The role of MADS-box genes in flower morphogenesis

Genes de identidad de meristemo. Codifican parafactores de transcripcin necesarios para iniciar la inducin de los genes de identidad. Son reguladores positivos de la identidad de rgano durante el desarrollo floral. Genes de identidad de rgano. Controlan directamente la identidad de rgano. Codifican tambin para factores de transcripcin que controlan la expresin de otros genes cuyos productos estn implicados en la formacin o funcin de los distintos rganos de la flor. Genes cadastrales. Son aqullos que actan como reguladores espaciales de la actividad de los genes de identidad de rgano, dando lugar a fronteras en su expresin. De este modo, se controla la interferencia o no entre genes que no deben intervenir en el mismo lugar y momento. Identidad de rgano, fenmeno por el que durante el desarrollo embrionario de animales y plantas grupos de clulas, al conocer cul es su posicin dentro del embrin, se diferencian hacia un determinado rgano o estructura, adquiriendo un compromiso de destino celular. En la toma de decisin intervienen tanto las interacciones con las clulas del entorno como los gradientes de factores morfogenticos que definen los ejes corporales. Clonacin de genes, proceso mediante el cual puede aislarse un gen de entre todos los genes diferentes que existen en un organismo, lo que permite realizar su caracterizacin. Esto se consigue con la preparacin de una batera de bacterias que contienen todos los genes distintos presentes en un organismo de manera que cada una de ellas contiene un solo gen. Esto se lleva a cabo efectuando cortes del ADN de un individuo. Otra alternativa es la de crear un conjunto de todas las secuencias de ADN expresadas en una clula especfica mediante la produccin de copias complementarias de ADN a partir del ARNm hallado en dichas clulas (v ase Biologa molecular). En ambos casos, los fragmentos de ADN se unen a un vector, un virus bacteriano conocido como bacterifago o a un ADN circular denominado plasmido, que se introduce en una bacteria de forma que cada una adquiere solo una copia del vector y por tanto recibe solo un fragmento de ADN. Genes hometicos y mutantes hometicos: Tanto las moscas como los mamferos emplean genes hometicos (de plan corporal) en su crecimiento y desarrollo. Los mutantes hometicos, tales como las moscas con patas en la cabeza en lugar de antenas, fueron descubiertos hace algunas dcadas. Ms recientemente, los cientficos se han dado cuenta de que un sistema de memoria controla el mantenimiento de la expresin de los genes hometicos a travs de complejos proteicos de accin antagonista. Las protenas del grupo Polycomb son fundamentales en la represin de los genes hometicos, mientras que las protenas del grupo Trithorax reprimen la actividad de las protenas Polycomb. Los fallos en la actividad de estos complejos tambin pueden causar cambios enormes en la identidad de la clula, en la prdida de clulas madre y en el cncer. (http://cienciainn.blogspot.com.es/2009/05/genes-homeoticos.html)

Abstract Intensas investigaciones sobre los genes de identidad de meristemo de la flor, as como de los genes responsables de la identidad del verticilo condujeron a un enorme progreso en el conocimiento de los procesos de fondo (subyacentes) de la morfognesis floral. Despus de la clonacin de genes implicados en este proceso, se encontr que muchos de ellos pertenecen a una gran familia altamente conservada, que codifica los factores de transcripcin, que

