P. 1
(ESP) Isolation and Structure Elucidation of a Novel Yellow Pigment

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Molecules 2005, 10, 1286–1291

molecules
ISSN 1420-3049 http://www.mdpi.org

Aislamiento y explicación de la estructura de un nuevo pigmento amarillo de la bacteria marina Pseudoalteromona tunicata
Ashley Franks 2, Peter Haywood 1, Carola Holmström 2, Suhelen Egan 2, Staffan Kjelleberg 2 and Naresh Kumar 1,*
1

School of Chemistry and 2 School of Biotechnology and Biomolecular Sciences, The University of New South Wales, Sydney NSW 2052 Australia

* Author to whom correspondence should be addressed; e-mail: n.kumar@unsw.edu.au Received: 12 December 2004; in revised form: 21 April 2005 / Accepted: 4 May 2005 / Published: 31 October 2005

Abstract: El medio marino es una de las principales fuentes de muchos nuevos compuestos naturales. Se ha aislado un nuevo pigmento amarillo de la bacteria marina P. tunicata e identificado como un nuevo miembro de la clase de compuestos tambjaminas. La identificación estructural se logró mediante una combinación de espectroscopia de RMN 1D y 2D, y datos de alta resolución de espectrometría de masas. Keywords: Pseudoalteromonas tunicata, marine bacterium, tambjamines

Introduction Los miembros del género bacteriano Pseudoalteromonas se encuentran comúnmente asociados a la vida y las superficies inertes en el medio marino [1]. La especie Pseudoalteromona produce una gran variedad de compuestos biológicamente activos que tienen actividad contra los organismos marinos comunes. Estos incluyen compuestos para bacterias objetivo, larvas de invertebrados, algas esporas, pastos de protozoos y hongos, y se cree que proporcionan protección para los organismos huésped marinos colonizados por especies Pseudoalteromonas. En una pantalla preliminar de diez especies Pseudoalteromonas, Holmström et al. [6] encontró que P. tunicata tiene la gama más alta y más amplia de actividades biológicas.

Por otra parte. Como parte de nuestra investigación en curso sobre los compuestos biológicamente activos producidos por P. Las fracciones pigmentada amarilla (90 mg) (en la fracción de cloroformo 100%) fueron más fraccionado en otra columna Altec SPE. 100% de cloroformo. que incluyen compuestos de tetra-pirrol. tunicata [16] en medio VNSS [17] a la fase estacionaria (12 horas) y se cosecho por centrifugación. La fracción amarilla resultante se sometió a cromatografía preparativa sobre placas de capa delgada de vidrio recubiertas con gel de sílice para eliminar la gran cantidad de ácido oleico. nudibranquios y ascidias [9-10]. espectrómetro de masas de resonancia con una fuente de ionización electrospray Analítica. Experimental General Con un Espectro de masas de alta resolución fue adquirido metanol mediante un Bruker BioApex IIe 7 T Transformada de Fourier Ion ciclotrón. 1H y 13C-NMR espectros se realizaron en CDCl3 neutralizado (preparado por pasar CDCl3 través de una capa de carbonato de potasio anhidro) en un espectrómetro Bruker AMX300.1287 Molecules 2005.2 '-bipyrrole) sistema de anillos que contienen un resto de enamina en la posición C2 del anillo de pirrol. Este pigmento es una nueva clase del compuesto tambjamina. La muestra se cargó con DCM y se eluyó con 2% de alcohol isopropílico (IPA) / cloroformo. La columna se eluyó con incrementos de 100% de hexano. y un grupo metoxi adyacentes en el C3. se evapora y se carga en una columna de SPE Altec con éter dietílico. BE-18 591. se presenta el aislamiento e identificación de este pigmento amarillo producido por P. poseen una amplia gama de actividades biológicas incluyendo antibióticos [12]. Las muestras se ejecuto en modo de iones positivos en condiciones de alta resolución (<2 ppm). Los alcaloides tambjamina han sido aislados previamente de las bacterias e invertebrados marinos. que co-eluyeron con el pigmento amarillo. La evaporación del disolvente al vacío produjo un compuesto como un aceite amarillo (11 mg). contiene una cadena de doce carbonos saturada de alquilos se ha aislado de los cultivos de Streptomyces sp [11]. mientras que los experimentos de RMN en dos dimensiones se realizaron en un espectrómetro Bruker DMX600. 10 Estas actividades están vinculadas a la producción de pigmentos no identificados. Bacterial culture conditions and isolation of the yellow pigment Se cultivo (100 litros) P. antitumoral [13] y las actividades de inmunosupresores [14]. La banda pigmentada amarilla fue raspada de la placa de sílice. amarillo y morado [8]. En algunos casos se emplearon las placas de preparación que contienen gel de sílice se mezcla con acetato de sodio al 12%. Otros miembros de esta clase. . BE-18 591 también ha demostrado inhibir immuno-proliferación y gastritis en conejos [15]. tunicata. La fracción DCM se separa. el análogo de la tambjamina. Una banda de color púrpura también se aisló de la mezcla de crudo. Las células se liofilizaron y se extrajo con metanol. un 10% de acetato de etilo% / hexano. tunicata. y 4 de isopropanol / cloroformo. Se componen de un (2. El extracto de metanol se redujo al vacío y se dividió con diclorometano-agua (1:1 v / v). y se eluyó con diclorometano. El nitrógeno enamina normalmente sustituido por dos o cuatro carbonos alquilo de cadena saturada. incluyendo los briozoos.

