Ao de la Inversin para el Desarrollo Rural y la Seguridad Alimentaria

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS E.A.P. CIENCIAS BIOLGICAS

CURSO: LABORATORIO DE QUMICA ORGNICA PROFESORA: Jos Luis Lpez Gabriel

ANLISIS CROMATOGRFICO CROMATOGRAFA DEL PAPEL

PRACTICA

N5:

GRUPO: (Horario- Jueves 8:00 10:00 am) Brito Obregn, Lidsay Luna Gmez, Connie Peza Espinoza, Mario Nuevo Espinoza, Natalie cd: 11100064 cd: 12100013 cd: 12100081 cd: 12100014

FECHA DE ENTREGA: 24/10/13

1. INTRODUCCION

2. Resumen

3. Parte terica: La cromatografa es uno de los principales mtodos para la separacin de especies qumicas estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografa es un mtodo fsico de separacin basado en la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra mvil. En todas las separaciones cromatogrficas la muestra se disuelve en una fase mvil, que puede ser un gas un lquido o un fluido supercrtico. Esta fase mvil se hace pasar a travs de una fase estacionaria inmiscible, la cual se mantienen fija en una columna o sobre una superficie slida. Las fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son retenidos con ms fuerza por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo; por el contrario los componentes que unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas discriminadas. Hay 3 mtodos principales de cromatografa: frontal, de desplazamiento y de elucin. Slo consideraremos este ltimo, que es el ms habitual, al menos en Bioqumica y Biologa Molecular. 1. De acuerdo con la forma del lecho cromatogrfico: 1.1 Cromatografa plana Se realiza sobre papel u otro material slido. Suele llamarse en capa fina o en capa delgada porque la fase estacionaria recubre un soporte plano y rgido. Disposiciones experimentales para realizar una cromatografa en papel descendente (izqda.) y ascendente (dcha.).

Rf es el factor de retardo o retraso, que mide la movilidad relativa de cada componente con respecto al mximo posible, la distancia recorrida por el frente de fase mvil.

Componente 1: Rf = a / D Componente 2: Rf = b / D Componente 3: Rf = c / D

1: aplicacin de la muestra 2: se sumerge el extremo inferior en la fase mvil 3 a 5: la fase mvil asciende por capilaridad y se va produciendo la separacin de los componentes 6: se marca el frente de avance del disolvente y se deja secar la placa 7: revelado de los componentes ya separados y medida de su avance 1.2 Cromatografa en columna F.M. lquida, F.E. slida: columnas de varios mm de dimetro y varios cm de longitud. F.M. gas, F.E. slida: columnas de unos 5 mm de dimetro y 1-20 m de longitud. F.M. gas, F.E. lquida: columnas capilares, con menor dimetro y 30-100 m (incluso ms) de longitud. Funcionamiento de una columna, mostrando la carga de la muestra y diversos momentos a lo largo de la elucin:

1. Muestra depositada sobre el lecho cromatogrfico

2. La muestra penetra en el lecho 3. Se aade fase mvil 4. Comienza la separacin de los componentes de la muestra 7. Eluye el primer componente 9. Eluye el segundo componente 2. De acuerdo con el estado fsico de las fases 2.1 Cromatografa de gases Con fase mvil gaseosa.

Cromatografa gas-lquido Cromatografa gas-slido

2.2 Cromatografa lquida Con fase mvil lquida.

Cromatografa lquido-lquido Cromatografa lquido-slido

4. Parte experimental: DETALLES EXPERIMENTALES:

Hemos trabajado con extracto de flores, en nuestro caso con Extracto de rosas. El cual se obtuvo previamente secando las hojas o ptalos, luego molindolas en un mortero con 70 u 80 % de Alcohol, el extracto que se concentr se us para nuestro experimento de cromatografa de papel.

1. Cortamos en tiras de papel Whatman N 1 de 19cm x 1cm, esto se hace

con la finalidad de colocarlos con facilidad en la probeta y que nos sirvan como cmaras de separacin.

2. Trazamos una lnea con lpiz de 1 cm del borde inferior del papel y se
marca con un punto el lugar donde se colocar el extracto. Al aplicar el extracto de rosas con un capilar delgado, se deja secar.

3. Colocamos un volumen de aproximadamente

1 cm de etanol en la probeta, es importante no mojar las paredes y tapar con un corcho.

4. Sujetamos la tira de papel al corcho (con un

clip) que se cort en el paso 1.Luego introducimos la tira en la probeta, en el cual el nivel de eluyente (etanol) qued por debajo de la lnea de siembra del papel cuidando que est libre y no chocara con las paredes de la probeta para evitar errores y volver a realizar el experimento.

5. Se dej correr el cromatograma por unos minutos, cuando alcanza el

recorrido mximo, entonces se retira cuidadosamente sin chocar con las paredes de la probeta.

