Manual de Prcticas de Biologa Celular

Prctica No. 3
INTRODUCCIN AL CUARTO DE CULTIVO CELULAR
OBJETIVO
El alumno conocer y se familiarizar con los equipos fundamentales requeridos
para el trabajo de rutina en un cuarto de cultivo celular.
INTRODUCCIN
Los cultivos celulares y de tejidos son una herramienta muy importante para la
investigacin en diversas reas! las cuales se han visto favorecidas por una serie
de innovaciones como el desarrollo de una gran variedad de medios de cultivo! el
uso de antibiticos y suplementos como el suero fetal bovino u de otras especies
animales! las t"cnicas de tripsinizacin para el pasaje de c"lulas y el empleo de
t"cnicas de fusin celular para la generacin de hibridomas ampliamente utilizadas
para la generacin de anticuerpos monoclonales. #odo esto ha contribu$do a los
grandes avances y diversificacin en la aplicabilidad de las t"cnicas de cultivo
celular.
Los cultivos pueden ser primarios o secundarios% &on Primarios cuando se
obtienen c"lulas a partir de un tejido y secundarios cuando uno o varios tipos de
c"lulas de un cultivo primario se re'siembran (sub'cultivo). *uando "ste cultivo
primario es sometido a procesos de transformacin capaz de conferirle capacidad
ilimitada de multiplicacin! reciben el nombre de l$neas celulares.
EQUIPO Y MATERIAL NECESARIO EN UN CUARTO DE CULTIVO CELULAR
+entro de la infraestructura f$sica y bsica de un cuarto de cultivo celular se
requiere de equipo especial como% campanas de flujo laminar! incubadoras de
*,-! microscopio ptico! invetido! de fluorescencia! entre otros! ba.o /ar$a!
centr$fuga refrigerada! sistemas de esterilizacin como autoclaves y equipos de
filtracin, as$ como diferentes materiales para el manejo de los cultivos celulares!
entre estos se encuentran las pipetas y micropipetas! tubos cnicos! cajas y
placas de cultivo! crioviales! contadores de c"lulas (0emocitmetro o cmara de
Neubauer)! sistemas de almacenamiento y preservacin de c"lulas. En el
comercio e1isten diferentes medios de cultivo los cuales podrn ser utilizados de
manera diferencial dependiendo del tipo de c"lulas con las que se vaya a
trabajar. Los de uso ms generalizado son% +/E/ (+ulbecco2s modified Eagle2s
/edium)! +34 (+ulbecco2s modified Eagle2s /edium suplementado con 35 de
suero fetal bovino)! 06# (0ipo1antina! 6minopterina y #imidina)! 7.P./.8. 9:;<
(7os=ell Par> /emorial 8nstitute medium). Por otro lado! para el mantenimiento de
l$neas celulares es necesario contar con un sistema de preservacin celular! que
incluyan%
a. Equipos% #anque de nitrgeno y ultracongelador.
b. /ateriales% crioviales! pipetas serolgicas! micropipetas! puntas para
micropipetas! pipetas pasteur y pipetores.(todo el material debe estar
est"ril).
c. 7eactivos% /edios de cultivo mas alg?n preservador como +/&, o
glicerol.
Las instalaciones f$sicas de un cuarto de cultivo deben sujetarse a ciertos
lineamientos como por ejemplo evitar corrientes de aire cuando se est"
trabajando en la campana! nunca debern trabajar dos personas a la vez en la
campana! se deber utilizar el equipo de seguridad personal acorde a los riesgos
potenciales de los cultivos que se manejen. Los siguientes son ejemplos de los
requerimientos bsicos para el funcionamiento de un cuarto de cultivo%
Cabinas de bioseguidad. Son un elemento indispensable en el trabajo de
laboratorio cl nico especializado y de investigaci n, especialmente cuando se
trabaja con microorganismos y cultivos celulares. Normalmente se les conoce
como campanas de flujo laminar, purificadores o gabinetes de bioseguridad.
Estos equipos permiten mantener condiciones controladas para el desarrollo de
trabajo que implique la necesidad de brindar protecci n al medio ambiente, al
usuario y/o al material con el cual se trabaja. En base a sus caracter sticas; las
cabinas de bioseguridad se clasifican en diferentes tipos: , !", #$,#%, #&' y
.
