CAMBIO EN LA AFINIDAD DE LIGNINAS KRAFT ACETILADA EN SISTEMAS AGUA-SOLVENTES ORGNICOS

Fredy Ysambertt1, Orlando J. Rojas2, Dimitris S. Argyropoulos2, Johnny Bulln3 Lab. Petroqumica y Surfactantes. Dpto. de Qumica, Facultad de Ciencias-Universidad del Zulia. Apdo. 526, Maracaibo, Venezuela. Telf. 58-261-8156937. e-mail: ysambertt@yahoo.com 2 Forest Biomaterials Laboratory, College of Natural Resources, North Carolina State University Raleigh, NC 27695-8005, USA. 3 Laboratorio LMSSI, Universidad de Los Andes, Mrida 5101, Venezuela.

RESUMEN En este trabajo se estudi la influencia de algunas variables de formulacin (pH, salinidad y Nmero Equivalente de la Cadena Alqulica EACN- de solventes orgnicos) de una lignina Kraft con diferentes grados de acetilacin, en un sistema compuesto por agua-dimetilsulfxido (DMSO)/solventes orgnico. Con los resultados obtenidos se demuestra el cambio de afinidad de la biomolcula por la influencia de estas variables y su potencial aplicacin para la formulacin de sistemas emulsionados utilizando ligninas industriales. Una muestra de lignina kraft de maderas blandas (Indulin AT) se acetil a diferentes grados (30% a 100%) mediante reaccin con anhdrido actico y piridina. El grado de acetilacin se determin por Resonancia Magntica Nuclear, RMN. A estas muestras se le estudi su comportamiento como agentes modificadores de la actividad superficial o interfacial utilizando el procedimiento de barridos de formulacin unidimensional, modificndose las variables salinidad (%NaCl), pH y EACN. En todos los casos se observ un comportamiento similar al de surfactantes convencionales, esto es: a mayor salinidad el biopolmero pasa de la fase acuosa a la fase de solvente orgnico, a pH cido la biomolcula es ms afn al solvente orgnico, mientras que a pH neutro o ligeramente bsico su afinidad es mayor por la fase acuosa; finalmente, a medida que aumenta el EACN de la fase orgnica, la biomolcula disminuye su afinidad por esta fase. La variacin en el grado de acetilacin permite ajustar el grado de hidrofilidad en la biomolcula, desde hidroflica (lignina pura) hasta lipoflica (lignina 100% acetilada). En todos los casos estudiados el comportamiento observado fue similar al reportado para cambios del balance lipoflico-hidroflico (HLB) de surfactantes monomricos. Finalmente, se discute la relevancia del balance hidroflicolipoflico de molculas de lignina en la formulacin de una nueva generacin de sistemas emulsionados. PALABRAS CLAVES Lignina, lignina kraft, lignina acetilada, comportamiento de fase, variables de formulacin, emulsiones. ABSTRACT In this work the influence of formulation variables (pH, salinity and Equivalent Alkyl Chain Number EACN - of organic solvents) on the phase behavior of water-dimethylsulfoxide/organic solvent mixture was studied. We used Kraft lignins with different degrees of acetylation as interface stabilizer. The results allowed us to elucidate the changes in the biomolecules affinity with formulation and also demonstrated the potential application of industrial lignins in the formulation of emulsified systems. A sample of a softwood Kraft lignin (Indulin AT) was acetylated (from 30% to 100%) by reaction with acetic anhydride and pyridine. The acetilation degree was determined by Nuclear Magnetic Resonance, NMR. The surface activity of these samples was studied using a one-dimensional formulation scan by changing either salinity (% NaCl), pH or EACN. In all cases a similar behavior to that observed for conventional surfactants was demonstrated, i.e., the biopolymers affinity changes from hydrophilic to lipophilic with increased salinity. At acid pH the biomolecule show the lowest hydrophilic character while at neutral or lightly basic pH the affinity with the aqueous phase increases.

