Mesa 6 B2 PRCTICA N 4

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(UNIVERSIDAD DEL

PER, DECANA DE AMRICA)

FACULTAD DE MEDICINA SAN FERNANDO

E.A.P. MEDICINA HUMANA

DEPARTAMENTO ACADEMICO DE CIENCIAS DINMICAS

PRCTICA N : 4 TTULO DE LA PRCTICA : DETERMINACIO DE GLUCOSA EN SUERO

ASIGNATURA MESA N GRUPO INTEGRANTES: : : : 6 B2 BIOQUIMICA

34 160 202 76

CASTILLO RAMOS, DIEGO ALEXIS QUISPE SOLIS, JUDITH SHERLY TAMARIZ DIAZ, GILDA CLAVELINA GARIBAY YALAN RAUL EDUARDO

2013

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I. II. Determinacin de glucosa en suero 1

Mesa 6 B2 PRCTICA N 4 III. IV. V. VI. VII. VIII. IX. X. XI. XII. XIII. XIV. XV. XVI. XVII. XVIII. XIX. XX.

XXI.
XXII. XXIII. XXIV. XXV. XXVI. XXVII. XXVIII. XXIX. XXX. XXXI. XXXII. XXXIII. XXXIV. Determinacin de glucosa en suero 2

Dedicatoria

Mesa 6 B2 PRCTICA N 4 I. MARCO TERICO INTRODUCCIN La glucosa una molcula de seis carbonos, es una hexosa con que se encuentra en sus formas aldehdica y enlica. Tiene un peso molecular de 180 g /mol. El principal origen de la glucosa est en la ingesta de los carbohidratos consumidos como alimentos y la mayora de ellos terminan convirtindose en glucosa en la sangre. Despus de las comidas, una parte de la glucosa se convierte en glucgeno para ser almacenado por el hgado y por los msculos esquelticos. El glucgeno se descompone gradualmente en glucosa y el hgado lo libera al torrente sanguneo cuando los niveles de glucosa disminuyen. El exceso de glucosa se transforma en triglicridos para el almacenamiento de energa. El cerebro necesita que las concentraciones de glucosa en la sangre se mantengan dentro de un margen determinado para funcionar normalmente. Las concentraciones inferiores a 30 (hipoglicemia) miligramos por decilitro (mg/dl) o superiores a 300 mg/dl pueden producir confusin, prdida de la conciencia e incluso la muerte, particularmente la hipoglicemia. El control de la glicemia, est finamente regulada por la insulina como agente hipoglicemiante y un grupo de hormonas hiperglicemiantes, entre las cuales destaca el glucagn. Tanto la insulina como el glucagn son producidas por el pncreas, en las clulas beta como alfa de los islotes de Langerhans de esta glndula; la accin conjunta de estas hormonas mantienen a la glucosa entre 70 a 110 mg/dL en sangre. La glucosa normalmente no se encuentra en la orina y cuando est es seal que ha rebasado el umbral renal, es decir la capacidad de este para reabsorber la glucosa filtrada; esto ocurre cuando los niveles de glicemia sobrepasan los 180 mg/dL; en este caso la glucosuria revela la falta de control de la hiperglucemia, asociada a la diabetes. En la prctica determinaremos la concentracin de glucosa (en mg %) en suero, utilizando el mtodo enzimtico en cual consiste que la glucosa por accin de la glucosa oxidasa produce cido glucnico y perxido de hidrgeno; este ltimo por accin de la peroxidasa oxida a la 4-aminofenazona generando la oxazona de color rosado, color que es proporcional a cantidad de glucosa y medible a 510 nm.

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II.

OBJETIVOS

Realizar la obtencin de suero. Desarrollar protocolos experimentales de trabajo. Obtener por clculos el factor de calibracin y la concentracin de la glucosa en sangre. Interpretar los resultados obtenidos en cada mesa para verificar si se desarroll correctamente el protocolo del experimento. Hacer una comparacin de los resultados obtenidos en la mesa de prctica, con los niveles de glucosa normales en sangre.

III.