C!ase I. Este tipo de cabinas estn dise.adas para proporcionar seguridad tanto al
usuario como al ambiente pero no al producto con el cual se trabaja. &e puede
utilizar para trabajar con material u organismos de los niveles 9(riesgo individual y
comunitario escaso o nulo)! - (riesgo individual moderado! riesgo comunitario
bajo) y 3 (riesgo individual elevado! riesgo comunitario moderado).de
bioseguridad. #rabajan con un flujo de aire frontal a una velocidad de 3@.9 cmAseg
y no son adecuadas para el trabajo con qu$mico t1icos ni con material
radioactivo. El aire de la habitacin entra directamente al rea de trabajo sin ser
filtrado! motivo por el cual! el producto no se ve protegido! en la parte superior de
la cabina se localiza un filtro tipo 0EP6 el cual filtra el aire que ser eliminado.
(figura 9)
4ig. 9. +iagrama de una cabina de seguridad clase 8.
4uente% ,rganizacin Panamericana de la &alud *abinas de seguridad biolgica% uso!
desinfeccin y mantenimiento. Bashington! +.*. ,P&. -<<-.
C!ase II" Estn dise.adas para brindar proteccin al usuario! al medio ambiente y
al producto con el cual se trabaja. Ctilizan dos filtros 0EP6! uno suministra el aire
purificado dentro de la cabina de manera de flujo laminar! el cual minimiza la
posibilidad de contaminacin del producto. El segundo filtro 0EP6 se encarga de
filtrar el aire que ser eliminado. 6 diferencia de las cabinas tipo 8! el aire no sale
al e1terior. Estn dise.adas para el trabajo con agentes patgenos de clase - y 3.
D se clasifican en cuatro categor$as (886! 88E9! 88E- y 88E3) en funcin al porcentaje
de aire reciclado dentro de la cabina.(figuras - y 3)
4ig. -. *abina de bioseguridad Labconco. *lase 88! tipo 6-! modelo Logic
4ig. 3. +iagrama de flujo de aire en incubadora clase 88.
4uente% ,rganizacin Panamericana de la &alud *abinas de seguridad biolgica% uso!
desinfeccin y mantenimiento. Bashington! +.*.% ,P&. -<<-
C!ase III" Este tipo de cabinas se caracterizan por la gran seguridad que tienen
para trabajar con agentes infecciosos de clase 3 y ;! estos ?ltimos representan un
riesgo individual y comunitario elevados. &u caracter$stica principal es que son
completamente selladas. Para trabajar en ellas se hace uso de una caja de paso
sellada que permite el suministro de los materiales con los que se trabaje. En la
parte frontal se localizan unos soportes adaptados guantes permanentes que
tambi"n estn perfectamente sellados para evitar la contaminacin tanto del
producto como del personal. El aire es filtrado a trav"s de dos filtros 0EP6 o bien
a trav"s de un filtro 0EP6 y un incinerador de aire para ser eliminado de manera
segura. (figura ;)
4ig. ;. *abina de bioseguridad clase 3 y ;.
4uente% ,rganizacin Panamericana de la &alud *abinas de seguridad biolgica% uso!
desinfeccin y mantenimiento. Bashington! +.*. ,P&. -<<-
In#ubadoa de CO$ %&is'e S#ien(i)i#*" Para el cultivo de l$neas celulares es
importante contar con un equipo que controle la temperatura! humedad y niveles de *,-!
para esto e1isten diferentes tipos de incubadoras! desde las ms simples como las jarras
de anaerobiosis! hasta las convencionales incubadoras de *,- (figura ;). Las jarras de
anaerobiosis son utilizadas com?nmente para el cultivo de microorganismos en placas!
consigui"ndose un ambiente anaerobio mediante el uso de diferentes dispositivos
productores de *,-! en la incubadora de *,-! este es suministrado de manera controlada
y automtica desde un contenedor e1terno al equipo! el cual se regula por el uso de un
manmetro. +e igual manera! la temperatura se mantiene al interior de la cabina
mediante un termostato. La humedad puede controlarse de manera automtica en
equipos que tienen una fuente e1terna y la inyecta automticamente cuando el equipo lo
requiere. ,tros equipos controlan la humedad de manera manual mediante el uso de un
recipiente con agua que se coloca en la parte inferior de la incubadora.
4ig. 3. 8ncubadora de *,-. 4isher &cientific. /odelo isotemp
Sis(e+as de #io,ese-a#i.n" La criopreservacin es el proceso en el cual las
c"lulas o tejidos son congelados a muy bajas temperaturas (generalmente entre
'@< F* y '9G: F*)! para disminuir las funciones vitales de una c"lula o un
organismo y poderlo mantener en condiciones metablicamente inactivas por
mucho tiempo. Este procedimiento se consigue mediante el uso de *,- slido
(com?nmente conocido como hielo seco) consiguiendo temperaturas de 'H@F*!
ultracongeladores o tanques de nitrgeno l$quido.
U!(a#onge!ado. La ultracongelacin consiste en una congelacin a una
temperatura muy baja! generalmente inferior a ';< F*! en el comercio e1isten
ultracongeladores que alcanzan temperaturas de hasta '@<
o
* (figura :) lo que
permite conservar al m1imo la estructura f$sica de las c"lulas.
4ig. :. Cltracongelador #hermo &cientific
Tan/ue de Ni(.geno !0/uido" Por este m"todo se consigue una congelacin
uniforme y rpida a temperaturas de '9G3.@
o
* a?n con poca cantidad de nitrgeno
l$quido en el contenedor! lo que permite el mantenimiento de las c"lulas viables
por varios a.os. El tanque est equipado con una serie de ra>cs de acero
ino1idable que permiten el almacenamiento de las c"lulas dentro de cajas
criog"nicas para su fcil ubicacin. 6lgunos modelos como el Locator Ir y el
Locator ; permiten el almacenamiento en rac>s de mayor tama.o.

4ig. H. #anque de almacenamiento criog"nico. EarnsteadA#hermolyne. &erie
Locator Ir
*entrifuga refrigerada. +urante el manejo y mantenimiento de las c"lulas!
usualmente se requiere de la separacin de las mismas de su medio de cultivo ya
sea para su resiembra o para su anlisis! para ello se utiliza la centrifugacin y es
importante mantenerlas a temperaturas de ;
o
* durante el proceso! las velocidades
utilizadas y el tiempo de centrifugacin dependen del tipo de procedimiento y
finalidad del uso de las c"lulas. E1isten diferentes modelos de centr$fugas
refrigeradas equipadas con rotores que permiten la centrifugacin de
suspensiones celulares en tubo de volumen variable o en placas.
4ig. @. *entr$fuga refrigerada #hermo &cientific. /odelo /aratton 3<<<
Sis(e+as de es(ei!i1a#i.n" La esterilizacin es un procedimiento que produce la
destruccin o eliminacin de cualquier tipo de vida microbiana incluyendo la
destruccin de esporas. 4undamentalmente e1isten tres m"todos para la
esterilizacin% 4$sicos! qu$micos y 4$sico'qu$micos.
/"todos f$sicos. Cno de los m"todos ms utilizados es el 6utoclave a
temperatura de 9-9
o
*! 93 Lb de presin por 93'-< minutos.
4ig. G. Esterilizador Damato! modelo &/-<<
Esterilizacin por filtracin. *onsiste en la utilizacin sistemas de filtracin con de
membranas de nitrocelulosa con tama.o de poro que va de <.-- a <.;3 / de
dimetro! a trav"s del cual se hace pasar la solucin que se desea esterilizar.
*omercialmente e1isten sistemas reutilizables! los cuales debern ser
esterilizados por autoclave antes de su uso (figura Ga) y los sistemas
desechables para un solo uso (figura Gb).
4ig. G. &istemas de filtracin% a) reutilizable (se esteriliza en autoclave)! b) &istema
desechable
,tro m"todo para esterilizacin es por irradiacin con rayos gamma! rayos J! o
luz ultravioleta. La luz CK de peque.a longitud de onda (entre -<< y -G3 nm)! es
com?nmente utilizada con fines antimicrobianos. 6l penetrar la luz ultravioleta
sobre las c"lulas "sta da.a al 6+N y por lo tanto la c"lula no se puede reproducir
y muere.