6. Al retirar cuidadosamente, se dej secar la tira de papel y se marc con un

lpiz el frente del solvente. Para nuestro caso, la distancia que recorri el solvente fue de 10.2cm

7. Para poder visualizar

manchas del extracto el papel se us una ultravioleta UV.

mejor las de rosas sobre lmpara de luz

CLCULOS EXPERIMENTALES Y RESULTADOS: Antes de hacer clculos de debe tener en cuenta que:

El Rf, al ser un cociente, nos permite medir el desplazamiento de cada sustancia, con un valor independiente del tiempo o las dimensiones de la placa o distancia de desarrollo. El movimiento es constante y caracterstico para cada sustancia en un sistema cromatogrfico determinado y a una Temperatura determinada. De la definicin resulta que el valor de Rf va de 0 a 1, siendo 0,5 un valor medio.

A menor Rf la sustancia queda ms retenida en la FE A mayor Rf la sustancia no est unida con fuerza a la Fe y es arrastrada por la FM En los dos casos anteriores la muestra no establece equilibrios cromatogrficos y por lo tanto no se separa. Se establece como parmetros de Rf aceptable, entre 0,2 y 0,8 para extractos vegetales.

El valor nominal del Rf no vara con la distancia de desarrollo, pero en la prctica si tengo una mayor distancia de desarrollo, tendr mayor nmero de platos tericos y ms equilibrios cromatogrficos, que me darn una mayor separacin de las sustancias. El lmite a la distancia de desarrollo est dado por la difusin de las sustancias con el tiempo y al peso de la columna de solvente que deja de ascender y se estanca, favoreciendo tambin la difusin de la muestra. La distancia de desarrollo es en general entre 5 y 10cm

 Para nuestro experimento tenemos:

Rf: Relacin de frentes = Nuevas posiciones del compuesto A B C Frente al solvente 10.2cm

= =

5. Discusin: Para evitar errores, la tira de papel debe estar suspendida en el aire dentro de la probeta sin tocar las paredes, solo la punta del papel deber chocar con el solvente (etanol), cuya polaridad ser menor que el metano, lo cual influir en la separacin de sustancias integrantes del extracto que usamos. Podemos aadir que los factores que influyen en la separacin por cromatografa son: Polaridad y Eleccin de eluyente. Donde la Polaridad nos indica la mayor o menor velocidad de desplazamiento a lo largo de la columna depende directamente de la estructura de cada molcula as como de los grupos funcionales que pueda poseer. El motivo principal es su diferente polaridad. Molculas ms polares quedan ms retenidas en la fase estacionaria, es decir "corren menos", mientras que las molculas menos polares se ven menos retenidas y avanzan a mayor velocidad arrastradas por eluyente. Y la eleccin de eluyente, donde la polaridad de la mezcla de disolventes eluyente - utilizado es clave para obtener una buena separacin. Eluyentes ms polares arrastran ms fcilmente a los compuestos, es decir los compuestos "corren ms" en eluyentes ms polares. Por el contrario, mezclas de disolventes con poca polaridad desplazan los compuestos a travs de la columna con mayor lentitud. La polaridad relativa de los disolventes ms usuales se encuentra relacionada en una tabla denominada "serie eluotrpica" (polaridad creciente de izquierda a derecha): hexano, ciclohexano, tolueno, ter, cloroformo, diclorometano, THF, acetato de etilo, acetona, etanol, metanol, agua. De nuevo, es importante recordar que en la eleccin adecuada de la mezcla de disolventes radica el xito de la separacin en la cromatografa. Las placas de cromatografa comerciales portan un agente fluorescente inorgnico en la fase estacionaria. Ello permite visualizar el cromatograma iluminando la placa con una lmpara de luz ultravioleta UV. Los diferentes compuestos aparecen en la placa como manchas circulares. Las distintas manchas A, B y C se midieron para hallar las posiciones relativas. Adems el valor de Rf depende del tipo de solvente empleado, del soporte utilizado y otros factores ms. Conocer este valor permite saber que tan rpido se mueve el soluto que se analiza respecto al sistema cromatogrfico, que en nuestro caso fueron de .. Un disolvente que tiene una interaccin ms fuerte para un determinado producto qumico superar ms fcilmente cualquier afinidad del qumico para la capa absorbente, y mover ese qumico ms lejos en un determinado perodo de tiempo. No podemos hacer una comparacin de Rfs porque solo usamos un eluyente (etanol).

6. Conclusiones y recomendaciones experimentales: Conclusiones:

La polaridad de los solventes utilizados para la cromatografa determinan el resultado mostrndonos sus diferentes compuestos.

El etanol usado como solvente en esta prctica no nos result de mucha ayuda ya que las manchas en el papel de filtro se notaron con mucha dificultad.

Recomendaciones:

La tira de papel en todo momento tiene que estar suspendida de forma vertical en la probeta y en ningn momento debe tocar los lados de esta, asi evitamos que el papel filtro se humedezca por otras partes que no sean el extremo del papel.

Es importante fijarnos con cuidado en donde se encuentran el frente del solvente y las manchas del extracto, asi se podrn analizar los resultados con eficiencia

7.

Bibliografa: