METODOLOGIA EFECTO DEL pH La actividad de una enzima es mxima a un determinado pH; por debajo o por encima de este la actividad

disminuye. Procedimiento Preparar 5 tubos enumerados de acuerdo a la tabla adjunta: Reactivos &ol. 'e ovoalb(mina H)L * *a# )+$. +, -.ua destilada Tubo !ml" #.5+ .++ / / Tubo# !ml" #.5+ +.#5 / +.05 Tubo$ !ml" #.5+ / / .++ Tubo% !ml" #.5+ / +.#5 +.05 Tubo5 !ml" #.5+ / .++ /

Para preparar la soluci1n de albumina se si.ue los si.uientes procedimientos:

/ llevar los 5 tubos a ba2o 3ar4a y preincubarlos por 5 minutos / lue.o .5 ml a2adir a cada tubo de soluci1n de pepsina al ,

/ continuar la incubaci1n de los 5 tubos a $05)

Resultados 6bservar cuidadosamente los tubos y anotar el .rado de turbidez en la si.uiente tabla. Tubo 7alor de pH Turbidez !8" -ctividad !88" !8" !88" 99 :# Tubo# Tubo$ Tubo% Tubo5 # 0 ; # 9 999 9999 99999 :$ :% :5

<xpresar por medio de cruces= mas turbidez mas cruces <xpresar como el inverso del n(mero de cruces

EFECTO DE LA TEMPERATURA >na reacci1n <nzimtica se ve ?avorecida por el aumento .radual de la temperatura; las mol@culas de la reacci1n adAuieren pro.resivamente una mayor ener.4a cin@tica ?avoreciendo su interacci1n. <ste aumento solo es Basta cierto limite ya Aue a partir de el se a?ecta la estructura de la enzima. Procedimiento Preparar 5 tubos de acuerdo a la si.uiente tabla: Reactivos Tubo !ml" Tubo# !ml" Tubo$ !ml" Tubo% !ml" Tubo5 !ml"

&ol. 'e ovoalb(mina H)l * -.ua destilada T 5) de incubaci1n

#.5+ +.#5 .05 + C)

#.5+ +.#5 .05 #+ 5)

#.5+ +.#5 .05 $0 5)

#.5+ +.#5 .05 D+ 5)

#.5+ +.#5 .05 ;+ 5)

/ llevar los 5 tubos a sus respectivas temperaturas de incubaci1n por 5 minutos.

/ Lue.o a2adir a cada tubo +.5 ml de soluci1n de pepsina al ,. Para el caso del tubo 5 a.re.ar pepsina Bervida.

/ )ontinuar la incubaci1n de los 5 tubos por 5 minutos en sus respectivas temperaturas Resultados 6bservar cuidadosamente los tubos y anotar el .rado de turbidez en la si.uiente tabla: Tubo Tubo# + #+ 99999 999 :5 :$ Tubo$ $0 9 Tubo% D+ 99 :$ Tubo5 ;+ 99999 :5

T 5) de incubaci1n Turbidez !8" -ctividad !88" !8" !88"

<xpresado por medio de cruces= mas turbidez mas cruces <xpresado como el inverso del n(mero de cruces

Aqu se muestra los resultados del experimento realizado

EFECTO DE LA CONCENTRACION DE LA ENZIMA La velocidad de una acci1n <nzimtica esta directamente relacionada con la concentraci1n de la enzima. Procedimiento Preparar 5 tubos de acuerdo a la si.uiente tabla: reactivos &ol. 'e alb(mina H)l * -.ua destilada Pepsina , Tubo !ml" #.5+ +.#5 +.05 .5+ Tubo# !ml" #.5+ +.#5 .#5 .++ Tubo$ !ml" #.5+ +.#5 .05 +.5+ Tubo% !ml" #.5+ +.#5 #.++ +.#5 Tubo5 !ml" #.5+ +.#5 #.#5 /

&e le a.re.a una acido clorB4drico al *

&e le a.re.a una acido clorB4drico al *

/ 3ezclar bien cada tubo y llevarlos a ba2o 3ar4a a $0 5) por 5 minutos.

Resultados 6bservar cuidadosamente los tubos y anotar el .rado de turbidez en la si.uiente tabla:

<nzima !8" Turbidez -ctividad !8"

Tubo Tubo# +.++$ +.++++# 9 99 :#

Tubo$ +.+++ 999 :$

Tubo% +.++++ 5 9999 :%

Tubo5 / 99999 :5

)alcule te1ricamente la concentraci1n de la enzima !m.,"

Del tu o !

Del tu o "

Del tu o #

Del tu o $ No se pudo realizar ningn clculo por no contener pepsina.

Del tubo 3

CUESTIONARIO
1. Cul es el pH optimo encontrado para la actividad de la pepsina

Es ms activa alrededor de un pH de entre 2 y 4.

!. C"mo ser la actividad de la pepsina al pH del #u$o $strico

El jugo gstrico tiene un pH es alrededor de 1.5 la actividad de la enzima pepsina es alta debido a que uno de los factores que regula la actividad de las enzimas en general es el pH y como el pH del jugo gstrico esta cerca al valor del pH de la pepsina su actividad se ve favorecida.

