DETERMINACIN DE MICROORGANISMOS INDICADORES DE CONTAMINACIN FECAL EN EL YACIMIENTO HDRICO DEL HACINAMIENTO BELLO ORIENTE

Realizado por: Carolina Mateus Herrera Heidy Daniela Mora Delgado Mara Victoria Herrera Camila Espaa

Docente Piedad Gmez

Asignatura Microbiologa

Universidad de Medelln Facultad de Ingenieras 2012

TABLA DE CONTENIDO

Pregunta problema 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) Introduccin Objetivos Justificacin Estado del arte Marco terico Materiales y mtodos Impactos ambientales de las descargas de las aguas residuales en los yacimientos hdricos 8) Glosario 9) Anexos: Paginas 4,6,7 10) Bibliografa

~2~

Pregunta problema: Establecer si el agua de los yacimientos en las invasiones de Bello Oriente es apta o no para el consumo humano a travs de determinacin de microorganismos indicadores de contaminacin fecal. 1) INTRODUCCIN El crecimiento de la poblacin a nivel mundial y el aumento del uso del agua para diferentes actividades, ha incrementado los niveles de contaminacin. Esto ltimo est muy relacionado con los vertidos de origen domstico, industrial, hotelero, y recreativo, a los cuerpos de agua, estos tambin se pueden transportasen subterrneamente, ocasionando as la contaminacin de los suelos, y de yacimientos hdricos ubicados en partes cercanas a los entes generadores de dicha problemtica. En el caso de los residuos de origen domstico, la carga contaminante est representada por altos porcentajes de materia orgnica y microorganismos de origen fecal. Estos microorganismos son causantes de graves enfermedades, que generan altos porcentajes de morbi-mortalidad en la poblacin. El control de la calidad microbiolgica del agua de consumo y de vertido, requiere una serie de anlisis dirigidos a determinar la presencia de microorganismos patgenos. (Diaz, 2003) El agua para el consumo humano debe ser de excelente calidad, la cual inicia desde su origen natural, hasta la planta de tratamiento, y su llegada al servicio domiciliario (Salgado, 2006). La determinacin de microorganismos intestinales normales como indicadores de contaminacin fecal, en lugar de patgenos, es un principio de aceptacin universal en la vigilancia y evaluacin de la seguridad microbiana en los sistemas de abastecimiento de agua (Pajares, 2002). Los coliformes fecales son un subgrupo de los coliformes totales, capaz de fermentar la lactosa a 44.5C. Aproximadamente el 95% del grupo de los coliformes presentes en heces fecales, estn formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los coliformes fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminacin fecal. Los coliformes fecales y E. coli en particular, se han seleccionado como indicadores de contaminacin fecal debido a su relacin con el grupo tifoide-paratifoide y a su alta concentracin en diferentes tipos de muestras. (Red Iberoamericana de Potabilizacin y Depuracin del Agua) Las pruebas estndar para el grupo coliformes pueden hacerse mediante la tcnica de fermentacin de tubos mltiples clsicas (a travs de las fases supuestas y confirmatoria o prueba completa) o rpida (mediante el uso de sustratos definidos) o utilizando la tcnica de filtro de membrana. Su uso se ha restringido para aguas tratadas y aguas minerales. Para aguas superficiales o para evaluar la eficiencia de una planta de potabilizacin debe usarse los coliformes fecales. Solamente deber recurrirse a los coliformes totales si no hay condiciones para cuantificar los coliformes fecales. (Diaz, 2003).

