LAS ACUAPORINAS. UNA ENTRADA MOLECULAR EN LAS RELACIONES HDRICAS DE LAS PLANTAS Christophe Maurel * y Maarten J.

Chrispeels Biochimie et Physiologie Mole'culaire des Plantes, Agro-Montpellier/Centre National de la Recherche Scientifique / Instituto Nacional de Investigacin Agronmica / Universite 'Montpellier 2 Unite' Mixte de Recherche 5004, Place Viala, F-34 060 Montpellier Cedex 1, Francia (CM), y el Departamento de Biologa, Universidad de California, 9500 Gilman Drive, La Jolla, CA 92093-0.116 (MJC) Relaciones hdricas son, obviamente, crucial para la fisiologa de las plantas terrestres , pero hace 25 aos la mayora de los bilogos de plantas vieron esta rea de investigacin como algo de una rareza . Dominado por las ecuaciones y teoras fsicas inusuales sobre lquidos en tuberas , relaciones hdricas pareca ser un campo con poca necesidad aparente de los conceptos crecientes y enfoques ofrecidos por la biologa molecular y celular. El descubrimiento de las acuaporinas uni a estas dos "culturas" de los biofsicos y genetistas moleculares y despert el inters de los bilogos celulares y moleculares en las relaciones hdricas de las plantas. Biofsicos temprana (y actual ) de la planta, la explotacin de las teoras fsicas sofisticados , formularon el concepto general y unificador que el flujo de agua a travs de las clulas y los tejidos de la planta puede ser entendida como el producto de la fuerza motriz y la conductancia ( 3 , 16 ) . En las plantas, en condiciones naturales , la absorcin de agua por las races y la prdida de las hojas son impulsados por fuerzas en constante cambio , y las plantas a mantener un equilibrio apropiado del agua ajustando continuamente la conductancia del agua de sus tejidos. El concepto de potencial de agua unifica la descripcin de estas fuerzas , si hidrosttica , osmtica , matriz de derivado de , o gravitacional en la naturaleza ( 3 , 16 ) . Sin embargo , la medicin in situ en una de estas fuerzas est sujeto a trampas , como se ejemplifica por las actuales controversias sobre los mecanismos de la subida de la savia del xilema . Gradientes de potencial de agua tambin pueden ser manipuladas experimentalmente y en estos estudios la conductancia de las clulas y los tejidos de la planta mucho tiempo se ha visto como un cuadro negro ( 16 ) . De qu manera las clulas regulan la conductancia en este cuadro de negro ?

CANALES DE AGUA: UN REVOLUCIONARIO DESCUBRIMIENTO Clulas de guarda y los tejidos vasculares desempear un papel central en la conduccin de agua y el control de la corriente de transpiracin , pero al entrar y salir del agua los tejidos vascular tiene que fluir a travs de las clulas vivas. Cuando el agua fluye a travs de los tejidos vivos , puede seguir diferentes rutas : a travs de las paredes celulares (camino de apoplstico ) , de clula a clula a travs de cualquiera de los plasmodesmos ( ruta simplstica ) , o atravesar las membranas celulares (camino de transcelular ) . Se han desarrollado criterios biofsicos para distinguir entre el apoplstica y clula a caminos celulares ( 16 ) . Estos estudios se beneficiarn de las ltimas descripciones bioqumicas y genticas de las barreras celulares crticos, como la endodermis de la raz con sus bandas de Caspary , y de los nuevos conocimientos sobre los mecanismos moleculares de activacin peridica plasmodesmatal . El avance ms significativo hasta la fecha en la comprensin de la conductancia de las clulas vivas ha llegado desde el descubrimiento de una clase de protenas de los canales de agua llamados acuaporinas ( 1 ) . Las acuaporinas ahora se han