conteniendo un dominio MADS. Las protenas de tipo MADS juegan un papel importante durante todas las etapas del proceso que conduce a la formacin de la flor. Inicialmente los trabajos en este campo se llevaron a cabo en organismos modelo como Antirrhinum majus y Arabidopsis thaliana, lo que permiti el desarrollo de un modelo general en el que se defini el papel de determinados grupos de genes MADS-box en la estructura de la flor. Los anlisis comparativos realizados en los ltimos aos llevaron a la publicacin de numerosos trabajos sobre el papel de los genes MADS-box en la morfognesis de la flor en otras especies, no slo en las dicotiledneas sino tambin en monocotiledneas y gimnospermas. La comprensin de cmo funcionan estos genes dar nuevas pistas sobre los mecanismos evolutivos que regulan la formacin de la variedad de formas de las flores. Tambin se utilizarn para el control del desarrollo de flores y reproduccin vegetal. Introduction Un nmero de genes responsables de la induccin y diferenciacin de los elementos particulares de la de flores se activan durante la morfognesis de flores. Los genes que estn implicados en este proceso se limitan principalmente a dos clases. El primer grupo de genes controla la identidad de meristemo y el segundo participa en la determinacin de la identidad de los rganos (florales?). Los genes que pertenecen al primer grupo activan el programa que conduce a desarrollo de las flores. Cuando existen mutaciones en los genes del primer grupo, la formacin de meristemo se ve alterada. Las mutaciones de genes del segundo grupo causan diferentes anomalas en la estructura de la flor. En los mutantes hometicos un rgano que se encuentra en el tipo salvaje se sustituye por otro rgano. Los mutantes de este tipo fueron especialmente bien analizados en dos especies: Arabidopsis thaliana (Fam. Cruciferae; arabidopsis u oruga) y Antirrhinum majus (Fam. Plantaginaceae; boca de dragn, becerra, conejitos) ( http://www.anthos.es/). La flor silvestre de estas especies est compuesta por cuatro verticilos situados concntricamente. Los dos verticilos exteriores estn compuestos por (formados de) rganos estriles: los spalos (verticilo 1) y ptalos (verticilo 2). Los verticilos internos contienen rganos reproductores: estambres (verticilo 3) y carpelos que forman el pistilo (verticilo 4). En el desarrollo de las flores participas tres clases de genes, segn el modelo ABC. Muchas mutaciones cambian los rganos presentes en dos verticilos adyacentes, causando la formacin de flores con un patrn alterado. Los mutantes de Arabidopsis con rganos florales modificados fueron divididos en tres grupos. Los del primer grupo tienen flores con un cambio de las estructuras de los dos verticilos exteriores, en lugar de spalos tienen carpelos y los ptalos son reemplazados por estambres. Las plantas de la segunda clase tienen flores con modificaciones en los verticilos 2 y 3, se dan spalos en los verticilos 1 (cosa normal) y 2 (en lugar de ptalos), y carpelos en 3 (en vez de estambres) y 4 (normal). El tercer grupo se compone de mutantes en los que los estambres son reemplazados por ptalos (verticilo 3) y los carpelos del 4 verticilo se sustituyen por spalos. En cada una de estas tres clases se ha perdido una actividad gentica (especfica?) necesaria para la formacin normal de la flor.

Coen y Meyerowitz (1991) propusieron un modelo en el que las actividades de los genes de las tres clases de mutaciones fueron descritas como A, B y C. Los genes de clase A operan en los dos primeros verticilos, los de clase B en el segundo y tercero, y los genes de clase C en el verticilo tercero y cuarto. Este modelo supone que en los sitios donde estn activos los genes de clase A se formarn spalos. Los ptalos se producirn en el rea donde las actividades de los genes de clase A y de clase B se superponen. El rea de solapamiento de las actividades de los genes de clase B y C provocan la formacin de estambres, y la actividad nica de los genes de clase C formar carpelos. El modelo ABC tambin predice la exclusin mutua de las actividades "A y C", es decir, si en cualquier regin la actividad "A" est presente entonces no hay actividad C y viceversa. Los dobles mutantes, sin actividad A ni B, forman flores que contienen solamente un tipo de rganos (supongo que carpelos, no?). La eliminacin simultnea de actividad B y C provoca la formacin de flores que tienen solo spalos. Las flores que carecen de actividad A y C contenan hojas en los verticilos uno y cuatro, y en los verticilos segundo y tercero se formaban rganos con una estructura intermedia entre ptalos y estambres. El triple mutante (que carece de la actividad de las tres clases de genes) tiene flores compuestas slo de hojas colocadas en verticilos. El anlisis de mutantes permiti el aislamiento y descripcin de los genes que participan en la formacin de los verticilos florales (de los verticilos florares o de los rganos florales de los verticilos?). En la Tabla se presentan los genes MADS-box implicados en la identificacin de rganos en Arabidopsis y Antirrhinum.

Los primeros genes aislados y caracterizados fueron el gen DEFICIENS (DEF) de la clase B en A. majus, y el gen AGAMOUS (AG) de la clase C en Arabidopsis (son homlogos). La comparacin de las secuencias de los dos genes indica un alto grado de similitud. Secuencias de protenas de ambos genes contienen un fragmento de 56 aminocidos de los cuales 40 son idnticos. Este fragmento tiene una similitud significativa con la protena humana SERUM RESPONSIVE FACTOR (SFR) (Factor de Respuesta Srica SRF) y al factor de transcripcin de levadura (o se refiere a hongo?) MICRO-CHROMOSOME-MAINTENANCE 1 (MCMI). Basndose en esta homologa se propuso un nombre comn para esta regin: MADS (MCM1-AGAMOUSDEFICIENS-SRF). Adems tambin contienen este fragmento otros genes hometicos implicados en la correcta identidad de los verticilos florales. Slo la protena APETALA2 (AP2) (tambin factor de transcripcin) no tiene el dominio MADS. Los detalles de la estructura de protenas tipo MADS se describe en muchas revisiones (publicaciones reviews). La determinacin de los patrones de expresin de los genes ABC han proporcionado un fuerte apoyo para el modelo ABC, ya que, para la mayor parte, cada gen se expresa en la regin de la flor que presenta conversiones hometicas cuando el gen est mutado. El gen AP2 representa una excepcin, porque se ha detectado mRNA de AP2 en los cuatro verticilos florales y tejidos