H4. 1H-13C y 1H-15N experimentos HMBC.90 ppm y el carbono C3 en 163. 9 COSY (COrrelation SpectroscopY). TOCSY (TOtal Correlation SpectroscopY).95 ppm correspondiente a los protones H5. NOESY. y experimentos NOESY (Figura 1.Molecules 2005. y el pigmento amarillo como un alcaloide nuevo de tambjamina. Results and Discussion Un ESI-HRMS (Resolución de espectrometría de masas) del compuesto 1 dio un ión molecular de m / z 356.269605 [MH +]). HSQC (Heteronuclear Simple Quantum Correlation).270484 [MH +] que corresponde a una fórmula molecular de C22H33N3O (CALC: 356. La estructura se deduce a través de un amplio uso de los experimentos nucleares de alta resolución espectroscopia magnética incluyendo TOCSY COSY. 6. H3 y H4. El espectro de 1H-RMN de 1 mostró señales de los protones en δ bipyrrole 7.25. 6. Tabla 1) y la comparación con los desplazamientos químicos de 1H y 13C informó de tambjaminas [9. 17 15 13 11 1 La presencia de un sistema de anillos de 2.2 '-bipyrrole se estableció desde el TOCSY COSY. HMBC (Heteronuclear Multiple Bond Correlation). La presencia de un grupo metoxi en el C3 fue confirmada por una camiseta de protones en δ 3.9 ppm. respectivamente (Tabla 1). 10 128 El compuesto fue identificado como púrpura viola-ceína por comparación.06. NOESY (Nuclear Overhauser Effect SpectroscopY HMQC (Heteronuclear Multiple Quantum Correlation).1 ppm. La comparación de los datos espectrales de la tambjamine nuevo con estructuras tambjamine informó indicaron la presencia de una cadena más larga y un doble enlace entre C10 y C11 átomos de carbono. La estructura del compuesto amarillo fue identificada como sigue. El nitrógeno enamina se encontró que ser sustituido por una cadena de carbono insaturados doce alquilo. El CH enamina apareció en δ 7.10]. Figure 1:Selected 2D NMR Data .29 ppm en el espectro de protones con la señal de carbono correspondientes a 141. HSQC.70 y 5.