~3~

2) OBJETIVOS GENERAL: Determinar mediante mtodos microbiolgicos la presencia de indicadores de contaminacin fecal identificando as mismo si la calidad sanitaria del agua es viable para un futuro consumo en el hacinamiento de Bello Oriente. ESPECFICOS: Evaluar la calidad sanitaria a partir de las muestras de agua obtenidas en Bello Oriente identificando as mismo la presencia de microrganismos indicadores de contaminacin fecal. Identificar las diferentes tcnicas utilizadas para la determinacin de microrganismos indicadores de contaminacin fecal en una muestra. Este objetivo se siempre y cuando hagan una comparacin terica de los diferentes mtodos utilizados para la determinacin de este parmetro, as que debe aparecer en el trabajo. Analizar e interpretar los resultados que buscan determinar la calidad bacteriolgica de la muestra obtenida en los yacimientos hdricos de Bello Oriente. 3) JUSTIFICACIN A medida que la poblacin crece, la expansin de las ciudades en las zonas suburbanas aumenta notablemente generado consigo problemticas ambiental como lo es el declive en la calidad de los recursos. Estas zonas por ser invasiones no presentan el servicio de un acueducto, por lo tanto no cuentan con el recurso hdrico potabilizado, tampoco tienen correcto manejo de la disposicin de estas aguas residuales, las comunidades se ven expuestas a muchas enfermedades causadas por la presencia de microorganismos patgenos para el hombre. Este proyecto se realiza con el fin de determinar microorganismos indicadores de contaminacin fecal en el yacimiento hdrico del hacinamiento bello oriente, para as lograr establecer un posible grado de contaminacin de estas y concluir su viabilidad para el consumo humano. 4) ESTADO DEL ARTE De enero a junio de 1993 se llevaron a cabo tres muestreos del agua procedente de los 35 suministro que abastecen a la poblacin de la cuidad de Campeche, dicha investigacin fue realizada por el Instituto Nacional de Salud Publica de la Ciudad de Mxico supervisada por los investigadores Anglica Patricia Isaac Claudio Manuel Lezama Pedro Pablo Ku Paulino Tamay Segovia. La determinacin de coliformes fecales se llevo a cabo mediante la tcnica defermentacin en tubos mltiples, emplendose series de 7 tubos, cinco de ellos inoculados con 10 ml, uno con 1 ml y otro con 0.1 ml. Para la prueba presuntiva y confirmatoria de organismo coliformes se efectu por medio de los mtodos de Eijkman y Mackenzie. Los resultados de la investigacin indicaron que las muestras del 60 por ciento de los suministros presentaron niveles de organismos coliformes no permisibles para aguas de consumo humano. La contaminacin de los pozos con microorganismos, que posiblemente incluyen la presencia de patgenos intestinales, es el resultado de una

~4~

deficiente calidad sanitaria de los suministros y de su entorno, lo que representa un riesgo potencial para la salud de la poblacin. Entre los aos 2003-2006. se llevo a cabo el estudio de Evaluacin Del Contenido De Oxigeno Y Coliformes Fecales en el Agua Del Rio El Tunal En Durango Mexico, la zona de estudio posee descargas difusas por efecto de terrenos de cultivo, se efectuaron muestreos simples de las 11 y las 15 horas, se estableci que el agua residual de la ciudad de Durango, es la que ms altera la calidad del agua del ro el Tunal y que es mejorada aguas abajo por la presencia de espacios naturales como el Humedal de Mlaga.De los 18 sitios 8 se presentaron como anxicos (bajo contenido de oxigeno), mismos que mostraron cantidades no permisibles de coliformes fecales, lo cual indica que han recibido descargas de agua residual domstica. (PREZ-LPEZ, 2003) 5) MARCO TERICO Localizacin La identificacin de Coliformes se llevara a cabo en Bello Oriente este lugar queda entre Arvi y Santo Domingo Sabio, la problemtica presente en este lugar es que las casas no tiene servicio de acueducto, y para abastecerse de agua la obtienen de unos yacimientos hdricos. Aparte de que las personas que habitan all son desplazadas y otras han heredado estos terrenos "ilegalmente". A partir del programa satelital de Google Earth se logro conseguir la cartografa de la zona para delimitar los yacimientos, tambin se seleccionaron las viviendas que estn localizadas cerca a los yacimientos y que sern objeto de visita.

