INTRODUCCIN.

Los enzimas son catalizadores muy potentes y eficaces, qumicamente son protenas Como catalizadores, los enzimas actan en pequea cantidad y se recuperan indefinidamente. No llevan a cabo reacciones que sean energticamente desfavorables, no modifican el sentido de los equilibrios qumicos, sino que aceleran su consecucin.

Las enzimas son grandes protenas que aceleran las reacciones qumicas. En su estructura globular, se entrelazan y se pliegan una o ms cadenas polipeptdicas, que aportan un pequeo grupo de aminocidos para formar el sitio activo, o lugar donde se adhiere el sustrato, y donde se realiza la reaccin. Una enzima y un sustrato no llegan a adherirse si sus formas no encajan con exactitud.

OBJETIVOS.
Conocer las propiedades principales de las enzimas. Describir la funcin biolgica de las enzimas. Explicar el funcionamiento de las enzimas respecto a sus propiedades.

DESARROLLO.
Estructuras y Mecanismos: Especificidad enzimtica Una de las principales caractersticas de las enzimas es su alta especificidad. Se conocen varios tipos de especificidad enzimtica que son: Especificidad ptica: Las enzimas presentan generalmente una

especificidad ptica absoluta por lo menos para una porcin de la molcula del substrato. Especificidad de Grupo: Cuando una enzima acta solo sobre grupos qumicos y particulares. Especificidad de sustrato: acepta solo un tipo de sustrato. Especificidad de reaccin: llevan a cabo una reaccin especfica, independiente del sustrato. Las enzimas son especficas para: el sustrato y la reaccin. Esto significa que las enzimas pueden catalizar la transformacin de apenas un substrato o una familia de sustratos relacionados estructuralmente, catalizando solo una de las posibles reacciones que ese substrato puede experimentar. Cuando la enzima solo puede actuar sobre un tipo de sustrato, se dice que la enzima muestra especificidad absoluta para el substrato. Ese es el caso de la deshidrogenasa succinica, que es especfica para el succinato, o la L-glutmico deshidrogenasa, especfica para el glutamato. Si la enzima puede actuar sobre sustratos con estructuras muy similares, se dice que la enzima muestra especificidad relativa para el substrato. La Laminocido oxidasa, por ejemplo, puede catalizar la oxidacin de diferentes aminocidos de la serie L. Esta caracterstica de algunas enzimas puede ser aprovechada en algunos escenarios clnicos. Por ejemplo, en pacientes intoxicados con metanol, se

utiliza etanol en el tratamiento. La enzima puede unirse a cualquiera de los dos alcoholes (especificidad relativa), pero tiene de 10 a 20 veces ms afinidad por el etanol, lo cual favorece la oxidacin del etanol por sobre la oxidacin del metanol. Evitar la oxidacin del metanol para favorecer su eliminacin sin ser transformado, es muy importante, ya que la oxidacin metablica del metanol produce metabolitos muy peligrosos para el organismo, como formaldehdo y acido frmico. La especificidad de accin consiste en que la enzima solo cataliza una de las posibles reacciones que puede seguir un substrato. En el caso del glutamato, por ejemplo, que puede experimentar diferentes transformaciones, se requiere una enzima diferente para cada una de esas transformaciones: Glutamato a: Glutamina (Fijacin de amoniaco): Glutamina sintetasa GABA (Descarboxilacin): Glutamato Descarboxilasa Alfacetoglutarato: Glutamato Deshidrogenasa

