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Activacin y funcin de clulas T y B La interaccin del ag con receptores ag-especficos inician una cascada de eventos que resultan en proliferacin

n y posterior diferenciacin de clulas B o T.

Estos contactos contribuyen a la formacin de la sinapsis inmunolgica (rea de contacto entre APC y clulas T conteniendo el pptido + MHC clase II y TCR).

Cul es el objetivo de la sinapsis? Incrementar el tiempo en que las dos clulas estn en contacto y por tanto permitir un sealamiento intracelular ms sostenido.

Cul es el resultado de la estimulacin antignica? Clulas B o T se diferencian en clulas efectoras, y una pequea fraccin se diferencian en clulas de memoria.

Cmo? Cules son las consecuencias de la activacin de clulas B y T? 1.1.1 CD4- MHC clase II Clulas B: - produccin de acs y generacin de acs de diversos isotipos. - sntesis y secrecin de citoquinas que afectan a muchos y diferentes tipos celulares, - o alternativamente, desarrollo de clulas que son directamente citotxicas. CD4 sobre clula T interacta con la regio no-polimrfica de la molcula MHC clase II e incrementa la unin clula T CD4+ a una APC MHC clase II+. Adems CD4, acta como un componente importante de las vas de activacin de clulas T.

Clulas T:

Cmo? Parece que CD4 se acerca a TCR, despus de que el complejo pptido MHC se une a TCR. La cola citoplasmtica de CD4 se asocia con una enzima involucrada en la activacin de clula T. Esta enzima participa en un complejo transductor de seal.

Cules son las consecuencias de la activacin de clulas B y T? 1. Activacin de clulas T CD4+ APCs como clulas dendrticas, son importantes en presentar complejos pptido + MHC clase II a clulas T CD4+ en respuesta primaria, mientras que clulas B son probablemente las principales APCs en la respuesta de clulas T cebadas (memoria).

1.1.2 Molculas co-estimuladoras Interaccin MHC y TCR se conoce como la primera seal. Se requieren seales adicionales conocidas como coestimuladoras o seales secundarias, para la activacin completa de la clula T.

1.1 Interacciones pareadas entre APC y clulas T CD4+ Regiones variables, V-alfa + V-beta, del TCR sobre clulas T CD4+ expresando el receptor apropiado interacta con un pptido unido a una molcula MHC clase II. Es suficiente el contacto entre TCR y molcula MHC clase II de APC para la activacin de clula T? Interaccin entre TCR y complejo pptido-MHC es una interaccin de baja afinidad, adems son pocos contactos, ~100 por clula. Se requiere por tanto interacciones adicionales pareadas entre las superficies de APC y clulas T. Interacciones ms importantes involucran co-receptores, CD4, unin a MHC clase II, interacciones de molculas conocidas como pares co-estimuladores y los efectos de otros pares de molculas de adhesin (Fig. 1). Fig. 1. Interacciones clave de superficie celular que llevan a la activacin de clulas T y a la secrecin de citoquinas

Para que se cree sirven estas seales? - Principalmente para activar clulas T en reposo no cebadas. - Tienen poca importancia en la activacin de clulas T cebadas o de memoria. Interacciones ms importantes son entre: CD40 y CD154 (CD40L), B/ y su ligando CD28 y CTLA-4. Recientes estudios sugieren que interacciones coestimuladoras participan en llevar molculas como algunas enzimas involucradas en la activacin de clulas T, al lugar donde el TCR esta en contacto con APC.

1.1.3 Otras interacciones adhesivas CD2 es una molcula de clula T especifica y de las primeras expresadas durante el desarrollo de clulas T, se une a CD58 (leucocyte funtion associated antigen-3 [LFA3]), que se expresa en muchas clulas.

Estas interacciones incrementan la adhesin de clulas T a otras clulas. LFA-1 es una molcula de adhesin sobre superficie de clulas T (pero no exclusiva), que se une a CD54 (ICAM-1) sobre APC. Estas interacciones ag no-especificas estabilizan la interaccin clula T APC. En resumen tanto las interacciones ag-especificas como las ag no-especificas se requieren para iniciar la activacin de clulas T.