Finally, as the EACN of the organic phase increases, the affinity of the biomolecule with this phase also decreases. Overall, the degree of acetylation allows adjusting the hydrophilic nature of the biomolecule, from hydrophilic (pure lignin) to lipophilic (100% acetylated lignin). In all the studied cases the observed behavior was similar to that reported for changes in the hydrophilic-lipophilic balance (HLB) of monomeric surfactants. Finally, the relevance of the hydrophilic-lipophilic balance of lignin molecules in the formulation of a new generation of emulsified systems is discussed. KEYWORDS Lignin, Kraft lignin, acetylated lignin, phase behavior, formulation variables, emulsions INTRODUCCIN La lignina es uno de los compuestos orgnicos ms abundante de la biosfera terrestre, representando del 15 al 36 % en peso seco de la madera (1). Est particularmente asociada por extensos enlaces covalentes a la celulosa y hemicelulosa, constituyendo el principal componente del tejido vegetal, el cual se distribuye entre las diferentes regiones morfolgicas de la madera. La lignina se obtiene por separacin de los componentes celulares vegetales, llevada a cabo principalmente a travs del pulpado qumico empleado en la industria de la celulosa y el papel; aqu, se realiza una remocin completa de las fibras de la madera mediante una digestin qumica, donde quedan disueltos en el licor de cocimiento todos los compuestos orgnicos exceptuando la celulosa (2). De este procesamiento se generan grandes cantidades de material de desecho, denominado licor negro, rico en polmeros lgnicos (del 70 al 90 % del contenido de lignina), provenientes de una extensa degradacin, que da lugar a la formacin de grupos inicos solubles en agua o en soluciones alcalinas, de gran utilidad a nivel industrial (3). A pesar de que las ligninas del licor negro no tienen la estructura qumica de molculas anfiflicas convencionales, estas muestran actividad superficial. Su comportamiento como dispersante proviene bsicamente de efectos electrocinticas puesto que la carga elctrica de las superficies slidas se modifica por la adsorcin de lignina, de manera que se producen repulsiones electrostticas y mejora la dispersin de slidos. Por otra parte, debido a la naturaleza polimrica de la molcula, los efectos estricos tambin contribuyen en la estabilizacin de las dispersiones. Se cree que las ligninas se adsorben en la interface agua/aceite formando una pelcula interfacial condensada (o superficie viscoelstica). Se ha demostrado la actividad superficial para el caso de ligninas obtenidas directamente del licor negro con poca o ninguna modificacin (4), luego de una derivatizacin qumica (5-9) y en combinacin con otras especies (10,11). Entre las reacciones de modificacin de la estructura lgnica, la de acetilacin es una de las empleadas, tanto para estudios de estructura de maderas y fibras (12), como de reactividad de los grupos hidroxilo presentes en la biomolcula (13) y como estructura protectora para la fotoestabilizacin de maderas (14,15). En estas ltimas situaciones se busca en algunos casos un cambio en la afinidad de la estructura lignica para un mejor desempeo en su aplicacin. EXPERIMENTAL Para los ensayos se utiliz una lignina comercial, Indulin AT, de Westvaco Corp (Charleston, SC, USA) la cual es una forma purificada de lignina Kraft de pino libre de material hemicelulsico. Esta lignina fue acetilada en diferentes porcentajes siguiendo un procedimiento previamente reportado (16,17). El grado de acetilacin fue seguido por 31P NMR cuantitativo, previa reaccin de fosfitilacin (16), utilizando un espectrmetro Bruker de 300MHz, equipado con una sonda Quad dedicada a la adquisicin de 31P, 13C, 19F y 1H. El comportamiento de fases y reparto de lignina entre las pseudofases acuosas y oleicas se estudi usando barridos de formulacin unidimensional en sistemas equilibrados por una semana (18). En todos los casos se utiliz como fase oleica acetato de etilo y como fase acuosa una pseudo fase agua/dimetilsulfxido 60/40 v/v. La concentracin de lignina en ambas fases (pseudoacuosa y