encontrado en casi todos los organismos vivos. Pertenecen a una familia ms grande de protenas de membrana homlogas a la protena intrnseca importante bovina ( MIP ) y exhiben una estructura tpica con seis dominios que atraviesan la membrana y una simetra interna que muestra dos motivos Asn - Pro - Ala altamente conservadas (Fig. 1 ) . Debido a su abundancia, se identificaron plantas homlogos MIP a finales de 1980 ( 4 ) , pero varios aos pasaron antes de que se reconoci que algunos de ellos pueden funcionar como canales de agua de alta eficiencia y facilitar la difusin de las enormes cantidades de agua a lo largo de gradientes de potencial transmembrana de agua (10) . Cuando este descubrimiento fue presentado en la Conferencia de membrana Planta en Monterey , California, en 1992 , las reacciones de la audiencia mostraron claramente que el descubrimiento no estaba en sintona con el pensamiento actual de muchos. En ese momento, y en contraste con lo que se haba establecido en las membranas de los eritrocitos y de los riones , se asume comnmente que el flujo de agua a travs de la fraccin lipdica de las membranas de la planta sera suficiente para hacerse cargo de todas las necesidades celulares. Sin embargo, los canales acuosos en las membranas de las plantas se haban examinado ms de 25 aos antes ( 3 ) , y las pruebas funcionales se haba facilitado por un laboratorio ( 20 ) . Se ha argumentado que el descubrimiento de las acuaporinas no revolucionar la base biofsica de las relaciones hdricas de las plantas ( 17 ) , y esto tambin puede ser cierto . Sin embargo , creemos que la identificacin de las acuaporinas ha cambiado mucho nuestro pensamiento sobre cmo las plantas podran regular el flujo de agua , mucho ms all de la simple representacin de los poros llenos de agua en un modelo de membrana . El descubrimiento de las acuaporinas constituye un avance conceptual en la fisiologa de las plantas .

NUEVAS PERSPECTIVAS EN LA BIOLOGA MOLECULAR Y CELULAR DE MEMBRANAS

A diferencia de lo que se supona en un principio, composiciones especficas de lpidos de membrana difcilmente puede dar cuenta de algunos de los valores de permeabilidad al agua alta ( 0.100 mm s21 ) que fueron reportados inicialmente para las membranas vegetales . Por lo tanto , el descubrimiento de las acuaporinas dio un fuerte apoyo a la idea de que este tipo de propiedades de alta permeabilidad al agua puede ser requerido para ciertos procesos fisiolgicos. Lo ms importante, las acuaporinas inmediatamente proporcionaron una slida base molecular para la regulacin rpida y reversible de transporte de agua transmembrana. Una vez que una protena est implicada , la clula tiene la capacidad de regular su abundancia ( la regulacin transcripcional o postranscripcional ) o para modular su actividad . La expresin de genes de las acuaporinas est regulado por el desarrollo de una manera especfica de la clula , a travs de hormonas , y por seales ambientales tan diversos como la infeccin por nematodos o la sequa (revisado en 5 y 15 ) . Fosforilacin reversible controla la actividad de alguna planta acuaporinas ( 9 ) . En hojas de espinaca , por ejemplo , el nivel de fosforilacin de una membrana de acuaporina de plasma depende de la potencial de agua apoplstica , estableciendo as un enlace intrigante entre la fuerza de conduccin y la conductancia (revisado en 5 ) . Un trabajo reciente realizado en animales apunta a otros mecanismos para la regulacin de las acuaporinas , a travs de pH o el cambio libre de calcio o protena controlada focalizacin (revisado en 19 ) . Control de compuerta