La especificidad de las enzimas depende de las caractersticas del sitio o centro activo. Esta es la regin de la enzima donde esta se une al substrato antes de que ocurran las transformaciones del substrato. El enlace de la enzima a sustratos especficos depende de los diferentes grupos (usualmente de las cadenas laterales de aminocidos, aunque puede haber otros grupos) relacionados con el sitio activo: a) Los grupos que forman el esqueleto peptdico en el rea del sitio activo, que proporcionan la conformacin apropiada para el enlace. b) Los grupos de orientacin, que obligan al sustrato a adoptar la orientacin apropiada para la reaccin. c) Los grupos ambientadores, que proporcionan el medio adecuado (ambiente hidrofbico, polar, negativa o positivamente cargado, etc)

necesario para garantizar una apropiada afinidad entre la enzima y el substrato especifico, y d) Los grupos catalticos, responsables por crear las tensiones necesarias para la ruptura de viejos enlaces y la formacin de otros nuevos, entre los que participan en la reaccin: substrato (s), coenzima(s) y/o otros grupos prostticos. Modelo de llave cerradura (candado) El modelo llave-cerradura supone que la estructura del sustrato y la del centro activo son complementarias, de la misma forma que una llave encaja en una cerradura. Este modelo es vlido en muchos casos, pero no es siempre correcto. Modelo del encaje inducido En algunos casos, el centro activo adopta la conformacin idnea slo en presencia del sustrato. La unin del sustrato al centro activo del enzima desencadena un cambio conformacional que da lugar a la formacin del producto. Este es el modelo del ajuste inducido. Sera algo as como un cascanueces, que se adapta al contorno de la nuez.

 Cofactores y enzimas / coenzimas Los cofactores enzimticos son sustancias de diferente naturaleza qumica, que participan en las reacciones enzimticas debido a que las enzimas no poseen en su estructura todos los grupos funcionales necesarios para llevar a cabo la catlisis de todas las reacciones metablicas; los cofactores no son componentes obligados de todas las reacciones. Los cofactores pueden ser iones inorgnicos como el Fe 2+, Mg2+, Mn2+, Zn2+ etc. Cuando el cofactor es una molcula orgnica se llama coenzima. Muchos de estas coenzimas se sintetizan a partir de vitaminas. Por ejemplo, las vitaminas del complejo B son coenzimas que se requieren para una respiracin celular adecuada. Cosustrato: Se asocia de forma transitoria con la enzima. Ejemplo: NAD en la PDH, ATP en las Quinasas. Cuando los cofactores y las coenzimas se encuentran unidos covalentemente al enzima se llaman grupos prostticos. La forma catalticamente activa del enzima, es decir, la enzima unida a su grupo prosttico, se llama holoenzima. La parte proteica de un holoenzima (inactiva) se llama apoenzima, de forma que: apoenzima + grupo prosttico = holoenzima. Por ejemplo, grupo Hemo en los Citocromos. Funcin biolgica / Cintica Las enzimas presentan una amplia variedad de funciones en los organismos vivos. Son indispensables en la transduccin de seales y en procesos de regulacin, normalmente por medio de quinasas y fosfatasas. Tambin son capaces de producir movimiento, como es el caso de la miosina al hidrolizar ATP para generar la contraccin muscular o el movimiento de vesculas por medio del

citoesqueleto. Otro tipo de ATPasas en la membrana celular son las bombas de iones implicadas en procesos de transporte activo. Adems, las enzimas tambin

estn implicadas en funciones mucho ms exticas, como la produccin de luz por la luciferasa en laslucirnagas. Los virus tambin pueden contener enzimas