MATERIALES 1. Pipetas de 1, 2 y 5 mL. 2. Gradilla y tubos de ensayo. Determinacin de glucosa en suero

Mesa 6 B2 PRCTICA N 4 3. Algodn, aguja estril descartable y ligadura. 4. Alcohol yodado. 5. Bao Mara 37C 6. Centrfuga clnica. 7. Espectrofotmetro a 510 nm 8. Solucin estndar de glucosa 10 mg/dL

9. Solucin de enzimas, glucosa oxidaza.

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IV. DESARROLLO DE LA PRCTICA PARTE EXPERIMENTAL 1. Obtencin de suero. Obtener una muestra de sangre por puntura venosa;

incubar a 37C por 10 min, centrifugar y obtener el suero libre de hemlisis.

2. Dilucin del suero. Usando dos tubos de ensayo pequeos (10x100), colocar en cada uno 0,3 mL de suero y agregar 2,7 mL de agua destilada, mezclar suavemente hasta la homogeneidad. Sern las MP1 y MP2.

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PROTOCOLO: En 4 tubos de ensayo agregar: Tubos B Agua destilada 0.5 MP diluida -Solucin estndar 10% -Reactivo enzimtico 1

ST 0.3 -0.2 1

MP 0.3 0.2 -1

MP 0.2 0.3 -1

Llevar los tubos a incubar en bao mara a 37C por 15 min Retirar los tubos de bao mara y agregarle 0.5ml de agua destilada mezclar y levar a leer al espectrofotmetro a 510 ni.

Glucosa oxidasa *Glucosa + O2 acido gluconico + H2O2 (Perxido hidrogeno) de

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Mesa 6 B2 PRCTICA N 4 peroxidasa * H2O2 + 4 aminofenazona + fenol oxazona La oxazona es El cromgeno que nos Dara La concentracin de glucosa en suero al llevarlo al espectrofotmetro. A 510 nm.

RESULTADOS En la tabla adjunta se muestran los datos obtenidos por cada una de las mesas: [MP]mg MESA B st MP MP [MP]mg% % 1 2 3 4 5 6 7 0.012 0.013 0.014 0.011 0.022 0.010 0.030 0.405 0.600 0.617 0.485 0.415 0.736 0.532 0.531 0.471 0.466 0233 0.451 0.549 0.385 0.365 0.612 0.735 0.323 0.653 0.684 0.517 78,96 81,91 103,761 124,6 95,38 109,88 110,92 47,99 76,10 109,292 128,00 82,49 112,62 92,407

V.

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VI.

DISCUSIONES -CONCLUSIONES

Discusin En esta prctica se busca medir la glucosa por lo menos de una manera indirecta a travs de la oxazona. Una vez obtenidas las muestras de sangre, se centrifugaron para que los elementos formes precipiten y podamos tener un suero libre. Es aqu donde haremos los anlisis de glicemia a travs de su comparacin con un estndar de concentracin de glucosa conocida. Debido a que la glucosa no es directamente medible a travs del espectrofotmetro, se utilizar un residuo de su reaccin a cido glucornico catalizada por la glucosa oxidasa, que es el perxido de hidrgeno. A travs de una peroxidasa, este perxido de hidrgeno ser convertido a 4-aminofenazona de color rosado que s es sensible de medirse con el espectrofotmetro y cuya lectura a 510 nm ser proporcional a la concentracin de glucosa. Se utilizan dos muestras problema pues como se sabe el protocolo es distinto al desarrollado en la prctica de laboratorio en el que se utilizan cantidades muchsimo ms pequeas de suero y usar muestras de tanto volumen podra no reflejar realmente la glicemia si se usara un solo tubo. Lo ideal sera que ambas muestras problema arrojen la misma concentracin de glucosa o por lo menos lo ms cercana posible. En nuestro caso tal vez el pipeteo o algn otro factor externo hizo variar la concentracin de 109 en el primero a 112 en el segundo. Conclusiones La glucosa no tiene absorbancia de luz pero puede ser medida por el mtodo fotocolorimtrico a travs de uno de sus derivados como es la 4-aminofenazona, pues la cantidad de esta ltima es proporcional a la concentracin de glucosa. El mtodo enzimtico es importante para poder obtener glicemia de manera ms precisa y ms confiable de una muestra de glucosa que los anteriores mtodos de obtencin de glicemia La diferencia entre ambas concentraciones pudo deberse a un problema en el pipeteo y al hecho de manejar cantidades pequeas. Debido a esto es que se minimizan los volmenes de las muestras en los laboratorios.

VII.