Cmo se activan Fyn y Lck? CD45 protena de membrana, les quita un grupo fosfato inhibidor, lo que las aproxima a CD3 y cadenas zeta fosforilndoles los ITAMs. 3. ITAMs fosforilados de CD3 y cadenas zeta actan como sitios seal para otras tirosina quinasas, ZAP-70 (familia tirosina quinasa Syk). Individuos que carecen de ZAP-70 no responden a ags.

Por qu? 4. ZAP-70 activado resulta en activacin de fosfolipasa Cgamma (PLC-gamma) una enzima de membrana que digiere fosfolpidos de membrana. Rompe fosfatidilinositol difosfato (PIP2) en diacilglicerol e inositol trifosfato (IP3) disparando la activacin de dos vas de sealamiento importantes. 5. DAG activa a la protena quinasa C que a su vez activa una cascada de quinasas, llevando finalmente a la activacin de los factores de trascripcin NF-AT.

Activacin resulta en: - proliferacin, - secrecin de citoquinas, - diferenciacin en clulas de memoria - regulacin de la expresin de molculas de superficie celular para migrar desde el sitio de activacin (generalmente rgano linfoide secundario) a tejidos infectados.

Para qu? 1.2 Eventos intracelulares en la activacin de clulas T CD4+ La activacin de una clula T dentro de la clula puede demorar segundos, minutos e incluso horas despus de la interaccin inicial TCR-pptido + MHC clase II. Las vas activadoras viajan desde la superficie de la membrana atravesando el citoplasma hasta el ncleo (Fig. 2). Fig. 2. Eventos intracelulares en la activacin de clulas T. Por simplicidad, slo se muestra una cadena de CD3 y (zeta) y un ITAM fosforilado. Unin selectiva a promotores de genes, lo que resulta en la transcripcin de genes involucrados en etapas subsiguientes de la activacin de clulas T, por ejemplo los que codifican para citoquinas y receptores de citoquinas. En particular, activacin de clulas T resulta en la trascripcin de una cadena del receptor IL-2, IL-2R (CD25): - Dentro de 24 horas la clula se agranda y la protena IL-2 comienza a secretarse. - Despus de ~ 48 horas, el ADN se duplica y aproximadamente a las 72 horas la clula se divide. Resultado: proliferacin y diferenciacin. La mayora de las clulas T activadas detiene la expresin de receptores homing, CD26L (L-selectina), lo que permite a las clulas T vrgenes entrar al ganglio. Consecuentemente clulas T activadas dejan el ganglio y se mueven a los sitios de infeccin donde el ag esta presente. El trafico de Clulas T activadas tambin se incrementa por la induccin de la expresin de las molculas de superficie celular, CD49d (VLA-4) y CD44, que se unen a las molculas sobre la superficie de clulas endoteliales en tejido infectado.

Cmo ocurre la activacin? 1. Unin pptido + MHC clase II con regiones variables del TCR transmiten una seal va molculas asociadas CD3 y zeta al interior de la clula T.

Se conoce la naturaleza de la seal? No. Podra involucrar cambios conformacionales en regin transmembrana de cadenas TCR o agregacin de mltiples TCRs en membrana celular. 2. A los pocos segundos se activan tirosinas quinasas asociadas a la regin citoplasmtica del complejo TCR y molculas CD4, Fyn y Lck respectivamente, que pertenecen a la familia tirosinas quinasas conocidas como Src.

En resumen, las clulas T activadas cambian su patrn de migracin, migran afuera del ganglio donde fueron activadas, hacia las reas donde son efectivas.

Las clulas T CD4+ vrgenes por estimulacin pptido + molculas MHC producen IL-2. Posteriormente, esta clula puede diferenciarse y sintetizar un gran nmero de citoquinas. Toda clula T CD4+ activada sintetiza el mismo conjunto de citoquinas despus de estimulacin antignica? Estudios en clulas T de ratn y humanas indican que estas se pueden dividir en tres subconjuntos (TH0, TH1, y TH2) basados en las diferentes citoquinas que producen. TH1, y TH2 son generadas por diferenciacin dirigida a partir de ag de clulas TH0, las cuales sintetizan IL-2 , IFNgamma e IL-4 (Fig. 3).