implicadas en la infeccin celular, como es el caso de la integrasa del virusHIV y de la transcriptasa inversa, o en la liberacin viral, como la neuraminidasa del virus de la gripe. Una importante funcin de las enzimas es la que presentan en el sistema digestivo de los animales. Enzimas tales como las amilasasy las proteasas son capaces de degradar molculas grandes (almidn o protenas, respectivamente) en otras ms pequeas, de forma que puedan ser absorbidas en el intestino. Las molculas de almidn, por ejemplo, que son demasiado grandes para ser absorbidas, son degradadas por diversas enzimas a molculas ms pequeas como la maltosa, y finalmente a glucosa, la cual s puede ser absorbida a travs de las clulas del intestino. Diferentes enzimas digestivas son capaces de degradar diferentes tipos de alimentos. Los rumiantes que tienen una dieta herbvora, poseen en sus intestinos una serie de microorganismos que producen otra enzima, lacelulasa, capaz de degradar la celulosa presente en la pared celular de las plantas. Varias enzimas pueden actuar conjuntamente en un orden especfico, creando as una ruta metablica. En una ruta metablica, una enzima toma como sustrato el producto de otra enzima. Tras la reaccin cataltica, el producto se transfiere a la siguiente enzima y as sucesivamente. En ocasiones, existe ms de una enzima capaz de catalizar la misma reaccin en paralelo, lo que permite establecer una regulacin ms sofisticada: por ejemplo, en el caso en que una enzima presenta una actividad constitutiva pero con una baja constante de actividad y una segunda enzima cuya actividad es inducible, pero presenta una mayor constante de actividad. Las enzimas determinan los pasos que siguen estas rutas metablicas. Sin las enzimas, el metabolismo no se producira a travs de los mismos pasos, ni sera lo suficientemente rpido para atender las necesidades de la clula. De hecho, una ruta metablica como la gluclisis no podra existir sin enzimas. La glucosa, por ejemplo, puede reaccionar directamente con el ATP de forma que quede fosforilada en uno o ms carbonos. En ausencia de enzimas, esta reaccin se producira tan lentamente que sera insignificante. Sin embargo, si se aade la enzima hexoquinasa que fosforila el carbono 6 de la glucosa y se mide la concentracin de la mezcla en un breve espacio de tiempo se podr encontrar nicamente glucosa-6-fosfato a niveles significativos. Por tanto, las redes de rutas metablicas dentro de la clula dependen del conjunto de enzimas funcionales que presenten. Clasificacin y nomenclatura de enzimas

El nombre de una enzima suele derivarse del sustrato o de la reaccin qumica que cataliza, con la palabra terminada en -asa. Por ejemplo, lactasa proviene de su sustrato lactosa; alcohol deshidrogenasa proviene de la reaccin que cataliza que consiste en "deshidrogenar" el alcohol; ADN polimerasa proviene tambin de la reaccin que cataliza que consiste en polimerizar el ADN. La Unin Internacional de Bioqumica y Biologa Molecular ha desarrollado una nomenclatura para identificar a las enzimas basada en los denominados Nmeros EC. De este modo, cada enzima queda registrada por una secuencia de cuatro nmeros precedidos por las letras "EC". El primer nmero clasifica a la enzima segn su mecanismo de accin. A continuacin se indican las seis grandes clases de enzimas existentes en la actualidad:

EC1 Oxidorreductasas: catalizan reacciones de oxidorreduccin o redox. Precisan la colaboracin de las coenzimas de oxidorreduccin + + (NAD , NADP , FAD) que aceptan o ceden los electrones correspondientes. Tras la accin cataltica, estas coenzimas quedan modificadas en su grado de oxidacin, por lo que deben ser recicladas antes de volver a efectuar una nueva reaccin cataltica. Ejemplos: deshidrogenasas, peroxidasas. EC2 Transferasas: transfieren grupos activos (obtenidos de la ruptura de ciertas molculas) a otras sustancias receptoras. Suelen actuar en procesos de interconversin de monosacridos, aminocidos, etc. Ejemplos: transaminasas, quinasas. EC3 Hidrolasas: catalizan reacciones de hidrlisis con la consiguiente obtencin de monmeros a partir de polmeros. Actan en la digestin de los alimentos, previamente a otras fases de su degradacin. La palabra hidrlisis se deriva de hidro 'agua' y lisis 'disolucin'. Ejemplos: glucosidasas, lipasas, esterasas. EC4 Liasas: catalizan reacciones en las que se eliminan grupos H2O, CO2 y NH3 para formar un doble enlace o aadirse a un doble enlace. Ejemplos: descarboxilasas, liasas. EC5 Isomerasas: actan sobre determinadas molculas obteniendo o cambiando de ellas sus ismeros funcionales o de posicin, es decir, catalizan la racemizacin y cambios de posicin de un grupo en determinada molcula obteniendo formas isomricas. Suelen actuar en procesos de interconversin. Ejemplo: epimerasas (mutasa). EC6 Ligasas: catalizan la degradacin o sntesis de los enlaces denominados "fuertes" mediante el acoplamiento a molculas de alto valor energtico como el ATP. Ejemplos: sintetasas, carboxilasas.

