EVALUACION DE LOS REGULADORES DE CRECIMIENTO ANA/BAP/KIN EN EL ESTABLECIMIENTO IN VITRO DE LA PLANTA Ortiga (Urtica urens L.

) MEDIANTE ORGANOGENESIS DIRECTA A PARTIR DE SEGMENTOS NODALES.

Resumen En la presente investigacin se va a describir el proceso de estandarizacin de la tcnica del cultivo in vitro de la planta ortiga (Urtica urens L.) Se utilizar la tcnica de organognesis directa, es decir, los rganos se originan directamente desde el explante. La tcnica del cultivo in vitro en la ortiga hasta hoy no se ha realizado. Se llevar la planta al sistema in vitro, para ello se tendrn en cuenta cuatro fases. La primera fase consisti en establecer las plantas madres, dichas plantas de obtuvieron en fincas y en viveros; una vez establecida la planta madre, se extrajeron los segmentos nodales y se les realiz un proceso desinfeccin en donde se probaron diferentes concentraciones de NaClO para determinar cul es la cantidad a la que el explante responde mejor en porcentajes de contaminacin y necrosis. En esta fase se hicieron seis repeticiones por cada tratamiento. Una vez desinfectado el material se continuar con la induccin, en esta fase se realizar la composicin del medio de cultivo MS, en el cual se evaluarn las concentraciones necesarias de reguladores de crecimiento BAP y KIN, aqu tambin se deben hacer al menos tres pruebas por cada concentracin. Luego se proceder a la fase siguiente: La multiplicacin. En esta fase se probaran distintas concentraciones del regulador de crecimiento ANA (cido Naftilactico) con el que mejor tenga resultado en la fase de induccin, por ltimo se tomara le mejor resultado obtenido de la fase de induccin para determinar que concentraciones son ms aptas para la multiplicacin de la Ortiga. Por ltimo se proceder a la fase de aclimatizacin, en esta etapa las plntulas obtenidas se adaptaran a vivir en condiciones naturales. Planteamiento del problema: La ortiga (Urtica Urens L.) es una planta que posee diversas propiedades medicinales y que hoy en da estn siendo utilizadas en diversos productos de la industria farmacolgica y cosmetolgica de Colombia, para hacer estos productos se importa un principio activo desde Europa donde se cultiva esta planta comercialmente, mientras que en Colombia no se hace y ms bien es tratada a la ortiga como maleza. El proceso de cultivo in vitro de esta planta va a permitir que en un futuro probablemente se cultive comercialmente en Colombia, ya que tiene algunas ventajas sobre la siembra normal, como la obtencin de semillas en cualquier poca del ao, muchas plntulas en poco espacio y plantas libres de algunas bacterias y hongos,, entre otros patgenos.

Pregunta de investigacin: Cul es la relacin entre las diferentes concentraciones de los reguladores de crecimiento ANA, BAP Y KIN en el establecimiento in vitro de la planta Ortiga (Urtica urens L.) mediante organognesis directa a partir de segmentos nodales? Descripcin del problema La ortiga es una planta poco aceptada, es portadora de propiedades medicinales y nutritivas y hasta efectos secundarios para la salud de las personas, gracias a que tiene unos pequeos pelos urticantes en sus hojas y esto la lleva a provocar la urticaria. No se ha llevado a cabo un cultivo in vitro de ortiga, por ende no se han definido las cantidades adecuadas de reguladores de crecimiento adecuadas para hacerlo. Podra ser de gran ayuda para una amplia variedad de investigaciones futuras en campos medicinales y vegetales que se definiera ahora estandarizacin de la tcnica del cultivo in vitro de la planta, ya, que entre otros beneficios, el cultivo in vitro permite que las plantas crezcan con menos cantidad de patgenos y se puede mantener gran cantidad de material vegetal en un pequeo espacio. Para iniciar el mtodo de siembra de la Ortiga menor (Urtica urens L.) esta necesita suelos muy fertilizados sobre todo en nitrgeno y fosfatos, y una temperatura entre los 15 y los 25C. Aunque se puede producir muy fcilmente casi en cualquier lugar. Por otra parte el cultivo in vitro en la ortiga mediante segmentos nodales nunca se ha registrado en el sistema, este es uno de los aspectos que lleva a realizar este proyecto, Por eso gracias al cultivo in vitro se dejara estandarizado el mtodo de cultivo para esta planta. Antecedentes ATECEDENTES: DIVISION BOTANICA DE LA ORTIGA (Urtica urens L.) Reino Divisin Clase Orden Familia Genero Plantae Magnoliophyta Magnoliopsida Rosales Urticaceae Urtica

