TEMA I. MICROBIOLOGIA.

GENERALIDADES

Caractersticas: Es empleada por la medicina para combatir procesos infecciosos Se trata de la ciencia que estudia los microorganismos. (< 0,1 mm) Desde hace 300 aos: o o Procariotas y eucariotas Unicelulares y pluricelulares

Son organismos unicelulares los que cuentan con una clula y los organismos pluricelulares son aquellos que cuentan con billones de clulas y tienen una organizacin ms compleja como las plantas o los animales. En seres vivos unicelulares, el tamao, forma y caracterstica de la clula que lo constituye vara segn la especie. En los organismos pluricelulares, las clulas integrantes del organismo tienden a ser sumamente especializadas. Estos organismos poseen diferentes clases de clulas agrupadas, con capacidad para desempear funciones especficas, ms all de aqullas que son comunes a todas las clulas. Existe un tercer grupo de organismos intermedios o de transicin, que no son unicelulares, ni pluricelulares.

Metodologa comn: esterilidad, cultivos puros, microscopa Uso de uno con diversos fines
o o

Fermentacin: pan, cerveza, vino, yogurt, kfir, etc. Conservacin de alimentos: salazonado, desecacin, etc.

A. HISTORIA DE LA MICROBIOLOGA A. Von Leewenhoek Primeras observaciones de microorganismos, hemates, espermatozoides Describi las principales bases clases de microorganismos

1864 J. Lister Ciruga antisptica (uso de antisptico en quirfano)

1877 Kooh Postulados Son un conjunto de exigencias que deben cumplir los microorganismos para ser considerados agentes causales de enfermedades transmisibles oMicroorganismos presentes en todos los casos de enfermedad oDebe poder aislarse del enfermo y obtener un cultivo puro in Vitro oUn cultivo puro de un microorganismo debe causar la enfermedad en individuos sanos. oEn microorganismo debe aislarse de nuevo del individuo afectado B. PREVENCIN, DESCUBRIMIENTO Y TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS Inmunizacin: sistema de prevencin de enfermedades transmisibles. Prevencin primaria

Activa: vacunas Pasiva: seroterapia.

Seroterapia: se introducen anticuerpo procedentes del suelo de animales o personas

previamente inmunizadas (poco duradera) es inespecfico. Objetivo de la inmunizacin es evitar la produccin de la enfermedad en el sujeto sano susceptible actuando sobre este. Las vacunas, en cambio, introducen en el organismo grmenes muertos o toxinas que producen en ele organismo una respuesta inmunolgica mediante la produccin de defensas especficas (anticuerpos). Duradero. Vacunas - Activo - Generacin de anticuerpos - Duradero - Especfico Antisepsis Lister Uso de feud en quirfano Esterilizacin del material quirrgico. Antisepsia Asepsia quirrgica Seroterapia - Pasivo Inyeccin de anticuerpos Inespecfico - No duradero

Postulados de Kook Establece una relacin causa- efecto entre un microorganismo y una enfermedad C. INTRODUCCIN DE MEDIOS DE CULTIVO Conocimiento de lo agentes causales de enfermedades infecciosas Conocimiento de la fisiologa de los microorganismos Etapa molecular

Quicio antiinfecciones Salvarsn Sulfamidas Antibiticos

Retos del siglo XXI

SIDA Resistencia a los antibiticos

TEMA II: EL CRECIMIENTO MICROBIANO

Caractersticas:

Hay un aumento tanto estructural como funcional Fisin binaria. A partir de un organismo se generar otro con las mismas caractersticas.

Produccin de formas de resistencia (endosporas bacterianas). Tiene el mismo material gentico que la clula. Las generan durante el perodo de latencia para protegerse hasta que las condiciones ambientales mejores.

A. FASE DE CRECIMIENTO BACTERIANO Es la funcin exponencial es donde se mide el tiempo de generacin de un microorganismo. Cada tiempo de generacin se va duplicando Cultivo discontinuo nutrientes limitados, toxinas.

1. MEDICIN DEL CRECIMIENTO Peso seco. No es til para la microbiologa mdica Densidad ptica: determinamos los microorganismos de un medio lquido. Densidad ptica/n de bacterias

Recuento de viables: calcula cuantas bacterias vivas hay en un determinado medio por unidad de volumen. Los resultados se expresan en unidades formadoras de colonias (UFC). Normalmente crecen de forma centrfuga. La progenitora quedar en el centro y las hijas en el exterior. Morirn antes los microorganismos que estn ms cercanos al interior. 2. FACTORES QUE INFUYEN EN EL CRECIMIENTO Nutrientes: las rutas siempre estn acopladas a rutas de sntesis y combustin Catablicas Anablicos

La clula se va a formar a partir de molculas carbonadas:

Auttrofas:

Aquellas

capaces

de

sintetizar

molculas

orgnicas

complementarias a partir del CO2 Hetertrofas: No poseen habilidades de sntesis, requieren de molculas orgnicas para sintetizar. Quimiorganotrofo Fotoorganotrofo

Respiracin: Mtodo de obtencin de energa en el cual la sustancia que se reduce es el O2 o molculas inorgnicas.