 Cintica Dada la reacin: A ----> B , donde A es el sustrato (reactante) y B el producto, la velocidad (o la tasa de rapidez), u, es la cantidad de B formado o la cantidad de A consumido por unidad de tiempo. As:

La relacin matemtica entre la tasa de rapidez y la concentracin de reactantes e la ley de rapidez. Para esta reaccin la ley de rapidez es:

donde n es el orden de la reaccin, determinado experimentalmente y k es la constante de rapidez. Reaccin de Cero Orden: la rapidez es independiente de la concentracin del reactante: v= k[A] Una reaccin enzimtica es de cero orden cuando la enzima est saturada del sustrato. En este caso, la formacin del producto procede a una rapidez lineal con respecto al tiempo. La adicin de ms sustrato no aumenta la rapidez de la reaccin.

Reaccin de Primer Orden: la rapidez depende de la concentracin del reactante elevado a la primeta potencia: v=k[A]1 El paso determinante de la reaccin es unimolecular (no se requieren colisiones moleculares; slo una molcula es necesaria para alcanzar el estado de transicin). La rapidez es directamenete proporcional a la [A]. La unidad de k es 1/seg. Una grfica de v vs [A] da una lnea recta cuya pendiente es igual a k.

A mayor disponibilidad de A mayor la rapidez de la reaccin.

Un analisis de la rapidez de una reaccin de un slo sustrato y catalizada por una enzima genera resusltados muy diferentes a los esperados. A baja [A] la es proporcional a la [A]: la reaccin tiene una cintica de primer orden. Sin embargo v no aumenta proporcionalmente segn [A] aumenta: en su lugar, comienza a nivelarse. Cuando [A] es lo suficientemente alta, u es virtualmente indepentiente de [A] y tiende a un lmite mximo. El valor de u en ese lmite se indica como Vmax. Como la rapidez ya no es dependiente de [A| a esas altas concentraciones, se dice que la enzima est saturada del sustrato y la reaccin sigue una cintica de cero orden.

El factor ms comn que afecta la rapidez de una reaccin es el cambio en concentracin de reactantes ya que esto afecta el equilibrio. Para los procesos enzimticos hay dos posibilidades: (a) Cambios en la concentracin de la enzima.Para la reaccin: <center donde: S=sustrato E= ES=complejo P=

producto;

enzima enzima/sustrato y

k1 y k2 = constantes de rapidez de cada reaccin,</center la velocidad inicial, v, (velocidad medida cuando apenas ha reaccionado el sustrato) es proporcional a la concentracin de enzima [E]: v [E] . Sin embargo, segn procede la reaccin, esta proporcionalidad no es tan notable. Veamos: si consideramos la reaccin como:

entonces v1 = k1[S][E] y v2= k2[E][P].

Como la reaccin est en equilibrio entonces v1 = v2 , por lo que:

Como [ E ] se cancela, entonces:

Por lo tanto, la [ E ] no afecta la Keq, lo que equivale a decir que la enzima afecta la rapidez de la reaccin pero no las constantes de rapidez, cuya proporcin es la Keq. La constante de equilibrio ser la misma con o sin catlisis enzimtica. (b) Cambios en la concentracin del sustrato: con otras condiciones constante, si la [ S ] aumenta entonces la velocidad inicial,v, aumenta hasta un valor mximo, Vmax, y no ms all. Este mximo se alcanza cuando la enzima se satura del sustrato. Para la reaccin:

(k1/k2 representan las constante de rapidez de la reaccin directa e inversa, respectivamente) Se asume que: (a) k2 es insignificante cuando se compara con k1 (b) la rapidez de formacin de ES es igual a la rapidez de su degradacin por el transcurso de la reaccin. Esto se conoce como la presuncin del estado invariable. Por lo tanto, la expresin de rapidez para la reaccin de ES ser: v= / t = k3[ ES ]

