Crecimiento nutriente Dual limitada: modelos, observaciones experimentales y

aplicaciones

abstracto
Crecimiento limitado de doble nutriente, el control de la tasa de crecimiento celular
(aspecto cintica) o la restriccin de la cantidad de biomasa (aspecto estequiomtrica)
por dos nutrientes al mismo tiempo, es una capacidad relativamente desconocida de
los microorganismos y, por consiguiente, an no se menciona en textos hasta la fecha.
Sin embargo, nutrientes mltiple crecimiento limitado o controlado se ha informado
de diferentes sistemas, e. g. Ecosistemas, lotes, lote alimentado, y cultivos quimiostato.
Generalmente , el crecimiento limitado de doble nutriente se ha observado cuando el
microorganismo de inters : ( a) mostr una variacin de la composicin celular , ( b )
era capaz de acumular un compuesto de almacenamiento , ( c ) cambiar el
metabolismo de la clula , o (d ) excreta intermediarios metablicos . En consecuencia,
se han desarrollado modelos estequiomtricas para estimar las condiciones de
crecimiento que conducen a un crecimiento limitado de doble nutriente. Un problema
general del aspecto cintico es las mediciones precisas de control del crecimiento
nutrientes en el caldo de cultivo ( .gl - 1range ) , como los valles pueden consumir
nutrientes residuales durante el muestreo . Sin embargo, la mayora de los modelos de
acuerdo de un crecimiento limitado dual con el aspecto cintico aunque los
experimentos de control son difciles de llevar a cabo. El objetivo de esta encuesta es
introducir esta caracterstica especial de crecimiento con respecto a los modelos
bsicos, los datos experimentales y aplicaciones potenciales en bioprocesos.




1 . INTRODUCCIN

El principio bsico de la nutricin biolgica, la "ley del mnimo , fue formulada por el
qumico alemn Justus von Liebig (1840). Dijo que siempre un nutriente en
particular limita el crecimiento de la biomasa que puede ser






La figura 1. La teora del libro de texto de la limitacin de nutrientes. Panel A:
limitacin del crecimiento estequiomtrica. La cantidad de biomasa que puede ser
producido en un sistema en el limitado por slo un nutriente (ley del mnimo, (von
Liebig 1840)). Cuando se aumenta la concentracin del nutriente limitante, los
aumentos de biomasa hasta un segundo nutriente se hace limitante, y en consecuencia,
la biomasa no aumenta ms. Panel b: limitacin adulto cintica. La tasa de crecimiento
de la biomasa en un sistema es controlada por la concentracin real del nutriente "
limitacin. Varios modelos, por ejemplo, Blackman (1905) y Monod (1942), describen
la tasa de crecimiento en funcin de la concentracin s.X concentracin real de la
biomasa de nutrientes; S01, S02 concentracin de entrada de los nutrientes de 1; s1, s2
concentraciones residuales de los nutrientes 1 y 2; tasa de crecimiento especfico ; s la
concentracin de nutrientes en el caldo de cultivo.
Producido en un sistema biolgico. Este concepto ha influido en el pensamiento de los
microbilogos desde hace muchos aos (van niel y Hahn- Hgerdal, 1999).
Consecuencia, medios sintticos para el cultivo de microorganismos se disean
generalmente de tal manera que un nutriente especfico limita la cantidad de biomasa
que se puede formar. Por lo tanto, la biomasa que tericamente se puede producir en
un sistema de este tipo es una funcin de la concentracin inicial y el coeficiente de
rendimiento de biomasa para este nutriente en particular (gottschal, 1993) (Fig. 1a)
Un enfoque diferente se centra en el aspecto cintica de crecimiento de la biomasa. El
trabajo de Blackman (1905) y Monod (1942) abri el camino para la descripcin del
crecimiento mediante modelos cinticos. En estos modelos es como resumi que la
concentracin de un sustrato y la afinidad de la clula hacia este sustrato determinar
la tasa de aumento de la biomasa (fig. 1b)