/"todos qu$micos. El 1ido de etileno (*-0;,) 2 es un gas incoloro! inodoro en
condiciones normales de temperatura y presin.. El mecanismo de accin como
esterilizante se basa en la capacidad de alterar la estructura de prote$nas y cidos
nucleicos de los microorganismos por alquilacin! es decir! sustituye un tomo de
hidrgeno por un grupo alquilo! que es altamente t1ico para ellos.
/"todo f$sico'qu$mico. Este m"todo combina las propiedades qu$micas del
formaldehido al -5 con las propiedades f$sicas del vapor de agua! lo cual
incrementa la capacidad de penetracin del formaldehido como agente alquilante.
El tiempo de esterilizacin es un proceso relativamente largo que consiste de
ciclos de temperatura que van desde :<'H@
o
* y en periodos de tiempo de - a 3
hrs! se utiliza principalmente en material termosensible por ejemplo equipo
el"ctrico! material de vidrio.
E/ui,o 3 +a(eia! adi#iona!
Ea.o /ar$a /icroscopio invertido
/icroscopio compuesto /icroscopio de fluorescencia

Potencimetro /icrocentr$fuga
6nalizador de gases (4yrita) +iversos materiales utilizados en cuarto de cultivo
9. /icropipetas :. crioviales
-. 4rascos de cultivo H. /icrotubos cnicos
3. Eotellas de vidrio @. #ubos cnicos 3<mL
;. Puntas para micropipeta G. Pipets serolgicas
3. *ajas de cultivo 9<. #ubos cnicos 93 mL
ACTIVIDADES
9. 8nvestigue las caracter$sticas del funcionamiento de las campanas de flujo
laminar en base a su nivel de bioseguridad.
Cabinas de seguridad biolgica Clase I
Caractersticas:
El aire de la cabina es extrado a travs de un filtro HEPA (para proteger
el ambiente) y mediante un sistema de extraccin entregado al exterior!
El sistema de filtracin mencionado es la caracterstica "ue diferencia
esta clase de cabinas de las cabinas de extraccin de vapores "umicos#
las cuales carecen del sistema de filtracin!
$a proteccin al personal se logra por"ue el flu%o de aire &acia la cabina
tiene una velocidad como mnimo de '( pies lineales por minuto
()*#+ cm,s) a travs de la apertura frontal! El aire de la &abitacin (sin
filtrar) fluye directamente sobre la superficie de traba%o# ra-n por la
"ue no brindan proteccin al producto!
.e usan especficamente para aislar e"uipos como centrifugadoras#
e"uipos de cultivo o pe"ue/os fermentadores! 0gualmente# para airear
cultivos# &omogenei-ar te%idos con potencial para generar aerosoles y
tambin para pesar agentes "umicos en forma de polvo!
1o son adecuadas para traba%ar con materiales radiactivos# a menos
"ue se les instale un cerramiento frontal con guantes!
Est2n conectadas a los sistemas de extraccin de los edificios a travs
de un ducto# o pueden disponer de un sistema de extraccin
independiente "ue tiene su propio ducto de extraccin! 3ic&o sistema
de extraccin genera la presin negativa re"uerida para el adecuado
funcionamiento de la cabina mediante el acoplamiento de un ventilador
remoto!
Algunos fabricantes incorporan a la cabina un ventilador! En tal caso#
dic&o ventilador debe estar interblo"ueado con el ventilador del sistema
de extraccin del edificio!
Algunas cabinas disponen de un tablero frontal con orificios para los
bra-os para acceder a la superficie de traba%o! $as restricciones debidas
a las aberturas producen una mayor velocidad de ingreso del aire
incrementando la proteccin al traba%ador!
Para incrementar la seguridad# pueden ser fi%ados al tablero frontal#
guantes de la longitud del bra-o!
4) $a extraccin del aire es obtenida a travs de una apertura auxiliar la
cual podra contener un filtro alrededor de una articulacin frontal del
panel!
++) 1o disponen de recirculacin de aire &acia el laboratorio o dentro de la
cabina!
+5) .on adecuadas para traba%ar con agentes biolgicos clasificados con
niveles de bioseguridad +# 5 o )!
