CARACTERIZACIN DE PLSMIDOS DE ACINETOBACTER BAUMANNII EN TRES CENTROS HOSPITALARIOS R Pedroza1, W Cuotto2, O Velzquez3, L Torres2 y V Rodrguez Lemoine3. 1. Profesor Asociado.

Jefe de la Seccin de Biologa Molecular de Agentes Infecciosos. Instituto de Medicina Experimental. Facultad de Medicina. UCV. 2. Escuela de Bioanlisis. Facultad de Medicina. UCV. 3. Profesor Titular. Director del Centro Venezolano de Colecciones de Microorganismos. IBE. Facultad de Ciencias. UCV. RESUMEN: Acinetobacter baumannii es un importante agente etiolgico asociado a infecciones nosocomiales. Los patrones de resistencia a los principales agentes antimicrobianos y el perfil plasmdico fueron analizados en 34 cepas nosocomiales provenientes de tres hospitales del rea metropolitana. La mayora de los aislamientos (50%) provienen del tracto respiratorio y de la Unidad de Terapia Intensiva. Los porcentajes de resistencia obtenidos revelan la presencia de patrones complejos de resistencia mltiple incluso a los antimicrobianos imipenen, meropenen y b lactamicos, los cuales son de uso frecuente en el tratamiento de las infecciones causadas por este germen. El perfil plasmdico obtenido sugiere una alta variabilidad. Un plsmido > 23 Kb fue asociado con la resistencia en algunos aislamientos. El anlisis del DNA plasmdico es de gran utilidad en la tipificacin epidemiolgica de las cepas de A. baumannii y puede servir como un sistema complementario a los mtodos epidemiolgicos tradicionales. Palabras Clave: Acinetobacter baumannii, Resistencia, Plsmido. ABSTRACT: Acinetobacter baumannii is an important etiological agent causing nosocomial infections. Antibiotics resistance patterns and plasmid profiles analysis of selected 34 nosocomial strains isolated from three hospitals were determined. The majority of isolates (50%) were recovered from respiratory tract and intensive care unit. High level of resistance for different kind of antimicrobials has been observed, incluindg imipenem, meropenen and beta-lactam antibiotics. Plasmid profiles suggested a high variability. A plasmid < 23 kb was associated with the resistance in some isolates. Plasmid DNA analysis proved to be useful in epidemiological typing of A baumannii strains and may serve as a complementary typing system to traditional epidemiological methods. Key Words: Acinetobacter baumannii, Resistant, Plasmid.

INTRODUCCIN El uso indiscriminado de los antibiticos en centros hospitalarios ha tenido un efecto dramtico tanto en la seleccin como en el aumento de las poblaciones bacterianas resistentes a estos agentes, causando graves problemas en el control de las infecciones intrahospitalarias. Esta resistencia puede ser de naturaleza intrnseca, o estar mediada por plsmidos, en cuyo caso los determinantes de resistencia pueden ser transferidos horizontalmente a poblaciones bacterianas naturalmente sensibles. Acinetobacter baumannii es un bacilo Gram negativo, frecuentemente asociado a infecciones nosocomiales. Es considerado como el segundo germen ms frecuentemente aislado en pacientes con pneumona(1), y el sptimo causante de bacteremia e infecciones en el tracto urogenital y pulmn. Tiene una alta capacidad para acumular determinantes de resistencia a una amplia gama de agentes antimicrobianos, convirtindolo en un agente difcil de controlar (2). En este trabajo se presenta un estudio comparativo sobre la multiresistencia a agentes antimicrobianos encontrada en aislados de A. baumannii provenientes de tres hospitales de la Regin Capital, y se examina su contenido plasmdico mediante electroforesis en geles de agarosa. MATERIALES Y MTODOS Para este estudio fueron seleccionados 34 aislados de A. baumannii provenientes de pacientes hospitalizados durante el perodo octubre de 1999 y marzo de 2000. Los aislados provienen: 13 del Hospital Universitario de Caracas (HUC), 11 del Hospital Domingo Luciani (HDL) y 10 del Hospital Vargas de Caracas (HVC). Los aislamientos fueron identificados en los laboratorios de Bacteriologa de los respectivos hospitales. La identificacin fue confirmada en el Centro Venezolano de Colecciones de Microorganismos (CVCM), empleando el sistema semiautomtico ATBplus (Biomerux). La resistencia y susceptibilidad a los antibiticos se realiz por el mtodo de difusin en disco(3,4). Las cepas de control fueron E. coli CVCM 788 (derivada de ATCC 25922) y S. aureus CVCM 786 (derivada de ATCC 25923). Los experimentos de conjugacin se realizaron empleando cepas de P. aeruginosa (PU21-PaO38) CVCM 234 y E. coli K12 CVCM 401 como receptoras(5). El aislamiento del DNA plasmdico se realiz mediante el mtodo de la lsis alcalna(6).