Exquisito por acuaporinas como se ha puesto de manifiesto para los canales inicos de este modo se puede esperar. Con estos y los nuevos mecanismos de regulacin por descubrir en las plantas, las propiedades de transporte de agua de las membranas aparecen ahora como un nuevo e importante enfoque en la moderna fisiologa de la clula vegetal. Herramientas como la sonda de presin de la clula , que se desarrollaron antes de medir el transporte de agua a nivel celular ( 16 ) , estn ganando as un renovado inters. Despus del descubrimiento de las acuaporinas primero , un hallazgo secondsurprising ha sido su asombrosa diversidad de las plantas (21). Ms de 30 genes codifican homlogos de acuaporinas en Arabidopsis . Sobre la base de la homologa de secuencia , las acuaporinas vegetales se pueden clasificar en tres subfamilias especficos de la planta ( 5 , 15 ) , dos de los cuales parecen corresponder a ubicaciones subcelulares distintos . Protenas tonoplast intrnsecas ( TIP ) y protenas intrnsecas de la membrana plasmtica (PIP ) residen principalmente en la membrana vacuolar y plasma, respectivamente. Nodulin MIPs 26 -al igual que ocurre en la membrana peribacteroid de ndulos fijadores de nitrgeno ( 4 ), al menos en las legumbres , pero su ubicacin en otras plantas an no se ha descubierto ( 21 ) . Aunque todas las protenas en el clado PIP pueden no estar en la membrana de plasma ( 7 ) y todas las protenas en el clado TIP en el tonoplasto , est claro que las acuaporinas distintas isoformas estn dirigidos a compartimentos subcelulares distintos y acuaporinas han surgido como importantes marcadores de planta la diferenciacin de la membrana celular . Por ejemplo , los anticuerpos producidos contra diversos homlogos TIP se han utilizado para distinguir subtipos o morfologas vacuolar distintos dentro de la misma clula de la planta ( 13 ) , y los anticuerpos PIP han revelado subdominios de membrana de plasma invaginadas llamados plasmalemmasomes ( 15 ) . Los primeros estudios sobre las relaciones de agua de clulas de plantas se centraron en la conductividad hidrulica de clulas enteras y se supone que se determina por la membrana plasmtica . Sin embargo , en contraste con las clulas animales , muchos acuaporinas vegetales estn situados intracelularmente . Varios grupos investigados recientemente las propiedades de transporte de agua de vesculas obtenidas de diferentes membranas celulares. Las vesculas derivadas de la tonoplasto de clulas de la raz o de suspensin o de la membrana peribacteroid de ndulos que fijan el nitrgeno exhiben valores de permeabilidad al agua ( 11 , 12 , 14 ) que excede de varias veces por la de la membrana de glbulos rojos , que ha sido considerado como el prototipo de la membrana que contiene el canal de agua . Estos hallazgos nos hizo repensar la osmorregulacin de las clulas vegetales en relacin con su alto grado de compartimentacin . El citoplasma , lo que representa slo una pequea fraccin del volumen total de la clula , debe ser crticamente sensible a cualquier diferencial de caudal de agua que ocurre a travs de sus membranas limitantes. Osmorregulacin eficiente de este compartimento se puede lograr mediante el transporte rpido de agua a travs de membranas intracelulares , para proporcionar el equilibrio de volumen rpido y la disipacin de gradientes de potencial del agua dentro de la clula ( 11 , 12 , 18 ) . Un tercer hallazgo sorprendente es el descubrimiento de que algunos acuaporinas son protenas multifuncionales . Los homlogos en microorganismos tienen una funcin bien establecida en el transporte de solutos osmocompatible tales como glicerol ( 1 ) . Es una curiosidad biofsico que algunos acuaporinas vegetales puedan ser permeados por tales molculas ( 14 , 18 ) ( fig. 1 ) ? Si la relevancia de esta penetracin se puede probar in planta , el soluto transporte de las propiedades de las acuaporinas vegetales puede establecer una conexin

ms entre la fuerza motriz y la conductancia . El transporte por acuaporinas vegetales de sustancias gaseosas , como el CO2 o NH3, es una idea an ms provocativo que podra ser de gran importancia en las hojas o en los ndulos de las races simbiticas ( 18 ) .