CUESTIONARIO Determinacin de glucosa en suero

Mesa 6 B2 PRCTICA N 4 1.- Compare las lecturas y las concentraciones de la MP y MP, comente sus resultados. Abs B Abs St Abs Abs [MP]mg% [MP]mg% MP MP 0,010 0,435 0,477 0,728 109,88 112,62 Como se observa, las concentraciones de MP y MP son 109 y 112 respectivamente, estos valores esta en lmite superior normal con respecto a los valores normales de concentracin de glucosa en sangre que estn entre 80 y 110. En clase, se discuti los resultados de todas las mesas y se lleg a la conclusin, que hubo errores en el pipeteo, en la correcta dilucin y el tiempo que se demor en conseguir la lectura, esto podra explicar los valores distantes que existan en algunas mesas. 2.- Esquematice el proceso de absorcin intestinal de la glucosa:

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Mesa 6 B2 PRCTICA N 4 3. Menciones los frmacos que puede elevar la glicemia. Remedios de la gripe con epinefrina Caramelos de catarro y jarabe con azcar Niacina eta-blokeantes Descongestionantes Puede elevar el nivel de glucosa en sangre. Alivio del catarro. Suplementos alimenticios. HTA Puede elevar el nivel de glucosa en sangre. En dosis altas puede elevar la glucosa en sangre. Normalmente baja pero algunas veces sube el nivel de glucosa en sangre. Puede ocultar los sntomas de hipoglucemias. Puede subir el nivel de glucosa en sangre. Puede subir el nivel de glucosa en sangre. Puede subir el nivel de glucosa en sangre. Puede subir el nivel de glucosa en sangre. Puede subir el nivel de glucosa en sangre. En altas dosis puede subir el nivel de glucosa en sangre. Puede subir el nivel de glucosa en sangre tomando sulfanilureas. Puede subir el nivel de glucosa en sangre. Puede subir el nivel de glucosa en sangre tomando sulfanilureas. Puede subir el nivel de glucosa en sangre tomando sulfanilureas. En altas dosis, puede subir el nivel de glucosa en sangre e incrementar las necesidades de insulina.

Corticoides (Cortisona, Prenisona, y otros) Diurticos Epinefrina, adrenalina Estrgenos Carbonato de litio Acido Nicotnico (Niacina) Penobarbital Fenitoina (Dilantn) Rifampicina Sulfanilureas H. Tiroideas

Asma, artritis y esclerosis mltiple. HTA, fallo cardiaco. Asma, reacciones alrgicas. Control de natalidad, sntomas de menopausia. Locura transitoria. Hipercolesterolemia Sedante, epilepsia. Epilpticos Tuberculosis Antibitico Inactividad o alteraciones de las glndulas tiroideas.

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4. Menciones los frmacos que puede disminuir la glicemia. Aspirina Aliviar el dolor. En altas dosis, puede bajar el nivel de glucosa, especialmente en personas tomando sulfanilureas. (1 Aspirina al da no es considerada una dosis alta). Parches de nicotina Dejar de fumar. Puede bajar el nivel de glucosa en sangre. Clorampenidol Antibitico Puede bajar la glucosa en personas que toman sulfanilureas. Clofibrina Niveles lipdicos Puede bajar la glucosa en personas altos. que toman sulfanilureas. Metildopa HTA Puede bajar el nivel de glucosa en sangre tomando sulfanilureas. Inhibidores de la Depresin Puede bajar el nivel de glucosa en Monoaminasa sangre. oxidasa 5.- Mencione los casos en que la glicemia esta elevada y en qu casos se encunetra baja: A) Hipoglucemia: Es el nombre que se da a la situacin en la que la concentracin de glucosa en la sangre (glucemia) es ms baja de lo normal (60 mg/dl). Se desarrolla ms frecuentemente en gente que se est administrando insulina o medicamentos hipo-glucemiantes para tratar la diabetes. Las personas diabticas sufren de hipoglucemia ocasionalmente; es una parte de la problemtica vivencial del diabtico. Cuando aparece la hipoglucemia ocurre una falta de energa en el organismo. La hipoglucemia, que en general es una reaccin a la insulina, puede aparecer incluso en ocasiones en las que hacemos todo lo que est a nuestro alcance para controlar la diabetes. Por tanto, aunque muchas veces no podamos evitarlo, es posible tratar la hipoglucemia antes de que empeore; razn por la cual, es importante saber qu es la hipoglucemia, cules son los sntomas y cmo tratarla. 1) Causas de la Hipoglucemia: - La hipoglucemia puede deberse a diversas causas. En personas sanas (no diabticas) suele ser consecuencia de un ayuno muy prolongado debido a que el organismo sigue utilizando la glucosa una vez que ya no queda glucgeno en el hgado para producirla. Tambin aparece en casos de trastornos hepticos y ligada al excesivo consumo de alcohol. Determinacin de glucosa en suero 12