Cabinas de seguridad biolgica Clase II
Caractersticas:
Existen diversos tipos de cabinas de seguridad biolgica# Clase 00! $os
m2s comunes son los denominados tipo A# 6+# 65 y 6)!
Estas cabinas disponen de dos re%illas# una frontal y una trasera# a travs
de las cuales es succionado el aire "ue circula sobre la superficie de
traba%o! A travs de la re%illa frontal es succionado el aire "ue proviene
de la &abitacin y "ue pasa alrededor del traba%ador a una determinada
velocidad# aisl2ndolo de los agentes existentes en el interior de la cabina!
3ispone de un filtro HEPA a travs del cual se suministra un flu%o de
aire vertical laminar) (filtro HEPA de suministro) "ue protege el producto
y evita la posibilidad de "ue ocurra una contaminacin cru-ada a lo
largo de la superficie de traba%o de la cabina!
3ispone de un segundo filtro HEPA a travs del cual sale el aire de la
cabina (filtro HEPA de extraccin)! Como consecuencia de esta
particularidad del dise/o# el aire "ue circula dentro de la cabina est2
libre de contaminantes y puede ser reciclado!
.e identifica la cabina como de tipo A# si se recicla el aire dentro del
laboratorio!
.i se extrae el aire &acia el exterior a travs de un ducto# se identifica la
cabina como de tipo 6!
Cabinas de seguridad biolgica Clase II, Tipo A
Caractersticas:
El ventilador del e"uipo absorbe el aire (del ambiente) a travs de la
abertura frontal a una velocidad promedio de '( pies lineales por
segundo ()*#+ cm,s)!
El aire es suministrado verticalmente a la superficie de traba%o a travs
del filtro HEPA de suministro y fluye libre de partculas de forma
laminar! El flu%o laminar minimi-a el potencial de contaminacin
cru-ada sobre la superficie de traba%o!
El aire "ue fluye dentro de la cabina# a medida en "ue se aproxima a la
superficie de traba%o# se divide en dos corrientes# una "ue va &acia la
re%illa delantera y otra "ue va &acia la re%illa trasera!
$a separacin de corrientes ocurre generalmente en la mitad de la
distancia entre las re%illas frontal y trasera y a una altura "ue vara entre
dos y seis pulgadas sobre la superficie de traba%o!
El aire succionado a travs de las re%illas frontal y trasera es descargado
por el ventilador a travs de un sistema de ductos (plenum trasero) al
espacio locali-ado entre los filtros HEPA de suministro y extraccin!
3ic&os filtros est2n locali-ados en la parte superior de la cabina! 3esde
el espacio en mencin# el aire fluye a travs de los filtros HEPA de
suministro y extraccin!
3ebido al tama/o relativo de los filtros# aproximadamente el )78 del
volumen del aire "ue circula es extrado de la cabina9 el '78 restante
es recirculado &acia la -ona de traba%o!
$a mayora de las cabinas Clase 00# :ipo A# tienen controles para regular
la relacin )7,'7 del flu%o de aire!
Estas cabinas se usan para traba%ar con agentes de ba%o o moderado
riesgo biolgico!
Es pro&ibido traba%ar en este tipo de cabinas con materiales "ue sean
txicos o vol2tiles!
.i se re"uiere conectar este tipo de cabina al exterior# la conexin se
efect;a utili-ando un acople tipo <dedal= (t&imble)# "ue es una campana
un poco m2s grande "ue el filtro HEPA de extraccin# permitiendo
"ue exista un espacio libre aproximadamente de una pulgada entre el
perfil de descarga del filtro y el acople en mencin# de forma "ue no se
produ-can desbalances en el flu%o de aire "ue es extrado de la cabina#
si por alg;n motivo se presentaran situaciones "ue afecten las presiones
y el flu%o en el ducto de extraccin!
Cabinas de seguridad biolgica Clase II, Tipo B
Caractersticas:
$os ventiladores de la cabina extraen el aire de la &abitacin# as como
tambin una porcin del aire "ue es reciclado por la re%illa frontal y de
all travs de un filtro HEPA# "ue se encuentra locali-ado directamente
ba%o la superficie de traba%o!