La ortiga menor (Urtica urens L.) se puede identificar por sus hojas opuestas y grandes, con pelos urticantes los cuales pueden causar gran irritacin en la piel; con flores color lila, esta planta florece de otoo a primavera y fructifica en primavera. La ortiga tambin conocida como ortiga menor o yerba del ciego, es una planta de la familia urticcea. Esta planta crece al lado de la ortiga mayor, por eso se

puede encontrar en climas templados y tropicales, Crece en zonas rurales nitrificadas y arcillosas. Esta planta a diferencia de la ortiga mayor sus propiedades medicinales son ms pocas, pero produce una mayor irritacin en las personas y animales y sus efectos son ms duraderos. (Plantas vasculares. Medelln, 4 de octubre de 2012 inbuy.fcien.edu.uy/fichas_de.../Urtica_urens_i.pdf) La ortiga contiene abundante clorofila, y tambin taninos, cidos orgnicos, vitamina C, provitamina A y sales minerales. Los pelillos urticantes contienen cido frmico, resina, acetilcolina, histamina y otras sustancias. (Plantas medicinales. Medellin 6 octubre de 2012 http://www.natureduca.com/med_espec_ortigamayor.php) Tiene numerosas aplicaciones medicinales e industriales. Es un excelente hemosttico, y por tanto un buen remedio contra las hemorragias. Es un buen diurtico, especialmente til en la eliminacin del cido rico; por este motivo es igualmente hipotensor y antirreumtico. Se emplea en catarros gastrointestinales, bronquiales y renales; adecuado como antidiarreico y contra el estreimiento. Por su accin hipoglucemiante es un anti anmico coadyuvante en el tratamiento de la diabetes,
https://www.google.com.co/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&c d=&cad=rja&docid=SuVdXflq63AEoM&tbnid=pH7wSMt410dJCM:&ved= 0CAUQjRw&url=http%3A%2F%2Fwww.fotolog.com%2Fclaroenelbosque %2F21368893%2F&ei=Bd9Ur6dA8XJkAfHm4DwAw&psig=AFQjCNGBHLActrpczGfyrOaYKWr yRypXLA&ust=1384016242294977

estimulante de la actividad de las glndulas endocrinas y la produccin de glbulos rojos, as como un favorecedor de los intercambios metablicos. Ejerce un buen drenaje heptico. Acta tambin como depurativa y fortificante. En aplicaciones externas es cicatrizante, til en heridas, lceras, etc., y tambin como revitalizador del cuero Cabelludo. Las hojas tiernas se pueden consumir como verdura en primavera. Las sumidades tambin se utilizan en procesos industriales para obtener la clorofila, que es la sustancia ms abundante de esta planta. sta es empleada como aditivo en productos cosmticos, jabones, etc. Hay evidencia cientfica en el campo de la medicina con la ortiga? La evidencia es mucho mejor para la raz de ortiga y el agrandamiento de prstata que para la hoja de ortiga y las alergias.

Raz de Ortiga El uso de la raz de ortiga para tratar la hiperplasia prosttica benigna no se ha estudiado tan bien como la serenoa, pero la evidencia es al menos moderadamente convincente. La raz de ortiga contiene numerosos qumicos biolgicamente activos que podran influir en la prstata indirectamente interactuando con las hormonas sexuales o directamente alterando las propiedades de las clulas de la prstata. Un estudio doble ciego controlado por placebo de 50 hombres con seguimiento de 9 semanas encontr un incremento significativo en el volumen de orina y en la tasa de flujo de orina en el grupo de ortiga en comparacin al grupo de placebo. 7 En otro estudio doble ciego y controlado por placebo, el tratamiento de 67 hombres con ortiga produjo un 14% de mejora en el flujo de orina y un 53% de disminucin en la orina residual. 8 Finalmente, un estudio doble ciego y controlado por placebo de 40 hombres encontr una disminucin significativa en la frecuencia de orinar despus de 6 meses. Hoja de Ortiga Un estudio preliminar doble ciego y controlado por placebo que sigui a 69 individuos sugiere que la hoja de ortiga seca congelada podra al menos mejorar ligeramente los sntomas de alergia Un pequeo estudio doble ciego sugiere que la aplicacin directa de la hoja de ortiga a una articulacin dolorosa podra mejorar los sntomas. (Beth Israel Deaconess Medical Center. Ortiga. Recuperado el 4 de octubre de 2012, de http://www.bidmc.org/YourHealth/ConditionsAZ.aspx?ChunkID=125088) La ortiga tambin se abre en el campo de la gastronoma, a pesar de ser una hierba mala. Es mejor recolectar los brotes tiernos y las hojas, y desechar los tallos ms duros. Las propiedades urticantes desaparecen con la coccin o 12 horas despus de recolectada. La forma ms sencilla de prepararlas en el campo es, despus de lavarlas con unos guantes, hervirlas entre 10 y 15 minutos. Luego aliarlas con aceite y sal si se dispone de ello. Tambin se puede prepararlas en tortilla, sopas, pur o cualquier otro plato que salga de vuestra imaginacin. M. Pahlow recomienda las hojas de ortiga junto con diente de Len y celidonea menor como una buena ensalada de primavera. Las virtudes de la ortiga como alimento superan probablemente a las de las espinacas, ya que, al contrario que estas, la ortiga no contiene oxalato sdico. Sin embargo s aporta otros beneficiosos elementos como el hierro o el silicio.

