Qu es la tecnologa del ADN recombinante? ADN recombinante es una molcula que proviene de la unin artificial de dos fragmentos de ADN.

Por lo tanto, la tecnologa de ADN recombinante es el conjunto de tcnicas que permiten aislar un gen de un organismo, para su posterior manipulacin e insercin en otro diferente. De esta manera podemos hacer que un organismo (animal, vegetal, bacteria, hongo) o un virus produzca una protena que le sea totalmente extraa. Estas tcnicas se emplean normalmente para la produccin de protenas en gran escala, ya que podemos hacer que una bacteria produzca una protena humana y lograr una superproduccin, como en el caso de la insulina humana, que actualmente es producida por bacterias en grandes recipientes de cultivo, denominados biorreactores. Como las bacterias se multiplican muy rpidamente y pueden expresar grandes cantidades de protenas, es posible lograr una sobreproduccin de la protena deseada. A esto justamente se dedica labiotecnologa, es decir a la utilizacin de organismos vivos o de sus productos con fines prcticos. El desarrollo de la tecnologa del ADN recombinante fue posible gracias a varias lneas de investigacin: 1) el conocimiento de las enzimas de restriccin, 2) la replicacin y reparacin de ADN, 3) la replicacin de virus y plsmidos y 4) la sntesis qumica de secuencias de nucletidos. Cmo cortar y pegar el ADN? Tijeras moleculares: enzimas de restriccin En 1975 Daniel Nathans y Hamilton O. Smith descubrieron un tipo de protenas las enzimas endonucleasas o enzimas de restriccin- que actan como tijeras moleculares, cortando la doble cadena de ADN a travs del esqueleto de fosfatos sin daar las bases. El descubrimiento de estas enzimas condujo a dichos microbilogos al Nobel en 1978 y dio origen a la ingeniera gentica. Las enzimas de restriccin son producidas por bacterias como mtodo de defensa contra virus y degradan el ADN extrao. A su vez, el propio genoma bacteriano est protegido contra sus enzimas de restriccin mediante metilaciones (es decir, el agregado de un grupo metilo [-CH3)]) en un tomo especfico de ciertos nucletidos. Estas molculas son indispensables para la ingeniera gentica, ya que producen fragmentos que se pueden unir entre s fcilmente (con la ayuda de un pegamento molecular: la enzima ligasa). Las enzimas de restriccin cortan dejando extremos cohesivos o romos. Los extremos cohesivos son generados cuando la enzima corta las dos hebras asimtricamente, dejando los extremos de cada hebra de simple cadena complementarios entre s. Por otro lado, los extremos romos son generados cuando la enzima corta las dos hebras por el mismo lugar, generando dos extremos doble cadena.

Figura 1. Enzimas de restriccin. Este tipo de endonucleasas puede dejar dos tipos de extremos. En el primer caso, el corte genera nuclotidos de simple cadena llamados extremos cohesivos. Estos extremos se pueden unir por medio de otra enzima, la ADN ligasa. En el segundo caso, se generan extremos doble cadena (extremos romos). Estos extremos tambin pueden ser unidos con la ayuda de una enzima ligasa pero, como no los extremos no son complementarios, la unin ser ms inespecfica. Las enzimas de restriccin permiten cortar el genoma de cualquier organismo en pequeos fragmentos llamados fragmentos de restriccin. La coleccin de miles o millones de estos fragmentos se llama biblioteca gnica.

--CLON: Grupo de clulas ou organismo xenticamente idnticos. --PLSMIDO: Os plsmidos son pequenas molculas de ADN (extracromosmico)circular ou lineal que se replican e trancriben independentemente do ADNcromosmico.Estn presentes en moitas bacterias e nalgunhas ocasins en levaduras. Os plsmidos son molculas pequenas de ADN circular (entre dous y varios centos de kilobases) que se replican de forma autnoma e independente do cromosoma da clula. Son moi comns en bacterias e algns deles, os mis pequenos, existen nas clulas bacterianas en nmero elevado (ata 100 copias/clula). Os plsmidos son unha ferramenta fundamental na Bioloxa Molecular e na Enxeera Xentica xa que pdense usar como "vectores" para introducir neles calquera fragmento de ADN de interese e, dese xeito, amplificalo de forma natural dentro da bacteria na que o plsmido se replica. Se teen desenvolvido un gran nmero de mtodos para a purificacin de ADN plasmdico de bacterias e todos eles implican invariablemente tres pasos: 1. Crecemiento da estirpe bacteriana portadora en medio de cultivo