Mesa 6 B2 PRCTICA N 4 En personas que padecen diabetes mellitus es muy habitual. En este caso, suele deberse a un fallo en la administracin de insulina exgena o de medicamento oral antidiabtico. Si se administran cuando no se ha comido lo suficiente, los niveles de glucosa pueden bajar hasta producir una hipoglucemia severa. En este tipo de pacientes tambin se puede producir por un exceso de ejercicio unido a una escasa ingesta de alimentos ya que la actividad fsica promueve la utilizacin de glucosa por los tejidos. Dosis de insulina o hipo-glucemiantes demasiado alta. Saltarse una comida. 2) Sntomas de la Hipoglucemia: Los sntomas varan de una persona a otra pero los ms comunes son el temblor en las manos y pies, el adormecimiento y el cansancio; a menudo aparece una transpiracin fra y hambre. El color de la piel plida y nerviosismo existente, mal humor y visin borrosa. Si la hipoglucemia no se corrige, seguirn otras sensaciones como dolor de cabeza, confusin, sensacin de hormigueo en la boca, dificultad al andar, nuseas, taquicardia, etc. Para el familiar cercano, el diabtico que reacciona con la insulina, aparece frecuentemente confuso, rudo, poco cooperativo y con poca coordinacin motora; es como si estuviera intoxicado. En casos extremos, aparece inconsciencia, convulsiones, coma diabtico e incluso muerte (shock insulnico). B) Hiperglucemia La hiperglucemia es el trmino tcnico que utilizamos para referirnos a los altos niveles de glucosa (azcar) en la sangre. El alto nivel de glucemia aparece cuando el organismo no cuenta con la suficiente cantidad de insulina o cuando la cantidad de insulina es muy escasa. La hiperglucemia tambin se presenta cuando el organismo no puede utilizar la insulina adecuadamente. En ayunas la glucosa sangunea de una persona no debe exceder de 105 mg/dl. Mantener durante aos los niveles altos de glucosa en la sangre contribuye a agravar seriamente la diabetes con complicaciones a largo plazo. Todas las personas con diabetes sufren de hiperglucemia de vez en cuando, pero es bueno tratarlo inmediatamente, ya que puede ser un problema serio. La hiperglucemia constituye una de las principales causas de muchas de las complicaciones que sufren las personas con diabetes. Por ese motivo, es importante saber qu es la hiperglucemia, cules son los sntomas y cmo tratarla. Hay muchas cosas que pueden causar hiperglucemia. Por ejemplo, si usted tiene diabetes tipo 1, tal vez no se haya inyectado la cantidad suficiente de insulina. Si usted sufre de diabetes tipo 2, quizs su organismo s cuente con la cantidad suficiente de insulina, pero no es tan eficaz como debera serlo. El problema tal vez sea por la que se aliment ms de lo normal o realiz menor actividad fsica de la programada. El estrs que provoca una dolencia como, por ejemplo, un resfro o una gripe tambin podra ser la causa. Otras clases de estrs, tales como los conflictos familiares, los problemas en la escuela o los problemas de pareja, tambin podran causar hiperglucemia. As como, algunas enfermedades como, gripe neumona, infeccin urinaria o dental, abscesos; cirugas; accidentes (traumatismo, quemados); tensin emocional; uso de corticoides. Determinacin de glucosa en suero 13

Mesa 6 B2 PRCTICA N 4 La hiperglucemia puede complicarse con la aparicin de cuerpos cetnicos en la sangre (cetoacidosis); sobre todo cuando la hiperglucemia pasa los 250 mg /dl. 1) Sntomas: Las seales y/o sntomas incluyen: Alto nivel de azcar en la sangre. Altos niveles de azcar en la orina, aumento de la sed y necesidad frecuente de eliminar orina. Prdida de peso. Visin borrosa. El medir con frecuencia el nivel de azcar en la sangre es una de las medidas preventivas que puede tomar para mantener la diabetes bajo control. Consulte con su mdico con qu frecuencia debe controlarla y cules deben ser sus niveles de glucemia. Para evitar otros sntomas de la hiperglucemia es necesario controlar y tratar los altos niveles de azcar en la sangre, sin perder tiempo. Es importante tratarla apenas se detecte. Si no lo hace, puede sufrir una afeccin denominada cetoacidosis, comnmente llamado coma diabtico. 6.- Determine los valores de glicemia .Si el St usado es mismo de su prctica y la muestra se diluy 1/20 y se us a.i ml de muestra diluida, 0.3 agua y 1ml de Rvo.
St St Glucosa 10 mg% MP diluida Agua destilada Reactivo Enzimtic o 0.2 mL MP 0.1 mL

