INTRODUCCION

El consumo de F&H frescas es parte integral de una dieta sana. Estas se encuentran
expuestas a contaminacin por microorganismos patgenos antes, durante y despus de
su cosecha. En la precosecha son de inters la tierra, el agua de riego, la presencia de
materia fecal animal o humana, el tipo de abono utilizado, el aire y las personas que
cuidan de la tierra de cultivo. En la poscosecha destacan la maquinaria y equipo, los
recipientes, animales domsticos o silvestres, los trabajadores, el polvo de la atmsfera y
los vehculos1. En los pases en vas de desarrollo el avance econmico para aliviar la
pobreza se apoya muchas veces en el sector agrcola. Este a su vez necesita garantizar que
los productos sean de alta calidad sanitaria para su consumo. De ah la necesidad de
capacitacin especializada y generacin de informacin relevante sobre los peligros
microbiolgicos como condicin para ajustarse a las normas que establecen organismos
internacionales [Codex Alimentarius de la Organizacin para la Agricultura y la
Alimentacin y la Organizacin Mundial de la Salud (FAO/WHO)].














I. OBJETIVOS
1. Determinar la bacteria Escherichia Coli en una muestra de apio.
2. Comprobar si esta muestra est en el lmite permisible de acuerdo a la
Resolucin Ministerial.

II. FUNDAMENTO TEORICO

ESCHERICHIA COLI

La Escherichia coli tambin conocida por la abreviacin de su nombre, E. coli, es quizs el
organismo procariota ms estudiado por el ser humano. Se trata de un entero
bacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales, y por ende en
las aguas negras, pero se lo puede encontrar en todos lados, dado que es un organismo
ubicuo.
Esta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso
digestivo, adems de producir las vitaminas By K. Es un bacilo que reacciona
negativamente a la tincin de Gram (gramnegativo), es anaerobio facultativo, mvil
por flagelos periticos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz
de fermentar la glucosa y la lactosa.











AGAR MULLER HILTON
Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad
a los antimicrobianos. Adems es til con el agregado de sangre para el cultivo y
aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.
El Clinical and LaboratoryStandardsInstitute (CLSI), ex
NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards (NCCLS), recomend su uso en forma
rutinaria para la realizacin del antibiograma en medio slido, debido a una serie de
factores que se detallan a continuacin: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las
pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y
tetraciclina es bajo, la mayora de los patgenos crece satisfactoriamente y una gran
cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo.
Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es til para realizar las pruebas de
sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos.
Resultados

Consultar en la seccin prueba de sensibilidad a los antimicrobianos, la metodologa
apropiada.

Notas:

1-Los lotes de agar MuellerHinton Britania cumplen con las normas descriptas en el
documento M6 - P del NCCLS: Evaluatingproductionlots of dehydratedMuellerHinton
agar. Esto es muy importante pues algunos lotes pueden variar significativamente y si las
bacterias no crecen adecuadamente, las zonas de inhibicin en las pruebas de difusin son
generalmente ms grandes, quedan fuera de los lmites de control de calidad y pueden
dar resultados errneos.

2-Los medios que contienen cantidades excesivas de timidina o timina pueden revertir el
efecto inhibitorio de las sulfonamidas y trimetoprima, produciendo as zonas de inhibicin
ms pequeas y por lo tanto informes de falsa resistencia. Para evaluar el contenido de
timidina del lote de agar MuellerHinton, se prueba la cepa de control de calidad:
Enterococcusfaecalis ATCC 29212 frente a discos de TMS. En un medio satisfactorio, se
produce una zona clara de inhibicin de 20 mm o ms.

3-Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el agar MuellerHinton es que las
variaciones en cationes divalentes principalmente calcio y magnesio pueden afectar los
resultados con tetraciclina, polimixina y aminoglucsidos cuando se ensayan cepas de
Pseudomonasspp. Por tal motivo, se deben cumplir los lmites de control de calidad
publicados por el NCCLS.