RESULTADOS Y DISCUSIN Las infecciones por A. baumannii se ven favorecidas por el uso de dispositivos como sondas y catteres, a los cuales el germen se adhiere provocando la colonizacin de la zona(7). El uso indiscriminado de antibiticos para el control de procesos infectivos afecta el conjunto de la flora microbiana minimizando el fenmeno de interferencia, favoreciendo la seleccin de bacterias resistentes a los agentes antimicrobianos de uso extensivo. Es frecuente encontrar que las infecciones causadas por bacterias resistentes sean de mayor gravedad que aquellas causadas por cepas sensibles. En este trabajo se analiz la incidencia de A. baumannii en diferentes servicios de tres hospitales de la regin Capital. El grfico 1 muestra la procedencia de A. baumannii de acuerdo al servicio (Terapia Intensiva [UTI], Neumonologa [N], Ciruga [C], Pediatra [P], Medicina [M], Observacin [O] y Recuperacin [R]). La mayora de los aislados proviene de UTI. En el HUC el mayor porcentaje de aislamientos procede de la UTI (54%), seguido de los servicios de Medicina I y II (15%), Neurologa, Ciruga III, Observacin de adultos (8% c/u). Mientras que los del HDL proceden fundamentalmente de los servicios de UTI y C (36%), P, N y R (9%). En el HVC la muestras provenientes de la UTI fueron las ms frecuentes (40%) seguido de los servicios de Ciruga y Medicina (30%). Cabe destacar que los aislamientos de los servicios de Medicina y Ciruga podran tener como fuente primaria las unidades UTI, ya que muchos de estos pacientes estuvieron previamente en estas unidades o en quirfano. Los aislados de A. baumannii fueron agrupados de acuerdo a su procedencia clnica. El grfico 2, muestra el nmero y porcentajes para cada una de las fuentes de aislamiento (secrecin traqueal, abdominal, bronquial, herida, esputo, sangre y punta de catter). En los hospitales HUC y HDL la presencia de A. baumannii fue ms frecuente en las secreciones traquales, seguido de secrecin de herida, abdominal, esputo y punta de catter.

Resistencia mltiple a antimicrobianos Los porcentajes de resistencia obtenidos de A. baumannii a 19 agentes antimicrobianos revelan la presencia de patrones complejos de resistencia mltiple. Para determinar el espectro de resistencia se incluyeron antibiticos que no son de eleccin en teraputica clnica. Ms del 80% de las cepas presentan una elevada resistencia a la mayora de los antimicrobianos utilizados, incluso a los antimicrobianos Ceftrioazona, Cefotaxima, Ampicilina/Sulbactam y Amoxacilina/Acido Clavulnico, los cuales son de uso frecuente en el tratamiento de las infecciones causadas por este germen. Se observ resistencia hasta de 100%, frente a frmacos como Amoxacilina y Cefotaxima. Llama la atencin en el HDL el elevado porcentaje de resistencia a los antibiticos: Imepenam (45%) y Meropenem (44%), de reciente aplicacin en nuestro medio. En los hospitales HUC y HVC la resistencia a estos dos agentes fue considerablemente inferior (23% y 20% respectivamente). Presencia de plsmidos La resistencia mltiple a antibiticos es un fenmeno frecuentemente asociado a la presencia de plsmidos transmisibles. Con el objeto de establecer una correlacin entre los patrones de resistencia encontrados en la mayora de los aislados de A. baumannii se examin la presencia de plsmidos entre los aislados de los hospitales HUC, HDL y HVC. El anlisis de extractos de DNA mediante electroforesis en geles de agarosa revel la presencia de plsmidos de alto peso molecular. En todas las cepas se observ una banda comn de aproximadamente 23 Kb y otras bandas de 9, 6, 4 y 2 Kb. Se encontr un patrn de bandas similar entre los aislados provenientes de los hospitales HDL y HVC. Esto sugiere la presencia de un plsmido de origen comn (23 Kb) en dos de los hospitales bajo estudio. Sin embargo, para establecer las relaciones de parentesco es necesario hacer estudios de incompatibilidad y de los patrones de restriccin enzimtica. Los resultados presentados sugieren que la presin ejercida por el uso de antibiticos en reas restringidas como las Unidades de Terapia Intensivas, ha favorecido la diseminacin y prevalencia de plsmidos que han ido acumulando determinantes de resistencia a una amplia variedad de antibiticos. En estos aislados se demostr la presencia de plsmidos, de diferentes tamaos moleculares a los cuales pudieran estar asociados los determinantes de resistencia identificados mediante pruebas de fenotipos. La presencia de plsmidos de tamaos moleculares similares en aislados provenientes de diferentes centros hospitalarios sugiere un alto grado de diseminacin de la resistencia mediada por plsmidos transmisibles. La identificacin y caracterizacin molecular de los aislados de A. baumannii y los plsmidos que contienen, permitir establecer las relaciones de parentesco y origen de la resistencia.