1.3 Funciones de los pares co-estimuladores Inhibicin de la unin CD40 (clula T) con CD154 (clula dendrtica, macrfago, clula B) dan fuertemente la respuesta de clulas T a muchos ags proteicos. El par co-estimulatorio mejor caracterizado es CD28 (clula T) y B7 (APC). CD28 es una molcula transmembrana, miembro de la superfamilia Ig, expresada en un gran porcentaje de clulas T perifricas humanas (y algunas clulas B activadas). B7 comprende al menos dos molculas B7.1 (CD80) y B7.2 (CD86), expresadas sobre clulas B activadas, clulas dendrticas y macrfagos activados. Unin CD28-B7 induce fosforilacin y activacin de protenas de clulas T, incluyendo al mismo CD28. En esta va es importante la activacin de la fosfatidilinositol-3 quinasa. Una consecuencia importante de la activacin de CD28 es que se incrementa el tiempo de vida de ARNm especficos como el de IL-2. Estudios recientes en clulas T CD4+ muestran que estas clulas se pueden volver tolerantes o apagar cuando no hay interaccin B7-CD28. CTLA-4 muy cercanamente relacionada a CD28 (CD152): - se induce tarde en la secuencia de activacin de clulas T. - Interacta con B7 para constituir una seal negativa a la clula T activada: - apaga la produccin de IL-2, por lo que limita la extensin de la respuesta inmune, y lleva a la diferenciacin de clulas T en clulas de memoria.

Clulas TH1 sintetizan: - IL-2 - IFN-gamma - TNF-beta

Clulas TH2 sintetizan: - IL-4 - IL-5 - IL-10 - IL-13

Las clulas TH1 y TH2 juegan un papel importante en la respuesta inmune pero con diferentes funciones. Como las diferentes citoquinas interactan con diferentes clulas blanco, cada subconjunto de clulas T tiene diferentes funciones efectoras. Fig. 3. Control por citoquinas de la generacin de + subconjuntos celulares de clulas T CD4 TH1 y TH2 Citoquinas producidas por clulas TH1 activan clulas involucradas en inmunidad mediada por clulas T CD8+, clulas NK, y macrfagos. Citoquinas producidas por clulas TH2 disparan en clulas B el cambio de clase hacia IgE y activan eosinfilos.

Se pueden distinguir subconjuntos TH1 y TH2 por sus molculas de superficie celular? Estudios han sido controversiales pero se estima que expresan molculas diferentes en las interacciones homing, incluyendo diferentes receptores de quimoquinas.

2. Subconjuntos de clulas T CD4+ definidas por produccin de citoquinas Las citoquinas, factores solubles ag no-especficos, producidas por las clulas T CD4+ afectan la funcin de mltiples tipos celulares, incluyendo: - clulas T CD8+ y CD4+, - clulas B, - clulas mieloides, como macrfagos y eosinfilos, - diferenciacin de precursores de mdula sea.

Todos los ags dan lugar a los tres subconjuntos de clulas T CD4? Muchos generan estos tres subconjuntos pero otros generan preferencialmente un subconjunto: - Virus y bacterias favorecen la produccin de clulas TH1, - alrgenos y parsitos favorecen la produccin de clulas TH2.

Cmo se induce preferencialmente la proliferacin de uno de los subconjuntos de clulas T CD4+?

Depende de la presencia de citoquinas en el momento de la estimulacin de clulas T (Fig. 3). Tambin se han sugerido otros factores como son:

Se encuentra preponderancia de clulas TH2 y de sus citoquinas sintetizadas, durante las respuestas alrgicas y parasticas. Esto sugiere que regular el balance de los subconjuntos TH1 y TH2 podra ser una manera para tratar diferentes enfermedades.

