Centro de Bachillerato Tecnolgico

industrial y de servicios Nm. 224

Mdulo:
Biologa Contempornea

Facilitador:
Jos Luis Ortega Prez

Tema:
ADN recombinante y Biotica

Equipo: #7
6B

En la actualidad los avances cientficos y tecnolgicos han ido ms all de lo esperado, la
ingeniosidad del humano ha sobre pasado lmites que han beneficiado la vida del hombre. En
medicina, el avance que caus revuelo a finales del siglo pasado, y tambin de este, ha sido el
descubrimiento del genoma humano y ste ha desencadenado una serie de descubrimiento y
posibles remedios en la medicina, como lo es el ADN recombinante.
ADN recombinante es una molcula que proviene de la unin artificial de dos fragmentos de ADN.
Por lo tanto, la tecnologa de ADN recombinante es el conjunto de tcnicas que permiten aislar un
gen de un organismo, para su posterior manipulacin e insercin en otro diferente.
En cuanto a la modificacin gentica, se crea a travs de la introduccin de ADN pertinentes en un
ADN existente de organismos, tales como los plsmidos de las bacterias, alterar las caractersticas
diferentes para un propsito especfico, como resistencia a los antibiticos
La tcnica del ADN recombinante, se propuso por primera vez por Peter Lobban, un estudiante
graduado, con A. Dale Kaiser en el Departamento de Bioqumica de la Universidad de Stanford.
La tcnica se llev a cabo entonces por Lobban y Kaiser, Jackson, Symons y Berg y Stanley Norman
Cohen, Chang, Herbert Boyer y Helling, en 1972-74.
Ellos publicaron sus hallazgos en artculos como el papel 1972 "mtodo bioqumico para insertar
nueva informacin gentica en el ADN del virus de simio 40: Circular SV40 molculas de ADN que
contienen genes de fagos Lambda y la galactosa Operon de Escherichia coli", el documento de
1973 "enzimtica de extremo a fin de la unin de molculas de ADN ", y el artculo de 1973''La
construccin de los plsmidos bacterianos biolgicamente funcionales in vitro'', que describe las
tcnicas para aislar y amplificar los genes o segmentos de ADN y los insertan en otra celda con
precisin, la creacin de una bacteria transgnica .
Tecnologa del ADN recombinante ha sido posible gracias al descubrimiento, el aislamiento y la
aplicacin de las endonucleasas de restriccin por Werner Arber, Daniel Nathans y Hamilton
Smith, para lo cual recibi el Premio Nobel 1978 en Medicina.
Cohen y Boyer solicitado una patente sobre el proceso para la produccin de quimeras molecular
biolgica funcional que no puede existir en la naturaleza en 1974. La patente fue concedida en
1980.
La tcnica consiste en introducir el gen seleccionado en el interior de un vector y ste, a su vez,
dentro de una clula, denominada clula anfitriona. Aprovechando la maquinaria celular, el gen se
expresa, sintetizndose as la protena codificada en el gen. Adems, al dividirse la clula,
las nuevas clulas formadas contienen ese gen que tambin sintetizan esa protena. Se genera un
grupo celular que contiene un genoma distinto.


Las etapas en la produccin de ADN recombinante son las siguientes:
1-PREPARACIN DE LA SECUENCIA DEL ADN PARA SU CLONACIN
Es la parte esencial del proceso, ya que el ADN debe separarse y concentrarse.
Partimos de clulas con ncleo, que deben ser lisadas (rotas).
Las protenas estructurales, enzimas, ARN y restos moleculares deben separarse del ADN.
El ADN obtenido se concentra y se fragmenta por accin de las enzimas de restriccin.
Se asla el ADN que se desea clonar, por ejemplo, mediante cromatografa lquida o por
centrifugacin.
Si el ADN debe expresarse hay que aadir los segmentos reguladores de la expresin gnica.
2 PREPARACIN DE UN VECTOR DE CLONACIN
El vector es el portador de la secuencia de ADN que se desea clonar. Un vector debe presentar las
siguientes caractersticas:
Una pequea secuencia de ADN fcil de aislar, como, por ejemplo, un plsmido.
Contener distintos puntos de ataque a enzimas de restriccin y que sean conocidos.
Poder ser incluido en la clula anfitriona con facilidad.
Replicarse de forma independiente al ADN de la clula anfitriona.
Poseer un gen marcador con el que puedan identificarse y seleccionar las clulas clonadas. Un
ejemplo de marcador puede serla resistencia a un antibitico
Las etapas del proceso consisten en:
Cortar el vector coenzimas de restriccin, las mismas enzimas que se utilizaron para cortar el ADN
que se quiere insertar.
Unir el vector y el ADN que se va a clonar mediante los llamados extremos cohesivos, o pegajosos,
o escalonados.
Una vez que el ADN ha sido introducido en el vector se denomina ADN inserto, o simplemente,
inserto.
Los tipos de vectores que se utilizan suelen ser plsmidos, virus como el fago l, cromosomas
creados de forma artificial y quimeras.
3 FORMACIN DEL ADN RECOMBINANTE
En esta etapa se produce la unin covalente del vector y el ADN inserto mediante una ligasa. As se
realiza el sellado de la llamada Mella, Muesca o Nick.