vegetativos a pesar de su funcin especfica de rganos en los dos verticilos exteriores (en el 1 y 2, pues pertenece a los genes de clase A). Investigaciones realizadas en petunia permiti la extensin del modelo ABC A una clase de genes que toman parte en la formacin del vulo (actividad D). Dos genes tipo MADS-box: "FLORAL BINDING PROTEIN" 7 y 11 (FBP7 y FBP11) son responsables de la funcin D. Fueron descritos como los principales genes que controlan el desarrollo del vulo. En petunia el efecto de la expresin ectpica de FBP7 y FBP11 es la formacin de vulos en el perianto (parte no reproductiva de la flor) de flores transgnicas. Hasta ahora los mutantes que se han encontrado confirman la existencia de genes de clase D solo en petunia, aunque, basndose en la importante (considerable) secuencia homloga, AGL1 1 (AGAMOUS like) se postula como un posible homlogo de la funcin del gen D en Arabidopsis. Los genes FBP7 y FBP 11 estn en el inicio de una cascada de genes que conduce a la formacin del embrin. Angenent et al. (1995b) observaron tambin que la sobreexpresin de genes que realizan la funcin C con una simultnea prdida de funcin de los genes FBP7 y FBP11 causan la formacin de embriones en el perianto de flores transgnicas. Recientemente se descubri que en mutantes para otros tres genes MADS-box - SEPALLATA1 (SEP1), SEPATALLA2 (SEP2) y SEPALLATA3 (SEP3) (tambin conocidos como AGL2, AGL4, AGL9) los cuales perdieron su funcin, todos los rganos florales parecen spalos. El triple mutante sep1/sep2/sep3 forma flores que contienen slo spalos, el mismo fenotipo se observ en los mutantes dobles para las funciones B y C. Basndose en el anlisis del sitio de expresin de los genes de funcin B y C en los triple mutantes sep1/sep2/sep3, as como el anlisis de los sitios de actividad de los genes SEP1, SEP2 y SEP3 en mutantes para los genes de funcin B y C, se encontr que los genes SEP representan otra clase de genes hometicos florales denominados genes de clase E. Los genes de clase E, junto con los de clase B y C, son necesarios para la especificacin de la identidad del rgano en: ptalos (A + B + E), estambre (B + C + E) y carpelo (C + E). REGULACIN DE GENES MODELO ABC Se sabe que los genes ABC desempean funcin catastral en relacin unos con otros. Los genes catastrales estn involucrados en el establecimiento de los lmites de la actividad de genes hometicos florales durante el desarrollo floral. Los genes hometicos AGAMOUS y APETALA2 (AP2) parecen tener un papel catastral en la determinacin de cada uno de los patrones de expresin, adems de sus actividades de especificacin de rganos. La protena AP2 juega un papel catastral respecto al gen AGAMOUS impidiendo su actividad en los verticilos exteriores. Similar a la protena de AG que impide la expresin de los genes AP1 y AP2 en los dos verticilos internos. Esto est en consonancia con los postulados del modelo clsico ABC que dice que existe exclusin mutua entre las actividades de los genes de clase A y los de clase C. Aparte de eso, se conocen varios genes no MADS-box que no estn ligados a la identidad del rgano floral (flor), pero se comprob que estaban involucrados en la especificacin, donde actan los genes de identidad del verticilo. El gen SUPERMAN, aislado en Arabidopsis, pertenece a este grupo. Una de sus funciones es evitar la expresin de los genes de la funcin B (AP3 y PI) en los cuatro verticilos florales (esta frase tengo que preguntarla). Otro factor que afecta a la actividad de transcripcin AGAMOUS es SAP. El producto de este gen impide la

expresin AG en el meristemo de la inflorescencia y en los verticilos exteriores. Otros dos genes LUG y de CLF puede jugar un papel junto con APETALA2 en la represin de AGAMOUS en el primer y segundo verticilo de las flores de Arabidopsis. Se sugiri que la protena BELL1 (BEL1), vinculada al desarrollo del integumento (envoltura), regula la actividad AGAMOUS en los vulos. Sin embargo, los experimentos de Reiser (1995) demostraron que la falta de actividad de BEL1 no afecta al patrn de la transcripcin de genes AG en los vulos. Estos resultados no excluyen la posibilidad de que BEL1 pueda regular la expresin de AGAMOUS, pero slo indican que el mecanismo de regulacin no es en el nivel de acumulacin (?) de ARN. Otro gen que puede desempear la funcin catastral es el gen AINTEGUMENTA (ANT), miembro de APETALA2-1ike familia. ANT es un factor de transcripcin que juega un papel crtico en la regulacin del desarrollo del vulo y del gametofito femenino. Adems, ANT puede tener un papel similar en el bloqueo de la expresin de AG en los dos primeros verticilos de la flor de manera similar a AP2.

