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REPLICACIN REPLICACIN
Propiedadesgenerales
del proceso de
replicacin
Biosntesis del ADN
El mecanismo de la
replicacin
La maquinaria de la
replicacin
La Replicacinen
Eucariotas
Telmerosy
Telomerasas
TranscriptasasReversas
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La importancia de la replicacin del ADN La importancia de la replicacin del ADN
en la medicina en la medicina
La replicacindel material gentico es
esencial a la vida
Erroresen la replicacinson el origende las
enfermedadeshereditarias
Erroresen la replicacinson causa primaria
de canceres
Existenpatologasporincapacidad de
repararerrorescometidosen la replicacin
Los patgenostambienreplican. Entender
estosprocesospermite establecer terapias
especificas
Muchosantibioticosinhibenla replicacin
de microorganismos
mitosis
mitosis
meiosis
3
Tres posibles modelos de replicacin Tres posibles modelos de replicacin
4
El experimento de El experimento de Meselson Meselson y y Stahl Stahl
La replicacin es La replicacin essemiconservativa semiconservativa
Cada hebra se usa como molde para sintetizar otra
Losnucletidosse unen por complementariedad
Se sintetiza una cadena nueva a partir de cada hebra vieja
Se respeta la disposicin antiparalela de lashebras
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Direccionalidad Direccionalidad de la replicacin de la replicacin
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Origenes Origenes, burbujas y horquillas de replicacin , burbujas y horquillas de replicacin
La replicacin se inicia en sitios
particulares (orgenes de replicacin)
Cada origen define un replicn
(unidad de replicacin independiente)
A partir de cada origen la replicacin
avanza bidireccionalmente
Se forma una burbuja de replicacin
formada por dos horquillasque
avanzan en direcciones opuestas
horquilla 1 horquilla 2
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Replicacin de ADN circular y lineal Replicacin de ADN circular y lineal
1. Theta Cromosoma bacteriano
2. Crculo rodante Bacterifagos
3. Lineal Cromosoma eucariota
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Replicones simples o mltiples Replicones simples o mltiples
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Reaccin de Sntesis Reaccin de Sntesis
En la sntesis de la nueva
cadena se generan:
enlaces fosfodiester
(covalentes)
puentes de H
entre las bases
complementarias
La sntesis ocurre en direccin 53 10
La replicacin es La replicacin es semidiscontinua semidiscontinua
Todas las polimerasascatalizan la elongac in de cadena in direccin 5-3
Las dos hebras estn orientadas en direccin antiparalela
Solo una hebra avanza continuamente leyendo una hebra molde en
direccin 35
La hebra complementaria se debe sintetizar en fragmentos discontinuos
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La hebra retrasada se La hebra retrasada se
sintetiza en fragmentos sintetiza en fragmentos
de de Okazaki Okazaki
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La replicacin es La replicacin es
semi semi- -discontinua discontinua
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La La replicacin replicacin es esun un proceso proceso complejo complejo
Seales:
Ori C
Ter
Enzimas principales:
ADN polimerasas
Primasas
Ligasas
Helicasas
Topoisomerasas
Mapa de genes involucrados con la replicacin y reparacin en E. coli
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El mecanismo de la replicacin El mecanismo de la replicacin
INICIACION
Reconocimiento de origenes de replicacin
separacin de hebras
Posicionamiento de maquinaria transcripcional
ELONGACION
Crecimiento bidireccional de las horquillas de
replicacin
Replicacin semiconservativa, semidiscontinua,
coordinada
TERMINACION
Reconocimiento de seales de terminacin
Desensamble de replisomas
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Repeti dos 13 pb ri cos en AT
Protena DnaA
Repeti dos 9 pb
Protena DnaAse une a
AND superenrrollado en
OriC.
Genera tensindisociando
repetidosadyacentes
La helicasa comienza
disociacinde hebras
Se asocianprotenasde
unina cadena simple
Inicio de la replicacin en procariotas: Inicio de la replicacin en procariotas:
Separacon Separaconde de las las hebras hebras
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Ensamblaje del Ensamblaje del replisoma replisoma
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Elongacin Elongacin
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Resolucin de la replicacin en la hebra retardada Resolucin de la replicacin en la hebra retardada
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Terminacin Terminacin
Secuencias
terminadoras
Retienenlashorquillas
de replicacin
Contienensecuencias
que facilitanla
decatenaciny
separacinde los
cromosomasresultantes
Requierenelementosde
terminacinparticulares
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ADN ADN Polimerasa Polimerasa I I
Kornbnberg, 1957
ACTIVIDAD POLIMERASA
Necesita Mg
++
como cofactor
La energa es provista por la liberacin de PPi
El ADN acta como molde
Necesita un cebador que ofrezca un exrtremo
3OH libre para agregar nucletidos
La elongacin ocurre en direccin 53
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ACTIVIDAD EXONUCLEASA
ADN ADN Polimerasa Polimerasa I I
53 Nick Translation
reemplazo de cebadores
35 Proofreading
correccin de sntesis
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FIDELIDAD DE LA REPLICACIN FIDELIDAD DE LA REPLICACIN
Esta dada por la actividad exonucleasa 3-5
Requerimiento de primers
Imposibilidad de la polimerasa de agregar nucletidos si no hay
apareamiento exacto en los nucletidos previos
Implica la imposibilidad de replicacin en direccin 3-5.