- concentracin del ag y la ruta de exposicin, - afinidad de la interaccin entre pptido + MHC y TCR, - naturaleza de la APC en la respuesta. Fig. 3. Control por citoquinas de la generacin de + subconjuntos celulares de clulas T CD4 TH1 y TH2 Clulas TH1 se desarrollan cuando IL-12 y IFN-gamma e IL10 estn presentes durante la estimulacin antignica de clulas T. Estas citoquinas las sintetizan clulas del sistema inmune innato, particularmente NK y macrfagos, temprano en la respuesta a patgenos como virus y bacterias. Clulas TH2 se desarrollan cuando IL-4 esta temprano en la respuesta. IL-4 se cree lo producen mastocitos o clulas T CD4+ NK1.1. Las citoquinas producidas por TH1 pueden inhibir la funcin de TH2 y viceversa (Fig. 3). Por ejemplo: - IFN-gamma (de TH1) inhibe la generacin de clulas TH2, - e IL-4 e IL-10 (de TH2) inhiben la generacin de clulas TH1. Fig. 3. Control por citoquinas de la generacin de + subconjuntos celulares de clulas T CD4 TH1 y TH2 Dos puntos importantes sobre los subconjuntos de clulas TH1 y TH2 son: 1. Sintetizan un numero de citoquinas en comn, incluyendo IL-3 y GM-CSF (granulocyte-macrophage colony stimulating factor) (Tabla 1). 2. En ratn muestran diferencias ms claras en la produccin de citoquinas que en los humanos. Se encuentra preponderancia de clulas TH1 y de sus citoquinas sintetizadas en la respuesta a: - muchos virus y bacterias, - hipersensibilidad de tipo retardado, y - enfermedades como forma tuberculoide de lepra.

3. Clulas T CD4+ de memoria Despus de estimulacin antignica, las clulas T CD4+, proliferan substancialmente y durante el curso de la respuesta al ag la mayora de las clulas activadas mueren por mecanismos apoptticos. Las clulas sobrevivientes forman las clulas de memoria CD4+ ag especificas. El tamao clonal de esta poblacin es ms grande que el tamao de la poblacin no-cebada lo que contribuye a una mayor efectividad en la respuesta secundaria o respuesta a clula T de memoria que una respuesta primaria. Las clulas de memoria expresan algunas molculas diferentes de las expresadas por las no-cebadas; por ejemplo: - incremento en CD44 y - disminucin de CD62L. - se han descrito cambios en la fosfatasa de membrana CD45 (la activacin se cree cambia CD45 de una forma CD45RA a una CD45RO).

Cmo ocurre la activacin de clulas T de memoria? Se cree que no requiere interacciones co-estimuladoras B7-CD28 para una completa activacin.

Cmo persisten las clulas de memoria? No se sabe si requiere de la presencia del ag, aunque sea a muy bajo nivel; algunos estudios indican que en ausencia del ag cebador, las clulas de memoria mueren.

4. Funcin de las clulas T CD8+ Su funcin primordial es destruir las clulas que han sido infectadas por patgenos, como bacterias y virus. Tambin estn involucradas en destruir clulas tumorales y clulas forneas transplantadas en los rechazos de injertos. Son conocidas con el nombre de clulas T asesinas o linfocitos T citotxicos (CTL).

La clula destruida por un CTL se conoce como blanco, y puede ser una APC especializada o cualquier clula del cuerpo. Cmo reconoce a la clula blanco? El TCR de clulas T CD8+ reconoce una combinacin pptido + MHC clase I sobre la superficie de la clula. Este reconocimiento termina en la muerte de la clula que presenta el ag forneo. Clulas T CD8+ tambin producen citoquinas: muchas producen citoquinas asociadas con el fenotipo TH1 CD4+. Incluyen IFN-gamma, que regula ciertas infecciones virales y bacterianas, como INF-beta, que participa en la destruccin de la clula blanco. Otras clulas T CD8+ sintetizan citoquinas como IL-4 asociadas con el patrn de clula TH2 CD4+.

Destruccin de clulas blanco por clulas T citotxicas (Fig. 4) La CTL activada inicia la destruccin de la clula blanco adhirindose va TCR. Adems, el contacto entre CTL y clula blanco se incrementa por interacciones pareadas de molculas de adhesin.