2. Recollida e lise das bacterias 3. Purificacin do DNA plasmdico

--PCR: http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_en_cadena_de_la_polimerasa -TRANSFORMACIN BACTERIANA: Nesta prctica realizarase unha transformacin xentica. Un xen un fragmento de ADN que provee as instruccins para a biosntese dunha (ou codifica para unha) protena. Esta protena dalle a un organismo unha caracterstica particular. A transformacin xentica ocorre cando unha clula incorpora e expresa dentro dela un novo pedazo de material xentico (ADN). Esta nova informacin xentica moitas veces proporciona organismo unha nova caracterstica que pode ser identificada logo de que tea lugar a transformacin. Unha transformacin xentica polo tanto un cambio na constitucin xnica dun organismo e conleva a insercin de un ou mis xenes en orde de cambiar as caractersticas do mesmo.

ESTREMOS COHESIVOS O PEGAENTOS: Los extremos cohesivos se generan cuando una enzima de restriccin corta las dos hebras del ADN asimtricamente,dejando los extremos de cada hebra de simple cadena completamentarios entre si.

Si usamos la misma enzima de restriccin para cortar diferentes cadenas de ADN,obtenemos fragmentos de los dos tipos de ADN que se pueden juntar de forma fcil por complementariedad de sus dos extremos cohesivos.Esta es la va para obtener ADN recombinante y para la produccin de libreras genmicas.

GEL DE POLIACRILAMIDA.QUE INDICA LA DISTANCIA QUE SEPARA LAS BANDAS,XQ UNAS SON MS GROSAS QUE OTRAS.

Las protenas forman bandas segn su tamao,si conocemos el tamao de las protenas de la muestra que se corre se puede determinar e tamao de la protena estudiada por la distancia recorrida en el gel.Las protenas ms grandes se quedan por encima y las ms pequeas debajo,quedando las medias entre ellas y ordenadas segn su tamao. Referente al grosor,el grosor de la banda obtenida depender de la cantidad de protena que se halla inyectado en la cubeta del gel,cuanto mayor sea la cantidad de protena ms ancha ser la banda. IMNS MOLECULARES

Las imanes moleculares son sondas y anticuerpos, que actan como imanes moleculares. Las sondas son fragmentos de ADN o ARN de simple cadena complementarias a la regin de ADN o ARN que queremos encontrar. Contienen alguna marca que permite revelar su unin (hibridacin) a la secuencia elegida y de esa manera revela presencia de la regin buscada. Su finalidad es la de localizar fragmentos determinados en el genoma, ya que de otra manera, localizar un gen determinado en el genoma resulta muy complicado, tanto como encontrar una aguja en un pajar. Hasta hace relativamente poco, encontrar un gen en un genoma era como encontrar una aguja en un pajar. Si tuviramos que realizar dicha tarea, probablemente usaramos un imn para atraer la aguja (siempre y cuando esta sea de metal y posea propiedades magnticas). De manera anloga, hoy da podemos encontrar genes o protenas usando, respectivamente, sondas y anticuerpos, que actan como imanes moleculares. Las sondas son fragmentos de ADN o ARN de simple cadena complementarias a la regin de ADN o ARN que queremos encontrar. Contienen alguna "marca" que permite revelar su unin (hibridacin) a la secuencia elegida y de esa manera revela presencia de la regin buscada. Se puede tambin utilizar colonias de bacterias con ADN recombinante con una tcnica similar, pero que usa anticuerpos en vez de sondas. Se comienza por una colonia de bacterias que contengan y expresen el gen de ADNc. Luego se trata las bacterias con un anticuerpo marcado, que se unir a la colonia que sintetice la protena deseada. De esta manera se puede localizar el gen en cuestin y clonarlo para obtener mltiples copias. PCR

El plsmido pglo est compuesto de tres genes que se juntan mediante la tecnologa de ADN recombinante.Son los siguientes -bla:Codifica para la enzima beta-lactamosa? Que ofrece resistencia a las bacterias dado que degrada os antibiticos de la familia beta-lactamicos como ampicilina.

