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d
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TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 27
MUESTRA: porcin del material, o poblacin de la que se requiere informacin analtica, de la cual
partimos para iniciar el anlisis.
MUESTRA ANALTICA: indica la porcin de la muestra que se presenta al instrumento de anlisis.
ANALITO: especie o especies a determinarse en la muestra analtica.
MATRIZ: conjunto de todos los constituyentes en la muestra. Esta incluye al analito y a todos lo dems
constituyentes, que son llamados concomitantes.
MATRIZ ANALTICA: se refiere especficamente a la matriz de la muestra analtica.
En funcin de la concentracin de un analito en una muestra estos pueden
clasificarse en:
Constituyentes mayoritarios (presentes en la muestra entre 1-100 % p/p)
Componentes minoritarios (presentes en la muestra entre 0.01-1% p/p)
Constituyentes traza (presentes en la muestra entre < 0.01 % p/p).
CONCENTRACIN DEL ANALTO EN LA MUESTRA
TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 28
MEDIDA ANALTICA
Cada medida analtica consta de dos componentes:
-Seal: lleva la informacin relativa al analito de inters.
-Ruido: compuesto por informacin no deseada que degrada la exactitud y la precisin del
anlisis y aumenta el lmite inferior de la cantidad de analito detectable.
Representacin
terica de la misma
corriente en
ausencia de ruido
Seal de corriente continua
Su origen puede ser qumico (variables incontroladas relacionadas con la qumica
del sistema) o instrumental (relacionado con los componentes del instrumento
utilizado: generador de seales, detector).
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TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 29
SEALES
SEAL: puede definirse como la salida de un detector que est respondiendo al sistema qumico de
inters.
SEAL TOTAL (S
t
): seal de salida no modificada obtenida de la medida de una muestra analtica o de
un patrn. S
t
= S
a
+ S
b
SEAL BLANCO (S
b
): seal de salida obtenida de la medida de un blanco. Esta incluye la SEAL DE
FONDO, debida a las seales que provienen del medio/clula de medida y de los concomitantes en el
blanco.
SEAL ANALTICA: est relacionada directamente con la concentracin del analito, y se obtiene
restando la seal blanco de la seal total.
S
a
= S
t
- S
b
Blanco: disolucin (slido o vapor) de
composicin parecida a la muestra, que no
contiene al analito y sirve para medir/estimar
la sea fondo (sirve para ajustar el cero del
instrumento.
TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 30
MTODOS QUMICOS CUANTITATIVOS:
S
a
=KC
Carcter absoluto
Magnitud de
propiedad
medida
Concentracin o
cantidad
Constante nica, tiene un valor
perfectamente definido deducible de
las leyes estequiomticas.
MTODOS INSTRUMENTALES CUANTITATIVOS:
S
a
=KC
Carcter relativo
Magnitud de
propiedad
medida
Concentracin o
cantidad
Constante NO nica, depende
de condiciones experimentales
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TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 31
CALIBRACIN
La calibracin consiste en comparar el valor de la magnitud medida (o
representada) por el sistema de medicin, con los valores que, bajo condiciones
estrictamente definidas, producen patrones conocidos o materiales de referencia.
MTODOS DE CALIBRACIN
Calibracin externa
Adicin estndar
Patrn interno
TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 32
TIPOS DE CALIBRADOS
1. CALIBRACIN EXTERNA
Las disoluciones patrn deben:
- Cubrir el intervalo de concentraciones de inters: desde cero (corresponde al blanco) hasta
una concentracin por encima de la concentracin esperada para la muestra.
- Tener una matriz tan parecida a la muestra analtica como sea necesario.
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TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 33
TIPOS DE CALIBRADOS
1. CALIBRACIN EXTERNA
Y = mx + a
Las medidas de seales de las muestras se deben obtener siempre junto
con las de los patrones y en las mismas condiciones instrumentales.