0.3 mL

0.3 mL

1 mL

1 mL

[ MP ] = mg St Mp 100
St Vr
La absorbancia de la MP 0.060 la asumiremos que ya esta restada del blanco

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[ MP ] = 0.02 mL 0,060
0,571

100 0.005mL
[MP] =

42.031 mg / dL

7.- Mencione las complicaciones que presentara un recin nacido de una madre diabtica. Hipoglucemia Es la complicacin ms frecuente del HMD (10-50%) sobre todo en RN de pesos elevados y prematuros. Hipocalcemia Se detecta en el 20-40% de los HMD. Aparece entre las24 y 72 horas de vida. Aunque su etiologa no se conoce bien, se atribuye, en parte, a un hipoparatiroidismo funcional transitorio por lo que coexiste, en ocasiones, con hipomagnesemia. 2. Peso elevado para la edad de gestacin /Macrosoma Con una incidencia del 15-45% de los HMD. La glucosa fetal se mantiene 20-30 mg/dL por debajo de la materna. Durante las primeras 20 semanas los islotes pancreticos son incapaces de responder a la hiperglucemia, pero despus de este perodo la respuesta a la hiperglucemia mantenida es la hiperplasia de los islotes y el incremento de niveles de insulina y factores proinsulina (IGF-1, IGFBP-3) que actan estimulando el crecimiento fetal. A consecuencia de la macrosoma son ms frecuentes en estos nios la asfixia perinatal y los traumatismos durante el parto: fracturas de clavcula, parlisis braquial. 3. Retraso de crecimiento intrauterino

En estos RN la hipoglucemia es ms frecuente entre las 6 y 12 horas de vida y es secundaria a la disminucin de los depsitos de glucgeno.
4. Inmadurez funcional A la insulina se le ha atribuido un efecto de retraso sobre la maduracin morfolgica y funcional de algunos rganos (pulmones, paratiroides e hgado) quiz por antagonismo con el cortisol. Por ello la mayor incidencia de membrana hialina y de ictericia en este grupo de pacientes. 5. Malformaciones

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En el hijo de madre con diabetes pregestacional las malformaciones mayores son de 2 a 10 veces ms frecuentes que en la poblacin general, pero la incidencia no est aumentada en el hijo de madre con diabetes gestacional. Las malformaciones ms frecuentes son: neurolgicas (anencefalia o espina bfida), cardacas (comunicacin interventricular, transposicin de grandes arterias, coartacin de aorta), sndrome de regresin caudal en grado ms o menos importante, intestinales (colon izquierdo hipoplsico), renales (agenesia), entre otros. 6. Problemas hematolgicos

Poliglobulia (30%). La hiperglucemia y la hiperinsulinemia crnicas estimulan el metabolismo basal y el consumo de oxgeno, lo cual aumenta la produccin de eritropoyetina y la de glbulos rojos fetales; por ello estos RN tienen focos extramedulares de hematopoyesis y eritroblastos abundantes.
Trombocitopenia: habitualmente por ocupacin medular. Hiperbilirrubinemia secundaria a varios factores: hemlisis asociada a la poliglobulia, inmadurez heptica, etc. Dficit de hierro (65%) por redistribucin. Puede incrementar el riesgo de alteracin del neurodesarrollo.

BIBLIOGRAFIA Dvila-Esqueda, Ma. Eugenia;Silva-Ruiz, Rosendo;Martnez-Morales, Flavio;RiveraBerlanga, Yazmin / Asociacin Mexicana de Bioqumica Clnica, A.C. Mxico; Vol. 25, Nm. 3, julio-septiembre, 2000, pp. 75-78. Universidada de Bogota Jorge Tdeo Lozano/ http://www.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basicas/bioquimica/guia_1_3. pdf

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