Ahora bien: (a) si la rapidez de formacin de ES es = k1[ S ][ E ]; y (b) si la rapidez de disociacin de ES es = (k2 + k3)[ ES ], entonces, por la presuncin del estado invariable: k1[S][E] = (k2 + k3)[ES] por lo que:

La expresin

se conoce como la constante de Michaelis-Menten (km), cuya dimensin es moles/litro (Molaridad). Usando otras consideraciones, se logra derivar la ecuacin conocida la Ecuacin de Michaelis-Menten:

donde v = velocidad (rapidez) inicial y Vmax = velocidad (rapidez) mxima que la reaccin puede alcanzar. Si km = [S], entonces

Si se grafica v vs [S] tenemos que:

Km es la concentracin de S, [ S ], a la que la enzima est a la mitad de su velocidad mxima (punto 'b' en la grfica). Desde el origen hasta el punto 'c' de la grfica, la enzima presente no est totalmente combinada con el sustrato. En los puntos 'a' y 'b', aumentando o disminuyendo [ S ] aumenta o disminuye [ ES ], por lo que v depender de [S] (reaccin de primer orden). En el punto 'c', toda la enzima est esencialmente combinada con el sustrato (saturada), por lo que cualquier aumento en [S] no altera la rapidez de reaccin: no hay enzima libre para reaccionar (reaccin de orden cero).

La ecuacin de Michaelis-Menten describe el comportamiento de muchas enzimas segn [ S ] vara. A esos efectos: (a) Si Km es la [ S ] que produce la mitad de la Vmax, entonces en ese punto la enzima esta "media" saturada. Km se puede calcular experimentalmente de la grfica de v vs [ S ]. (b) Si [ S ] es mucho menor que Km (punto 'a' en la grfica), entonces la ecuacin de Michaelis-Menten ser:

Lo que implica que cuando la concentracin del sustrato es considerablemente menor que la requerida para obtener la mitad de la Vmax (el valor de K m), entonces la velocidad v depender de [ S ] (reaccin de primer orden). (c) Si [ S ] es mucho mayor que Km (punto 'c' en la grfica) entonces la ecuacin de Michaelis-Menten ser:

Lo que implica que la velocidad medida es realmente la velocidad mxima posible (enzima saturada; reaccin de cero orden). Importancia de la constante de Michaelis-Menten, Km: -Es una constante que es caracterstica de cada enzima y su sustrato bajo condiciones especficas. -Puede reflejar la afinidad de la enzima por su sustrato (a menor valor de Km mayor la afinidad de la enzima para la formacin del complejo ES). -Permite interpretar el mecanismo de la reaccin enzimtica. Como regla general, si [ S ]>100(Km), entonces v = Vmax y la cintica es de cero orden; si [ S ]< 0.01(Km), la cintica es de primer orden. - Permite calcular cuanto sustrato usar. Muy pocas enzimas dan curvas de saturacin que permitan la evaluacin de Vmax y Kmde la grfica de v vs [ S ]. En este caso se recurre a las grficas de Lineweaver-Burk, que parte de una ecuacin del tipo y = mx+b , que es la grfica de una lnea recta. Esta ecuacin surge del recproco de la ecuacin de Michaelis-Menten:

-la pendiente m es Km/Vmax; -el intercepto en "y" es 1/Vmax -el intercepto en "x" es -1/Km Km se puede calcular de la pendiente o del intercepto en "y" o del negativo del intercepto en "x".

La ecuacin de Lineweaver-Burk permite evaluar la reacciones enzimticas con inhibidores. Otra forma de medir eficiencia cataltica es por el nmero de vuelco o de recambio (turnover number), kcat : kcat = Vmax/[ Etotal ] donde [ Etotal ] es la concentracin total de la enzima= [ E ] + [ ES ], donde [ E ] es la concentracin de la enzima libre y [ ES ] es la concentracin de la enzima en el complejo enzima sustrato. kcat es una medida de la mxima actividad enzimtica; se asume que la enzima esta totalmente saturada con el sustrato, por lo que la reaccin procede a la mxima rapidez. Se han encontrado muchas enzimas que no dan cintica de saturacin hiperblica o clsica de Michaelis-Menten. Para estas enzimas, una grfica de v en funcin de [S] da una curva sigmoidal.