orgnica) se determin por espectroscopia UV a 280 nm en un equipo UV-Vis Perkin Elmer modelo Lamda 11. RESULTADOS Y DISCUSIN Una manera de incrementar la afinidad de la lignina hacia la fase oleica es modificar la molcula, por ejemplo con una reaccin de acilacin. Esto la hace ms hidrofbica puesto que se pierden grupos OH de la estructura original y se incrementa la actividad superficial (19). De acuerdo a este planteamiento se realizaron reacciones de acetilacin siguiendo un procedimiento ya reportado (26,27) con el fin de investigar su comportamiento de fase en un sistema pseudo acuoso (DMSO/agua 40/60), para una mejor solubilidad de la lignina en esta fase, y acetato de etilo como fase orgnica, cambiando de manera sistemtica las ya conocidas variables de formulacin (salinidad, pH y EACN). En la Tabla 1 se observan los resultados obtenidos en los diferentes grados de acetilacin realizados para la muestra INDULIN AT. En cada caso se observa que al incrementar el grado de acetilacin, disminuye el contenido de grupos OH en la estructura de la lignina, siendo el caso ms pronunciado para los OH fenlicos. La investigacin del comportamiento de fase de la lignina en sistemas agua/aceite se requiere para comprender la afinidad de la molcula hacia estas fases como funcin de las variables de formulacin: pH, salinidad y tipo de aceite (EACN). Para el caso del barrido de pH (Fig. 1) se pudo observar que a altos valores la lignina tiene mejor afinidad hacia la fase acuosa (se puede describir el sistema como un Winsor I, R<1), mientras que a bajo pH se favorece la afinidad hacia la fase oleica (se puede definir el sistema como un Winsor II, R>1). A pH bsico, los grupos fenlicos remanentes en la molcula acetilada pueden perder un hidrgenode manera que la molcula se ioniza incrementando su afinidad por la pseudo fase acuosa. Por el contrario, al disminuir el pH, estos grupos no se ionizan por lo que la estructura se hace hidrofbica e incrementa su afinidad por la fase orgnica. Se observa tambin en la Figura 1 que a pH entre 3 y 5 estara la condicin en la cual la afinidad o reparto de las molculas hacia ambas fases es idntica. De hecho, se nota en la Figura 2 como las molculas de lignina estn casi completamente fraccionadas en las respectivas fases en los pH extremos y a un pH de aproximadamente 4.5 las molculasestan distribuidas por igual en ambas fases. Tabla 1. Resultados 31P NMR de las ligninas INDULIN AT acetiladas

Muestras (*)

Cantidad en mmol/g OH Aliftico Total 2,9 2,4 1,8 0,0 PhOH Total 3,9 1,9 1,0 0,0 COOH Total 0,3 0,3 0,2 0,2 OH Total 7,2 4,7 3,1 0,2

Acetilacin

Indulin AT Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3

0% 35% 57% 97%

(*) Se increment la cantidad de anhdrido actico utilizado en la reaccin de 1 a 3

Para el caso de la salinidad como variable de formulacin, la Figura 3 (parte izquierda) ilustra los casos del Indulin AT con grado de acetilacin de 97% y 57%. Se observa que a bajas salinidades la lignina tiene una mayor afinidad hacia la fase acuosa, mientras que a alto contenido de sal ocurre lo opuesto, hay una mayor afinidad hacia la fase aceite debido a un efecto de salting out. Este comportamiento se explica por los cambios en las interacciones electrostticas y la solvatacin que ocurre cuando se vara la fuerza inica. En el caso de la lignina acetilada en un 97% las interacciones se equilibran entre 0.02-0.04% de salinidad, mientras que para la lignina acetilada un 57% esto ocurre entre 0.08 y 0.1% de sal. El grfico de la derecha de la Figura 3 confirma el fraccionamiento de la lignina entre las dos fases y muestra que un fraccionamiento de 50% de lignina en cada fase debe ocurrir a aproximadamente una concentracin de sal de 0.03% aproximadamente.

pH 1 Cambio de afinidad

pH 3

pH 5

pH 7

pH 8

Figura 1. Comportamiento de fase en un barrido de pH para un sistema Indulin AT acetilado (97%)/agua-DMSO/acetato de etilo. Concentracin de lignina en el sistema 0.1%, pH ajustado con HCl o NaOH. Se agreg Sec-butanol para prevenir la formacin de gel 120 100 Lignina 80 en cada 60 fase (%) 40 20 0 1 3 5 Fase acuosa