Una gran gama multiplete a δ 1.46. s 155 111. m 7. m 1.1 134.86.8 Hz y una correlación NOESY entre H9 y H12.5-27.1289 Molecules 2005. m 6.Table 1: 1H and 13 C chemical shifts for 1 Yellow Pigment Position 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 – 18 19 20 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 123.9 91. El doble enlace entre C10 y C11 en la cadena de alquilo se encuentro mediante experimentos COSY / TOCSY y se asigna una configuración cis con una constante de acoplamiento J10.7 14. . d 132 5.95.70 0.5 124.2 28. Ambos H8 y H9 mostraron 3-enlaces heteronucleares correlacionados con el doble enlace.1 7.90. m 5. El CH2 en C12 mostró uniones de largo alcance a ambos átomos de carbono doble enlace.25.4 141.46.1 6. s 13c 1 H 15N 142 Por otra parte.5 113.8 3. 11 = 10.55.6 143. La larga union constante entre C6 protón y el NH enamina (J = 14 Hz) confirmó la disposición trans-antiplanar de la enamina.46 ppm y mostró a través del espacio de acoplamiento a H6 y directa a través de la correlación enlace a C9 CH2. m 51. m 2. dt 2.8 124.86 ppm como un triplete.35. protones a C8 y C9 mostraron largo alcance 1H-15N acoplados al N7 confirmando la vinculación de la cadena de alquilo (Figura 1).70 ppm representa los protones de metileno C13-C18 con el grupo metilo terminal que aparece en δ 0.3 163.70.29.21-1. dt 5.21-1.8 26. 10 El grupo C8 CH2 junto a un nitrógeno enamina apareció en δ 3.0 110. H8 mostro la union a C10 y H9 a C11.06.5 58.01. t 3.5 27.

C. 2002. tunicata está descrito. Syst. Holmström. Davis.. References 1. James. tunicata. A. A. Este es el primer aislamiento reportado de un tambjamina con una cadena insaturada de alquilo en la naturaleza. S. Appl. 54. FEMS Microbiol. 10. 7. A. R.. McCloy.. Japan. . Los autores también desean agradecer a Stender Hilda por su ayuda en la realización de experimentos de RMN. 9. Biotechnol. Blackman.. 1999. 285-293. 41.. S. 2. 4.. J. W. Egan. Environ.. 30. S. 2001. 2001. 14. 649-653. R. Microbiol. M. M.. Holmström. 1994. Carroll. Gauthier. P. S. Holmström. J. S. C. Egan. S. Johnson. Production of a pyrrole antibiotic by a marine bacterium.. Int. 8. 27. 177. Marine Pseudoalteromonas species are associated with higher organisms and produce active extracellular agents. C. Li. FEMS Microbiol. 355-359. 47-58. H. Franks. J. Leitz. Burkholder. Bacteriol.. McCarthy. J. J. C. 51. M. J..Molecules 2005. 3. Evol. 426-32. Int. 77. Ecol. Bacteriol. 1499-1504. Microbiol. Chem. Appl. Ecol. nov. Eaton.. Characterization of an antibiotic produced by Alteromonas luteoviolacea Gauthier 1982.. A. Alteromonas citrea. 85 isolated from Kinko Bay. Egan. P. J. Chapman. 6983-6988. a bacterium with antifouling activities isolated from the surface of a marine alga. 1625-1629.. D. Chem. Microbiol. Aust. Pseudoalteromonas ulvae sp. New tambjamine alkaloids from the marine bryozoan Bulgula dentata.. R. R. Syst. Aust. 1994. S. R. Kakimoto. Antifouling activities expressed by marine surface associated Pseudoalteromonas species. Kjelleberg.. Kjelleberg. Kjelleberg. la similitud de aislamiento y estructurales de 1 a tambjaminas aislados de esponjas y briozoos sugiere que estos compuestos pueden ser de origen bacteriano y en relación con la presencia de Pseudoalteromonas ya sea dentro de los tejidos o en la superficie del organismo como es el caso de P. S. J. J. Formation of indigo and related compounds from indolecarboxylic acids by aromatic acid-degrading bacteria: chromogenic reactions for cloning genes encoding dioxygenases that act on aromatic acids. 2002.. 433-442. 1995. 349-354. The synthesis of a combinatorial library using a tambjamine natural product template. 6. Kjelleberg. Por otra parte. J. A. Quinn. cknowledgements Damos las gracias a Anthony Carroll de productos naturales Descubrimiento Universidad Griffith y Blackman Adrian de la Universidad de Tasmania por proporcionar espectros de tambjamines. 1977. F. R. Correlation between pigmentation and antifouling compounds produced by Pseudoalteromonas tunicata. R. Pfister.. 47. Holmström. C. 5. Bacteriol. S. 4. S. 10 Conclusions 1290 El aislamiento y caracterización de un nuevo pigmento amarillo de la bacteria marina P.. a new gram-negative yellow-pigmented species from seawater. 1966.

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