Cmo ocurre la destruccin de las clulas blanco por las CTLs? Parece que ocurre por dos vas. Fig. 4. Activacin de CTL CD8+ y destruccin de clula blanco Primera va. Involucra la accin de sustancias citotxicas contenidas en grnulos dentro de las clulas T que producen lesiones en las membranas de las clulas blanco. Cmo? 1. Despus de adhesin a clula blanco la CTL por exocitosis moviliza sus grnulos en direccin de la clula blanco y libera el contenido de esos grnulos sobre la clula blanco. Grnulos contienen principalmente:

Cmo ocurre la activacin de CTLs para destruir las clulas blanco? Una va principal de activacin involucrada en la respuesta a muchos virus es la va de activacin de clulas T CD4+ virus-especifica (Fig. 4): 1. Clulas CD4+ se activan por ags virales que los presentan molculas MHC clase II de una APC con un macrfago. 2. Combinacin clula infectada por virus y secrecion de IL2 por clulas T CD4+ inducen la proliferacin y diferenciacin de clulas T CD8+. En esta va el eptope viral que interacta con clulas T CD4+ puede ser diferente del eptope viral que interacta con clulas T CD8+? Fig. 4. Activacin de CTL CD8+ y destruccin de clula blanco Hay otras vas de activacin que no parecen requerir de IL2 o de clulas T CD4+, como es el caso de algunos virus. Estas vas de activacin de CTL involucran muy probablemente la presentacin por APCs potentes como clulas dendrticas de ags virales a clulas T CD8+. Por qu? APCs presentan altos niveles de molculas coestimuladoras y de MHC clase I y II. Es muy probable que los eventos de activacin intracelulares sean similares a los descritos en clulas T CD4+. CD8, como CD4, esta asociado a la tirosina quinasa Lck y tambin involucra al mismo conjunto de pares de molculas co-estimuladoras y de adhesin (CD28-B7, LFA1-ICAM-1 y CD2-CD58).

2.

- perforina (polimeriza y genera canales o poros transmembrana en forma de anillo, provocando un incremento en la permeabilidad celular similar a la accin del sistema del complemento). - granzimas (conjunto de proteasas sricas que entran va poros al interior de la clula blanco y le inducen apoptosis). Por qu inducir muerte va apoptosis? Porque no hay liberacin de contenido celular, y por tanto se evita regar el virus infeccioso a otras clulas.

Segunda va. - Involucra la activacin secuencial de enzimas proteolticas conocidas como caspazas dentro de la clula blanco que inducen apoptosis y muerte celular en pocas horas. - Interaccin CTL-clula blanco es mediada por Fas ligando en CTL y Fas en clula blanco. - La va perforina-granzima es de mayor importancia en la destruccin de clulas blanco que la via Fas-FasL. - La CTL despus de iniciar el mecanismo de destruccin se despega de la clula blanco para atacar y destruir clulas blanco adicionales.

Qu sucede con los CTLs activados despus de la destruccin de clulas blanco?

La mayora mueren por un proceso conocido como muerte celular inducida por activacin. Una minora de clulas T CD8+ sobreviven y constituyen la poblacin de clulas de memoria T CD8+.

- para ratones las evidencias sugieren que para la funcin citotxica clula T CD4+ es ms importante la va de destruccin de clulas blanco Fas-FasL que la va perforinagranzima.