Ara c regula la expresin de la GFP cabe decir que este gen solo se expresa en presencia de arabinosa Gpf gen que codifica la protena verde fluorescente Ori origen de replicacion

-Tcnicas que permiten aislar un genTECNOLOGA DEL ADN RECOMBINANTE -ADN Recombinante es unin artificial de 2fragementos de ADNVERDADERO. -Las enzimas de restriccin son producidas por bacterias como mtodo de defensa contra virusy degradan el ADN extraoVERDADERO -En la fase exponencial de crecimiento bacteriano..LAS BACTERIAS SE MULTIPLICAN A UNA VELOCIDAD CONSTANTE. -Visualizacin de ADN.SOLUCIN DE PRECIPITACIN. 1-Equilibrado de columna 2-Recoleccin celulas transformadoras 3- Resuspension de pellet 4lisado celular 5-Precipitacin restos celulares 6-Retencion plsmidos 7.Lavado columna 8Elucion 9-Precipitado y lavado plsmido 10-Resuspension de plasmidos. -Tecnica de investigacin da herdanza matrilinealVERDADEIRO -Eucariotas/bicatenario/celulascadenas?/transferentes/ribosomicos/operon?/intron/exon/matrilineal/selectivo/materna/nai. -SO,MT,ST,MO -2/10 7/10 1/10 11/20P 9/20Q -Para aumentar la cantidad de adn bacteriano incubar bacterias medio adecuado.

CUESTIONARIO BIOFUEL Que tipo de molcula un enzima? Normalmente as (ou os) enzimas son protenas e como tales estn formadas por aminocidos. Tamn existen algunhas enzimas que estn formadas por nucletidos. Porque a forma das enzimas importante en relacin sa funcin? O centro activo das enzimas precisa ter a forma correcta para que a unin co seu sustrato sexa posible. A estrutura primaria dunha enzima determina o resto de niveis estructurais (estructura secundaria, terciaria e, cando existe, cuaternaria). Os grupos qumicos presentes nos aminocidos interactan formando pontes de hidrxeno, ligazns inicas, covalentes, de Van der Waals para determinar a configuracin global da protena/enzima. As cadeas laterais dos aminocidos presentes no centro activo da enzima son os mis importantes. Esto debido a que eses grupos qumicos son os responsables de modificar as densidades electrnicas para crear ou romper ligazns no sustrato. Si eses aminocidos non estn na orientacin axeitada, o centro activo non quen de catalizar a reaccin. Como pode unha enzima aumentar a velocidade dunha reaccin? As enzimas aumentan a velocidade das reaccins reducindo as enerxas de activacin. A enerxa de activacin a cantidade de enerxa requerida para levar sustrato estado de transicin. Esto provoca que a reaccin tea lugar mis rpidamente dado que se precias menos enerxa para que cada molcula de sustrato sexa convertida nos productos.

 Que enzima est implicada na producin de biodisel? Mis que de enzimas, hai que falar de catalizadores porque na producin industrial de biodisel adoitan usarse coma catalizadores soda custica ou metilato sdico, ambos en solucin metanlica. Na nosa prctica imos usar Celobiasa, un tipo de celulasa, ou beta-glucosidasa. Cal o producto natural de esa enzima? Glucosa Cal o sustrato natural de esa enzima? Celobiosa, un disacrido (beta-glucopiranosil, beta(1-4) glucopiranosa) Como se pode determinar a cantidade de producto que rende a reacin por unidade de tempo? Cando a celobiasa rompe o sustrato artificial o prodto vira a amarelo en presencia de unha solucin bsica. A cantidade de amarelo pdese medir con un espectrofotmetro comparando con mostras estndar de cantidades de producto coecidas. Como se pode medir a tasa de formacin de producto? A cantidade de producto producida por unidade de tempo calclase determinando a pendiente incial da curva obtida co produto como funcin do tempo. Para determinar a velocidade de reaccin nun punto calquera, tmase a diferencia sobre o eixo Y (diferencia na cantidade de producto entre dous instantes) e divdese polo intervalo de tempo. Esto proporciona a velocidad en nmoles/min.

Hidratos de carbono https://docs.google.com/document/d/1JqM5_ePOrctbgcrUkTllCLtYQYbhT58qzvlHLTWxhlA/pr eview