Adems, contiene una importante cantidad de protenas: de 6 a 8gr por cada 100gr de planta fresca y de 30 a 35gr si est seca; y vitaminas A, C y K. En la obra "Secretos y Virtudes de las Plantas Medicinales" de Selecciones del Reader's Digest se nos dice que no consumamos las semillas. Tambin Alan Sauri, en su libro "La Vida Autosuficiente" de Ed. Blume, advierte "Desconfiad de las semillas: 10gr por da suprimen totalmente la orina". Es un dato curioso, sobre todo teniendo en cuenta que una de las principales propiedades reconocidas de la ortiga es su efecto diurtico, para que nos entendamos, las plantas diurticas eliminan las toxinas de la sangre y a menudo aumentan temporalmente la secrecin de orina. Para evitar riesgos, se desechan las semillas al realizar cualquier plato o infusin con ortiga. (Naturaleza educativa. Plantas medicinales. Recuperado el 4 de octubre de 2012, de http://www.natureduca.com/med_espec_ortigamayor.php)
Justificacin:

Este proyecto se realizar porque hasta el momento no se ha estandarizado la tcnica de cultivo in vitro en la Ortiga (Urtica urens L), tambin porque La planta ortiga es una planta conocida poco a pesar de sus grandes propiedades medicinales (estimulante de aparato digestivo y antidiarreica, hemosttica, antiarteriosclertica, antidiabtica, anti anmica, galactogena, anti-prosttica, Alzheimer, Diurtico, Impotencia sexual, cosmticos, tratamiento capilar, citica) En Colombia la aplicacin del medio de cultivo in vitro es nulo para esta planta, pero por medio de cultivo en campo si se da, pero es muy costoso su mantenimiento a una gran escala por sus condiciones de cultivo, La aplicacin en este pas de a la ortiga es para materia prima de cosmticos, y productos medicinales sin embargo la produccin es muy escasa por sus condiciones climticas ya mencionadas. Esto principalmente fue lo que dio pie a la planeacin de un proceso de propagacin in vitro, mediante organognesis directa, con los que se propagar la planta. Objetivos Objetivo general: Evaluar los reguladores de crecimiento ANA/BAP/KIN en el establecimiento in vitro de la planta ortiga (Urtica Urens L.) mediante organognesis directa a partir de segmentos nodales

Objetivos especficos: Determinar la concentracin de NaClO (hipoclorito de sodio) ptima para la desinfeccin de los segmentos nodales. Definir la concentracin adecuada de los reguladores de crecimiento BAP y KIN en la fase de induccin en el medio de cultivo MS Estimar la concentracin necesaria de los reguladores KIN Y BAP/ANA en la fase multiplicacin.