El aire una ve- filtrado# fluye &acia la parte superior de la cabina a
travs de unos conductos locali-ados a cada lado de la cabina y a
continuacin fluye &acia el 2rea de traba%o a travs de una placa de
presin trasera!
El aire de la &abitacin es succionado a travs de la abertura frontal de
la cabina a una velocidad de ingreso mnima de +77 pies lineales por
minuto!
Aproximadamente# el '78 del volumen de aire "ue fluye dentro de la
cabina de forma vertical# es extrado a travs de la re%illa trasera# y de
all# a travs de un filtro HEPA es extrado del edificio!
El )78 restante del volumen es extrado de la cabina a travs de la
re%illa delantera!
$as actividades "ue puedan generar vapores "umicos peligrosos o
producir partculas# deben ser traba%ados en la parte trasera de la cabina
Cabinas Clase 00# :ipo 6+
Caractersticas:
Estas cabinas mantienen una velocidad promedio mnima de ingreso
del aire de +77 pies lineales por minuto ((7#* cm,s)!
:odo el aire reciclado y extrado pasa a travs de dos filtros HEPA en
serie!
$os ductos internos (contaminados) y el plenum est2n presuri-ados
negativamente!
3isponen de su propio ducto de extraccin# o est2n conectados a un
sistema de extraccin dise/ado de acuerdo a las necesidades9 extrae
principalmente el flu%o contaminado a la atmsfera# previa filtracin
en el filtro HEPA de extraccin! El ventilador de extraccin est2
generalmente ubicado al final del ducto!
3eben disponer de un sensor independiente de presin# conectado a
un dispositivo "ue active una alarma y apague el ventilador de la cabina
de seguridad biolgica en el caso de "ue ocurra alguna falla en el sistema
de extraccin!
El ventilador del sistema de extraccin debe estar conectado al sistema
elctrico de emergencia de la instalacin! (Alimentado por el generador
elctrico de emergencia)!
Estas cabinas se utili-an cuando se re"uiere traba%ar en condiciones
estriles! $a doble filtracin logra una atmsfera muc&o m2s limpia!
En este tipo de cabinas pueden ser traba%ados agentes tratados con
cantidades mnimas de materiales txicos# o vol2tiles o vol2tiles
radiactivos# si dic&o traba%o se reali-a en la -ona de extraccin de la
cabina! 1o deben traba%arse cantidades "ue no sean mnimas!
.on adecuadas para traba%ar con agentes "ue re"uieren nivel de
contencin +# 5 )!
Cabina de seguridad biolgica Clase II, Tipo B2
Caractersticas:
Es una cabina de seguridad biolgica de extraccin total9 el aire no es
reciclado ni dentro de la cabina ni &acia el laboratorio! Por esta ra-n#
esta clase de cabinas proporciona contencin "umica y biolgica y
permite traba%ar con agentes biolgicos tratados con pe"ue/as
cantidades de "umicos txicos o inflamables y radionucleidos!
Estas cabinas no deben utili-arse en reempla-o de cabinas para
contencin de "umicos o vapores# ni para preparar existencias de
substancias "umicas peligrosas para almacenar!
El ventilador de suministro succiona aire de la &abitacin y a travs de
un filtro HEPA lo enva a la superficie de traba%o de la cabina!
El sistema de extraccin de la cabina succiona a travs de las re%illas
delantera y trasera# el aire filtrado# m2s una cantidad adicional de aire
proveniente de la &abitacin# a una velocidad lineal mnima de +77
pies por minuto!
:odo el aire "ue ingresa a este tipo de cabina es extrado y pasa a travs
de filtros HEPA y de otros dispositivos (filtros de carbn activado) si es
el caso# antes de ser descargado al exterior!
Estas cabinas pueden llegar a ser costosas de operar pues tienen la
capacidad de extraer &asta +577 pies c;bicos de aire acondicionado
por minuto!
.i se presentaran fallas en el sistema de extraccin# la cabina podra
presuri-arse positivamente y expulsar el aire de la -ona de traba%o &acia
el laboratorio! Para evitar tal posibilidad# se debera disponer de sensores
"ue apaguen el ventilador de la cabina en caso de falla del sistema de
extraccin!
Cabina de seguridad biolgica Clase II, Tipo B3
Caractersticas:
Esta cabina es similar a la cabina con ducto# tipo A!
