Prctica No.

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Microscopa de luz
Objetivo:
Que el alumno conozca las partes, el funcionamiento los cuidados !ue se deben
de tener con el microscopio de luz, as como la t"cnica para obtener
microfoto#rafas de diferentes tipos de c"lulas.
$ntroducci%n: El microscopio es un instrumento ptico capaz de amplificar y resolver
detalles finos de objetos (especmenes) que no pueden observarse a simple vista. La
microscopa es la ciencia que abarca el conjunto de mtodos y aplicaciones que emplean
microscopios para su observacin. Esta ltima se divide en de luz y electrnica. La
importancia del microscopio radica en que !racias a el" se #a revolucionado el
conocimiento del mundo biol!ico (y mdico) de nuestra era. El microscopio se
clasifica de acuerdo al nmero de lentes necesarias para formar una ima!en en
a) $imple" formado por una sola lente" llamada lupa.
b) %ompuesto" formado por dos o mas lentes.
Los microor!anismos son tan peque&os que no se supo de su e'istencia #asta principios
del si!lo ()** por el #olands +ntonio )an Leeu,en#oe- !racias al microscopio
simple inventado por l.
.osteriormente en /001" 2oberto 3oo-e" acu& por primera vez el nombre de clula al
e'aminar con su microscopio una laminilla de corc#o" observ que estaba formado por
peque&as cavidades a las que llam clulas.
.osteriormente" !racias al microscopio" nace la 4eora %elular con 4#eodor $,ann y
5att#ias $c#leiden en /678. La cual menciona en sus postulados que todos los
or!anismos est9n compuestos por clulas y sus productos celulares" que la clula es la
unidad donde se llevan a cabo todas las funciones vitales y que toda clula procede de
otra pree'istente.
En los microscopios de finales del si!lo (*( se inventa e incorpora el condensador por
el fsico alem9n Ernest +bbe" que junto con la posterior incorporacin de la l9mpara
dieron un !ran paso en la fabricacin y operacin del microscopio.
Los microscopios modernos combinan diversos accesorios para la observacin de un
espcimen por diferentes tcnicas campo claro" campo oscuro" contraste de fase"
fluorescencia" polarizacin" etc. :ando lu!ar a diferentes tcnicas de microscopa.
.oder de resolucin. La caracterstica m9s importante de un microscopio es su poder de
resolucin" que es la capacidad de un instrumento ptico de distin!uir dos objetos
cercanos como entidades diferentes (separados) en la ima!en.
El lmite de resolucin es la distancia mnima que nos permite percibir dos objetos
separados. :epende de la lon!itud de onda de la luz usada () y de la apertura numrica
(+;)" que es la capacidad de una lente para absorber luz. Est9 dada por la e'presin<
&.'(
)mite de resoluci%n * +++++++++++++++++
, N
El valor de +; se e'presa se!n la relacin: ,N* nsen
En donde =n> es el ndice de refraccin del medio a travs del cual pasa la luz despus
de dejar un objeto y antes de entrar al lente objetivo y sen de , e'presa la apertura
an!ular del objetivo (semi?cono de luz que entra al objetivo). :e estas ecuaciones puede
deducirse que a) + mayor +; o menor " mayor poder de resolucin de un instrumento
(lmite de resolucin numricamente menor)< b) :ebido a que el aceite de inmersin
tiene un ndice de refraccin mayor que el aire e i!ual al vidrio" mejora (aumenta) el
valor de +;.
El aumento total (+4) que se puede alcanzar con un microscopio compuesto se obtiene
multiplicando el aumento del objetivo por el del ocular.
+4@aumento obj. ( aumento ocular
La iluminacin AB#ler. Es una tcnica que permite iluminar solo la zona del espcimen"
eliminando los rayos secundarios y se obtiene el beneficio total de las lentes utilizadas
dando mayor nitidez y contraste a lo observado. Los pasos para obtenerla son.
/.? %olocar espcimen y enfocar con objetivo /C(. *luminar con luz tenue.
D.? +brir diafra!ma de campo e iris
7.? $ubir el condensador
E.? %errar diafra!ma de campo
1.? Fajar condensador #asta ver los bordes ntidos del diafra!ma de campo (#e'9!ono)
0.? En caso de ser necesario centrar el condensador (#e'9!ono).
G.? +brir el diafra!ma de campo (#e'9!ono) en cuanto no se observe en el campo
6.? %errar el diafra!ma iris. %ontrastar.
Material:
5icroscopio compuesto. %ampo claro
.ortaobjetos y cubreobjetos
5uestras de clulas bacterias" levaduras" epitelio bucal" etc.
5uestra de a!ua enc#arcada.
%olorantes azul de al!odn" azul de metileno" safranina" etc.
.ipetas .asteur
M"todos
,. -uidados del microscopio.
/.? El microscopio debe estar en una mesa apa!ado" tapado y con el objetivo /C( en
posicin de uso. +s" en estas condiciones se debe de dejar al final de la sesin.