Marco terico:

La Urtica Urens L, ms conocida como ortiga menor o picamoscas, es muy conocida por ser una hierba que nace mucho entre los escombros y el desorden, incluso se ha llegado a considerar como una plaga. Puede llegar a crecer entre 40- 60 cm tambin posee mltiples beneficios medicinales que la gente desconoce y adems ha sido usada en varias investigaciones cientficas de las cuales se habla en los antecedentes de este proyecto. Sus principales beneficios medicinales son

Analgsica Antialergica Antianmica Antigotosa Antiinflamatoria Antirreumtica Astringente Diurtica

Esta planta es muy conocida por poseer unos pelos urticantes tanto en sus hojas como en su tallo, que tiene un efecto sobre la piel de los humano, estos pelos al mnimo roce inyecta un lquido el cual causa ronchas urticantes. La composicin de esta planta no se conoce parcialmente, pero se conocen algunos, por ejemplo, en la raz est compuesta por escopetrol, alcohol homovainillico, lignanos y en las partes areas est compuesta principalmente por hierro y silicio, cidos fenoles y numerosos flavonoiles, los pelos urticantes contienen aminas (acetilcolina, histamina, serotonina). MICROPROPAGACION La micro propagacin "in vitro" de plantas es una tcnica que utiliza pequeos trozos de tejido o de rganos en condiciones aspticas, con el fin de conseguir nuevas plantas idnticas a la planta madre. Esto se consigue gracias a que las clulas de las plantas son "totipotentes", es decir, tienen una capacidad latente para regenerar una planta nueva a partir de una nica clula, de manera que la nueva planta ser genticamente idntica a la planta madre.

El cultivo in vitro permite entre otras muchas cosas una rpida propagacin vegetativa de las plantas, y una mejora del estado sanitario de las mismas. ORGANOGENESIS DIRECTA Cuando los rganos se originan directamente del ex planto (yema axilar) en ausencia de proliferacin del callo, aunque normalmente es indirecta. La organognesis directa (es decir sin la formacin previa de callo) es altamente deseable en los trabajos de micro propagacin y de conservacin de germoplasma. La organognesis directa consta de 6 procesos, cuatro de ellos en el laboratorio, estos son: - Establecimiento de plantas madres - Desinfeccin - Induccin - Multiplicacin - Enraizamiento - Climatizacin

Establecimiento del cultivo: El cultivo de tejidos comienza a partir de trozos extrados de la planta madre. Estos pequeos rganos o trozos de tejido se llaman explantos. Las plantas que crecen en el medio natural estn contaminadas por microorganismos (bacterias y hongos). Los explantos antes de ser introducidos en el medio de cultivo han de ser esterilizados. Posteriormente se introducirn en el medio a su vez estril y se mantendrn all en condiciones aspticas. Multiplicacin: Una vez que la primera fase se ha completado con xito, comienza la multiplicacin de los explantos. El explanto encuentra en el medio de cultivo todo aquello que necesita para su crecimiento y desarrollo (agua, elementos minerales, azcares, hormonas, etc). Tras un perodo de crecimiento (4-8 semanas) es necesario el subcultivo y paso a un nuevo medio. Es en este paso donde se produce la multiplicacin de las plantas. AGAR Es una mezcla de polisacridos extrados de un alga marina. Tiene una elevada masa molecular, tiene la capacidad de hidratarse y formar una red. La planta no puede digerirlo ni adsorberlo, adems no interacta con los componentes nutritivos del medio.

Enraizamiento: Antes de llevar las nuevas plantas al exterior es necesario proporcionarles una raz con la que sean capaces de realizar sus actividades vitales una vez que se encuentren de nuevo en el medio natural. La induccin de estas races se produce modificando ligeramente las caractersticas del medio de cultivo adecundolas para la generacin de races. Aclimatacin: Esta fase consiste en el paso de las plantas del cultivo al medio natural. Este es un paso extremadamente importante, ya que si no se realiza cuidadosamente se pueden perder gran nmero de plantas. Las plantas en condiciones de cultivo estn en una atmsfera con alta humedad y baja intensidad luminosa, por tanto el tejido epitelial se caracterizar por tener menos ceras que protejan a las plantas contra la deshidratacin. El acondicionamiento de nuevo al medio exterior se efectuar por tanto cuidadosamente, utilizando para ello invernaderos. Aclimatacin: Esta fase consiste en el paso de las plantas del cultivo al medio natural. Este es un paso extremadamente importante, ya que si no se realiza cuidadosamente se pueden perder gran nmero de plantas. Las plantas en condiciones de cultivo estn en una atmsfera con alta humedad y baja intensidad luminosa, por tanto el tejido epitelial se caracterizar por tener menos ceras que protejan a las plantas contra la deshidratacin. El acondicionamiento de nuevo al medio exterior se efectuar por tanto cuidadosamente, utilizando para ello invernaderos. Divididas en cinco fases: FASE 0: PREPARACIN DE LA PLANTA MADRE Para poder establecer el cultivo en condiciones de asepsia, se deben obtener explantos con un nivel nutricional y un grado de desarrollo adecuado. Para obtener estos explantos es recomendable mantener a las plantas madre un perodo de tiempo que puede oscilar entre unas semanas o varios meses, en un invernadero, en que se va a intentar cultivar la planta en condiciones sanitarias ptimas y con un control de la nutricin, del fotoperiodo y de la irradiancia recibida. FASE I: ESTABLECIMIENTO DEL CULTIVO EN CONDICIONES DE ASEPSIA Una vez escogida la planta madre, se extraern los fragmentos a partir de los cuales se obtendrn los explantos. Antes de extraer los explantos se har una desinfeccin de los fragmentos de planta madre para eliminar los contaminantes externos. Una vez desinfectado el material vegetal, se debe mantener en condiciones de asepsia. Ya en condiciones de asepsia (se trabajar en cabinas de flujo laminar) se extraern los explantos del material vegetal y se pondrn en cultivo en un medio de iniciacin dentro de un tubo de cultivo, para poder controlar la sanidad y la viabilidad de los explantos.