Genes regulados segn el modelo ABC Poco se sabe acerca del objetivo de los genes aguas abajo de los genes hometicos florales que participan en la identidad de los rganos. El primer gen identificado fue NO-APICALMERISTEM (NAP), el cual se ve afectado por la protena hometica heterodmera APETALA3/PISTILATA. Se cree que juegan un papel en la transicin entre la divisin celular activa y la expansin de clulas en ptalos y estambres. En Arabidopsis la expresin del gen NAP bajo un promotor constitutivo inhibe la expansin de clulas en ptalos y estambres, lo cual conduce a un acortamiento de rganos.

GENES IMPLICADOS EN LA IDENTIDAD DEL MERISTEMO FLORAL. Los factores de transcripcin que controlan funciones ABC estn en el centro de la cascada de eventos que conduce a la formacin de una flor normal. Los genes responsables de la identidad de los rganos florales pueden regularse entre s dentro de la misma funcin, as como afectar a los genes que realizan otras funciones como se discuti anteriormente. Investigaciones detalladas han hecho posible encontrar las conexiones entre este grupo de genes y los genes que se activan antes y los cuales son responsables del desarrollo del meristemo floral. En el caso de Arabidopsis el paso de la fase vegetativa a la generativa est relacionado con la transformacin del meristemo vegetativo en el meristemo de la inflorescencia del cual secuencialmente se formarn los sucesivos meristemos florales. Los genes que participan en el proceso de transformacin del meristemo de la inflorescencia en el meristemo floral se caracterizan (?) y abrevian como FLIP (Floral Initiation Process). La inactivacin de los genes relacionados con la diferenciacin del meristemo provoca un cambio parcial o total de los

rganos florales en las estructuras foliares las cuales tambin indican una represin de la actividad de los genes de la identidad del rgano (?). Se conoce un nmero de genes que controlan la formacin y desarrollo del meristemo floral. Las funciones de estos genes y sus interacciones fueron revelados por el anlisis de mutantes y los efectos de la expresin ectpica (el producto de un gen se expresa en un lugar en el que habitualmente no lo hace) en plantas transgnicas. Ambos tipos de genes MADS se han descrito anteriormente (realizando funciones ABC en la identidad del verticilo), y otras nuevas estn relacionadas con la activacin del proceso que conduce al desarrollo de la flor. La gentica de la formacin y desarrollo del meristemo floral son conocidos con mayor detalle en Arabidopsis thaliana. LEAFY (LFY), factor de transcripcin sin dominio MADS-box, es considerado crucial para la actividad del meristemo floral (o para la activacin del meristemo floral?). Las flores de un mutante que carece del gen funcional LEAFY no tienen ptalos ni estambres. En su lugar tiene serie de rganos similares a spalos, pero sin forma concntrica como la tienen los rganos normales del segundo y tercer verticilo, aunque su estructura es en espiral, similar a las hojas del tallo de Arabidopsis. Otro gen importante para la identidad del meristemo es APETALA 1 descrito anteriormente como controlador de la funcin A durante el desarrollo de los verticilos florales. Una mutacin de este gen, adems de cambios drsticos en la estructura de la flor, provoca la formacin de flores en las ramas laterales situadas con un patrn en espiral caracterstico de meristemos no-florales. Otro gen relacionado con el proceso descrito es CAULIFLOWER (CAL). Un nico mutante del gen cal no muestra cambios fenotpicos siginificantes. Slo el doble mutante ap1/cal se caracteriza por la formacin de un gran nmero de meristemos, lo que puede sugerir un papel en relacin con la mejora de la funcin del gen AP1. La alta similitud de secuencia entre los productos de los genes AP1 y CAL (76% de secuencia de aminocidos homologa) as como los sitios de expresin similares sugieren una funcin redundante. Mutaciones por separado en los genes vistos anteriormente no causan una inhibicin completa de la iniciacin y desarrollo del meristemo floral, lo que demuestra la asociacin de estos genes en el proceso de control de la identidad de meristemo. Basndose en los efectos de la mutacin lfy sobre la actividad del gen AP1, se vio el gen LFY era capaz de activar la transcripcin del gen AP1. Adems, la expresin ectpica de LFY provoca la expresin ectpica de AP1 en primordios foliares. Estudios recientes confirman que el promotor del gen AP1 es el objetivo directo de la protena LFY. La complejidad de su relacin se indica por el hecho de que el gen AP1 regula la actividad LFY a travs de feedback inhibition o interacciones con otro factor. Otros genes FLIP son AP2 y UNUSUAL-FLORAL-ORGANS (UFO). Las mutaciones en ellos causan slo pequeos cambios durante el proceso de desarrollo de meristemos, es decir, aumentando los efectos de las mutaciones en los genes LFY y AP1. el gen UFO parece controlar una cierta parte de las funciones de LFY y requiere actividad de LFY para su funcin de afectar la expresin LFY. Anlisis de mutantes indican que AP2 tambin est conectada (asociado) con el desarrollo de meristemos y juega un papel en la mejora de la funcin de los genes LEAFY y AP1. La mutacin del gen AP2 puede fortalecer el fenotipo de un mutante para