MEMBRANAS, TRANSPORTE DE AGUA EN TODA LA PLANTA Y PLASTICIDAD DEL DESARROLLO Ya sea en el nivel de clula o tejido , una dificultad intrnseca en el estudio de transporte de agua es distinguir entre los caminos paralelos mencionados anteriormente . A nivel celular , las propiedades reguladoras y la capacidad de transporte de alta de las acuaporinas han establecido un papel predominante para estas protenas con respecto a la membrana de lpidos en s . A nivel de los tejidos, las acuaporinas apuntan a la importancia del transporte de agua transcelular como alternativa a apoplstica y transporte simplstica . La expresin ubicua y altamente regulado de las acuaporinas en plantas tambin sugiere que el transporte de agua transmembrana puede ser relevante para muchos procesos distintos de los relacionados con la transpiracin . Por ejemplo , regulacin de la expresin de acuaporina en flores o durante la maduracin y germinacin de semillas ha sido descrito (revisado en 5 , 15 ) . En trminos ms generales , las acuaporinas proporcionan valiosos marcadores espaciales para explorar los intrincados flujos de agua y solutos que juegan un papel fundamental en toda desarrollo de la planta o en la respuesta de las plantas a diversos estreses biticos o abiticos (Fig. 2) . Despus de slo unos pocos aos , la bsqueda de la funcin de las acuaporinas en el nivel de planta entera ya ha dado lugar a nuevos enfoques experimentales , sobre todo en el estudio de la absorcin de agua por las races . Las races pueden ajustar con precisin su conductividad hidrulica en respuesta a los cambios ambientales , tales como un aumento de la salinidad del suelo, la privacin de nutrientes , los ciclos de da y de noche , o anaerobiosis . Las acuaporinas podran perfectamente dar cuenta de tal regulacin ( 18 ) y su funcin en las races se est investigando en varios laboratorios . Una cuestin fundamental que queda por tratar es la coleccin de evidencia inequvoca para la actividad acuaporinas a nivel de tejido u rgano. La farmacologa de las acuaporinas sigue siendo pobre , y derivados de mercurio son los nicos bloqueadores generales de acuaporinas conocidas hasta la fecha . Estos compuestos se dirigen residuos Cys en las acuaporinas , pero , por desgracia, en otras protenas celulares tambin. Algunos laboratorios han descontado estos efectos secundarios obvios y caracterizado los efectos del mercurio en el transporte de agua de la raz ( 2 , 8 ) . Aunque cada estudio individual se debe interpretar con cautela , la consistencia de los datos proporciona evidencia convincente de que una parte importante del transporte de agua de la raz ( 20 % -80 %) se encuentra bajo el rpido control metablico , y consiste en la actividad de las protenas celulares , muy probablemente acuaporinas . La gentica inversa permite un enfoque ms riguroso y pueden revelar funciones inesperadas de las acuaporinas . Plantas transgnicas de Arabidopsis que expresan una copia antisentido del gen pip1b mostraron una expresin reducida de varios homlogos PIP1 y proporcionaron pruebas definitivas para la contribucin de las acuaporinas para el transporte de agua de la membrana plasmtica ( 6 ) . Sorprendentemente, estas plantas antisentido mostraron un aumento de la masa de races , mientras que el desarrollo de la sesin se mantuvo sin cambios . A pesar de que este fenotipo podra estar relacionado con la edad observacin de que la relacin raz / brote de las plantas ajusta en respuesta a su estado de agua , se hace hincapi en cmo directamente el

transporte de membrana puede influir en la plasticidad del desarrollo de las plantas . En un futuro prximo , el anlisis de mutantes individuales de acuaporina nocaut de esperar que proporcionar evidencia de las mltiples funciones de acuaporinas en el crecimiento y desarrollo de las plantas y en su respuesta de adaptacin a las tensiones . Ha sido fascinante observar en los ltimos aos , cmo el descubrimiento de las acuaporinas ha desafiado conceptos generales sobre el papel de las membranas en las relaciones hdricas de las plantas. En un momento en que fue asumida por la mayora de los bilogos de plantas que la permeabilidad al agua residual de lpidos de la membrana de la planta fue suficiente para que el flujo de agua en las plantas. Entusiasmo por el descubrimiento de las acuaporinas condujo a la propuesta poco realista de que el flujo de agua transmembrana necesariamente debe estar mediada por estas protenas. La verdad debe estar en algn lugar en el medio y todava tenemos un largo camino por recorrer para comprender plenamente el significado de estas protenas. Sin embargo , las acuaporinas proporcionan un punto de entrada molecular nica de las relaciones hdricas de las plantas y establecen conexiones fascinantes entre el transporte de agua , desarrollo de la planta y las respuestas de adaptacin de las plantas a su entorno en constante cambio.

Figura 1. Las acuaporinas facilitan la difusin de agua y solutos pequeos neutros travs de las membranas celulares de las plantas. La permeabilidad residual de la membrana lipdica de estas molculas tambin se indica. La capacidad de algunos acuaporinas para el transporte de solutos se demostr usando molculas de ensayo, tales como glicerol y urea, y la importancia fisiolgica de esta propiedad todava no se entiende claramente (vase el texto). Acuaporinas vegetales similares a sus contrapartes de origen animal se cree que forman tetrmeros, siendo cada monmero funcionalmente independientes. Se muestra la supuesta estructura de un monmero acuaporinas con seis dominios transmembrana inclinadas. Los estudios sobre la estructura de AQP1 humana sugieren que los dos bucles de conexin que contienen los motivos Asn-Pro-Ala altamente conservadas sumergirse en la parte de la membrana y la forma del poro acuosa.

Figura 2. Las acuaporinas pueden estar involucrados en un gran nmero de funciones fisiolgicas de las plantas. Estas funciones se infiere a partir de los patrones de expresin de isoformas acuaporina especficas o de los efectos de bloqueo del mercurio en el transporte de agua a travs de los tejidos vegetales.