FASE II: MULTIPLICACIN DE LOS BROTES Durante esta fase se espera que los explantos que sobrevivieron de la FASE I originen brotes (de procedencia axilar o adventicia) con varios entrenudos. Peridicamente estos nuevos brotes se deben subcultivar en un nuevo medio mediante divisiones y resiembras en tubos de cultivo u otros recipientes adecuados. Estas operaciones se realizan en la cmara de flujo laminar. FASE III: ELECCIN DE UN MEDIO DE ENRAIZAMIENTO DE LOS EXPLANTOS Para enraizar los explantos se utilizan principalmente dos mtodos: ENRAIZAMIENTO IN VITRO Se transfieren los brotes obtenidos durante la fase de multiplicacin a un medio libre de reguladores de crecimiento o que solo contenga auxinas. Esta operacin se realiza en la cmara de flujo laminar. Este mtodo permite ser mas flexible a la hora de escoger los brotes, ya que stos obtienen del medio la fuente de energa para enraizar, y por tanto no es necesario que tengan las hojas muy bien desarrolladas para realizar la fotosntesis. ENRAIZAMIENTO EX VITRO Los explantos se deben transferir a un sustrato limpio, aunque no necesariamente estril, que puede ser una mezcla de turba con perlita o vermiculita. Con este mtodo es necesario que el medio de enraizamiento est libre de organismos patgenos y que los brotes tengan las hojas bien desarrolladas, ya que deben realizar fotosntesis para que la planta tenga una fuente de energa para enraizar y desarrollarse. Los explantos deben de plantarse en contenedores cubiertos por un plstico, para mantener la humedad relativa elevada, y hacerlos enraizar en el laboratorio, o ponerlos en 'multipots' dentro de un invernadero en un rea sombreada con "fog-system" o "mist-system".

YEMAS AXILARES Las yemas auxiliares estn situadas en los nudos de los tallos. De ellas salen las hojas y las flores. CONDICIONES ASEPTICAS Una de las caractersticas bsica de este tipo de cultivos in vitro es la rigurosidad fitosanitaria necesaria para que los plantines lleguen a campo sin ser portadores de hongos, bacterias u otros agentes patgenos.