4 INTRODUCCIN DEL ADN RECOMBINANTE EN LA CLULA ANFITRIONA
Para la clonacin (replicacin del ADN recombinante) se necesita la maquinaria celular. Por ello,
hay que introducir el ADN recombinante en una clula anfitriona.
Los tipos de clulas anfitrionas son:
Clulas bacterianas: son las ms utilizadas, ya que tienen una alta velocidad de replicacin, un bajo
coste de mantenimiento de las colonias y son fcilmente manipulables.
Clulas eucariotas: aunque las clulas eucariotas son, en general, difciles de mantener se usan
levaduras y clulas tumorales:
Levaduras: se utilizan en procesos relacionados con la investigacin de la expresin y la regulacin
gnica y la sntesis de protenas eucariotas.
Clulas tumorales: apropiadas en procesos de clonacin, ya que la velocidad de replicacin es muy
alta y se mantienen los caracteres sin producirse cambios, pues son muy estables.
Los mtodos para la introduccin del ADN recombinante facilitan la entrada de grandes
fragmentos de ADN, puesto que la membrana celular es selectiva y no permitira la penetracin de
grandes molculas.
5-PROPAGACIN DEL CULTIVO
Se induce la divisin de clulas anfitrionas, de forma que se producen tambin copias de ADN
recombinante y, por ello, la clonacin. Primero se efecta una siembra en placas Petri con agar
como medio de cultivo. Se dejan crecer las colonias. Cada una de ellas ser seleccionada y
transferida a distintos medios lquidos, donde seguir aumentando el nmero de individuos de la
colonia.

6- DETECCIN Y SELECCIN DE LOS CLONES RECOMBINANTES
En los procesos de clonacin se utiliza un gran nmero de clulas. Al final del proceso se hace
necesario separar las clulas que contienen ADN recombinante de las que no lo contienen.
La deteccin y la seleccin de colonias se realiza en los medios de cultivo. En los procesos de
clonacin se obtienen clulas anfitrionas que no han incluido el vector, clulas recombinantes, es
decir, que han incluido el vector con el ADN para recombinar, y clulas anfitrionas con vector que
no lleva el ADN inserto.
Los mtodos para detectar y seleccionar son:
Mtodo de hibridacin: se utiliza una sonda marcada que hibrida con el ADN recombinante o con
el ARN mensajero que se transcribe a partir de l.
Mtodo inmunolgico: se detecta la protena codificada en el ADN recombinante mediante
anticuerpos especficos.
Mtodos genticos: que, a su vez, pueden ser:
Insercin del vector y el ADN recombinante en un gen de la clula anfitriona que queda
desactivado. Por ejemplo, si la colonia no produce enzima lactasa, es que el ADN recombinante se
encuentra dentro del ADN bacteriano en ese gen.
Vector con genes de resistencia a un antibitico: en el medio se agrega el antibitico y slo crecer
aquella colonia que sea resistente a l, por tanto, que porte el ADN.
Colonias con defectos nutricionales: se utilizan clulas anfitrionas mutantes que no puedan
sintetizar, por ejemplo, un aminocido. Para que la colonia sobreviva, el aminocido debe ser
aadido al medio de cultivo. Empleando un vector que lleve el gen correcto para la sntesis de
dicho aminocido, haciendo crecer las colonias celulares en medios carentes de l slo crecern
las bacterias que lleven el ADN inserto.
A lo largo de los ltimos 100 aos, el conocimiento de la gentica ha crecido exponencialmente.
Hoy en da, los cientficos se han visto beneficiados con los aos de investigacin y estn
explorando con xito el campo de la ingeniera gentica. Combinando el ADN de dos organismos
distintos con la tcnica del ADN recombinante, son posibles muchos resultados, y el potencial de
esta ciencia es virtualmente ilimitado. Los beneficios del ADN recombinado incluyen mejoras en
las investigaciones sobre el cncer, aumento de la fertilidad, produccin de
vacunas, tratamientos para la diabetes y la produccin de alimentos enriquecidos, resistentes y
abundantes. Los usos del ADN recombinante varan ampliamente; se emplea en muchas industrias
diferentes, desde la medicina hasta la agricultura.
MEDICINA
Las hormonas como la insulina o la hormona de crecimiento humanas, son creadas en cuerpos que
funcionan normalmente. Estas hormonas son protenas y las protenas estn hechas de una
secuencia especfica de aminocidos. La secuencia de aminocidos est determinada por el ADN
de una persona. Anteriormente, los diabticos usaban insulina porcina, pero no era bien tolerada
por todos los pacientes ya que su secuencia de aminocidos es levemente diferente. Hoy en da,
los cientficos han desarrollado bacterias que poseen el gen humano para la insulina que se ha
insertado dentro de ellas utilizando tcnicas de ADN recombinante. Como la secuencia de
aminocidos es la misma, los diabticos la toleran rpidamente an cuando ha sido producida por
una bacteria. De forma similar, los cientficos han elaborado protocolos para los factores de la
coagulacin, la hormona de crecimiento, protenas para luchar contra los virus y muchas otras
medicinas que estn en desarrollo.