los genes AP1 y LFY vinculados con la identidad del meristemo. AP2 juega un papel ms significativo en el desarrollo del meristemo floral que el indicado por el fenotipo mutante. En mutantes ap2 la transcripcin del gen AG se encuentra en todos los verticilos. Esto sugiere que AG puede compensar en parte la prdida de actividad del gen FLIP AP2, enmascarando as defectos en el desarrollo del meristemo. Otros factores tambin son conocidos por estar involucrados en la mitigacin de la prdida de la actividad de los genes AP2. Esto est indicado por el fenotipo del mutante doble ap2/ag donde no se observaron cambios drsticos. Sin embargo, es difcil determinar el papel exacto de determinados genes FLIP durante (en el) desarrollo de la flor, como (por ejemplo) la mutacin en uno de estos genes causa una disminucin en la actividad de la expresin de los genes restantes implicados en el desarrollo del meristemo floral. (Es difcil saber cmo funciona cada uno porque la mutacin de uno disminuye la actividad del resto). Adems de las relaciones mutuas, los genes de identidad de meristemo se dedican a la regulacin de la identidad del verticilo floral. Es sabido desde hace tiempo que la protena LFY afecta a la represin de la funcin C del gen AGAMOUS en Arabidopsis thaliana, y recientemente Busch et al. (1999) demostr que el promotor del gen AGAMOUS es la diana de la protena LFY actuando junto a un hasta ahora desconocido ("X") potenciador transcripcional. Como se ha mencionado anteriorment, genes de funcin C parecen depender del gen AP1 el cual es responsable simultneamente de la determinacin de la especificidad de meristemos y de los rganos en el primer y segundo verticilo. La doble mutacin leafy/ap1 tiene un mayor efecto en el cambio de flor a brote que los mutantes simples de leafy y ap1. Tambin afectan al patrn de expresin de AG. Se presentaron pruebas que sugieren que LFY y UFO son reguladores del gen AP3. Doble Ify/ufo mutantes carecen de corola de ptalos y estambres, la expresin del gen AP3 tambin se reduce fuertemente. La expresin constitutiva de los genes AP3 y PI en mutantes lfy y ufo causa una reconstruccin parcial de la corola de ptalos y de los estambres, pero la expresin ectpica del gen UFO en mutantes para ap3 y pi no causa ese efecto. Parcy et al. (1998) propusieron, basndose en sus propios experimentos, que el sitio de expresin de AP3 est determinado por LFY and simultneamente por UFO. El gen LFY sera responsable de la expresin en el meristemo de la flor y el gen UFO para la determinacin del verticilo en el que ocurri, de manera similar a lo que pasa en la activacin del gen AG por LFY y algn factor "X". An se desconoce si LFY se activa bajo la influencia directa del gen AP3. El gen que acta antagnicamente con respecto a los genes responsables de la iniciacin del meristemo floral es TERMINAL FLOWER1 (TFL1). La prdida de la funcin de este gen causa la expresin ectpica de los genes LFY y AP1 en el meristemo de la inflorescencia, transformndola as en un meristemo floral que genera una flor terminal no entiendo muy bien todo el rollo.. pero espero que me entere al final del todo. En Antirrhinum el gen CENTRORADIALIS (CEN) juega un papel similar y es ortlogo a TFL1 (Gen ortlogo: gen semejante por pertenecer a dos especies que tienen un antepasado comn). Ambos genes codifican protenas de membrana lo cual podra sugerir que estn relacionados con la transduccin de seales que causa (causando) la inhibicin de la expresin gnica de los genes