Fermentacin: molculas orgnicas como el azcar 3. NUTRIENTES ESENCIALES QUE NOSOTROS NECESITAMOS

TEMPERATURA

La temperatura es un factor muy limitante para el desarrollo microbiano En funcin de la cual sea temperatura ptima.

Psicrfilos. Frigorfico Mesfilos. Temperatura ambiente. Patologas del ser humano Temfilos. Temperaturas muy elevados Termfilos extremos. Temperaturas inusitablemente elevadas

ATMSFERA

Segn que atmsfera permita para su desarrollo ptimo para las bacterias diremos que son:

Aerobio: Aquel que crece en presencia de oxgeno, es capaz de respirar. El oxgeno no le es txico. Tiene que establecer mecanismos de defensa

Anaerobio: no sabe utilizar el oxgeno. No tolera su toxicidad. Crece en ausencia de O2

Facultativo: puede crecer en presencia o ausencia de oxgeno. Microaerfilo: Tolera niveles de oxgenos muy bajos del 2-5 %, y requiere ciertas condiciones en la atmsfera. Cierto O2, una atmsfera inerte y elevado nivel de nitrgeno.

SALINIDAD

Todos los microorganismos tienen lmites de tolerancia a la sal. Todas las bacterias soportan bien la presin osmtica baja, ya que poseen una pared rgida que evita que estallen con presiones bajas. Hay bacterias que crecen en ambientes hipersalinos, la pared celular no les va a

proteger y se van a deshidratar, por eso algunas bacterias no poseen pared celular, se denominan bacterias halfilas externas, poseen un mecanismo de transporte activo. pH

En funcin de que sus tiempos de generacin sean ptimos tendremos:

Acidfilas: se desarrollan en medios cidos. Neutrfilas: se desarrollan en medios neutro Basfilas: se desarrollan en medios bsicos

OTROS FACTORES

Radiacin visible: la luz ultravioleta oxida Rayos UV: afectan directamente al ADN de la clula. Las bacterias que crecen expuestas a la luz solar deben tener mecanismos de respiracin del ADN (cidos nucleicos de la clula)

TEMA II: EL CRECIMIENTO MICROBIANO

Caractersticas:

Hay un aumento tanto estructural como funcional Fisin binaria. A partir de un organismo se generar otro con las mismas caractersticas.

Produccin de formas de resistencia (endosporas bacterianas). Tiene el mismo material gentico que la clula. Las generan durante el perodo de latencia para protegerse hasta que las condiciones ambientales mejores.

B. FASE DE CRECIMIENTO BACTERIANO Es la funcin exponencial es donde se mide el tiempo de generacin de un microorganismo. Cada tiempo de generacin se va duplicando Cultivo discontinuo nutrientes limitados, toxinas.

4. MEDICIN DEL CRECIMIENTO Peso seco. No es til para la microbiologa mdica Densidad ptica: determinamos los microorganismos de un medio lquido. Densidad ptica/n de bacterias Recuento de viables: calcula cuantas bacterias vivas hay en un determinado medio por unidad de volumen. Los resultados se expresan en unidades formadoras de colonias (UFC). Normalmente crecen de forma centrfuga. La progenitora quedar en el centro y las hijas en el exterior. Morirn antes los microorganismos que estn ms cercanos al interior. 5. FACTORES QUE INFUYEN EN EL CRECIMIENTO Nutrientes: las rutas siempre estn acopladas a rutas de sntesis y combustin Catablicas Anablicos

La clula se va a formar a partir de molculas carbonadas:

Auttrofas:

Aquellas

capaces

de

sintetizar

molculas

orgnicas

complementarias a partir del CO2 Hetertrofas: No poseen habilidades de sntesis, requieren de molculas orgnicas para sintetizar. Quimiorganotrofo Fotoorganotrofo

Respiracin: Mtodo de obtencin de energa en el cual la sustancia que se reduce es el O2 o molculas inorgnicas. Fermentacin: molculas orgnicas como el azcar 6. NUTRIENTES ESENCIALES QUE NOSOTROS NECESITAMOS

TEMPERATURA

La temperatura es un factor muy limitante para el desarrollo microbiano En funcin de la cual sea temperatura ptima.