Para lograr esto, se debe controla distintos aspectos relacionados a la micro

propagacin: condiciones del ambiente del laboratorio; esterilizacin del medio de cultivo, tubos de ensayo, recipientes y las herramientas de trabajo; desinfeccin de los explantes; respetar y cumplir con las normas de higiene y asepsia, etc. El proceso se realiza en condiciones extremas de desinfeccin, endgenas y exgenas, por tal razn las instalaciones fueron especialmente diseadas y construidas para una mejor climatizacin. MEDIO DE CULTIVO El medio de cultivo es la combinacin slida o lquida de nutrientes y agua. Usualmente incluye sales inorgnicas, carbohidratos y vitaminas y aminocidos. A menudo se denomina Medio Basal y puede ser suplementado con algn regulador de crecimiento y ocasionalmente con otras sustancias varias. Los nutrientes son esenciales para el crecimiento y desarrollo de la planta: sin agua y nutrientes minerales una planta no puede vivir ni in vitro ni in vivo. Tambin se debe aadir azcares al medio de cultivo, ya que las plantas (o sus fragmentos) no son completamente autotrficas cuando se desarrollan en estas condiciones. El medio de cultivo debe ser rico en elementos minerales, en particular el potasio debe estar en un nivel alto para una mejor multiplicacin vegetativa; desde este punto de vista, el medio Murashige y Skoog es conveniente. EL MEDIO MS, O DE MURASHIGE Y SKOOG Es muy usado, particularmente si el objetivo es regenerar plantas; existen numerosas variaciones comerciales de este medio. El medio B5 o de Gamborg et al. (1968), o sus varios derivados, ha sido de un gran valor en el cultivo de clulas y protoplastos, y tambin es utilizado eficazmente en regeneracin de plantas. La diferencia principal entre los medios MS y B5 es la menor concentracin de nitratos en B5. El medio WPM (1980) de baja concentracin de sales est especialmente indicado para especies leosas. Esto nos lleva a ver de que est compuesto un medio de cultivo Carbohidratos Normalmente para el cultivo in vitro de clulas, tejidos u rganos es necesario adicionar una fuente de carbono en el medio, debido a que el crecimiento in vitro tiene lugar en condiciones poco apropiadas para la fotosntesis o incluso en oscuridad. La sacarosa es la ms utilizada para propsitos de micro propagacin. Generalmente se usan concentraciones de 1 -6% de sacarosa en el medio, aqu es convertida rpidamente en glucosa y fructosa; la glucosa es la que primero se utiliza seguida de la fructosa. El azcar blanco refinado que se vende en los supermercados puede resultar adecuado para la micro propagacin en muchos casos. Se trata de un producto purificado y de acuerdo con los anlisis se compone de 99,94% de sacarosa, 0,02% de agua y 0,04% de otras sustancias (no hay indicaciones de que estos ltimos constituyentes puedan causar toxicidad in vitro).

Vitaminas La mayor parte de las plantas sintetizan casi todas las vitaminas esenciales, pero aparentemente lo hacen en cantidades infraptimas. Para lograr un buen crecimiento es necesario a menudo suplementar al medio con una o ms vitaminas. La tiamina (B1) es la que ms se utiliza y se la considera un ingrediente esencial. Otras vitaminas tambin han demostrado tener un efecto positivo en el crecimiento in vitro, como son: pidiroxina (B6), cido nicotnico (B3), pantotenato clcico (B5). Aminocidos Aunque las clulas cultivadas son capaces de sintetizar todos los aminocidos necesarios, la adicin de L-glutamina (2 - 8 mM) o una mezcla de aminocidos es a menudo beneficiosa. Esto es particularmente importante en cultivo de clulas y protoplastos. REGULADORES DE CRECIMIENTO Sustancia orgnica que favorece o inhibe los procesos celulares de divisin, alargamiento, proliferacin de los vegetales. Sustancias qumicas, naturales o sintticas, que controlan el crecimiento de plantas, activndolo como las fitohormonas (auxina, giberelinas) o inhibindolo (inhibinas). Fitohormonas: AUXINAS Se relacionan con la elongacin, tropismo, dominancia apical, abscisin, enraizamiento y otros. En cultivo in vitro las auxinas son utilizadas principalmente para la diferenciacin de races y la induccin de callo. Las auxinas ms utilizadas son: IBA (cido indol-3-butrico), NAA (cido naftalenactico), IAA (cido indolactico) y 2,4-D (cido diclorofenoxiactico). El IBA y el NAA son usados frecuentemente para enraizamiento. El 2,4-D es muy efectivo para la induccin de callos. Las auxinas se disuelven usualmente en etanol diluido o en una solucin de hidrxido de sodio. CITOQUININAS Estn implicadas en la divisin celular, modificacin de la dominancia apical, diferenciacin de tallos y otros. En los medios para cultivo in vitro se incorporan citoquininas para promover la divisin celular y la induccin de yemas adventicias en callos y rganos. Adems se usan estos compuestos para la proliferacin de tallos axilares por la ruptura de la dominancia apical. Las citoquininas ms usadas son: BAP (bencilamino purina), quinetina y 2-ip (isopentenil-adenina). Generalmente son diluidas con cido clorhdrico o hidrxido de sodio.