del meristemo floral en el meristemo de la inflorescencia. LFY y AP1 tambin pueden causar una inhibicin de la actividad TFL1. Sin embargo, no se sabe si esto es debido a actividad directa o indirecta. Un gen ortlogo a LEAFY, encontrado en A. majus (Antirrhinum majus), es FLORICAULA (FLO), y el ortlogo del gen AP1 es SQUAMOSA, como se mencion anteriormente. El mutante flo tiene un meristemo lateral que inicia el desarrollo de un brote indeterminado en lugar de flores. Estos brotes laterales sufren bifurcacin sucesiva. En mutantes squamosa se forman brotes laterales en lugar de flores, pero tambin se forma un pequeo nmero de flores en los brotes de nivel secundario o superior. Esto podra indicar que el gen SQUAMOSA no juega un papel tan importante en la formacin de meristemo floral como el gen FLO. Tambin hay evidencias que indican que el gen FLO est involucrado en el proceso de activacin de la transcripcin del gen PLE. En contraste con la activacin del gen DEF, FLO afecta directamente a la actividad del gen PLE. La transcripcin del gen FLO es detectada en una concentracin muy baja en la parte central del meristemo antes de que PLE sea detectada. (preguntar profesor) En resumen, los genes relacionados con la funcin de identidad del meristemo pueden activar o activar ambos (pueden activarse o activarse mutuamente) y actuar al mismo tiempo que los genes responsables de la identidad del rgano. Curiosamente, los genes vinculados a la identidad del rgano probablemente pueden regular la expresin de los genes de identidad de meristemo. Los genes que actan en fases intermedias tambin se conocen actuando de manera independiente en genes de identidad verticilo o en colaboracin con los genes FLIP. Una protena especfica puede actuar a varios niveles por lo tanto la divisin propuesta en los

genes de identidad de verticilo, genes de identidad del meristemo, y genes intermedios es slo una cuestin de consenso (convenio) y se dirige a la clasificacin de la informacin (Figura).

VARIACIONES DEL MODELO ABC EN DIFERENTES ESPECIES Anlisis comparativos realizados a gran escala confirmaron la funcin de los genes MADS-box en la determinacin del desarrollo de la flor en otras especies. El modelo ABC desarrollado en base a la observacin de mutantes en Arabidopsis y Antirrhinum se encontr aplicable tambin a angiospermas y gimnospermas. Pese a la idoneidad (o adecuacin) general del modelo, algunas modificaciones fueron necesarias. Esto por ejemplo se encontr en las investigaciones realizadas en los genes ABC en petunia. El modelo clsico sufri algunos cambios en esta especie. Todos los genes para la funcin A no han sido completamente identificados hasta ahora. Sin embargo, el gen BLIND que todava no ha sido clonado y caracterizado en detalle, parece ser un buen candidato. El gen FBP26 parece ser otro candidato para la funcin A. Tiene una alta homologa de secuencia con el gen SQUA el cual desempea un papel importante durante el desarrollo del meristemo floral, as como en la identidad de los dos primeros verticilos florales en Antirrhinum. Sin embargo, los experimentos de expresin ectpica del gen AP2 vinculada con la funcin A en Arabidopsis indican que (el supuesto gen ortlogo de ste no realiza la misma funcin en petunia)la ortholog putativo de este gen no realiza la misma funcin en petunia. En petunia varios genes parecen ser responsables de la funcin B. Uno de los candidatos para ser el ortlogo de los genes GLO y PI es FLORAL BINDING PROTEIN 1 (FBP1). Otro gen con un alto grado de homologa en secuencia de protenas y un sitio similar de la expresin de los genes GLO y PI fue el gen pMADS2. Se observ un papel redundante con respecto a la funcin del gen FBP1. El gen responsable de parte de la funcin B es GREEN PETAL (GP, tambin conocido como pMADS1), el cual muestra un alto grado de homologa a nivel de secuencia de la protenas con el gen DEFICIENSE. Por otro lado, GP slo est relacionada con la formacin de ptalos. Investigaciones detalladas han indicado que FBP1 y GP son responsables de la identidad de los ptalos. Inicialmente se inducen de forma independiente el uno del otro y slo durante las etapas posteriores del desarrollo el gen FBP1 es activado por GP, pero la actividad de GP es independiente del gen FBP1. Esto est en contraste con el modelo clsico, por ejemplo, en Antirrhinum, donde los genes funcin B (GLO y DEF), responsables de la identidad del segundo verticilo, se activan el uno al otro. Recientes investigaciones de Touchimoto et al. (2000) demostraron la existencia de otro gen vinculado con la funcin B, nombrado como PhBX. Su producto probablemente activa el gen FBP1. Petunia tambin difiere del clsico modelo ABC en la organizacin de la funcin C. Hasta ahora dos genes de funcin C se encontraron en petunia - FBP6 y pMADS3 caracterizados por un alto grado de homologa de secuencia y un patrn de expresin similar. Los cambios fenotpicos