Anexo #1 imagen tomada de Google Earth el 13 de Sept 2012 Los yacimientos hdricos nacen en Parque Regional Ecoturstico Arv, cerca a este lugar se encuentra ubicada una zona hotelera y recreativa (estos en cierto modo pueden ser entes generadores de contaminacin hdrica ya que estas aguas se pueden transportar subterrneamente, ocasionando as la contaminacin de los suelos, y de yacimientos hdricos que se encuentren cercanos a las personas que habitan las invasiones). Despus de media hora de trayecto caminando desde Arvi hacia Santo Domingo Savio se encuentra ubicada la zona en la que se determinara la presencia de microorganismos indicadores de contaminacin fecal.

~5~

All se cuenta con una divisoria veredal; una parte de esta zona montaosa se encuentra en la actualidad deteriorada, debido a las invasiones por viviendas, y mal manejo de las tierras debido al deficientemente proceso que se lleva a cabo con la agricultura, generando as inestabilidad de los suelos, y con alta susceptibilidad a fenmenos erosivos. IMPACTOS AMBIENTALES DE LAS DESCARGAS DE LAS AGUAS RESIDUALES EN LOS YACIMIENTOS HIDRICOS Los vertimientos directos de las aguas residuales contaminan el recurso hdrico (superficial y subterrneo), el suelo y el aire, lo cual a su vez produce efectos nocivos sobre los componentes ambientales flora, fauna y el hombre. (Ambiente, 2004) Las corrientes naturales tienen la ventaja de oxigenarse y diluir los largo de su recorrido, influyendo en este proceso el caudal, concentracin de los contaminantes la cual puede llegar a ser tan contaminacin del recurso produciendo los siguientes impactos. DESARROLLO ECONMICO, 2000) contaminantes a lo las pendientes, la alta que genera la (MINISTERIO DE

PRODUCCIN DE OLORES OFENSIVOS: siendo este un impacto negativo para la salud, relacionado principalmente con trastornos del apetito, nuseas y otros malestares, adems del inconformismo que tiene la comunidad con esta problematica CONTRIBUCIN CON MATERIA ORGNICA AUMENTANDO LA DBO: El vertimiento de aguas residuales a las fuentes hdricas, teniendo en cuenta de este modo que los yacimientos son los que se afectan inicialmente, provocando de este modo el deterioro de la calidad del agua de la fuente receptora por el incremento de la materia orgnica. Igualmente se produce disminucin de la fauna acutica y la flora subacutica. CONTAMINACIN FECAL: causada por heces humanas, el ganado, marraneras, avcolas, donde la presencia de organismos patgenos produce enfermedades. (SALUD, 2009) 6) MATERIALES Y METODOS Se realizaron consultas para la recopilacin de informacin en estudios elaborados anteriormente en otros territorios del valle de aburra. A continuacin se describe el proceso que se llevara a cabo para analizar la informacin. Un buen organismo indicador debe ser fcilmente aislable, identificable y enumerable en el menor tiempo posible y con el menor coste. Debe ser capaz de crecer en los medios de cultivo empleados, estar distribuido al azar en las muestras y ser resistente a la inhibicin de su crecimiento por otras especies. (Lopz, 2005) Por esta razn el anlisis bacteriolgico de coliformes debe de cumplir ciertas caractersticas que son de vital importancia para que los resultados que se esperan obtener tengan un grado de confiabilidad mayor, los ms representativos son: Estererilizacion de los frascos en los cuales se depositaran las muestras representativas, para evitar algn tipo de error a la hora del anlisis. La muestra no debe demorar ms de 24 horas sin almacenamiento en caso tal de que a la hora de obtenerla pasen menos de 6 horas, debe ser almacenada entre

~6~

0 y 10C; si por lo contrario pasan ms de 6 horas debe almacenarse entre 0 y 4C. Materiales: Mechero. Pipeta 10.0 ml Esteril Pipeta 1.0 ml Estril Lmpara de luz ultravioleta. Asa bacteriolgica. Gradilla. Incubadora a 35C. Cajas petri. Muestra. Lentes de seguridad.