El aire "ue succiona desde el laboratorio tiene una velocidad lineal
aproximada de +77 pies lineales por minuto!
$os conductos contaminados# positivamente presuri-ados# est2n
rodeados por conductos de aire negativamente presuri-ados! Cual"uier
fuga en el conducto contaminado se "uedar2 en la cabina y no llegar2
al medio ambiente!
>ecicla el '78 del aire dentro de la cabina!
Permite el uso de mnimas cantidades de "umicos no inflamables "ue
deban ser usados coincidencialmente con agentes de ba%o o moderado
riesgo biolgico!
1o deben utili-arse en este tipo de cabinas substancias "umicas
inflamables ni cantidades "ue no sean mnimas de "umicos txicos#
radiactivos o vol2tiles!
Cabinas de seguridad biolgica Clase III
Caractersticas:
Es una cabina "ue se caracteri-a por ser totalmente cerrada! .u
construccin es sellada a los gases!
Est2 dise/ada para traba%ar con agentes microbiolgicos clasificados
en el nivel de bioseguridad ?!
.uministran m2xima proteccin al traba%ador y al ambiente! $a ventana
es sellada# no es posible abrirla!
$a colocacin de los materiales dentro de la cabina se reali-a a travs de
una ca%a de paso# (doble puerta sellada)# "ue puede ser descontaminada
entre usos!
$a inyeccin y la extraccin del aire a la cabina se reali-a a travs de
filtros HEPA!
El aire extrado de la cabina pasa a travs de dos filtros HEPA# o de un
filtro HEPA y un incinerador de aire# antes de ser descargado al exterior!
El flu%o de aire es mantenido a travs de un sistema externo#
independiente de la cabina# "ue mantiene el interior a una presin
negativa de aproximadamente 7#( pulgadas de agua (+5#' mm,H5
@) comparada con el exterior!
Estas cabinas son adecuadas para traba%ar con agentes microbiolgicos
"ue re"uirieran contenciones,confinamientos de bioseguridad de
niveles +# 5# ) ?!
-. 8nvestigue el funcionamiento de los incubadores de *,-
3. 8nvestigue diferentes m"todos de preservacin celular
;. 8nvestigue los cuidados que se deben tener durante el trabajo en una
campana de flujo laminar
Planear el traba%o o los procedimientos a reali-ar
Antes de iniciar el traba%o# el laboratorista deber2 saber "u
procedimientos y e"uipos utili-ar2! 3eber2 efectuar las coordinaciones "ue
estime convenientes con sus %efes y compa/eros para "ue el traba%o se
pueda reali-ar con un mnimo de interrupciones# mientras "ue la cabina
de seguridad biolgica este en uso!
Poner en marc&a la cabina de seguridad biolgica
$as actividades m2s importantes asociadas a esta etapa son:
Preparar el rea de trabajo.
5! Apagar la l2mpara AB!
)! Encender la lu- fluorescente!
?! Berificar "ue la posicin del marco de la ventana frontal es la correcta (la abertura
frontal vara entre * y +7C# 57#)5 y 5(#? cm)!
(! Berificar "ue las re%illas de retorno del aire (frontales y traseras) se encuentren libres de
obstrucciones!
D! Encender el ventilador de la cabina de seguridad biolgica!
'! Permitir "ue el aire fluya libremente al menos por cinco minutos! Algunos especialistas
recomiendan esperar &asta +( minutos!
*! Berificar la lectura del manmetro indicador de presin!
Preia utili!acin
+! $avar las manos y bra-os con un %abn germicida!
5! Bestir los elementos de proteccin personal (bata de manga larga# con pu/os a%ustados
y guantes de cauc&o9 usar tambin anteo%os protectores y si resulta apropiado# una
m2scara protectora!
)! >ociar y refregar todas las superficies interiores con etanol al '78 o con un
desinfectante adecuado!
?! Permitir "ue el aire "ue circula dentro de la cabina se"ue las superficies!
Cargar"instalar los #ateriales $ e%uipos
+! Ensamblar el material de traba%o!
5! 0ntroducir en la cabina de seguridad biolgica ;nicamente el material
re"uerido para reali-ar el procedimiento! 1o sobrecargar la cabina!