6. Reconocimiento de lpidos por clulas T La activacin de clulas T y la destruccin de clulas blanco son eventos separados? Los CTLs de un individuo que ha sido previamente infectado con un virus son capaces de destruir clulas blanco infectadas por un virus in-vitro, sin requerir la adicin de factores adicionales. Podra un CTL CD8+ especifico para un pptido viral de gripa y aislado de un individuo expresando HLA-A2, destruir una clula blanco que bien sea: - exprese HLA-A2 pero sin el pptido viral de gripa? - presente un pptido derivado de measles? - presente el mismo pptido viral de gripa pero unido a HLA-B3? Las respuestas de clulas T estn restringidas por MHC. - se cree que constituyen una tercer familia de molculas presentadoras de ags que ha evolucionado para presentar a clulas T ags, lpidos y glucolpidos derivados de patgenos microbianos. - son glucoprotenas de superficie celular no-polimrficas (no varan de clula a clula). - Se expresan en asocio con beta2m sobre APCs como clulas dendrticas y clulas B. - estn relacionadas distantemente con MHC clase I y II Clulas T pueden reconocer lpidos y glucolpidos. Por ejemplo se ha documentado la respuesta de clulas T a los lpidos y glucolpidos derivados de la pared celular de micobacterias. Los genes y los productos derivados de una familia conocida como CD1 parecen jugar un papel en la presentacin de estos lpidos y glucolpidos en un nmero de especies. Molculas CD1:

Por qu la habilidad de las clulas T CD8+ para destruir clulas expresando pptidos derivados de ag no-propios en asocio con MHC clase I tiene una importancia biolgica gigantesca? Pista: las molculas MHC clase I son expresadas por casi todas las clulas del cuerpo. nicamente patgenos como virus, parsitos y ciertas bacterias que infectan clulas y generan pptidos que alcanzan compartimientos citoplasmticos o de RE y se asocian con MHC clase I evocan repuestas de clulas T CD8+. Ags no-infecciosos o no-dainos (como las protenas virales destruidas en una vacuna): - generalmente no disparan respuesta de clulas T CD8+ - si pueden disparar respuesta de clulas T CD4+ y respuesta de acs, debido a que son introducidas en compartimientos cidos de las APCs e interactan con MHC clase II. Clulas T CD8+ en ratones y humanos casi que invariablemente funcionan como clulas T citotxicas. Sin embargo una proporcin considerable de clulas T CD4+ humanas y algunas de ratn, tambin presentan funcin citotxica. Los mecanismos de destruccin de clulas blanco utilizados por CD4+ y CD8+ parece que son muy similares:

Dnde ocurre la unin de los ags a CD1? Parece que en compartimientos celulares cidos, similar a la generada por los pptidos exgenos de MHC clase II. Molcula CD1 cristalizada muestra similitudes generales con MHC clase I, pero presenta un surco de unin mas grande con una cavidad profunda, probablemente la cavidad se une al esqueleto hidrofbico del ag lpido, con la regin polar del lpido o glucolpido exponindose en el surco para unirse al TCR. Miembros diferentes de la familia CD1 presentan ags a las clulas T gamma-delta, a clulas T CD8+, y a clulas T CD4 NK1.1 (expresan molculas de superficie de clulas T y NK). Activacin de clulas CD4 NK1.1 por clulas CD1+ a respuesta a ags derivados de agentes infecciosos resulta en la sntesis de altos niveles de IL-4. Por esto se ha sugerido que clulas T CD4 NK1.1 es quizs una de las fuentes de IL-4 que motiva la diferenciacin del subconjunto TH2 de clulas T CD4+.

7. Otras vas de activacin de clulas T no-cebadas Tienen consecuencias similares, es decir, llevan a produccin de citoquinas y proliferacin de clulas

7.1 Super-ags (SAg) Son una clase de ags que activan clulas T que expresa como componente de su TCR un segmento especifico V, como V3 o V11, independientemente de la molcula V utilizada por el TCR. Un alto porcentaje de clulas T de diversas especificidades antignicas puede activarse por la interaccin de SAgs con la poblacin de clulas T. Por qu? Hay diversos aspectos peculiares de la interaccin de Sag con clulas T (Fig. 5B). - Se unen a la regin V del TCR. - Lo presentan molculas MHC clase II de APCs pero no lo unen al surco del peptido. - Al parecer las APCs no los procesan. Caractersticas relevantes clnicas de los Sag: - los producen diversos organismos que causan enfermedad como estafilococos y diversos virus. Fig. 5. Reconocimiento de diferentes antgenos por TCR. (A) presentacin de glucolpidos por CD1; (B) superantgeno unido a V.