Se seleccionaron 3 puntos de muestreo en el tramo de estudio: 1) En el inicio de yacimiento hdrico. 2) Otra muestra se tomara unas 8 casas ms abajo de donde se encuentra el yacimiento. 3) La ltima muestra se obtendr donde comienza la parte de acueducto "legal" La toma de la muestra de agua se realizara a unos 3 u 5 cm de profundidad, evitando remansos que se encontraban al lado del yacimiento. De cada sitio elegido se tomara la muestra utilizando frascos de vidrio previamente esterilizados de boca ancha y con capacidad aproximada de 100.0 ml. Una vez tomada la muestra se rotula y se transporta al centro de laboratorios de la UDEM donde debe procesarse antes de 24 horas. PRUEBAS PARA LA DETERMINACIN DE COLIFORMES Prueba rpida Debido a la imperante necesidad de buscar alternativas ms rpidas de anlisis microbiolgicos para determinar la presencia de bacterias del grupo coliforme y E. coli en diferentes tipos de muestra se ha generado otras alternativas entre ellas est la de caldo fluorocult LMX el cual permite la determinacin simultanea de las bacterias coliformes totales y E coli. Este medio contiene dos sustratos, el X gal, el cual es clivado por la enzima B-D-galactosidasa exclusiva de las coliformes totales, liberando el cromgeno que se manifiesta produciendo un cambio de color amarillo inicial del medio a un color verdoso claro. Adicionalmente el medio posee un sustrato fluorogenico conocido con el nombre de MUG, el cual es clivado por la enzima -D glucoronidasa, especifica de E. coli liberando un compuesto fluorescente a la luz ultravioleta de longitud de onda de 366 nm generando una fluorescencia azul intensa, as los coliformes totales de los fecales (E. coli).Para dar un resultado preciso, confiable y rpido sobre el tipo de contaminacin. Para determinar la presencia de E coli en los tubos fluorescentes al medio se le ha incluido triptfano el cual permite hacer la prueba adicional de produccin de Indol, adicionando 3 gotas del reactivo de kovacs a aquellos tubos que den el resultado positivo para fluorescencia confirmando la presencia de E coli con la aparicin del anillo rojo en la superficie del cultivo.

~7~

Anexo #2 imagen tomada de Google el 13 de Sept de 2012 PROCEDIMIENTO: La tcnica de deteccin de bacterias coliforme totales y fecales es similar a la de los tubos mltiples, en la cual el anlisis se realiza sobre 9 tubos de ensayo, en este caso con medio fluorocult LMX, se inoculan de igual forma que los tubos mltiples en 3 series de 3 tubos con diluciones sucesivas 10, 1.0, 0.1 ml. (Perez, 2008). Explicar cmo se lleva a cabo el procedimiento: son 9 tubos con agar fluorocult, a los tres primeros que tienen concentracin doble se les adiciona 10 ml de muestra, a los tres siguientes de concentracin simple se les adiciona 1 ml de muestra y a los tres siguientes de concentracin simple. Esta tcnica se va a llevar a cabo? La tcnica de membrana filtrante fundamentalmente es la filtracin de un volumen conocido de la muestra a travs de una membrana de poros muy pequeos (0.22 a 0.45 um de dimetro) que pueden retener los microorganismos. Las bacterias atrapadas en los poros pueden crecer localmente y formar una colonia observable a simple vista. Se supone que en cada poro entro solo una bacteria. La filtracin se realiza con un dispositivo (embudo de filtracin) estril, que puede ser plstico, de vidrio o de acero inoxidable, montado sobre un frasco receptor con un soporte para la membrana de filtracin. La esterilizacin del equipamiento se hace por ebullicin (30 min). El sistema de filtracin se completa con una bomba de succin. Antes de la filtracin se preparan los medios de cultivo y despus de esterilizarlos se vierten en placas de petri, tambin esterilizadas. El medio de cultivo debe ser especfico para la bacteria que se desea cuantificar: los medios de cultivo pueden ser slidos (con agar) o lquidos. Si son lquidos, deber colocarse dentro de la placa de petri una almohadilla adsorbente atoxica que adsorbe el medio de cultivo lquido. (Perez, 2008)