)! Colocar el material de forma "ue no se crucen los materiales sucios
con los limpios# ni se obstruyan las re%illas delanteras o traseras!
?! Colocar el o los recipientes para material contaminado en la parte
trasera derec&a de la cabina de seguridad biolgica! Asualmente se
coloca all la bolsa de bioseguridad# un recipiente con desinfectante
para las pipetas y una unidad para almacenamiento seguro de ob%etos
puntiagudos! 1o colocar sobre el piso fuera de la cabina de seguridad
biolgica# recipientes o canecas para descartar las pipetas!
(! $os ob%etos grandes no deben colocarse demasiado %untos!
Pre purgar la cabina de seguridad biolgica
+! Permitir "ue el aire fluya durante cinco minutos sin "ue exista
actividad dentro de la cabina de seguridad biolgica para purgar de
partculas contaminantes el 2rea de traba%o!
Auto prepararse
+! Asar ropa y elementos protectores adecuados (guantes# m2scaras#
caretas# gafas)!
&esarrollar los procedi#ientos
+! 0ntroducir lentamente las manos dentro del 2rea de traba%o! >eali-ar
los procesos y tareas de forma metdica y cuidadosa# (de las -onas
limpias a las -onas contaminadas)!
5! Evitar tcnicas o procedimientos "ue puedan alterar los patrones de
flu%o del aire dentro de la cabina!
)! Eantener todos los materiales# al menos cuatro pulgadas# dentro del
marco de la ventana frontal de la cabina! >eali-ar &acia el fondo del
2rea de traba%o de la cabina todas las operaciones contaminantes!
?! Evitar el uso de llamas abiertas! 1o debe traba%arse con mec&eros
dentro de la cabina de seguridad biolgica! $a llama "ue producen
rompe el patrn de flu%o laminar (produce turbulencia) e incluso
puede llegar a "uemar el filtro HEPA! En su lugar# puede traba%arse
con incineradores de tipo elctrico!
(! Evitar el retiro de las manos del 2rea de traba%o &asta "ue todos los
procedimientos &ayan sido completados y todo el material
potencialmente peligroso (crtico) &aya sido ubicado (desec&ado) en
las bolsas o recipientes para mane%ar los desec&os peligrosos!
D! Colocar los guantes en el recipiente para material contaminado!
Pos purgar la cabina de seguridad biolgica
+! Permitir "ue el aire fluya libremente al interior de la cabina sin "ue
exista ninguna actividad en el interior!
&escargar los #ateriales $ e%uipos
+! Efectuar una descontaminacin de superficie a los ob%etos "ue &ayan
estado en contacto con material contaminado antes de ser retirados
de la cabina!
5! Cubrir todas las bande%as abiertas o contenedores antes de ser
retirados de la cabina!
)! >emover los materiales seg;n corresponda (a la incubadora# a la bolsa
de bioseguridad# al autoclave# etc!)!
&esin'ectar la cabina de seguridad biolgica
+! >ociar y refregar todas las superficies interiores con etanol al '78 o
con un desinfectante adecuado! Permitir "ue el aire "ue circula dentro
de la cabina se"ue las superficies interiores!
Arreglarse
+! 3escartar los guantes9 "uitarse los elementos de proteccin personal!
3ispngalos de la forma m2s adecuada!
5! $avar las manos con %abn y agua abundante!
Apagar la cabina de seguridad biolgica
+! Apagar el ventilador y la l2mpara fluorescente!
5! Cerrar la abertura frontal!
)! Encender la l2mpara ultravioleta!
3. *ul es la funcin de la lmpara CK en una campana de flujo laminar
Es una lmpara que emite radiacin ultravioleta que destruye las
bacterias y otros microorganismos presentes en el aire o en las superficies
que estn directamente e1puestas.
:. *ul es la funcin de los filtros 0EP6 en una campana de flujo laminar.
*onstituyen el componente central del sistema de filtracin. Estn
dise.ados para remover part$culas iguales a! o mayores que! <!3 Lm
(micrmetros) de dimetro! tama.o que incluye bacterias! esporas y virus!
con una eficiencia de GG!GH5.
CONCLUSIONES
RE&ERENCIAS BIBLIO4R5&ICAS