Psicrfilos. Frigorfico Mesfilos. Temperatura ambiente. Patologas del ser humano Temfilos. Temperaturas muy elevados Termfilos extremos. Temperaturas inusitablemente elevadas

ATMSFERA

Segn que atmsfera permita para su desarrollo ptimo para las bacterias diremos que son:

Aerobio: Aquel que crece en presencia de oxgeno, es capaz de respirar. El oxgeno no le es txico. Tiene que establecer mecanismos de defensa

Anaerobio: no sabe utilizar el oxgeno. No tolera su toxicidad. Crece en ausencia de O2

Facultativo: puede crecer en presencia o ausencia de oxgeno. Microaerfilo: Tolera niveles de oxgenos muy bajos del 2-5 %, y requiere ciertas condiciones en la atmsfera. Cierto O2, una atmsfera inerte y elevado nivel de nitrgeno.

SALINIDAD

Todos los microorganismos tienen lmites de tolerancia a la sal. Todas las bacterias soportan bien la presin osmtica baja, ya que poseen una pared rgida que evita que estallen con presiones bajas. Hay bacterias que crecen en ambientes hipersalinos, la pared celular no les va a proteger y se van a deshidratar, por eso algunas bacterias no poseen pared celular, se denominan bacterias halfilas externas, poseen un mecanismo de transporte activo. pH

En funcin de que sus tiempos de generacin sean ptimos tendremos:

Acidfilas: se desarrollan en medios cidos. Neutrfilas: se desarrollan en medios neutro Basfilas: se desarrollan en medios bsicos

OTROS FACTORES

Radiacin visible: la luz ultravioleta oxida Rayos UV: afectan directamente al ADN de la clula. Las bacterias que crecen expuestas a la luz solar deben tener mecanismos de respiracin del ADN (cidos nucleicos de la clula)

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TEMA III: BACTERIOLOGA I

. CARACTERSTICAS GENERALES

Caractersticas: 1. Son las clulas ms pequeas que hay en nuestro organismo. 2. Son organismos unicelulares que carecen de membrana nuclear, su ausencia es comn para los procariotas. 3. El ADN bacteriano esta desnudo y se le denomina nucleoide. 4. Esta ms prxima a las clulas primordiales que a cualquier clula animal o vegetal. 5. La diferencia entre una clula procariota y una eucariota es que la eucariota si que tiene verdadero ncleo y la otra tiene un ncleo primitivo

Formas bacterianas: Esfricas (cocos) Alargadas (bacilos) Espiral o helicoidal

Organizacin bacteriana: dependiendo de la supervivencia de las bacterias tendremos unos elementos u otros.

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Elementos obligados - Pared celular - Membrana citoplasmtica - Citoplasma - Nucleoide

Elementos facultativos - Cpsula - Flagelos - Fimbrias o pili - Esporas

A. ELEMENTOS OBLIGADOS PARED CELULAR

A diferencia de las clulas eucariotas, las procariotas poseen por fuera de la membrana citoplasmtica una estructura rgida, cuya funcin es dar forma a la bacteria y protegerla de la lisis osmtica.

Es el lugar de actuacin de una serie de antibiticos como la Penicilina que inhibe la sntesis de la pared celular provocando la muerte bacteriana. El componente bioqumico ms importante de la pared celular es el peptidoglicano o murena que est compuesta por dos subunidades idnticas, la N-acetilglucosamina y N-acetilmurmico. Las bacterias tienen un interior intracelular muy simple y un exterior muy complejo. Todos los compuestos se sintetizan en el citoplasma. Las tinciones sirven para visualizar mejor las clulas, ya que tienen el mismo ndice de

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refraccin que el agua y se observan al microscopio de color blanco.

Tincin Gram

La tincin Gram es una tincin diferencial.

Gram + Poseen una capa una gruesa de murena o peptidoglicano Presencia de cidos teicoicos y lipoteicoicos

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Gram Estn ms avanzadas en la evolucin Por fuera de la membrana citoplasmtica estara la murena, es una capa muy fina Por fuera de la murena poseen la membrana externa de las Gram -. Porina (canales) Lipopolisacridos (LPS). Componente ms importante. Tambin se le denomina endotoxina, responsable del sock sptico, cuando hay una spsis aunque haya un tratamiento, si la bacteria ha liberado esa toxina podra ocurrir el choque.