~8~

Anexo #3 Imgenes tomadas de la pag (Laboratorio de Tecnologa Educativa. Departamento de Microbiologa y Gentica. Universidad de Salamanca, 2008)

4) GLOSARIO Los siguientes conceptos fueron tomados de (MINISTERIO DE DESARROLLO ECONMICO, 2000) y (MINISTERIO DEL MEDIO AMBIENTE, VIVIENDA Y DESARROLLO TERRITORIAL., 2009) ANLISIS: Examen del agua, agua residual o lodos, efectuado por un laboratorio. COLIFORMES: Grupo de especies bacterianas que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn e importancia relevante como indicadores de contaminacin del agua y los alimentos. El grupo de organismos coliformes se utiliza actualmente como indicador de la presencia en el agua residual de heces y, por lo tanto, de organismos patgenos. Los organismos coliformes son tiles para destruir la materia orgnica en los procesos biolgicos de tratamiento de las aguas residuales. Las bacterias coliformes incluyen los gneros Escherichia y Aerobacter. Las Escherichia coli (E.coli) son totalmente de origen fecal. CONCENTRACIN: Denominase concentracin de una sustancia, elemento o compuesto en un lquido, la relacin existente entre su peso y el volumen del lquido que lo contiene. DEMANDA BIOQUMICA DE OXGENO (DBO): Es el grado de consumo de oxgeno durante la oxidacin de contaminantes en el agua, llevada a cabo por microorganismos. Este parmetro se determina midiendo la cantidad de oxgeno utilizado por microorganismos durante un perodo de 5 das. La prueba de DBO por s misma es el parmetro de mayor significacin cuando se trata de determinar la carga contaminante que pueden crear los desechos domsticos e industriales al descargarse en cursos naturales de aguas en los cuales se requiere persistan condiciones aerobias. Es importante para medir la capacidad de autodepuracin de los cuerpos receptores de vertimientos domsticos e industriales. DEMANDA QUMICA DE OXGENO (DQO): Medida de la cantidad de oxgeno requerido para oxidacin qumica de la materia orgnica del agua residual, usando como oxidantes sales inorgnicas de permanganato o dicromato en un ambiente cido y a altas temperaturas.66 LODO BIOLGICO: Lodo excedente que se genera en los procesos biolgicos de las aguas residuales.

~9~

MATERIA ORGNICA DE UN AGUA RESIDUAL: Pueden ser slidos sedimentables o suspendidos o disueltos provenientes de vegetales, animales o compuestos de sntesis de productos qumicos orgnicos, degradables por la accin de microorganismos o no biodegradables. Son principalmente protenas, compuestos del carbono y nitrgeno, grasas, aceites, hidrocarburos, hidratos de carbono, agentes tensioactivos, pesticidas, compuestos orgnicos voltiles y no voltiles y otras estructuras ms complejas TRATAMIENTO CONVENCIONAL: Procesos de tratamiento bien conocidos y utilizados en la prctica. Generalmente se refiere a procesos de tratamiento primario o secundario. Se excluyen los procesos de tratamiento terciario o avanzado. TRATAMIENTO PRIMARIO: Tratamiento en el que se remueve una porcin de los slidos suspendidos y de la materia orgnica del agua residual. Esta remocin normalmente es realizada por operaciones fsicas como la sedimentacin. El efluente del tratamiento primario usualmente contiene alto contenido de materia orgnica y una relativamente alta DBO. TRATAMIENTO SECUNDARIO: Es aquel directamente encargado de la remocin de la materia orgnica y los slidos suspendidos TANQUE SPTICO: Sistema individual de disposicin de aguas residuales para una vivienda o conjunto de viviendas; combina la sedimentacin y la digestin. Los slidos sedimentados acumulados se remueven peridicamente y se descargan normalmente en una instalacin de tratamiento. TRATAMIENTO ANAEROBIO: Estabilizacin microorganismos en ausencia de oxgeno.67 de un desecho por accin de