Fase oleica

Interface

7 8 pH Figura 2. Fraccionamiento de la muestra Indulin AT acetilada (97%). Nota: circulo en rojo 50% de fraccionamiento en cada fase ocurre a aproximadamente pH 4.5

0%

0.01% 0.02% 0.04%

0.06% 0.08%

0.1%

Lignina acetilada (%)

100 80 60 Aqueous phase Fase acuosa oil phase

Fase Oleica
interface interface

Incremento de la salinidad
0% 0.02% 0.04% 0.06% 0.08% 0.1% 0.4%

40 20 0
0 0.01 0.0 0.04

0.0

0.08

NaCl (%)

Figura 3. (Izquierda) Comportamiento de fase en un barrido de salinidad de una muestra Indulin AT acetilada 97% (superior) y 57% (inferior). (Derecha) Reparto de la lignina acetilada un 97%. Nota: concentracin de lignina en ambas fases son iguales a una salinidad de 0.03%. La estrella indica el rango de concentracin de sal en la que ocurre el cambio de afinidad.

La figura 4 muestra el comportamiento de la lignina acetilada en un 97% en dos sistemas con diferentes EACN. Para el sistema en 4(A) se tiene una mezcla de la fase oleica de acetato de etilo y xileno (EACN = 2), mientras que en 4(B) se tienen mezclas de acetato de etilo y heptano (ACN = 7). Se observa en ambos casos que un aumento del carcter hidrfobo de la fase oleica hace menos afn la molcula de lignina acetilada por esta fase. Este efecto es ms acentuado al pasar de un EACN = 2 para el Xileno (4(A)) a un ACN = 7 para el heptano (4(B)). En ambos casos el carcter hidrfobo de la lignina acetilada no permite la solubilidad de esta molcula en la pseudo fase acuosa.

(A)

E:X, 1:0

E:X, 9:1

E:X, 8:2

E:X, 7:3

E:X, 6:4

(B)

E:H, 1:0

E:H, 9:1

E:H, 8:2

E:H, 7:3

E:H, 6:4

Figura 4. Comportamiento de fase para Indulin AT 97% acetilada. (A) Fase aceite Etil acetato/Xileno (EACN = 2), (B) Fase aceite etil acetato/Heptano (ACN = 7). Concentracin de lignina 0.1%, cosurfactante 5% Sec-butanol para evitar formacin de geles. CONCLUSIN El comportamiento de la lignina modificada por reaccin de acilacin en barridos de formulacin, valida la posibilidad de ajustar la afinidad qumica de este polielectrolito e indica que la lignina, de forma similar a compuestos surfactantes convencionales, sigue las predicciones enunciadas por la teora de Winsor. AGRADECIMIENTOS Los autores expresan su agradecimiento al Fonacit y CONDES-LUZ por el apoyo financiero para este trabajo (proyectos G-2005000454 y CC-0438-04 respectivamente). BIBLIOGRAFA 1. Meyermans H., Moreel K., Lapierre C., Pollet B., De Bruyn A., Busson R., Herdewijn P., Devreese B., Van Beeumen J., Marita J., Ralph J., Chen C., Burggraeve B., Van Montagu M., Messens E. And Boerjan W.; Modifications in Lignin and Accumulation of Phenolic Glucosides in Poplar Xylem upon Down-regulation of caffeoyl-Coenzyme A O-Methyltransferase, an Enzyme Involved in Lignin Byosynthesis. The Journal of Biological Chemistry. Vol. 275 (57): 36899-36909. 2000. 2. Tanistra I.; Bodzek M.: Preparation of High-Purity Sulphate Lignina from Spent Black Liquor using Ultrafiltration and Diafiltration Processes. Desalination. Vol. 115, p. 111 120. 1998. 3. Kadla J. and Chang H.: Reactions of Lignin with Cyanamide Activated Hidrogen Peroxide. Part 3: The Degradation of Pine Kraft Lignin. Holzforschung. Vol. 56, p. 76 84. 2002. 4. Rojas, O. J.; Salager, L., Surface activity of bagasse lignin derivatives found in the spent liquor of soda pulping plants. Tappi, 77 (3), 169-174, 1994.

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