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Manual de FITO Revisado 2009 II

Manual de FITO Revisado 2009 II

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FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLAN DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AGRICOLAS MANUAL DE LABORATORIO DE FITOPATOLOGIA BIOL. MARCOS ESPADAS RESENDIZ M.C. GLORIA DE LOS ANGELES ZITA PADILLA PROLOGO Siendo la Fitopatología la ciencia que estudia las enfermedades de las plantas, los agentes causales, su interacción con los hospederos, la sintomatología, así como los medios de control de éstas, es notorio el papel que desempeña dentro de esta ciencia el trabajo de gabinete, esto es, el análisis de laboratorio, ya que es en éste lugar donde se establece el conocimiento de cada uno de los enunciados anteriores. El objetivo del laboratorio de Fitopatología es adiestrar al alumno en las principales técnicas de colecta, cultivo, identificación y control de los organismos causales de las enfermedades de las plantas. El presente manual tiene la intención de brindar la mínima información necesaria en el trabajo práctico de la Fitopatología, tratando siempre de establecer la relación hospedero-patógeno, al aportarles el conocimiento básico para que en un futuro sepan y puedan diagnosticar cuando un cultivo está enfermo o dañado y tengan noción de los métodos y técnicas de control que podrían emplear para lograr una mejor producción. No pretende ser éste un trabajo terminado, sino que se espera enriquecerse con la ayuda y crítica de profesores y alumnos. LOS PROFESORES DE FITOPATOLOGIA

OBJETIVOS GENERALES. Al terminar el curso el alumno: Adquirirá la destreza en el manejo de las principales técnicas el diagnóstico fitosanitario y podrá discriminar entre ellas cuando se aplican a determinado grupo fitopatógeno para su reconocimiento y diagnóstico (hongos, bacterias, nemátodos, virus)

DESARROLLO. El trabajo del laboratorio comprende a las prácticas generales y al seminario.

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PRACTICAS. Están contenidas en este manual. Se deberá entregar un reporte de cada una de estas prácticas, una semana después de haberlas concluido. Los reportes deben contener lo indicado en el manual, además de lo que los profesores les indiquen. NO SE ACEPTAN REPORTES DE PRACTICAS EXTEMPORANEOS. SEMINARIO DE INVESTIGACION. Es un trabajo particular que deberá desarrollar cada equipo a través del semestre. Este trabajo pretende que el alumno se familiarice con algún patógeno en particular, siguiendo los postulados de Koch, para lograr la correcta identificación del agente causal, de tal forma que pueda extrapolar sus conocimientos para un diagnóstico adecuado de cualquier enfermedad vegetal en su ejercicio profesional. En la primera sesión de laboratorio se les proponen algunos temas a escoger, aunque puede ser el mismo equipo el que lo proponga. En la segunda sesión todos los equipos deben tener su tema definido. En la tercera sesión deben entregar su proyecto de trabajo, el cual debe contener los siguientes puntos: 1. INTRODUCCION. (Justificación del trabajo, es decir, el QUE, el POR QUE y el PARA QUE). 2. OBJETIVOS. (Ante el planteamiento de un problema, se deben proponer objetivos a cumplir para poder solucionarlo). 3. HIPOTESIS. (Es la probabilidad que se supone como la solución al problema planteado, y por lo tanto, debe corresponder a los objetivos). 4. METODOLOGIA. (Es la descripción de los pasos a seguir para cumplir los objetivos). 5. BIBLIOGRAFIA. Cada equipo tiene que programar la fecha de siembra de las plantas que necesite, indicándolo en la metodología. Una vez que se terminen las prácticas, todas las sesiones subsecuentes se dedican exclusivamente al desarrollo del seminario. Al finalizar el semestre, hay una sesión para la EXPOSICION DE LOS SEMINARIOS. Cada equipo tiene 15 minutos para exponer y 5 minutos para preguntas. El mismo día de la exposición, se entrega un reporte final que contenga los siguientes puntos: 1. 2. 3. 4. INTRODUCCION. OBJETIVOS. HIPOTESIS. REVISION BIBLIOGRAFICA. Esta debe incluir: 4.1 Historia y distribución geográfica del patógeno. 4.2 Importancia económica

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5. 6. 7.