causados por la expresin ectpica de estos genes, sugieren que en petunia otro gen no caracterizado (conocido) hasta ahora es responsable de la funcin de C y puede interactuar con el gen FBP6 o adicionalmente (adems) con el gen pMADS3. En petunia, los genes de funcin D que especifican (?) vulos, fueron descritos anteriormente. Recientemente aparecieron varios informes sobre el aislamiento de los genes tipo MADS-box de rboles como el eucalipto o el manzano. Un ejemplo es el trabajo de Sung et al. (2000) en el que los autores describen dos genes aislados del manzano (Malus domestica x Borkh) de la variedad Fuji. MdMADS3 y MdMADS4 parecen ser los ms interesantes desde el punto de vista prctico. Los productos de la transcripcin de genes MdMADS4 se encontraron en los meristemos florales y de inflorescencia en los cuatro verticilos de los rganos florales y en el fruto (que quiere decir?). Los autores suponen que el producto de este gen puede desempear un papel importante en el control del desarrollo de flores y frutas. Anlisis del papel de los genes tipo MADS-box en la morfognesis floral no se limita a especies dicotiledneas. Muchas propiedades del desarrollo de flores monocotiledneas, especialmente para las gramneas, parecen ser muy diferentes. Un tipo de gramnea que ha sido intensamente estudiada debido a su enorme importancia econmica es el arroz (Oryza sativa L.). Potencial A, B, C y genes de funcin se caracteriza ya que confirma el modelo propuesto para A. thaliana y A. majus (Genes potenciales para la funcin A, B y C fueron caracterizados los cuales confirmaron el modelo propuesto para A. thaliana y A. majus). El gen RAPIA se considera como el ortlogo de APETALA1 debido a la similitud de secuencia y patrn de expresin. Tambin se encontraron los genes OsMADS2 y OsMADS4, que se supone que son ortlogos (putativos?) del gen PISTILATA, mientras que el gen OsMASD16 probablemente corresponde a APETALA3. El gen OsMADS3 es un ortlogo de AGAMOUS y los efectos que se observan como resultado de la expresin ectpica del gen OsMADS3 en tabaco transgnico indican funcin C. Lpez-Dee et al. (1999) aislaron y caracterizaron otro gen tipo MADS, el OsMADS13, que podra desempear un papel en el desarrollo del vulo y la semilla del arroz. Encontrar los genes ABC permiti obtener ms pruebas sobre el origen de las piezas estriles de la flor de arroz. Anlisis del sitio de expresin del gen de funcin B OsMADS2 sirvi como otra confirmacin de la hiptesis que dice que los lodculos se corresponden con ptalos de dicotiledneas. Se sabe que los genes de funcin B se expresas en los verticilos segundo y tercero; aunque Kyozuka et al. (2000) encontraron, que el ARNm del gen de funcin B en arroz, OsMADS2, se acumula en lodculos y estambres. Tambin la transcripcin del gen de funcin A RAPIA se lleva a cabo en los lodculos, lo que indica que estos rganos se corresponden con los ptalos en flores de dicotiledneas. Otra especie muy intensamente investigada es el maz (Zea mays L.). Durante el anlisis de sus funciones C se encontr que los genes ZAGI y ZMM2 tienen una alta homologa entre s y con AGAMOUS. Se expresan tanto en las flores masculinas como femeninas, pero el nivel de transcripcin del gen ZAG1 es mayor en el desarrollo de las flores femeninas. Una situacin opuesta se observ en el caso de ZMM2 cuyo nivel de expresin es mayor en las flores masculinas. Una alta homologa de secuencia y un perfil muy similar de expresin sugieren que los dos genes se solapan en parte, pero las actividades no son idnticas. No son las nicas secuencias con una alta homologa con el AGAMOUS que se han encontrado en el genoma del maz. Otros genes conocidos son ZAG2 cuyo sitio de expresin se limita a los carpelos en desarrollo y ZMM1 con una alta homologa con ZAG2. El anlisis de su localizacin