Crecimiento limitado dual de nutrientes: nomenclatura y la teora con respecto a la
fisiologa, la cintica, y la estequiometra (modificado de Bader, 1978 Baltzis y
Fredrickson, 1988, Tilman, 1980.). La parte superior: el rea de llenado (rayada)
representa el (total) necesidad nutricional de una clula, mientras las reas circulares
representan los nutrientes 1 y 2. media e inferior: lneas representan isolneas de la
misma tasa de crecimiento especfica (aspecto cintico) o la misma concentracin de
biomasa X (aspecto estequiomtrica). s: concentracin de nutrientes real en el caldo de
cultivo, S0: concentracin total de nutrientes que puede ser metabolizado tericamente.
Las flechas indican los valores cada vez mayor para i y Xi, respectivamente
Tcnicas de cultivo ms sofisticados , tales como la invencin de la quimiostato (
Monod 1950 : norvick y Szilard , 1950 ) , permite la investigacin de la
estequiometra ( Herbet , 1961 ) y la cintica de crecimiento de las clulas ( Koch ,
1982 ; Powell , 1967 ; Senn y cols . . , 1994 ) de una manera ms controlada estudios
cuantitativo revel que la tasa de crecimiento especfico y la naturaleza del nutriente
limitante tienen influencias decisivas en la composicin de clulas ( Goldman y
Dennett , 2000 ; . Heldal et al , 1996 ; . Herbert et al , 1971 ) , mientras que la
cintica se centraron en la afinidad de los sistemas de captacin celular hacia los
nutrientes y la tasa de crecimiento especfica observada ( Botn , 1985,1991 ;
Kovarova - Kovar y Egli , 1998 ; Roels , 1983 ) .
Sin embargo, en contraste con lo que en forma escrita en los libros de texto de mayor ,
la ley del mnimo es una descripcin bastante simplista de las condiciones de
crecimiento biolgico . Hay muchos informes que muestran que el crecimiento de la
biomasa y la concentracin de biomasa en un sistema microbiano no estn limitados
por un nutriente slo, sino ms bien por dos o ms nutrientes simultneamente (de
limitacin de doble o mltiple de nutrientes).
Recientemente, los botnicos revisado crticamente la nutricin de las plantas y han
encontrado desviaciones a la ley del mnimo. Adems, se ha sugerido la adaptacin
evolutiva de las poblaciones microbianas, las comunidades y los ecosistemas es una
respuesta directa o indirecta de recursos limitacin.
A medida que nos concentramos aqu en crecimiento limitado doble de nutrientes, las
definiciones siguientes y sus sinnimos se describen de forma explcita para el caso en
que dos o ms nutrientes interactan. En general , los nutrientes pueden ser
agrupados de acuerdo a su funcin
Fisiolgica (fig. 2)
2 . CLASES DE CRECIMIENTO LIMITADO DE DOBLE NUTRIENTE
Nutrientes homlogos que realizan la misma funcin fisiolgica durante el
crecimiento (Harder y Dijkhuizen , 1976 ) . Por ejemplo, para un microorganismo
heterotrfica dos compuestos orgnicos de carbono pueden ser homloga, debido a
que logran la misma funcin fisiolgica. Otros autores utilizan los sinnimos
"sustratos perfectamente sustituibles entre s" (Len y Tompson , 1975 ;
Ramakrisbna et al , 1997 . ) , o sustratos mixtos" .
Nutrientes heterlogos se utilizan para satisfacer diferentes requisitos fisiolgicos
(Egly , 1995 ) . Por ejemplo, el nitrgeno (amonio) y la fuente de carbono (glucosa)
son nutrientes heterlogos porque uno no puede ser sustituido por otro (al menos
cuando no contienen C o N, respectivamente). Los sinnimos utilizados tambin son "
interactivos" , "nutrientes complementarios" , o " los sustratos esenciales" ( Tilman ,
1980 ) .
Segn baltzis y Frederickson (1988), dos (Funcional) combinaciones adicionales de
nutrientes se pueden distinguir / definida cuando un nutriente puede tener dos
funciones al mismo tiempo. Por ejemplo, un sustrato, mientras que el segundo
sustrato (por ejemplo, la glucosamina y metilamina para un organismo metilotrfica).
Un sinnimo correspondiente es parcialmente sustituible y parcialmente
complementario
Bader (1978) divide los nutrientes de acuerdo a su funcin fisiolgica en "
moninteractive " ( heterloga ) y nutrientes " interactivo " (parcialmente y totalmente
homlogas homloga , parcialmente homloga y heterloga , y ) .
En lo que sigue vamos a utilizar los trminos homloga, heterloga , parcialmente
homloga y completamente homloga, y parcialmente homloga y heterloga
parcialmente y parcialmente homloga y heterloga parcialmente para pares de
nutrientes.
3. MODELOS DE LIMITACIN DE NUTRIENTES DOBLE
Basado en la historia de la descripcin de la limitacin del crecimiento, la cintica y los
aspectos estequiomtricas llevaron a modelos distintos a describir " crecimiento
limitado de doble nutriente. Los dos aspectos no se pueden vincular en la prctica,
debido a la cintica frente a la tasa de crecimiento como una funcin de la
concentracin de nutrientes en el caldo de cultivo (limitacin de tasa de crecimiento "
), mientras que el aspecto estequiomtrica especifica la relacin entre la
concentracin de biomasa y los nutrientes, por lo tanto consumidos ( cuanta de
limitacin biomasa "). Por lo tanto, diferenciar estos dos aspectos en esta revisin,
tambin: para el dual (cintica) restricciones, el doble de nutrientes expresin
crecimiento controlado ser utilizado, mientras que el trmino doble limitacin se
utilizar para el aspecto estequiomtrica.
3.1 MODELOS DE ASPECTO CINTICO
En general, el crecimiento controlado de doble nutriente puede ser definido por la
nica condicin de que la tasa de crecimiento aumenta con la concentracin de
cualquiera de sustrato a una concentracin constante del otro sustrato.
El primer modelo de control doble de nutrientes slo apareci en los aos setenta
(Megee et al, 1992). Su enfoque cintica se bas en la observacin de que en cultivos
mixtos los nutrientes se utilizan a menudo por completo (Veldkamp y Jannasch,
1972). Bader et al. , 1975 (Bader, 1978) propuso que incluso un monocultivo puede
mostrar un crecimiento limitado de doble nutriente dependiendo de la clase de los
nutrientes disponibles para el crecimiento. Para nutrientes heterlogas la tasa de
crecimiento del organismo est limitada por slo un nutriente a la vez. Por lo tanto, se
propusieron las tasas de crecimiento de seguir las ecuaciones subsiguientes:






Donde es la tasa de crecimiento especfico, "max" la tasa mxima de crecimiento
especfico, "Sn" la concentracin de sustrato residual de sustratos 1 (S1) y (S2), y Ks1
y KS2 son las constantes de Monod para sustratos S1 y S2, respectivamente. Sin
embargo, tiene que ser mencionado que el modelo se basa en el razonamiento
puramente terico y no en datos experimentales disponibles.
Donde es la tasa de crecimiento especfico, "max" la tasa mxima de crecimiento
especfico, "Sn" la concentracin de sustrato residual de sustratos 1 (S1) y (S2), y Ks1
y KS2 son las constantes de Monod para sustratos S1 y S2, respectivamente. Sin
embargo, tiene que ser mencionado que el modelo se basa en el razonamiento
puramente terico y no en datos experimentales disponibles.
Nutrientes interactivos son los que afectan a la tasa de crecimiento del organismo de
forma simultnea. Esto se observa cuando ambos nutrientes estn presentes en
menos de concentraciones de saturacin. La mayora de los modelos cinticos y
experimentos que se ocupan de esta combinacin de nutrientes (Bae y Ritmann
1996b;. Lee et al, 1984;.. Mankad y Nauman 1992;. Narang et al, 1997) se han
centrado en el crecimiento por lotes. Un enfoque a menudo se aplica para describir la
tasa de crecimiento resultante es la de Megee et al. (1972), que extendi la ecuacin
de Monod con el nutriente limitante segundo:




El factor crtico que determina si se produce un crecimiento controlado de doble
nutriente es de acuerdo con el modelo de la concentracin residual de los nutrientes
S1 y S2. La extensin de la ecuacin de Monod por idntico plazo no parece ser
correcto, cuando ms de los nutrientes de remolque son limitantes del crecimiento.
Esto significa que la tasa de crecimiento especfico se reduce aun cuando se supone
que las concentraciones de los sustratos individuales (S1, S2,... Sn) a permanecer
constante, que no es probable que tenga lugar. Hasta la fecha, no hay ninguna prueba
experimental del modelo de Megee et al. (1972).
Un interesante informe de Rutgers et al. (1990) analizaron los datos experimentales
de los cultivo en quimiostato de Klebsiella pneumoniae en la que la relacin C / N en el
alimento (Cf / NF) se ha cambiado (sistema heterlogo). Ellos basan su modelo en la
teora de control metablico de Kacser y Burns (1973). En esta teora el coeficiente
de flujo de un sustrato se define por la ecuacin:




Donde " Cu / s" es el coeficiente de control de flujo para la tasa de crecimiento
especfico ( ) por el " sustrato " efector ( S , la concentracin de sustrato residual ) , y
donde SS denota constante - estado . Rutgers et al. Encontr que un " coeficiente de
control de flujo positivo para un nutriente determina la condicin para el crecimiento
de nutrientes controlada. A la tasa de crecimiento mximo todos los sustratos estn
presentes en concentraciones de saturacin y los coeficientes de control se convierten
en cero. Sin embargo, tan pronto como dos nutrientes tienen un coeficiente de control
positivo, la cultura se convierte en doble nutriente controlada. Adems, mostraron
que en cultivo continuo bajo condiciones de estado estacionario la concentracin de
sustrato residual es una funcin de la tasa de crecimiento y las concentraciones
relativas de los sustratos. El enfoque terico es interesante porque representa una
nueva alternativa al modelo de cintica de Monod. Sin embargo, la determinacin
exacta del sustrato de estado estacionario (residual) sigue siendo un reto
experimental y, por lo tanto, una evaluacin estadstica del modelo es difcil.
Bell, 1980; Bley y Babel (1992), y Egli et al. (Kovarova-Kovar y Egli, 1998;
Lendenmann yEgli, 1998;. Lendenmann et al, 1996) (slo para los nutrientes
homlogas) han ampliado an ms estos modelos cinticos para la descripcin de
quimiostato cultivos.
El modelo de Lendenmann y Egli (1998) es capaz de describir las concentraciones
residuales de fuentes de carbono homlogas virtud de la limitacin de carbono. La
ecuacin principio (Ec. (5)) indica claramente que se propone la tasa de crecimiento
especfico de la clula a ser la suma de las tasas de crecimiento en azcares
individuales:





Cuando max es el ms alto de la max individuo, i valores, Ki es la constante de
saturacin Monod de azcar i, y Si es la concentracin de sustrato de estado
estacionario de azcar i durante la utilizacin del sustrato mixto. La ecuacin describe
con precisin la tasa de crecimiento de una secuencia de quimiostatos de Escherichia
coli ML30 crecido a dos tasas de dilucin (D = 0,3 y 0,6 h ^ (-1)) basados nicamente
en la concentracin residual de hasta seis azcares. Este enfoque tiene una gran
ventaja sobre las ecuaciones Monod extendidas, ya que no se limita a un sistema de
dos nutrientes homlogas.
Varios autores han desarrollado modelos cibernticos que se centran en el
metabolismo celular (Alexander y Ramakrishna, 1991; Baloo y Ramkrishna,
1991a; Baloo y Ramakrishna, 1991b; Recto y Ramakrishna, 1994). Este enfoque
matemtico requiere una descripcin completa de las actividades de las enzimas y la
sntesis, y las concentraciones de nutrientes intermedios, lo cual es difcil de obtener
experimentalmente. Como resultado, estos modelos no puede ser verificada en detalle
debido a la insuficiente calidad de los datos experimentales.
3.2. Modelos del aspecto estequiomtrica
Dual (estequiomtrica) crecimiento limitado se puede definir como la condicin para
que los cambios en el rendimiento de la biomasa con la concentracin de entrada de
cualquiera de sustrato a una concentracin constante del otro sustrato.
Los estudios con quimiostato culturas han proporcionado informacin sobre los
cambios fisiolgicos en el rgimen de crecimiento limitado doble (Al-Awadhi et al,
1990;.. Dumer et al, 2000,2001; Egli, 1995, Egli y Quayle, 1986; Gratzer-Lampart
y col ., 1986; Minkevich et al, 1988)..
Un enfoque estequiomtrica para predecir el crecimiento limitado dual de nutrientes
para cultivos quimiostato ha sido desarrollado por Egli y Quayle (1986); Sugerencia
similar fue hecha por Thingstad (1987) Ellos encontraron que las fronteras del
rgimen de crecimiento limitado a una tasa de crecimiento particular pueden ser
predicha a partir de la composicin celular (o los factores de rendimiento de
crecimiento sustrato) usando dos ecuaciones simples, se dan a continuacin para el
caso de carbono y nitrgeno como limitantes (heterlogos) nutrientes:








Cuando Cf y Nf son las concentraciones de alimentacin del medio de carbono y
nitrgeno, respectivamente, y Y_ (X / C) y Y_ (x / n) son los rendimientos de
crecimiento respectivos basados en carbono y nitrgeno medidos bajo ya sea C slo (C
Lim...) o N nica (lim N.) las condiciones de crecimiento limitado. Eq. (6) calcula el
lmite inferior (Fig. 3, (Cf / NF) inferior) entre el carbono y la doble C, N) limitacin
(mientras que la ec. (7) da el valor que corresponde a la frontera entre dual (C, N) la
limitacin y el rgimen de crecimiento limitado de nitrgeno ((Cf / NF) superior).
Las mediciones de los cultivos quimiostato de Hyphomicrobium ZV620 (Gratzer-
Lampart et al., 1986) y Pseudomonas putida GPO 1 (Durner et al., 2000) (Fig.
0.3) mostraron que el crecimiento limitado predicho y la doble medida (C, N)
regmenes eran casi idnticos.
Por otra parte, Egli (1991) predijo que el rgimen de crecimiento limitada de doble
nutriente es una funcin de la tasa de crecimiento especfico y la relacin Cf / NF, y lo
llam de doble nutriente zona de crecimiento limitado, lo que indica que este rgimen
de crecimiento se puede representar grficamente en un D. frente Cf / Nf diagrama
(Fig. 3) la zona cuenta con un ''pltano'' 'forma: el rgimen de crecimiento limitado
dual de nutrientes es ms amplia en las tasas ms bajas de crecimiento, se hace ms
estrecho en las tasas de crecimiento ms altas y no es detectable en el crecimiento
mximo tasa. La explicacin del autor es que los rendimientos de crecimiento no
difieren mucho entre C y N limitacin a altas tasas de crecimiento, ya que las clulas
no tienen la plasticidad para adaptarse a la limitacin de nutrientes, como es el caso
en bajas tasas de crecimiento. La ubicacin y la forma del ''pltano son determinadas
por el tipo de limitacin de sustrato y por los propios sustratos. Por ejemplo, la zona
para una (C, N) limitacin de doble con el metano no es tan amplio.
M.Zinn e al. /revista de Biotecnologa 113 (2004) 263-279
El grado de dilucin (h ^ (-1))
Cf / Nf (mol mol ^ (-1))
Crecimiento limitado de carbono.
Crecimiento limitado de nutrientes Dual
Medido a partir de nitrgeno residual
Calculado a partir de nitrgeno residual.
Calculado a partir de coeficientes de rendimiento.
Medido desde octanoato residual.






Fig.3.Extension de la zona de crecimiento limitada de doble (carbono / nitrgeno) de
nutrientes para el cultivo de P.oleovorans con octanoato y de amonio como una funcin
de la tasa de dilucin y la relacin Cf / NF de los lmites alimentacin del medio.
Measured medio se obtenido a partir de las pendientes de cualquiera de nitrgeno
residual (lmite inferior) o octanoato (lmite superior) vs.the Cf / Nf ratio en la
alimentacin del medio. los lmites de coeficientes de rendimiento de carbono y
nitrgeno, se calcula de acuerdo con Egli (1991) (Figura adaptada de Durner et al.,
2000).
Al igual que con formiato. Adems, la zona se desplaza hacia relaciones ms altas Cf /
NF en el caso de formiato. La explicacin para esta observacin es que el metano es
menos oxidado que el formiato, de modo que menos de metano de formiato se utiliza
para producir una cantidad dada de energa (Fig. 4).
La interaccin de los dos nutrientes se puede mostrar con respecto a su influencia en
la cintica y la estequiometra de los microorganismos como se muestra en Fig.2.It
tiene que tener en cuenta que los diagramas de estequiomtricas aspecto diferente
para cada tasa de crecimiento, como la influencia del grado de dilucin.
Relacin de carbono a nitrgeno en el medio de alimentacin
El metano.
El glicerol.
Citrato.
Formiato.
Fig.4.The estado redox del sustrato de carbono determina la forma y posicin de la (C, N)
zona de crecimiento limitado dual (adaptado y cambiado de Egli, 1991).
El mantenimiento de las clulas y la viabilidad son una funcin de la tasa de crecimiento.