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4.3 Etiología 4.3.1 Clasificación 4.3.2 Morfología. 4.3.3 Patogénesis 4.4 Sintomatología 4.5 Epifitiología 4.6 Control METODOLOGIA RESULTADOS. (Se describe lo obtenido en el experimento). DISCUSION. (Es la parte más importante del trabajo, pues es donde se hace el análisis de los resultados, interrelacionándolos con los objetivos e hipótesis planteados, fundamentándose en la información obtenida en la revisión bibliográfica). CONCLUSIONES. (Conocimiento obtenido a través de todo el trabajo experimental). BIBLIOGRAFIA.

El reporte debe ser en Word y con buena presentación. A la entrega de este reporte, debe de anexarse: - la copia de por lo menos 3 artículos recientes referentes al tema del seminario. - Material didáctico de apoyo, en referencia al seminario (diapositivas, láminas, preparaciones, material de herbario). NOTA: No se reciben ningún trabajo o reporte fuera de la fecha indicada. La asistencia al laboratorio es OBLIGATORIA. EVALUACION. Reportes de prácticas...................….....….........................15% Seminario de Investigación...........…...…..........................25% Proyecto.....................................................5% Desarrollo...................................................10% Exposición..................................................5% Reporte final...............................................5% Exámenes parciales.....................…..........…......................10% TOTAL.........50% MATERIAL NECESARIO PARA LAS PRACTICAS QUE DEBEN TRAER POR EQUIPO*. 1 m. de franela 1 m. de manta de cielo 1/2 lt. de blanqueador de ropa 1 marcador indeleble Cerillos 1 caja de porta objetos 1 caja de cubre objetos 1 rollo de masking tape 1 charola de plástico tipo panera

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1 paquete de algodón 1 bolsa de detergente de 200 gr. Etiquetas engomadas de 2 x 2 cm. 1 rollo de papel aluminio 10 goteros en frascos color ámbar 1 rotulador Cepillo para lavar cristalería de laboratorio *Este material es necesario desde la primera práctica

PRACTICA 1 METODOS DE COLECTA
INTRODUCCION. El diagnóstico de las enfermedades de las plantas tiene tanto de arte como de ciencia. Ciertas enfermedades pueden ser reconocidas fácilmente, mientras que otras toman años. No pueden darse normas fijas aplicables a todos los casos, cada uno requiere un enfoque diferente e individual. El diagnóstico es una de las bases indispensables para lograr el control eficaz de una enfermedad. Solo cuando se conoce el agente causal puede consultarse literatura especializada que revela la experiencia de otros fitopatologos y puede servir para planear las medidas de combate. El diagnóstico es más preciso, por lo general, si el que lo realiza ha examinado personalmente la enfermedad en el campo. Un observador cuidadoso puede obtener datos valiosos que facilitan todo el proceso por ejemplo, la distribución local de una enfermedad varía de acuerdo a las circunstancias, es decir, pueden estar afectadas todas las plantas por igual, algunas más que otras, plantas sanas alternadas con plantas enfermas, áreas bien definidas de plantas enfermas, en hileras en los bordes de la plantación, en las partes más bajas o distribuidas al azar. Es importante notar la presencia de focos de infección inicial, a partir de los cuales se extienda la enfermedad, ya que esta información da idea del patrón de diseminación y de la fuente de inóculo primario. En el desarrollo de la Fitopatología práctica, es de suma importancia la colecta del material enfermo, puesto que de esto dependerá el que se puedan realizar las técnicas conducentes a una identificación acertada del patógeno en cuestión. OBJETIVOS: Conocer y manejar las técnicas más comunes de colecta y preservación de material de estudio fitopatológico.