GIBERELINAS Existen multitud de giberelinas conocidas. La de mayor uso es el GA3, pero debe tenerse en cuenta que es muy sensible al calor (pierde el 90% de su actividad despus del auto clavado). Comparado con las auxinas y citoquininas, las giberelinas se utilizan raramente. La mayora de los explantos sintetizan cantidades suficientes de este grupo de hormonas. Cuando se aportan giberelinas al medio de cultivo, su funcin principal es el alargamiento de las regiones subapicales. El GA3 es soluble en agua fra hasta 1000 mg l-1. ANA Estas hormonas favorecen el enraizamiento, ya que estimulan la aparicin de nuevas races, aunque inhiben su alargamiento. Algunos estudios han demostrado que la estimulacin del crecimiento vegetativo, que es la principal caracterstica de las auxinas, puede derivar en inhibicin si se eleva la frecuencia de aplicacin o se supera el nivel adecuado para cada caso (sobredosis). Se producen en zonas meristematicas, embriones de nuevas plntulas, hojas verdaderas, semillas inmaduras. Cmo actan?

Dominancia apical Desarrollo en elongacin de ramas Produce divisin celular Activa el desarrollo de yemas Favorece la floracin Retrasa la cada de hojas y frutos KINETININA (KIN) furfurilaminopurina (kinetina) es un regulador del crecimiento vegetal tipo citoquinina. Aplicacin Utilizado en la agricultura. 6-furfurilaminopurina (kinetina) puede promover la divisin celular, diferenciacin y el crecimiento, y Adems mejorar la germinacin y el conjunto de frutas, induciendo la iniciacin de los callos, reduciendo la dominancia apical, rompiendo la dormancia de las yemas laterales, y retrasando el envejecimiento. Especificaciones Apariencia: Blanco cristalino Ensayo: 99% Prdida por desecacin: 0.5% Residuo en la ignicin: 0.05% FNF es el fabricante y proveedor de 6-furfurilaminopurina (kinetina) en China. Ofrecemos 6-furfurilaminopurina (kinetina), y Fosfato Diamnico, Sulfato ferroso monohidratado. Nuestros productos de alta calidad se ofrecen a precios

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3 4 5 Tabla 1.2.1

1 1,5 2

3 3 3

PRUEBAS DE INDUCCIN EN LA ORTIGA (URTICA URENS L.) Tratamientos BAP mg/L Repeticiones NMERO DE BROTES 1 0,00 3 2 0,5 3 3 1 3 4 1,5 3 5 2 3 Tabla 1.2.2 Multiplicacin: En esta fase se probarn distintas concentraciones del regulador de crecimiento ANA (cido Naftilactico) con el que estadsticamente obtenga un mejor tenga resultado en la fase de induccin (X1) (ver tabla 1.3) PRUEBAS DE MULTIPLICACIN EN LA ORTIGA (URTICA URENS L.) Tratamientos Unidades de Repeticiones NMERO concentracin DE ANA/X1 mg/L BROTES 1 2 3 4 5 Tabla 1.3 0,00 0,5 1 1,5 2 3 3 3 3 3

Enraizamiento Para esta fase del proceso para poder enraizar los explantes despus de haber pasado por cada una de las anteriores fases. Se utilizan principalmente vitro plantas individuales de un tamao aproximado de 2 cm. Los brotes obtenidos durante la fase de multiplicacin se pasaran a un medio libre de reguladores de crecimiento o que solo contenga hormonas del tipo de las auxinas (BAP) en diferentes concentraciones Donde se evaluar la longitud y el nmero de races que broten de dicho explante.

PRUEBAS DE ENRAIZAMIENTO EN LA PLANTA ORTIGA (urtica urens L.) Tratamientos Unidades de Repeticiones NMERO LONGITUD concentracin DE RAICES DE ANA BROTADAS RAICES 1 2 3 4 5 0,00 0,5 1 1,5 2 3 3 3 3 3