D.? Evitar arrastrar" !olpear o inclinar el microscopio.
7.? ;o forzar los tornillos macro y micromtrico" ni el diafra!ma iris.
E.? *mpedir tocar las lentes con los dedos.
1.? ;o in!erir alimentos ni bebidas mientras use el microscopio" para evitar ensuciarlo.
0.? 4ener cuidado de que el cordn de corriente no sal!a de la mesa" para evitar
arrastrarlo y tumbarlo.
G.? ;o utilizar rimel al observar al microscopio para evitar ensuciar los oculares
6.? Limpiar con papel para lentes (seda) despus de usar el objetivo de inmersin
(/CC().
8.? $iempre tener cuidado de no !olpear la preparacin con los lentes objetivos.
.. /so del microscopio.
/.? :estapar" conectar y prender el microscopio.
D.? %olocar el objetivo /C( (seco dbil) en posicin de uso" !irando el revolver de la
zona correcta (moleteado).
7.? .oner nuestra preparacin usando correctamente las pinzas sujetadoras.
E.? +cercar la preparacin #acia el objetivo subiendo cuidadosamente la platina y
viendo lateralmente. :ejar a D?7 mm la distancia entre ellos (tope).
1.? Enfocar" viendo a travs de los oculares alejando la preparacin del objetivo
(bajando la platina) con tornillo macromtrico. Enfoque fino con tornillo micromtrico.
0.? Llevar al centro del campo la muestra que se quiera observar con mas detalle y !irar
el revolver para colocar el objetivo EC( (seco fuerte) en posicin de uso. Enfocar
cuidadosamente con tornillo micromtrico.
G. $i se quiere observar en inmersin !irar revolver y dejarlo en posicin intermedia
entre los objetivos EC( y /CC(. En la zona iluminada del porta colocar una !ota de
aceite de inmersin y bajar un poco la platina. :espus !irar el revolver y colocar en
posicin de uso (vertical) el objetivo /CC(. +cercar cuidadosamente la platina
(preparacin) #acia el objetivo viendo lateralmente #asta que se forme un menisco.
+somarse a los oculares y enfocar cuidadosamente usando solamente el tornillo
micromtrico.
6. +l terminar" alejar la platina del objetivo" !irar el revolver un poco y limpiar el aceite
de inmersin de la lente frontal del objetivo.
8.? +pa!ar el microscopio primero bajando totalmente la intensidad de la l9mpara y
despus el botn de apa!ado. Fajar la platina" quitar la preparacin y dejar el objetivo
de /C( en posicin de uso. Enrollar el cable de corriente.
/C.? 4apar el microscopio.
;ota +visar al profesor de cualquier irre!ularidad que note en el microscopio" o
cualquier duda.
0"cnica para la realizaci%n de la prctica
/.? En portaobjetos perfectamente limpios" colocar una !ota de suspensin de clulas de
$ cereviseae y a!re!ar una !ota de safranina. %olocar el cubreobjeto y observar y
foto!rafiar.
D.? %on otro portaobjeto raspar li!eramente la len!ua y en el porta con clulas y saliva"
colocar una !ota de azul de metileno. %olocar el cubreobjeto" observar y foto!rafiar.
7.? En un portaobjeto colocar una muestra a ele!ir de a!ua enc#arcada" !rano de polen"
cabello" insecto" #ilo" letra" etc. H colocar cuidadosamente la preparacin en el
microscopio. Ibservar y foto!rafiar.
;ota todas las observaciones se #ar9n con objetivos /C y EC(.
1esultados -uestionario
/.? .e!ue las foto!rafas de todas las preparaciones observadas" indicando en el pie de
fi!ura que es cada una de ellas y el objetivo utilizado.
D.? 5encione las diferencias m9s importantes" entre las clulas observadas.
7.? 3a!a un esquema de un microscopio" a mano" e indique sus partes.
E.? 5encione los componentes del sistema de iluminacin" mec9nico y ptico del
microscopio.
1.? %alcule el lmite de resolucin de un microscopio considerando una lon!itud de onda
de EGC nm" un ndice de refraccin de /.ED y un 9n!ulo del cono de luz en el lente
objetivo de /1CJ (ojo" no semi?cono).
%onclusin en mi opinin personal esta pr9ctica ya se me #ace un poco repetitiva ya
que desde la prepa y al inicio de la carrera #emos visto en cada laboratorio el uso"
cuidados y mantenimiento del microscopio" pero a pesar de todo si se me #ace de !ran
importancia esta pr9ctica ya que aunque es repetitiva muc#as veces se nos olvida el
cuidado de esta !ran #erramienta que tenemos a nuestro alcance. Itra de las cosas
interesantes en esta pr9ctica es el fundament terico del descubrimiento del
microscopio por +ntoni van Leeu,en#oe- y la introduccin del trmino =clula> por
2oberto 3oo-e.