mecanismo especial que se inicia con la bsqueda y eleccin de las
semillas.

Segn Jessenia Romero, laboratorista del Orquideario, esta accin es
determinante en el proceso de produccin.

Dependiendo de la especie, cada planta tiene un tiempo de maduracin, que va
de tres a 20 meses. Por eso es clave la eleccin de las semillas. Una mala
eleccin puede retrasar aos la produccin de nuevos ejemplares.

El siguiente paso es la preparacin del medio de cultivo, que consiste en un
pequeo frasco de vidrio que contiene, entre otros ingredientes, agua de coco,
micronutrientes, macronutrientes, azcar y carbn.

Para que el experimento sea exitoso hay que tomar en cuenta varios aspectos
tcnicos, explica Jessenia Romero.

Una condicin bsica es trabajar en un ambiente totalmente higinico para
evitar la proliferacin de hongos que pueden echar a perder la produccin.
(MAN)