BIOPLSTICOS
Los plsticos comunes son polmeros creados a partir del petrleo, que es una fuente de
combustible fsil no renovable. Cuando se acabe el petrleo, podramos quedarnos no slo sin
combustible para nuestros autos, sino tambin sin plstico. Esta posibilidad ha estimulado a la
ciencia para crear bioplsticos. Estos son creados a partir de productos de las plantas, a menudo a
travs de mtodos de ADN recombinante. Los cientficos han creado un gen que producir un
compuesto casi idntico al plstico comercial y su aplicacin es hoy en da una zona caliente de la
investigacin. De tener xito, los cientficos se habrn asegurado de que nunca nos quedemos sin
plstico o tengamos que preocuparnos sobre la polucin que produce la fabricacin de plstico a
partir de las antiguas tecnologas no renovables.
Terapias gnicas
Muchas enfermedades debilitantes estn codificadas genticamente. La enfermedad de clulas
falciformes, la enfermedad de Huntington y otras innumerables patologas son causados por
anomalas en el ADN. Si bien los cientficos todava no pueden curar todas las enfermedades
genticas, estn usando las ideas del ADN recombinante para crear tcnicas llamadas terapias
gnicas. El objetivo de las terapias gnicas es eliminar el ADN anormal de las clulas de una
persona y reemplazarlo por ADN normal de otra fuente. Esta tarea es extremadamente difcil ya
que el cuerpo humano est formado por alrededor de 10 trillones de clulas. Sin embargo, en las
enfermedades de la sangre, si la mdula sea de una persona es tratada y reparada, toda la sangre
nueva que crea esa persona estar tambin reparada. Todava no es una ciencia perfecta pero las
ideas son consistentes y escuchars ms y ms sobre esto en los prximos aos.