La pendiente m es la sensibilidad
TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 34
TIPOS DE CALIBRADOS
V
patron Cd
(l) Absorbancia (U.A)
0 0.007
20 0.171
30 0.287
40 0.389
50 0.485
60 0.586
Muestra analtica 0.228
Se pretende determinar el contenido en cadmio en un zumo de fruta comercial, eligindose como tcnica
de medida la Espectroscopa de Absorcin Atmica con un atomizador de llama a una longitud de onda de
228.8 nm. El procedimiento seguido fue el siguiente: se homogeniz el zumo mediante agitacin y se
tomaron 5.00 ml que se filtraron para retiran la pulpa. De la disolucin filtrada se tomaron 2.50 ml que se
enrasaron a 25.0 ml en un matraz aforado con HCl 1:1 (muestra analtica).
Para la calibracin, se prepararon 5 disoluciones patrn de cadmio partiendo de una disolucin estndar de
990 mg ml
-1
en cadmio tomando 20, 30, 40, 50 y 60 ml de dicho estndar y enrasando a 25.0 ml con HCl
1:1. Las seales de absorbancia obtenidas se muestran en la siguiente tabla:
Qu concentracin de cadmio expresada en ng/ml hay en el zumo de fruta?
MTODO DE PATRN EXTERNO
(Ejercicio 2-hoja 2)
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TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 35
C
Cd
(g mL
-1
) Absorbancia corregida (U.A)
0 0.000
0.79 0.164
1.2 0.280
1.6 0.382
2.0 0.478
2.4 0.579
Muestra analtica 0.221
MTODO DE PATRN EXTERNO
(Ejercicio 2-hoja 2)
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0 0.5 1 1.5 2 2.5
C(microgramos/mL)
A
(
U
.
A
.
)
TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 36
TIPOS DE CALIBRADOS
2. ADICIN ESTNDAR
En ocasiones la interaccin del analito con otros componentes de la muestra puede
producir un aumento o una disminucin de la sensibilidad del analito. El mtodo
de adicin estndar permite eliminar los errores de matriz sin necesidad de efectuar
la equiparacin de matriz en la preparacin de patrones.
Adicin nica:
Se registran dos seales: la seal de la muestra y la de la muestra ms la adicin
de un volumen conocido de una disolucin patrn concentrada:
La seal correspondiente a la disolucin de la muestra:
Y la seal correspondiente a la muestra con adicin:
m 1
kC S =
+
+
+
=
p m
p p
p m
m m
2
V V
V C
V V
V C
k S
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TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 37
TIPOS DE CALIBRADOS
Para analizar el contenido de estao en un mineral, se fundi una muestra de 0.3000g del
mineral, se disolvi y se llev a 250.0 ml. De esta disolucin se tomaron 25.0 mL para un anlisis
polarogrfico y se observ una intensidad de corriente de 24.9 A. A continuacin se agregaron 5.00
ml de una disolucin patrn de estao 6.01 x 10
-3
M y la intensidad de corriente aument hasta 28.3
A. Calcular el porcentaje de estao en el mineral.
2. ADICIN ESTNDAR (adicin nica) (Ejercicio 3-hoja 2)
TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 38
TIPOS DE CALIBRADOS
2. ADICIN ESTNDAR (adicin mltiple)
Y= a + b Cx; cuando Y=0
Cx= a / b
y = 0,0411x + 0,0101
R
2
= 0,9995
0
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
- 0,4 - 0,2 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2
Cr om o ( m g/l)
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
(
u
.
A
.
)
Concentracin de patrn aadida
S
e
a
l
Muestra original (Cx)
Adicin 1
Adicin 2
Adicin 3
Adicin 5
Adicin 4
Extrapolacin
a seal cero
-Cx
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TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 39
TIPOS DE CALIBRADOS
2. ADICIN ESTNDAR (adicin mltiple)
INCONVENIENTES:
-Al ser un mtodo de extrapolacin es menos preciso que la recta de calibrado
(interpolacin).