cromosmica mostr que ambos pares se encuentran en regiones duplicadas de los cromosomas seis y ocho. Estos datos y anlisis de secuencias sugieren que los dos pares de genes han sido creados por eventos de duplicacin de genes muy recientes, es decir, son dos pares de parlogos (Las secuencias homlogas se dicen parlogas si las mismas se hallan separadas por un evento de duplicacin. En otras palabras, si un gen de un organismo se duplica para ocupar dos posiciones diferentes en el mismo genoma, entonces las dos copias son parlogas. Las secuencias o genes parlogos tpicamente tienen la misma o similar funcin, no obstante, muchas veces este no es el caso debido a que no existe la misma fuerza selectiva original sobre la copia duplicada del gen, sta puede adquirir nuevas funciones por mutacin y seleccin.). Recientemente fue identificado en el maz el gen SILKY1 (SI1) que acta como una funcin B de MADSbox. El anlisis de los sitios de actividad de este gen as como el fenotipo mutante proporcionan evidencias adicionales de que los lodculos son ptalos modificados de eudicotiledonias y que la palea y la lema (glumillas superior e inferior, son brcteas protectoras de las flores de monocotiledneas) son probablemente spalos modificados. Considerando en conjunto los datos de maz y arroz, sugieren que el programa de desarrollo que determina la identidad de los rganos petaloides en el segundo verticilo floral es una sinapomorfa de todas las monocotiledneas existentes y eudicotiledneas (o incluso todas las angiospermas existentes). (las eudicotiledneas no incluyen las Magnoliidae). La investigacin intensa se realiza no slo en plantas agrcolas importantes. Se est publicando un creciente nmero de artculos sobre los genes MADS-box relacionados con la morfologa floral de las especies ornamentales. Por ejemplo, el estudio de Yu et al. (1999) clon y caracteriz genes con funcin ABC relativos a margaritas. Basndose en el anlisis de los sitios de expresin las conclusiones se elaboraron en relacin a los distintos rganos florales. (como?) Tambin se est realizando en gimnospermas investigaciones sobre el papel de los genes de tipo MADS-box en la morfognesis floral. Los genes de funcin B fueron aislados en tres especies de gimnospermas diferentes: Gnetum gnemon (melinjo), Picea abies (abeto rojo) y Pinus radiata (pino de Monterrey). Despus de su caracterizacin result que los genes de la clase B de Gnetum y conferas se expresaron exclusivamente en unidades reproductoras masculinas, lo que sugiere que estos rganos son homlogos a los estambres. Se encontraron en estas plantas genes de tipo MADS que codifican para la funcin B y C de acuerdo con el modelo clsico de Coen y Meyerowitz (1991). Estos genes tienen tambin un alto grado de homologa de secuencia de aminocidos y un sitio diana similar a los genes correspondientes de Antirrhinum y Arabidopsis. Estos resultados sugieren que los principales componentes en los mecanismos de regulacin para el desarrollo de los rganos reproductores se conservan entre (en?) conferas y angiospermas. Sin embargo, las funciones desempeadas por los genes MADS box no se limitan a controlar el desarrollo de las estructuras reproductoras de las plantas. Se conocen varios genes de este tipo los cuales experimentan la activacin en rganos vegetativos, por ejemplo, los genes aislados de Arabidopsis thaliana AGL12, AGL14 y AGL17, que se expresan slo en las races. El factor de transcripcin MADS-box ANR1 tiene una funcin poco comn, codifica una protena que es un factor determinante en la plasticidad del desarrollo de la raz de Arabidopsis.

Los genes anteriormente mencionados son tambin objeto de inters de una nueva rama de la gentica - EVODEVTICA - la gentica de la evolucin del desarrollo, cuyo principal objetivo es determinar los cambios en los genes que participan en el desarrollo de las flores. Los genes tipo MADS-box son adecuadas como material para el anlisis de la evolucin de las estructuras generativas (lnea germinal??)de las plantas, porque la comprensin de la filogenia de los genes de control del desarrollo (evolutivo?) pueden ayudarnos a aprender acerca de los factores que intervienen en diferentes etapas del desarrollo de la flor. Los hallazgos reportados recientemente sugieren una respuesta a uno de los enigmas ms duraderos de la botnica: el origen evolutivo de la flor. La identidad de los rganos florales es totalmente dependiente de la actividad de los genes hometicos de la flor de tipo MADS, as pues la duplicacin y la diversificacin de genes dentro de la familia de genes MADS-box debe haber sido un proceso clave en la evolucin de la flor. OBSERVACIONES FINALES Varios factores de transcripcin pertenecientes a la familia MADS-box son activos en las diferentes etapas de la morfognesis floral tanto durante el desarrollo del meristemo floral como en la determinacin de la identidad de los verticilos de la flor. Debido a su carcter hometico la mutacin en un solo gen puede dar lugar a la reorganizacin de rganos completos, por ejemplo, para el cambio de sexo de la flor. La perspectiva de los cambios en la estructura de la flor y ajustndolo a las necesidades de la economa humana est llegando a ser ms realista con el desarrollo del conocimiento contemporneo. Esto trae nuevas posibilidades que podemos usar para la agricultura y la jardinera. Los cambios en el tiempo de floracin, estructura de la flor, as como propiedades anatmicas de la fruta permiten la produccin ms eficaz de los alimentos y hacen posible la obtencin de variedades con caractersticas nuevas o mejoradas. Los mutantes con un patrn de flor modificado ocurren en la naturaleza y durante mucho tiempo se han utilizado en la cra (el cultivo) de plantas ornamentales como se demuestra en la rosa ornamental y sus variedades de clavel. Los genes responsables de estos cambios han sido apenas descubiertos. Una comprensin profunda de los mecanismos subyacientes de estos caracteres pronto permitir manipulaciones favorables a la esttica y utilidad de ests clases (plantas).