Procedimiento: 1. Aplicar directamente sobre la llama el asa de siembra 2. Extender la preparacin sobre el porta

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3. Secar el porta y luego hacer tres cortes a la llama 4. Cubrir con violeta de genciana y dejarlo reposar durante un minuto 5. Lavar con agua destilada para eliminar el colorante sobrante 6. Cubrir con lugol (mordiente) para que se fije mejor el colorante 7. Volver a lavar con agua destilada 8. Aadir saframina (2 colorante), y dejar en reposo durante 1 minuto. aquella bacteria que quede teida del 2 colorante sern bacterias Gram negativas, las que no queden teidas sern bacterias Gram positivas 9. Lavar por ltima vez con agua destilada y dejar secar 10. Observar la muestra con el objetivo de inmersin

MEMBRANA CITOLPLAMTICA Es muy parecida a la de las eucariotas Permeabilidad activa La membrana de las bacterias es muy rica en protenas y no poseen colesterol Funcin de secrecin de sustancias txicas al exterior Sistema de transporte de electrones

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CROMOSOMA BACTERIOANO

Las bacterias tienen un nico cromosoma con una doble cadena circular de ADN con 4000 genes aproximadamente 5 millones de pares de bases.

Para que el ADN quepa dentro tiene que sper enrollarse, de esto se encargan unas enzimas denominadas girasas (lugar de actuacin de algunos antibiticos) Las bacterias pueden tener elementos genticos no extracromosmicos llamados

plsmidos (autorreplicacin). Son resistentes a los antibiticos y producen toxinas.

B.

ESTRUCTURAS NO NECESARIAS

CAPSULA:

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Inhiben la fagocitosis Estn formadas por polisacridos

FLAGELOS:

Confieren movilidad Estructura proteica Con un solo flagelo tienen mayor movilidad Monotricas un flagelo, peritricas ms flagelos

PILI: No tienen funcin motora Sirven para adherirse a superficies Proyecciones piliformes Estructuras proteicas ESPORA: Forma de resistencia Solamente producen ciertas bacteria Gram + No es una forma reproductiva Clostridium bacilus Resistencia a condiciones ambientales extremas Una clula produce una nica espora (esporulacin)

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 aqu)

Est deshidratada, cubierta de dipicolnico (slo aparece

II. GENTICA BACTERIANA

La ms ubicuitaria de todas la bacterias es la Escherichia coli, que se encuentra en nuestro intestino, comparte las caracterstica de las eucariotas, pero es mucho ms simple. La informacin gentica se organiza en genes (estructura que codifica la sntesis de una protena). El conjunto de todos los genes del organismo es el genotipo y la expresin del observador de esos genes es el fenotipo. A. ELEMENTOS GENTICOS

CROMOSOMA BACTERIANO: es la formacin gentica vital y est desnudo, es decir, no est protegido por la membrana nuclear ya que carece de ella.

PLSMIDOS. ADN CIRCULAR: es la informacin gentica no vital para la bacteria. Le confiere informacin adicional. Muchas de las resistencias antibiticas de codifican aqu. Esa informacin se puede transmitir de unas bacterias a otras ya que son independientes del cromosoma bacteriano. Algunos poseen la capacidad de integrarse y separarse del cromosoma bacteriano (plsmidos HFR)

B. MUTACIONES

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Las mutaciones son cambios en la secuencia de nucletidos que van a expresar en las siguientes generaciones. Las bacterias son organismos haploides y se reproducen por fusin binaria, van a ser iguales que su progenitor.

Caractersticas: 1. Introducen variabilidad gentica

Espontneas (al azar), de cada una 100 millones de bacterias Inducidas (agentes mutgenos), rayos x, luz ultravioleta, etc.

mutan

2.

Las mutaciones se expresan rpidamente. El tiempo de generacin de las bacterias es muy rpido y aparentemente podemos tener una falsa sensacin

3.

No pueden crear resistencia a un antibitico, lo que hay es una presin de seleccin, no es un agente mutgeno, el antibitico selecciona a las bacterias resistentes, eliminado a las sensibles. Las bacterias entonces colonizarn un nicho ecolgico en el que es frecuente ver cepas de bacterias muy resistentes a antibiticos por consumo excesivo de antibiticos

4.

Reparacin del dao de ADN. Las bacterias han desarrollado sistemas de reparacin de ADN, una cadena sirve de molde para separar la otra (son cadenas de doble hlice)

Mecanismos bioqumicos de resistencia

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Mutacin espontnea Modificacin del planco del antibitico El 40% de los neumococos son sensibles a la penicilina

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