FILTRO ANAEROBIO: Consiste en una columna llenada con varios tipos de medios slidos usados para el tratamiento de la materia orgnica carboncea en aguas residuales. Bibliografa Ambiente, M. d. (2004). M a n e j o d e I m p a c t o s A m b i e n t a l e s. 74-75. Diaz, D. (2003). Indicadores de Contaminacion Fecal en Aguas. Mexico: Cyted. Laboratorio de Tecnologa Educativa. Departamento de Microbiologa y Gentica. Universidad de Salamanca. (Octubre de 2008). Recuento de Coliformes Totales Filtracin a travs de membrana. Recuento de Coliformes Totales Filtracin a travs de membrana . Salamanca, Salamanca, Espaa. Lara, M. d. (2003). Importancia de los coliformes fecales como indicadores de contaminacion en la Franja Litoral de Baha de Banderas, Jalisco-Nayarit. Biomed , 121123. Lopz, M. G. (2005). DETERMINACION Y DIFERENCIACION DE ESCHERICHIA COLI Y. Espaa: Aquagest Galicia.

~ 10 ~

MINISTERIO DE DESARROLLO ECONMICO. (2000). Direccin de Agua Potable y Saneamiento Bsico Repblica de Colombia. Reglamento tcnico del sector de agua potable y saneamiento bsico RAS 2000. , 29-50. MINISTERIO DEL MEDIO AMBIENTE, VIVIENDA Y DESARROLLO TERRITORIAL. (Julio de 2009). MINISTERIO DEL MEDIO AMBIENTE, VIVIENDA Y DESARROLLO TERRITORIAL. Normatividad. Recuperado el 13 de 09 de 2012, de MINISTERIO DEL MEDIO AMBIENTE, VIVIENDA Y DESARROLLO TERRITORIAL. Normatividad.: www.minambiente.gov.co Pajares, M. (2002). Microorganismos Indicadores de la Calidad del Agua en Consumo Humano en Lima Metropolitana. Lima. Perez, G. R. (2008). Fundamentos de Limnologia Neotropical. Rionegro: Universidad de Antioquia. PREZ-LPEZ, M. E. (2003). Evaluiacion del Contenido de Oxigeno y Coliformes Fecales en el Tunal en Durango Mexico. Durango- Mexico: Becarias COOFAA. Red Iberoamericana de Potabilizacin y Depuracin del Agua. INDICADORES DE CONTAMINACION FECAL EN AGUAS. En R. I. Agua, Agua potable para comunidades rurales, reuso y tratamientos avanzados de aguas residuales domsticas. (pgs. 224 229). CYTED. Salamanca, D. d. (08 de Enero de 2006). Recuento de Coliformes Totales Filtracin a travs de membrana. Recuperado el 18 de Mayo de 2012, de Recuento de Coliformes Totales Filtracin a travs de membrana: http://virus.usal.es/Web/demo_fundacua/demo2/FiltraMembColiT_auto.html Salgado, M. (2006). Microbiologia de los Alimentos. Editorial Universidad de Caldas , 34. SALUD, O. P. (Noviembre de 2009). Representacin en Colombia Tanques spticos. Recuperado el 12 de 09 de 2012, de Representacin en Colombia Tanques spticos: www.col.ops-oms.org/saludambiente/guia-tanquessepticos.htm

~ 11 ~