3. calcule tericamente el pH para el tubo en donde se observe la mayor turbidez

4. A que temperatura la pepsina tiene mayor actividad para este sustrato? a temperatura en la cual la pepsina tiene su mayor actividad ser en los rangos de !5 "# a 4$ "# con picos altos a !% "#& donde encontramos dic'a enzima (estomago) alcanza 'asta 4$ "#. 5. Qu es un zimo!eno? "ite al menos 4 e#emplos
es un precursor enzimtico inactivo. Un zimgeno requiere un cambio bioqumico (como una reaccin de hidrlisis que revele el sitio activo, o que cambie la configuracin para revelar el sitio activo) para convertirse en un enzima activo. El cambio bioqumico suele ocurrir en un lisosoma, donde una parte especfica de la enzima precursora se parte para activarla. a cadena aminocida que se libera por la activacin se llama el p!ptido de activacin.
En algunos casos& las enzimas son sintetizados como principios inactivos& siendo necesario un cambio en su estructura para manifestar su actividad catal*tica. Estos precursores inactivos de las enzimas se denominan zimogenos o proenzimas +epsin,geno- es el zimogeno de la pepsina segregado en la luz gstrica su activaci,n se realiza por proteolisis en presencia de H#l del jugo gstrico o autocataliticamente con la separaci,n de 42 aminocidos de los !.2 originales separados del e/tremo amino terminal. 0ripsin,geno- zimogeno de la tripsina el cual al perder un 'e/apeptido del e/tremo amino 0erminal por la enteroquinasa rinde tripsina.

1uimitripsin,geno- este zimogeno se convierte en quimotripsina por acci,n de la tripsina o por acci,n de la propia quimotripsina& este zimogeno presenta ! especies- pi& delta y alfa& los cuales presentan estadios en el proceso de activaci,n. +roelastasa- es convertida en elastasa por acci,n de la tripsina& presente en los grnulos de los leucocitos polimorfonucleares.

$%&A'A &A(")*A+%"A

E<+E=>7E50? 1- H>@=A >3>3 @E ;#E>0E @E ? >B; +?= >+;3; +;5#=E;0>#;

,A+)%A$*'
Emulsi,n de aceite 2uffer fosfato pH 3oluci,n de sales biliares 4enoltaleina 3oluci,n de pancreatina Hidr,/ido de sodio al $.1 5 0ubos de ensayo +ipetas 2a6o 7ar*a a !% "#

,*+-D+ara este caso se realiza el m8todo de titilaci,n que nos demuestra la cantidad de cidos grasos libres por acci,n de la enzima sobre las grasas& con la ayuda de un indicador que viene ser la fenoltaleina.

&)*-"*D%,%*(+3e prepara . tubos de acuerdo al siguiente cuadro1 Emulsi,n de aceite 2uffer fosfato pH 9 3oluci,n sales biliares 3oluci,n de +ancreatina 3ol. +ancreatina 'ervida ;gua destilada ! ml 2 ml : 2 ml : : 2 ! ml 2 ml : : 2 ml : ! ! ml : 2 ml 2 ml : : 4 ! ml : 2 ml : 2 ml : 5 ! ml : : 2 ml : 2 ml . ! ml : : 2 ml 2 ml

7ezclar y colocarlos en ba6o de agua 7ar*a a !% "# durante !$ minutos& agitando los tubos a intervalos. ;l finalizar el tiempo de incubaci,n& retirar los tubos del ba6o y

agregar a cada uno 2 gotas de fenoltaleina& luego realizar la titilaci,n de los cidos grasos liberados (por acci,n de la enzima sobre las grasas) con 'idr,/ido de sodio $.1 5 'asta que aparezca una coloraci,n rosada. ;notar las cantidades gastadas de la base en mililitros.

"A$".$- D* $-' )*'.$+AD-'

#alcular el nCmero de miliequivalentes de cidos en cada tubo. >nterpretar sus resultados.

".*'+%-(A)%/ *ncontr 0idrlisis de aceite de oliva en ausencia de sales biliares? e1plique

5o se encontr, 'idr,lisis de aceite de oliva en ausencia de sales biliares& las sales biliares no se encuentran espec*ficamente como sales de los cidos biliares sino como sales de sodio y potasio entre ellos los mas importantes esta el acido c,lico y quenodeso/icolico que son sintetizados en el '*gado y son secretados unidos a sus derivados como la glicina o taurina& debido a que los l*pidos son mol8culas apolares necesitan de las sales biliares para emulsificar y para facilitar el contacto entre enzima y sustrato& lo que permitir*a la metabolizaci,n de los l*pidos y su absorci,n en la pared intestinal.

2. *s esencial para la di!estin la 3uncin de sales biliares en el tracto di!estivo. 'eria normal la absorcin de l4pidos en esas condiciones.
as caracter*sticas de polaridad de los l*pidos los 'acen insolubles tanto en los contenidos del lumen intestinal como en la linfa y la sangre 'acia donde deben ser transportados despu8s de la absorci,n intestinal. @urante el proceso de digesti,n y absorci,n de estos nutrientes esta dificultad se resuelve por la acci,n de las sales biliares que permite la formaci,n de emulsiones y micelas& logrando la dispersi,n y solubilizaci,n relativa de los l*pidos y sus productos de digesti,n en el contenido del intestino. +ara el transporte de los l*pidos absorbidos 'acia la linfa y posteriormente 'acia la sangre estos deben asociarse a peque6as cantidades de prote*nas para formar part*culas de lipoprote*nasD factor que determina la circulaci,n de los l*pidos en el torrente sangu*neo& por tanto una absorci,n de l*pidos en presencia de sales biliares es totalmente normal.

3. "mo realizar4a usted la misma practica con otra metodolo!4a? 4. "mo se in0ibe la reaccin *nzim5tica?
3e puede usar tanto in'ibidores competitivos como no competitivos& in'ibidores competitivos los cuales se unen al sitio activo de la enzima impidiendo que se una al sustrato o no competitivos que se unen en cualquier parte de la enzima modificando la forma del sitio activo o simplemente 'aciendo variar lo que es el pH en rangos donde la enzima no pueda actuar& como tambi8n modificando la temperatura& al igual que la cantidad de sustrato.