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ADN ADN Polimerasa Polimerasa III III
La DNA Pol III es la enzima principal en la replicacin
Multimrica, con varias subunidades
Anillo corredizo
???
35 exonucleasa
Pol C: polimerasa
dimerizacin
clamp loader
(cargadordel anillo)
core
24
El core de DNA Pol III es poco procesivo
El anillo corredizo asegura una muy alta
procesividad
El anillo corredizo y la El anillo corredizo y la procesividad procesividad
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Avance Avance de la de la horquilla horquilla
de de replicacin replicacin
La DNA Pol III funciona
como dmero
Las hebras crecen de
modo coordinado,
avanzando en la
direccin de la horquilla
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Coordinacin Coordinacin de de hebras hebras
27 28
29
ADN ADN polimerasas polimerasasprocariotas procariotas
Polimerasas
>500.000 1.500 3-200 Procesividad (*)
250-1.000 40 16-20 Vel.Polimerizacin (nt/ seg)
no no si Exonucleasa 53
si si si Exonucleasa 35
830.000 88.000 103.000 Peso Molecular
>10 >4 1 Subunidades
III II I Caractersticas
* Nucletidos incororadosantes de disociarse del ADN
Las DNA Polimerasasson enzimas elongadoras
Necesitan un cebador 3OH
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Primasa Primasa: sntesis del cebador : sntesis del cebador
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Helicasa Helicasa: Separacin de las hebras de ADN : Separacin de las hebras de ADN
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Girasa Girasa ( (topoisomerasa topoisomerasa II ) II )
Eliminacin de tensin durante la replicacin
QUINOLONAS
(cidonalidxico)
Se une a la subunidad A de la
DNA girasa (topoisomerasa)
espectro: Gram-positivose
infecciones urinarias
QUINOLONAS
(cidonalidxico)
Se une a la subunidad A de la
DNA girasa (topoisomerasa)
espectro: Gram-positivose
infecciones urinarias
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Resolucin de los cromosomas duplicados Resolucin de los cromosomas duplicados
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ADN ADN Polimerasas PolimerasasEucariotas Eucariotas
DNA Pol II DNA Pol III DNA Pol I Funcn similar en E.coli
- + - + + Sensible a afidicolina
- - - - + Asociada a DNA primasa
+ + + + + Acepta primer de ADN
replicacin reparacin? reparacin
replicacin
continua
replicacin
retardada
Cebado
Funcin
mitocondrial nuclear nuclear nuclear nuclear Localizacin
- ? - + + Acepta primer de ARN
+ + - + - Exonucleasa 35
+ + + + + Polimerizacin 53
gama epsilon Beta delta alfa
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La replicacin en los eucariotas La replicacin en los eucariotas
es similar a la bacteriana es similar a la bacteriana
Reconocimiento de origenes y
uninde helicasa (antigeno T)
La helicasa comienza la
disociacinde hebras
Se asocianprotenasde unina
cadena simple que mantienenlas
hebrasen condicionespara la
replicacion(RPA)
Se une un complejo formado porla
primasa y polimerasa, y se
sintetiza el cebador
Se une la protena RFC y comienza
la sntesisporla polimerasa
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La replicacin en los eucariotas La replicacin en los eucariotas
es similar a la bacteriana es similar a la bacteriana
La uninde PCNA (protena tipo
anillo corredizo) desplaza a la
polimerasa y recluta a la
polimerasa que continua la
sintesisde la hebra continua
Se une el complejo formado porla
primasa y polimerasa, a la hebra
retardada, se sintetiza el cebador
Se une la protena RFC a la he bra
retardada y la polimerasa
procede a la sntesisde los
fragmentosde Okazaki
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La La horquilla horquilla de de replicacin replicacin eucariota eucariota
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El El problema problema de de replicar replicar los losextremos extremosde de molculas molculas
de ADN de ADN lineales lineales
Como se inicia la replicacin en el extremo 5?
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Replicacin en los telmeros Replicacin en los telmeros
Telomerasa
Enzima que cataliza la sntesis de los extremos
Ribozima que contiene una molcula de ARN
que sirve como molde
El ARN gua la adicin de los nucletidos
correctos
Niveles variables de actividad de la telomerasa
regulan la divisin celular y el envejecimiento
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REPLICACIN DE LA CROMATINA REPLICACIN DE LA CROMATINA