Universidad de Chile Departamento de Qumica Mtodos Instrumentales de Anlisis

Laboratorio N7: Determinacin de pesticida con detector ECD, mediante Curva de Calibracin Relativa

Nombres: Fallon Nacaratte Francisca Nova Vesna Nez Daniela Ruiz Diego Quezada Fecha: 28/05/2010 Carrera: Licenciatura en Qumica.

Introduccin
En la cromatografa de gases, la fase mvil es un gas inerte (helio o nitrgeno) y la fase estacionaria es un slido (cromatografa gas-slido) o un lquido sostenido por un slido inerte (cromatografa gas-lquido). Este tipo de cromatografa siempre es en columna, ya que es la nica manera de que la fase mvil gaseosa se mantenga fluyendo, confinada dentro del sistema. La columna puede estar rellena con la fase estacionaria, en forma semejante a la cromatografa lquida, o bien la fase estacionaria puede depositarse sobre las paredes de un tubo muy delgado (0,25 mm de dimetro) y largo (hasta 100 m). Este tipo de columnas se conocen como columnas capilares y proporcionan la mayor capacidad de separacin. Las reas de aplicacin son muy diversas y abarcan prcticamente todas las actividades en las que interviene la qumica, por ejemplo, se emplea en el anlisis de drogas y frmacos en fluidos biolgicos como la saliva, la sangre, la orina, seguir la transformacin de las sustancias responsables de la transmisin neurolgica, determinar la presencia de contaminantes en el medio ambiente, descifrar la composicin de los combustibles fsiles, realizar el control de calidad de los productos qumicos y farmacuticos manufacturados, en fin, la lista de ejemplos es interminable. En este laboratorio utilizaremos la tcnica para la determinacin de pesticidas, especficamente, Clorpirifo. Para eso, se utilizar un detector ECD y se realizar una curva de calibracin relativa con la adicin de un estndar interno, en nuestro caso, captan, que obviamente, posee la misma naturaleza que el clorpirifo.

Figura 1: Captan

Figura 2: Clorpirifo

El ECD basa su funcionamiento en la emisin de partculas (electrones). Tpicamente, un ECD o detector de captura de electrones, ioniza el gas portador produciendo una rfaga de electrones. Si se aplica un campo elctrico constante, se tendr una corriente constante entre ambos. Sin embargo, si se tienen especies orgnicas en el gas, stas capturarn parte de los electrones, disminuyendo la intensidad de la corriente. Normalmente es necesario aplicar el potencial en forma de impulsos para lograr una respuesta lineal del detector. Este detector es muy selectivo y sensible a la presencia de molculas con grupos electronegativos como halgenos, perxidos, quinonas y grupos nitro, en general, grupos que contengan tomos de halgeno, oxgeno y nitrgeno.

Figura 3: Esquema de un ECD

Se aplica en la deteccin de molculas que contienen halgenos, principalmente cloro, como algunos insecticidas o bifenilos policlorados. Las ventajas ms significantes son su simplicidad y robustez, no destruye la muestra y es muy sensible, del orden de 10-12 g/mL del gas portador. Tambin posee algunas desventajas como un bajo rango dinmico lineal (102 unidades) y las precauciones en su uso, debido a la presencia de material radiactivo. Objetivos

Utilizar un detector ECD Cuantificar una muestra de pesticida mediante una curva de calibracin relativa

Procedimiento Experimental

Figura 4: Cromatgrafo GC-2014 Shimadzu con AOC-20i Auto inyector

Condiciones del equipo cromatgrafo de gases: Gas carrier: Helio -Make up: Nitrgeno -Modo de control de flujo: Presin Presin: 150,0 kPa Total flujo: 28,0ml/min -Flujo de columna: 1,60 ml/min -Velocidad lineal: 38,9 ml/min -Flujo de purga: 3,0 ml/min -Radio Split: 14,7 Columna: -Tiempo equilibrio temperatura:3,0min -Columna: Equity-1 Velocidad Inicio 20 10 T (C) 120 250 300 tR (min) 1,00 1,00 1,00 Detector: -Tipo de detector: PECD1 -Temperatura detector: 300C -Corriente: 2,00nA -Frecuencia de muestreo: 40 -Temperatura inyector: 250C -Tipo de Inyeccin: Splitless -Tiempo de muestreo:11min -Volumen de Inyeccin: 1 L Programacin solvente: -Lave 2 veces con solvente -Cuantas veces quiero que inyecte: 1 -Cuantas veces quiero que lave entre muestra: 1

-Longitud: 30m -Dimetro interno: 0,25mm -Grosor fase estacionaria: 0,25 m -Tiempo de anlisis: 14:50min -Temperatura mxima columna: 360C Procedimiento: - Se realiza una curva de calibracin relativa, con soluciones preparadas a partir de un estndar interno de Captan 0,1( g/ L), Clorpirifos 0,1( g/ L) y hexano como solvente.
Tabla 1: Soluciones para la Curva de Calibracin

Solucin 1 2 3 4 5

Volumen Clorpirifos( L) 100 200 400 600 800

Volumen Hexano( L) 800 700 500 300 100

Volumen Captan( L) 100 100 100 100 100

Estas muestras fueron preparadas en diferentes viales. De una muestra problema se procede a medir 1000 L, y fue trasvasijada al vial. Para cada solucin se usaron puntas diferentes para no contaminar las soluciones Listos los viales, se colocan en el carro del auto-sampler y se procede a iniciar el cromatgrafo.

Resultados
Para determinar la cantidad de Clorpirifo en una muestra problema, se utiliz una curva de calibracin relativa en la cual se grafica la relacin entre reas y sus masas respectivas, para el estndar interno y las soluciones.
Tabla 2: Preparacin o contenido de soluciones de concentracin conocida

Solucin 1 2 3 4 5

Clorpirifo [L] 100 200 400 600 800

Captan [L] 100 100 100 100 100

Hexano [L] 800 700 500 300 100

Hay que considerar las diluciones que se hicieron en cada caso. El clorpirifo tena una concentracin inicial de 0,1 [g/L]. El volumen tomado para la primera solucin era 100 L. entonces:
0,1 g 1 L x 0 g 10 L x =1 0 g

Pero en volumen total de la solucin no fue de 100 L, sino de 1000 L, eso significa que hay un factor de dilucin que afecta a la concentracin final. 10 g Concentrac in = = 0,01[ g / L ] 1000 L Se hizo el mismo anlisis para las soluciones restantes, los cuales se presentan en la Tabla 2.
Tabla 3: Masa Clorpirifo

Solucin 1 2 3 4 5

Masa Clorpirifo [g] 0,01 0,02 0,04 0,06 0,08

Para el captan, la concentracin inicial era de 0,1 [g/L]. Como se tomaron 100 L la concentracin del estndar, en ese volumen, es la siguiente:
0,1 g 1 L x 0 g 10 L x =1 0 g

Estos 10 g, estn en la alcuota de 100 L que se tomaron, sin embargo, como ya se mencion, la solucin tena un volumen total de 1000 L, lo que significa que la concentracin de captan agregada es 0,01 [g/L]. Considerando que el volumen inyectado es de 1 L, las masas agregadas de clorpirifo para cada solucin y que la masa agregada de captan para cada solucin es la misma, se sac la relacin de masa entre ellas.
Tabla 4: Relacin de masas para cada solucin.

Solucin 1 2 3 4 5

Masa Clorpirifo [g] 0,01 0,02 0,04 0,06 0,08

Masa Captan [g] 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01

[MasaClor./MasaCap.] 1 2 4 6 8

Cada inyeccin entreg dos reas, una para el clorpirifo y otra para el captan. Las reas para el clorpirifo son mayores, por lo tanto la relacin establecida entre las reas ser [rea Clorpirifo/rea Captan]
Tabla 5: Valores para las relaciones de masas y reas, respectivamente.

[MasaClor./ MasaCap.] 1 2 4 6 8

[reaClor./reaCap.] 1,336 2,892 6,318 8,965 10,487

Con los datos presentados en la Tabla 4, se realiza un grfico para obtener la curva de calibracin relativa.

Figura 5: Curva relativa, para la determinacin de clorpirifo

La regresin lineal entrega una ecuacin de la recta, que se utiliza para calcular la concentracin de la muestra problema. Las reas entregadas por el cromatograma para la muestra problema fueron: *rea Clorpirifo: 990417,2. *rea Captan: 144032,0. La relacin entre sus reas es 6,876. Por lo que finalmente, utilizando la ecuacin de la recta y tomando en cuenta que Y representa la relacin entre las reas, y X la relacin entre las masas, se tiene que:
rea Clorpirifo Masa Clorpirifo = 1,344 + 0,354 rea Capt an Masa Capt an M asa Clorpirifo 6,876 =1,344 + 0,354 asa Cap tan M Masa Clorpirifo Masa Cap tan = 4,852

Como el captan es un estndar interno, es de concentracin conocida. Equivalente a 0,01 g, es posible calcular la cantidad de g de clorpirifo en la muestra problema.

Masa Clorpirifo = 4,852 0,01 Masa Clorpirifo = 0,049 [ g ]

Por lo tanto, como de la muestra problema, tambin se inyect 1 L, se tiene que contiene aproximadamente 0,049 g/ L de clorpirifo.

Discusiones
El anlisis de pesticidas es un proceso recurrente en la qumica ambiental, debido a que estos son altamente persistentes y nocivos para la salud humana, de modo que la aplicacin de la tcnica de deteccin de pesticidas a nivel de traza debe ser confiable y reproducible. Es por esto que para el anlisis realizado se utilizo un estndar interno, lo cual nos permiti monitorear el comportamiento de la solucin durante el anlisis, manteniendo una concentracin fija de estndar y variando la de un patrn de pesticida a analizar se puede obtener una curva de calibracin relativa que nos permitir medir de manera confiable la concentracin de la muestra problema. En cuanto a las curvas de calibracin relativas, estas presentan una ventaja evidente frente a una curva de calibracin absoluta, debido a que cualquier factor que afecte a la concentracin algn analito, afectara tambin a nuestro patrn interno; por lo que en una curva de calibracin absoluta tendremos una desviacin evidente que nos provocara un error sistemtico en nuestras mediciones; mientras que para el caso de una curva de calibracin relativa, el comportamiento ser perfectamente lineal, debido a que el cociente entre la concentracin del estndar y el analito siempre ser constante, puesto que cualquier factor que los altere ser equivalente para ambas especies. De la curva de calibracin se pueden desprender varios datos tiles a la hora de evaluar la exactitud del mtodo, puesto que el valor de R2 es muy cercano a 1, entonces podemos decir que la relacin entre masa y rea es constante, y que se mantiene la linealidad, por lo que la proporcionalidad entre estas es perfectamente cuantificable, lo que nos permite calcular la masa de la muestra problema en base al rea obtenida en el cromatograma. En cuanto a las condiciones del equipo, podemos decir que la volatilizacin de la muestra fue efectiva, debido a que la respuesta del cromatgrafo esta dentro de los rangos esperados, por lo tanto no qued ningn rastro de analito sin volatilizar. Por otro lado, la columna utilizada logro separar eficientemente los compuestos analizados, lo que permiti un correcto anlisis del rea obtenida para cada analito. El uso de una auto-sampler automatizo la inyeccin, por lo que se minimizo el error de inyeccin frecuentemente provocado por la inyeccin manual, a la vez, debido a que el equipo utilizado esta perfectamente calibrado, la certeza de que la cantidad inyectada al equipo fuera la programada (1 L), es casi absoluta. Finalmente el uso de una columna capilar requiere que una cantidad muy pequea de analito sea inyectada dentro del equipo; por lo que una inyeccin convencional con una jeringa no es lo suficientemente pequea y podra percudir a la columna misma; para solucionar esto, se programo una inyeccin Split [Razn de Split: 14,7], lo que implico que de la cantidad inyectada fuese de 1/14 de la cantidad inicialmente medida.

Conclusiones

El mtodo por cromatografa de gases es una tcnica muy til a la hora de analizar compuestos ya que se necesita una menor cantidad de muestra que en HPLC, su efectividad nos permite hacer anlisis con alto inters toxicolgico, detectando cantidades de analito a nivel de trazas. En cuanto a las desventajas que posee este mtodo podemos mencionar a la cantidad minscula de muestra que debemos inyectar en el equipo, lo que hace necesario que la muestra se tenga que dividir para inyectar solo una fraccin en el equipo. Otra desventaja comn para la mayora de los anlisis hechos en un cromatgrafo de gases es la necesidad de tener compuestos en fase gas, lo que a menudo hace que la muestra se deba calentar para volatilizar la mayor cantidad de analitos presentes, por lo que es imperante que estos sean termoestables, de lo contrario se descompondrn y no podremos analizarlos cuantitativamente. El uso de un ECD, implica necesariamente el uso de elementos radioactivos, por lo que su fiscalizacin y correcto mantenimiento son especialmente importantes para un uso seguro de estas herramientas. El uso de un estndar interno nos permite hacer anlisis cuantitativos para la determinacin de analitos a nivel de trazas debido a que el cociente entre las reas y masas de este con el analito mantiene un comportamiento lineal durante el anlisis. Finalmente la masa de clorpirifo detectada en la muestra problema fue de 0,049 g lo cual esta dentro del rango lineal calculado en la curva de calibracin relativa a un estndar de Captan confeccionada segn el procedimiento experimental mencionado anteriormente.

Referencias
1.- Skoog. Principios de anlisis instrumental. McGraw-hill. 5 edicin.2001.732-756.p 2.- Sylvia Copaja. Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (HPLC) .2010.