4-Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos los organismos de
control para evitar datos aberrantes debido al medio de cultivo. Para aquellas cepas que
fallan de crecer satisfactoriamente sobre Agar MuellerHinton no suplementado, se agrega
sangre desfibrinada de carnero al agar fundido y enfriado, a una concentracin final al 5%
(v/v).

Para el control de precisin y exactitud del agar de MuellerHinton se usan las siguientes
cepas control:

S. aureus ATCC 25923
E. coli ATCC 25922
P. aeruginosa ATCC 27853
E. faecalis ATCC 29212

Para evaluar el desempeo de inhibidores de beta lactamasa, se utiliza la cepa control:

E. coli ATCC 35218









III. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Cuanta colonias

Balanza analtica

Incubadora

Estufa

Bao mara

Bolsa Ziploc
Guantes, mascarilla, gorro

Placa Petri

Pipeta

Probeta

Mechero

Rejilla

Trpode

Agar eosina-azul de metileno

Apio

Cloruro de sodio

Agua destilada









IV. PARTE EXPERIMENTAL

1. Preparar 500ml de una solucin salina 0.7 %
2. Pesar 10g de la muestra de apio. Colocar en una bolsa ziploc y adicionar 90ml de la
solucin salina.
3. Reducir la concentracin de la muestra, llevando 1ml de esta en 9ml de solucin
salina.
4. Nuevamente reducir la concentracin levando 0.1 ml en 1 ml de solucin salina.






5. Calentar en bao Mara el agar CITRATO en 250 ml de agua hasta fusin.








6. Colocar 1ml del inocuo (muestra) en una placa Petri e inmediatamente adicionar
entre 15- 20 ml del agar fundido.

7. Homogenizar y dejar enfriar






8. Colocar en el incubador a 37C por 48 horas y observar los resultados.
9. Hacer el experimento por duplicado y colocar la segunda incubacin a 25C.









V. RESULTADOS

No se detect Salmonella ni E. coli en la muestra de apio, sin embargo E. coli estuvo
presente en un porcentaje de los materiales asociados, principalmente en guantes.






XIV. FRUTAS, HORTALIZAS, FRUTOS SECOS Y OTROS VEGETALES
XIV.3. Frutas y hortalizas frescas semiprocesadas (lavadas, desinfectadas, peladas
y/o cortadas) refrigeradas y/o congeladas.
Agente Microbiano Lmite por g
m M
Escherichia Coli 10 10
2


INFORME DE ENSAYO
ANALISIS: MICROBIOLGICO DE APIO
LUGAR: LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
FECHA DE MUESTREO: 20/05/14
FECHA DE EJECUCIN: 23/05/14

RESULTADOS MICROBIOLGICOS

ENSAYOS / MANIPULADOR
APIO
(Hortalizas frescas)
LIMITE PERMISIBLE
(*)

DECTECIN

Escherichia Coli - 10 10
2


(*)
RM 591-2008 MINSA, Criterios Microbiolgicos de Calidad Sanitaria e Inocuidad de los Alimentos y
Bebidas de Consumo Humanos







VI. CONCLUSIONES

1. No se lleg a determinar colonias en la muestra de apio por el agar incorrecto
que trajo el grupo N 1
VII. RECOMENDACIONES

1. Se recomienda al grupo responsable de traer el agar incorrecto (GRUPO N1)
investigar con profundidad, para no tener percances en la identificacin de
bacterias que es el objetivo principal.
2. Se recomienda usar el Agar MuellerHinton para la identificacin de E. Coli.

3. Trabajar en un ambiente lo ms estril posible, flameando el rea de trabajo.

4. Operar en la siembra y lectura con las implementaciones de seguridad (gorro,
guantes y mascarillas).

5. Desechar como residuo slido todo lo que se haya utilizado en la siembra y
lectura del agente microbiano (bolsa ziploc y los implementos de seguridad);
esterilizar todo el material de vidrio utilizado.

VIII. FUENTES REFERENCIALES

1. http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/muellerhintonagar.htm
2. http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/embagar.htm
3. http://es.wikipedia.org/wiki/escherichia-coli