Estos antgenos se conocen como timo-dependientes (TD) y estas clulas T como colaboradoras (TH). Following antigen binding (a), the B-cell receptor (BCR) triggers a signal-transduction cascade (b), which leads to the transcriptional activation of genes associated with Bcell activation. The BCR is internalized (c) and either degraded (d) or trafficked to an intracellular compartment termed the MIIC (e), where newly synthesized major histocompatibility complex class II (MHC) molecules and peptides derived from the antigen bound to the BCR are formed into complexes. The antigen-processing and BCRdegradation pathway might not be identical and are shown here to occur in two different endosomal compartments. The peptideMHC complexes are subsequently transported to the cell surface, where they are recognized by the T-cell receptor (TCR) of T-helper cells (f), leading to T-cell activation (g). The activated T cell provides 'help' to the B cell, leading to full B-cell activation (h) through both secreted cytokines and cellcell interactions mediated by receptor pairs such as CD40 CD154. Ig, immunoglobulin. La produccin de anticuerpos en respuesta a antgenos TD requiere: - que tanto las clulas B como las clulas T se activen e interacten.

7.2 Protenas Vegetales y Anticuerpos contra Molculas de Superficie de Clulas T Mitgenos se consideran activadores policlonales debido a que son capaces de inducir proliferacin celular. Las glucoprotenas vegetales concanavalina A (ConA) y fitohemaglutinina (PHA) son potentes mitgenos de clulas T. Parece que estas molculas actan a travs de TCR. Algunos anticuerpos especficos para CD3 tienen la habilidad de activar a todas las clulas T. Por qu? CD3 se expresa en asocio con TCR.

Qu caracterstica debe tener el antgeno para que ocurra la cooperacin T-B? - Los eptopes a los que responden las clulas T y B deben estar fsicamente ligados. - este fenmeno de cooperatividad T-B se conoce como reconocimiento ligado.

las clulas T y B responden a diferentes eptopes en el antgeno? Qu consecuencias tiene la secrecin de citoquinas por la clula T en la clula B? - su activacin para proliferar y diferenciarse en una clula productora de anticuerpos. - dependiendo de las citoquinas secretadas se determina el cambio de clase (isotipo de inmunoglobulina) y la induccin de clulas B de memoria.

8. ACTIVACIN Y FUNCIN DE CLULAS B 8.1 Cooperacin T-B - antgenos con mltiples epitopes repetidos tienen la habilidad de ligar cruzadamente a BCR y activar directamente la clula B. - la mayora de antgenos proteicos no contienen mltiples epitopos repetidos por lo que no pueden ligar cruzadamente a BCR. - la respuesta de clulas B a casi todos los antgenos proteicos requieren seales adicionales de clulas T CD4+.

cmo ocurre la respuesta primaria? - clulas T se activan por antgenos procesados y presentados por clulas dendrticas. - secrecin de citoquinas por clulas T y activacin de clulas B.

cmo ocurre la respuesta secundaria? (Fig. 6)

- no se requiere clula dendrtica - cooperacin T-B es muy eficiente. - la clula B captura el antgeno unindolo a un receptor inmunoglobulina especfico. - complejo antgeno-inmunoglobulina se internaliza y degrada en compartimentos cidos que contienen molculas MHC clase II. - complejo pptido-MHC clase II viaja a lo largo de la clula hasta la superficie de la clula B. - complejo interacta con el TCR apropiado de la clula CD4+. Interacciones pareadas ms relevantes entre clulas T CD4+ y clulas B (Fig. 6): - LFA-1 ICAM-1, CD5 CD72, y CD45 CD22 incrementan la activacin. - CD154 CD40 tiene varias consecuencias: * promueve la regulacin positiva de la molcula coestimuladora B7 sobre clula B que incrementa la habilidad de clula para presentar antgenos a clula T va CD28 de la clula T activada. * promueve la proliferacin

primarias como secundarias (este fenmeno se conoce como el efecto del transportador). Qu importancia tiene el efecto del transportador en la inmunizacin de individuos con vacunas peptdicas? - para que haya respuesta de anticuerpos seundaria el pptido se debe ligar al mismo transportador tanto en la inmunizacin primaria como en las secundarias.