- Requiere ms cantidad de muestra y reactivos.
- Hay que realizar una recta de calibrado para cada determinacin.
TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 40
TIPOS DE CALIBRADOS
3. PATRN INTERNO
Se emplea en aquellas tcnicas en las que la seal depende de factores poco
reproducibles y que pueden variar en el curso del anlisis. La variable
analtica es el cociente de seales del analito y del patrn interno.
El patrn interno es una sustancia que no est presente en la muestra a analizar,
con un comportamiento similar al del analito y que no interfiere en la determinacin
de ste.
A
M
k
1
. C
M
A
P.I.
k
2
. C
P.I.
=
F= factor de respuesta del detector para el ANALITO
usando un patrn interno
A
M
C
M
A
P.I.
C
P.I.
=
F
Calculamos C
M
Patrn interno simple
DISOLUCIN PATRN: se conoce C
M
y C
P.I
.
MUESTRA: se conoce C
P.I
.
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TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 41
TIPOS DE CALIBRADOS
3. PATRN INTERNO
Altura de pico, cm
Compuesto Patrn Muestra
Vitamina C 15.15 6.95
Cafena 12.25 8.30
En la determinacin de vitamina C en un refresco mediante HPLC, se us cafena como patrn interno.
El procedimiento usado fue el siguiente:
1.se prepar una solucin patrn de todos los compuestos que contena vitamina C 250 g/ml
cafena 150 g/ml.
2.Por otro lado, se pipetearon 20.0 ml de refresco a un matraz aforado de 100.0 ml y se le
aadieron 5.00 mg de cafena pura. Se disolvi el compuesto y se llev a enrase. Porciones
iguales de estas dos disoluciones se inyectaron dentro del cromatgrafo, se registr sus
cromatogramas y se midieron las seales obteniendo los siguientes resultados:
Ejercicio 8-Hoja2
TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 42
TIPOS DE CALIBRADOS
3. PATRN INTERNO MLTIPLE
P/p
C
M
P
M
p
P.I.
Concentracin analito
1
2
3
4
C
1
, C
2
, C
3
, C
4
concentraciones de analito
c concentracin constante patrn interno
P seales analticas del analito
p seales analticas de patrn interno
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TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 43
TIPOS DE CALIBRADOS
3. PATRN INTERNO MLTIPLE
El patrn interno debe ser una sustancia que:
- No debe aparecer en la muestra
- Similar al analito qumicamente
- Con una seal fcilmente medible que no interfiera con el analito.
- Debe responder de una manera similar a l, para cualquiera de las
variables que puedan afectar al detector.
- Su concentracin debe ser del mismo orden de magnitud que la del
analito.
TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 44
CALIDAD Y PROPIEDADES ANALTICAS
CALIDAD INTERNA DEL
LABORATORIO ANALITICO
PROPIEDADES
BSICAS
PROPIEDADES SUPREMAS
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TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 45
CALIDAD Y PROPIEDADES ANALTICAS
ANLISIS QUMICO
MEDIDAS EXPERIMENTALES
Basado en
Toda medida experimental
tiene asociada alguna
incertidumbre
NO EXISTEN RESULTADOS CUANTITATIVOS VLIDOS SI NO
VAN ACOMPAADOS DE LA ESTIMACIN DE LOS ERRORES
INHERENTES A ELLOS
TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 46
CALIDAD Y PROPIEDADES ANALTICAS
EXACTITUD
Expresa el grado de concordancia entre el resultado de un ensayo y el
valor de referencia aceptado comoverdadero
El error absoluto
El error relativo
v
x
i
x E =
100% x
v
x
v
x -
i
x
r
E =
1. Anlisis de estndares de referencia: Materiales que contienen uno o ms analitos en
concentracin conocida.