Agricultura
Los granjeros actualmente tambin se benefician con las tcnicas de ADN recombinante. Los
cientficos han desarrollado numerosos avances que pueden ser utilizados para prevenir la muerte
de las plantas debida a insectos, insecticidas, herbicidas e incluso por las heladas. Puede insertarse
ADN en las plantas para hacerlas resistentes a los herbicidas comunes. Por consiguiente, cuando el
granjero fumiga para eliminar las malezas, slo estas mueren y las plantas buenas quedan
indemnes. Esto tambin puede ser utilizado para hacer que las plantas no se vean afectadas por
los insecticidas, e incluso stas pueden liberar qumicos que ahuyentan a los insectos. Los
granjeros tambin pueden cubrir los campos de fresas con bacterias con ADN recombinante que
ayudan a proteger a las plantas de los choques trmicos y las heladas.
Aunque aparentemente el ADN recombinante tiene muchos beneficios, Es realmente algo que
nos favorezca? Est bien experimentar con seres que sienten dolor al igual que nosotros?
Hay demasiadas dudas en cuanto a este tema sobre si est bien o est mal, es aqui donde entra la
biotica.
La biotica es la rama de la tica que se dedica a proveer los principios para la conducta correcta
del humano respecto a la vida, tanto de la vida humana como de la vida no humana (animal y
vegetal), as como al ambiente en el que pueden darse condiciones aceptables para la vida.
En su sentido ms amplio, la biotica, a diferencia de la tica mdica, no se limita al mbito
mdico, sino que incluye todos los problemas ticos que tienen que ver con la vida en general,
extendiendo de esta manera su campo a cuestiones relacionadas con el medio ambiente y al trato
debido a los animales. Se han formulado una serie de definiciones respecto a la disciplina de la
Biotica, siendo una de ellas la adoptada por la Unidad Regional de Biotica de la OPS, con sede en
Santiago de Chile y que, modificada por el S.J. Alfonso Llano Escobar en una revista de la
especialidad, define a la Biotica como "el uso creativo del dilogo inter y transdisciplinar entre
ciencias de la vida y valores humanos para formular, articular y, en la medida de lo posible,
resolver algunos de los problemas planteados por la investigacin y la intervencin sobre la vida,
el medio ambiente y el planeta Tierra".
En 1970, el onclogo norteamericano V.R.Potter, estableci por vez primera el
trmino biotica con la intencin de dar a entender una forma de accin para la sobrevida y,
simultneamente para un mejor vivir en un medio natural desarrollado gracias al progreso.
El inters en este campo se ha intensificado considerablemente desde que se descifro
el cdigo gentico humano y se plantearon nuevas posibilidades y surgieron nuevas
perspectivas de manipulacin cientfica de la naturaleza. Dentro del vasto campo de la biotica
caben cuestiones tan diversas como la liberacin en el medio ambiente de compuestos basados en
la tecnologa del ADN recombinante, las ciencias biomdicas y la guerra.
La biotica abarca las cuestiones ticas acerca de la vida que surgen en las relaciones
entre biologa, nutricin, medicina, qumica, poltica (no debe confundirse con la
"biopoltica"
7
), derecho, filosofa, sociologa, antropologa, teologa, etc. Existe un desacuerdo
acerca del dominio apropiado para la aplicacin de la tica en temas biolgicos. Algunos bioticos
tienden a reducir el mbito de la tica a lo relacionado con los tratamientos mdicos o con la
innovacin tecnolgica. Otros, sin embargo, opinan que la ticadebe incluir lo relativo a todas las
acciones que puedan ayudar o daar organismos capaces de sentir miedo y dolor. En una visin
ms amplia, no slo hay que considerar lo que afecta a los seres vivos (con capacidad de sentir
dolor o sin tal capacidad), sino tambin al ambiente en el que se desarrolla la vida, por lo que
tambin se relaciona con la ecologa.
El criterio tico fundamental que regula esta disciplina es el respeto al ser humano, a
sus derechos inalienables, a su bien verdadero e integral: la dignidad de la persona.
Por la ntima relacin que existe entre la biotica y la antropologa, la visin que de sta se tenga
condiciona y fundamenta la solucin tica de cada intervencin tcnica sobre el ser humano.
La biotica es con frecuencia asunto de discusin poltica, lo que genera crudos enfrentamientos
entre aquellos que defienden el progreso tecnolgico en forma incondicionada y aquellos que
consideran que la tecnologa no es un fin en s, sino que debe estar al servicio de las personas y
bajo el control de criterios ticos; o entre quienes defienden los derechos para algunos animales y
quienes no consideran tales derechos como algo regulable por la ley;
8
o entre quienes estn a
favor o en contra del aborto o la eutanasia.
Las primeras declaraciones de biotica surgen con posterioridad a la Segunda Guerra Mundial,
cuando el mundo se escandaliz tras el descubrimiento de los experimentos mdicos llevados a
cabo por los facultativos del rgimen hitleriano sobre los prisioneros en los campos de
concentracin. Esta situacin, a la que se suma el dilema planteado por el invento de
la fstula para dilisis renal de Scribner (Seattle, 1960), las prcticas del Hospital Judo de
Enfermedades Crnicas (Brooklyn, 1963) o la Escuela de Willowbrook(Nueva York, 1963), van
configurando un panorama donde se hace necesaria la regulacin, o al menos, la declaracin de
principios a favor de las vctimas de estos experimentos. Ello determina la publicacin de diversas
declaraciones y documentos bioticos a nivel mundial