8.2 Respuestas T-Independientes 8.2.1 Activacin de Clulas B en Ausencia de Colaboracin de Clulas T - Los antgenos timo independientes (TI) son: * capaces de activar clulas B para que produzcan anticuerpos en ausencia de clulas T o de las citoquinas producidas por clulas T. * generalmente, molculas polimricas grandes con determinantes antignicos mltiples repetidos. * Ejemplos: lipopolisacridos de paredes celulares bacterianas y componente lipopolisacrido de la capsula de Haemophilus influenzae.

Qu caractersticas son relevantes biolgicamente de la respuesta TI? - generan predominantemente IgM. - no dan lugar a clulas de memoria. - es decir, respuesta secundaria no se incrementa ni en intensidad ni velocidad, y no hay cambio de clase. - individuos sin clulas T pueden hacer respuesta inmune protectora contra antgenos TI como los derivado de bacterias extracelulares. Estas caractersticas de la respuesta TI resaltan la importancia de las citoquinas derivadas de las clulas T en el desarrollo de clulas de memoria y en el cambio de clase de clulas B.

* participa en el cambio de clase (explica el sndrome hiper-IgM en ratones knockout CD154). Fig. 6. Interacciones clave de superficies celulares involucradas en la cooperacin T-B.

Cules son los requisitos para el cambio de clase en clulas B? - Interaccin CD154 CD40 - Produccin de citoquinas por clulas T, as: * IL-4 induce predominantemente cambio de

clase IgE * IFN- induce cambio de clase IgG.

8.3 Vas Intracelulares en la Activacin de Clulas B Cmo ocurre la activacin de la clula B? - Inicia con el ligamiento cruzado del receptor, es decir, el acercamiento de ms de un receptor BCR en la membrana celular (Fig. 7). - El ligamiento cruzado induce una cascada de activacin dentro de la clula B que termina en la transcripcin y traduccin de genes receptores de citoquinas y de inmunoglobulinas.

Cules son los requisitos para el reconocimiento ligado de los epitopes antignicos en las clulas T y B en las respuestas primaria y secundaria? - el epitope para la clula B y el epitope para la clula T deben ser los mismos en la primera primaria y secundaria. - la respuesta de anticuerpos secundaria contra haptenos slo se generaba si el hapteno estaba ligado a la misma protena o transportadora tanto en las inmunizaciones

Fig. 7. Eventos intracelulares en la activacin de clulas B. Por simplicidad, slo se muestra una cadena de Ig e Ig asociada a cada molcula de Ig.

Cules son los eventos intracelulares en la activacin de clulas B? - Activacin de las tirosina quinasas de la familia src (Lyn, Blk, Lck, Fyn) asociados con el BCR que se creen las activa CD45. - Estas quinasas fosforilan residuos tirosina en ITAMs de las molculas Ig e Ig asociadas con cadenas Ig en la membrana. - Fosforilacin de estos ITAMs reclutan otra quinasa, Syk, que es fosforilada y activada. - Syk activa PLC- que divide PIP2 en DAG e IP3 que lleva a la activacin de dos vas de sealamiento principal. - DAG activa a protena quinasa C, que a su vez activa una cascada de quinasas; IP3 incrementa los niveles de calcio libre intracelular y lleva a la activacin de enzimas dependientes de calcio. - Como resultado de estos eventos, factores de transcripcin como NF-AT y NF-B, entran al ncleo de la clula B y promueven la transcripcin de genes especficos como los de inmunoglobulinas y de receptores de citoquinas. Aproximadamente 12 h despus de la estimulacin antignica la clula B incrementa en tamao y si recibe las seales apropiadas, generalmente de clulas T colaboradoras, prolifera y se diferencia en una clula plasmtica.

Qu funcin realizan las molculas de superficie de clulas B como CD19, CD21 y CD81 (TAPA-1)? - Funcionan como un complejo coreceptor que incrementa la seal transmitida a travs del BCR despus de la estimulacin antignica. - CD21 se une a C3d (un producto de la va del complemento) que se adhiere a antgenos. - Los ligandos de las otras molculas del complejo coreceptor no se conocen.