Curva de saturacin sigmoidal. Parece que la reaccin sigmoidea se debe a la presencia de focos de enlaces mltiples en la enzima, situados probablemente en subunidades diferentes. La interaccin de un sustrato en un foco ocasiona un cambio en la configuracin de la estructura terciaria de la protena, que puede dar como resultado un cambio en la afinidad de un foco libre para los sustratos (Alosterismo o efecto alostrico: un efector o modulador se une de forma no-covalente a una protena y afecta positiva o negativamente- su actividad). Termodinmica Las enzimas son molculas de protenas que tienen la capacidad de facilitar y acelerar las reacciones qumicas que tienen lugar en los tejidos vivos, disminuyendo el nivel de la "energa de activacin" propia de la reaccin. Se entiende por "energa de activacin" al valor de la energa que es necesario aplicar (en forma de calor, electricidad o radiacin) para que dos molculas determinadas colisionen y se produzca una reaccin qumica entre ellas As son catalizadores especficos: cada enzima cataliza un solo tipo de reaccin, y casi siempre acta sobre un nico sustrato o sobre un grupo muy reducido de ellos. En una reaccin catalizada por un enzima: 1. La sustancia sobre la que acta el enzima se llama sustrato. 2. El sustrato se une a una regin concreta del enzima, llamada centro activo. El centro activo comprende (1) un sitio de unin formado por los aminocidos que estn en contacto directo con el sustrato y (2) un sitio cataltico, formado por los aminocidos directamente implicados en el mecanismo de la reaccin 3. Una vez formados los productos el enzima puede comenzar un nuevo ciclo de reaccin Solamente aumentan la velocidad de la reaccin, actuando como catalizadores 1.- La enzima y su sustrato 2.- Unin al centro activo

3.- Formacin de productos

CONCLUSIONES
Las Funciones de las enzimas, se entrelazan y se pliegan una o ms cadenas polipeptdicas, que aportan un pequeo grupo de aminocidos para formar el sitio activo, o lugar donde se adhiere el sustrato, y donde se realiza la reaccin. Una enzima y un sustrato no llegan a adherirse si sus formas no encajan con exactitud. Este hecho asegura que la enzima no participa en reacciones equivocadas. Dentro de los Factores que incluyen las reacciones enzimticas tenemos: Cambios en el pH, Cambios en la temperatura, Presencia de cofactores, Las concentraciones del sustrato y de los productos finales, Activacin, Costes, Disponibilidad Es importante saber cual es la temperatura y de las enzimas ya que es elevacin incrementa la velocidad de una reaccin catalizada por enzimas. Al principio la velocidad de reaccin aumenta cuando la temperatura se eleva debido al incremento de la energa cintica de la energa de las molculas reactantes. A esta temperatura predomina la desnaturalizacin con prdida precipitada de la actividad cataltica. Por tanto las enzimas muestran una temperatura ptima de accin. As como tambin es necesario conocer el ph ya que es la intensidad mxima de la actividad de la enzima, ocurre en el pH ptimo, con rpida disminucin de la actividad a cada lado de este valor de pH. La actividad ptima generalmente se observa entre los valores de 5 y 9. El pH ptimo de una enzima puede guardar relacin con cierta carga elctrica de la superficie, o con condiciones optimas para la fijacin de la enzima a su sustrato. Las Intracelulares son los responsables de los procesos de degradacin celular. En estos procesos se obtienen nutrientes elementales a partir de los materiales estructurales propios de las clulas cuando el aporte mediante la dieta se interrumpe y las extracelulares son aquellas que se activan por fuera de la membrana plasmtica o pared celular de clulas, muchas de ellas cumplen procesos metablicos catalticos destinados a la degradacin de la materia en energa qumica,