RESULTADOS Y CONCLUSIONES: Resultados esperados: Debido al comportamiento del material biolgico las fases de induccin est en experimentacin, esperamos poder obtener diferencias significativas entre los tratamientos planteados al igual que en la etapa de multiplicacin, enraizamiento y aclimatizacin. Estas fases sern realizadas por nuestros compaeros del grado noveno que pertenecen al proyecto. Esperamos estandarizar la tcnica del cultivo in vitro para ortiga menor y as poder trabajar en otras fases posteriores en la obtencin directa de metabolitos secundarios y proponer el cultivo de ortiga como una alternativa para los agricultores del pas, as como tambin otra alternativa para los campesinos que pertenecen a los programas estatales de sustitucin de cultivos ilcitos. Resultados obtenidos: Este ao (2013) Se comenz con la primera fase del proyecto, de acuerdo con los ensayos que se hicieron de desinfeccin se obtuvieron los siguientes resultados: Ensayo # 1: Con respecto a la contaminacin, el mayor porcentaje se observ en el tratamiento control (T0) con un 100 % de contaminacin, seguido de tratamiento T2 (1,0% NaOCl) 75%, los mejores resultados se obtuvieron en los tratamientos T1 (0,5% NaOCl) con 12,5 %, T3 (1,5% NaOCl) con 25%, y T4 (2,0% NaOCl) 25%. En la necrosis de los tejidos se presentaron datos similares con valores que superan el 65%. Ensayo # 2: El tratamiento T2 (1,0% NaOCl) presento el menor porcentaje de contaminacin (25%), mientras que los dems presentaron valores superiores al 50%. Con respecto a la necrosis de los explantes T1 presento el mejor resultado con 37%, seguido de T3 y T4 con 50% y los tejidos donde ms se observ este fenmeno fueron los tratamiento T0,T2 con valores de 66,6% y 75 % respectivamente. Ensayo # 3: Todos los tratamientos muestran porcentajes de contaminacin superiores al 50%. Los tratamiento T0,T2 y T4 obtuvieron un 33% de necrosis y T1 y T3 un 50%.

El promedio de los porcentajes de contaminacin de todos los ensayos mostro que los mejores resultados para los tratamientos T3 y T4 los cuales presentan las concentraciones ms elevadas de NaOCl , mientras que la necrosis presento resultados muy similares para todos los tratamientos. Por la semejanza de los resultados se consider no aplicar la prueba de anlisis de varianza, que es la ms adecuada para establecer si hay diferencias significativas en los tratamientos, estadsticamente hablando.

Conclusiones: El promedio de los porcentajes de contaminacin de todos los ensayos mostro que los mejores resultados para los tratamientos T3 y T4, los cuales presentan las concentraciones ms elevadas de NaOCl, mientras que la necrosis presento resultados similares para todos los tratamientos. Los resultados que se obtuvieron con respecto a la desinfeccin y a la necrosis fueron muy similares, ya que el NaOCl en cada una de las concentraciones que se establecieron necroso los explantes, esto pudo deberse a que el NaOCl acto como un agente toxico, penetra los tejidos del explante elimina algunos patgenos como gonfos y bacterias, pero a la vez llega hasta las clulas y esto produce necrosis.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

1. (Naturaleza educativa. Plantas medicinales. Recuperado el 4 de octubre de 2012, de http://www.natureduca.com/med_espec_ortigamayor.php) 2. (Plantas vasculares. Medelln, 4 de octubre de 2012 inbuy.fcien.edu.uy/fichas_de.../Urtica_urens_i.pdf) 3. (Naturaleza educativa. Plantas medicinales. Recuperado el 4 de octubre de 2012, de http://www.natureduca.com/med_espec_ortigamayor.php) 4. (Beth Israel Deaconess Medical Center. Ortiga. Recuperado el 4 de octubre de 2012, de http://www.bidmc.org/YourHealth/ConditionsAZ.aspx?ChunkID=125088) 5. (Vive la naturaleza. ortiga (Urtica urens) Plantas medicinales, comestibles y tiles para aventureros y excursionistas. Recuperado el 4 de octubre de 2012, de http://www.vivelanaturaleza.com/botanica/ortiga.php) 6. (Raul Navalmanzo, clasificacin taxonmica, tomado el 27/09/12 de la pagina (http://navalmanzano.blogspot.com/2009/05/urtica-urens-ortigamenor.html) 7. (HiperNatural, Ortiga recuperado el 27 de septiembre de 2012 de http://www.hipernatural.com/es/pltortiga.html)

8. (Morfologa de las plantas vasculares, yemas. Recuperado el da 27 de septiembre de 2012 de http://www.biologia.edu.ar/botanica/tema1/13yemas.htm)

9. Furfurilaminopurina (kinetina), productos. Recuperado el da 03 de abril de 2013 de http://www.fertilizer.es/8-10-6-furfurylaminopurine.html

AGRADECIMIENTOS: Gracias a la I. E. Colegio Loyola para la ciencia y la innovacin por su acompaamiento, y por inculcarnos la investigacin como estilo de vida. A los docentes acompaantes, al programa Ondas por su ayuda en el ao 2012, a la fundacin Loyola, el Sena y a la Secretaria de Educacin