2. Comparacin con otros mtodos analticos, preferiblemente vlidos y fiables.
3. Anlisis de muestras blanco
4. Comparacin entre varios laboratorios (INTERLABORATORIO):
1. Todos los laboratorios utilizan la misma muestra- MATERIAL DE REFERENCIA.
2. Es mejor que haya un laboratorio vlido .
Cuando se desconoce el valor verdadero se evala mediante:
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TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 47
CALIDAD Y PROPIEDADES ANALTICAS
PRECISIN
Expresa el grado de concordancia, entre s, de un conjunto de resultados
obtenidos al efectuar varias veces la determinacin de un analito
Se evala mediante:
Desviacin estndar s =
Desviacin estndar relativa
Varianza: es el cuadrado de la desviacin estndar (s
2
)
1 - n
2
) x -
i
(x
100 ,% ,%) (
x
s
CV RSD = =
Precisin en patrones o una muestra analtica: REPETITIVIDAD
Se parte de una misma muestra de la que se hacen varias determinaciones.
Precisin en muestras: REPRODUCIBILIDAD
Se parte de varias muestras y se desarrolla todo el mtodo con cada una de ellas.
TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 48
CALIDAD Y PROPIEDADES ANALTICAS
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TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 49
CALIDAD Y PROPIEDADES ANALTICAS
ERRORES
SISTEMTICOS
(Determinados)
ERRORES
ALEATORIOS
(Indeterminados)
Errores de instrumento
Errores del mtodo
Errores personales
TIENEN VALOR DEFINIDO
TIENE CAUSA ASIGNABLE
TIENEN IGUAL SIGNO Y MAGNITUD
AFECTAN A LA EXACTITUD
Variables no controladas:
Parte inevitable de toda medicin
fsica o qumica
NO TIENEN SIGNO CONCRETO
NO PUEDEN CORREGIRSE
AFECTAN A LA PRECISIN
ERRORES CRASOS
(Espordicos)
RESULTADOS DISPARATADOS
TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 50
CALIDAD Y PROPIEDADES ANALTICAS
LMITE DE DETECCIN: LMITE DE CUANTIFICACIN:
m
B
LD
3
=
m
B
LC
10
=
N 10
INTERVALO DE LINEALIDAD:
Seal, S
Concentracin, C
Es el intervalo de concentraciones donde la relacin seal-concentracin es lineal.
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TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 51
CALIDAD Y PROPIEDADES ANALTICAS
Se define SENSIBILIDAD (s) como la razn del cambio en la seal de salida del instrumento, S, al
cambio correspondiente en el estmulo, en este caso la concentracin del analito, C.
s = dS / dC
Las pendientes de las curvas de calibrado se usan para determinar los valores de sensibilidad.
Qu nos indica la sensibilidad de un mtodo analtico?
La capacidad de discriminar entre pequeas diferencias en la concentracin del analito. A mayor
sensibilidad, ms fcil discriminar estas pequeas variaciones en la concentracin del analito y se
obtienen menores Lmites de Deteccin (LOD).
SENSIBILIDAD
TEMA 1. INTRODUCCIN AL ANLSIS INSTRUMENTAL 52
CALIDAD Y PROPIEDADES ANALTICAS
SELECTIVIDAD
Hace referencia al grado de interferencia de unas especies sobre la
identificacin de otras. El coeficiente de selectividad para una sustancia
potencialmente interferente B sobre un determinado analito A viene dado por
la relacin entre las pendientes de calibrado
K
B,A
= m
B
/m
A
RELACIN SEAL/RUIDO
Para describir la calidad de un mtodo analtico o el funcionamiento de un
instrumento, se utiliza la relacin seal/ruido (S/N). Las condiciones ms
favorables se obtendran para altas relaciones:
S/N = x /s siendo x la media de la seal analtica medida y s la desviacin
estndar.
Expresa la capacidad del mtodo para permanecer invariable a pequeas
modificaciones ambientales o de procedimiento.
Se mide mediante la reproducibilidad
ROBUSTED