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Es conveniente disponer del mayor número de elementos vegetales colectados que permitan lograr la identificación del agente causal.foxitsoftware. etc. flores. y cerrarla con una liga. colecte solo proporciones de los órganos afectados. bolsas de polietileno. Se colectan partes representativas. etc. frutos. MATERIAL Y EQUIPO UTILIZADO EN LA COLECTA DE PLANTAS ENFERMAS. sobre pigmentaciones. cámara fotográfica. etc. Es indispensable que todos los ejemplares que se colecten.com For evaluation only. así mismo. (aproximadamente). 5 . d) Alteraciones en el crecimiento (achaparramiento. igualmente con síntomas iniciales y en diferentes etapas de desarrollo de la enfermedad. engrapadora manual. ligas. de suelo. Para partes vegetales carnosas. Se pueden identificar cuando: a) Crecen anormalmente b) Se secan o se mueren c) Cuando disminuye la cosecha año con año y no se recupera aún con fertilizantes o combatiendo malezas. Las partes vegetales que deben colectarse. se deberán colectar partes que estén completamente muertas o en estado de descomposición. se debe sacar la planta entera. manchas. Se deberá colectar varias plantas completas que presenten síntomas iniciales y en diferentes etapas de desarrollo de la enfermedad. papel secante. gigantismos. soluciones fijadores. lupa de campo. hielera portátil. En el caso de que la planta presente nodulación en la raíz. estas bolsas no deben exponerse al sol. Si el cultivo ya esta muy desarrollado. DESARROLLO: Los problemas fitopatológicos se pueden presentar en hojas. navaja de campo. frascos de boca ancha.) e) Decoloraciones. como frutos o bulbos. b) Cultivo perenne. libreta de campo. tallos. serrucho. frutas. es muy probable que se trate de infestaciones de nemátodos. hojas. dependen del tipo de cultivos que se trate: a) Cultivo anual. y sin sacudir el suelo de las raíces. Es conveniente colectar también una planta sana para que sirva de comparación. En el caso de que las plantas sean pequeñas. a) Datos generales. raíces.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. tijeras de podar. prensa. machete. por lo que se deben tomar muestras del suelo que haya estado en contacto con la raíz. tallo. como raíz. periódico y cartón corrugado. rayados. se debe meter en una bolsa de plástico junto con 250 gr. pues así no son útiles para el estudio en el laboratorio. etiquetas. Pala recta. pero que no están en su totalidad muertas o en estado de descomposición. se deben colectar en frascos con soluciones fijadoras. Para evitar que los nemátodos mueran. vayan acompañados con los siguientes datos.

Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Fertilizantes Herbicidas Defoliantes ________________ Fungicidas ________________ Insecticidas ________________ Otros ________________ ________________ ________________ a) Características del suelo. Raíz Hojas Frutos ________________ ________________ ________________ Brotes o Tallos Flores ________________ ________________ d) Distribución de la enfermedad Plantas aisladas Areas grandes Bandas o franjas Manchones o grupos de plantas ________________ ________________ Areas pequeñas ________________ ________________ Bordes de cultivo ________________ ________________ e) Condiciones prevalecientes durante la aparición de los primeros síntomas y el desarrollo de la enfermedad. Localidad Fecha Cultivo (hospedero) ________________ ________________ ________________ ________________ Variedad Edad del cultivo Cultivos anteriores Predio ________________ ________________ ________________ ________________ b) Apariencia general del cultivo Marchitez Amarillamiento Areas muertas Manchas foliares __________________ Tizones ________________ Desarrollo anormal ________________ Otros ________________ ________________ ________________ ________________ c) Partes atacadas de las plantas.foxitsoftware. Drenaje ________________ Textura ________________ 6 .com For evaluation only. Precipitación Vientos Granizo ________________ ________________ ________________ Humedad relativa Heladas Otros ________________ ________________ ________________ a) Labores culturales. Muestra No. Frecuencia de riego Incorporación de materia orgánica Podas ________________ ________________ ________________ Fertilizaciones Aclareos Otros ________________ ________________ ________________ a) Químicos aplicados al cultivo (concentraciones y dosis).

.) d) Presencia de insectos o ácaros.. Gaviño...…..... o bien la preservación en fijadores* como alcohol al 70%.. 1975. Figueroa.......A. siguiendo las técnicas de herbario acostumbradas.. México..... Limusa..... Manual de Laboratorio de Fitopatología General........... consistencia etc.. NOTA: Los alumnos traerán la colecta fitopatológica BIBLIOGRAFIA. 10 ml.A.. Glicerina .. 7 ..... Técnicas Biológicas Selectas de Laboratorio y Campo. SOLUCION DE HESLER Agua destilada .. G. Alcohol al 50% ..100 ml.. micelio... b) Como material de herbario.....25 ml. y H... pH ________________ Otros ________________ a) Posibles diferencias y/o excesos nutricionales..... 1. 1975..... E..........A............25 ml.......com For evaluation only. Cloruro de Zinc ........Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www........ En el primer caso los ejemplares deben ser montados en cartulinas blancas de 25 x 45 cm.50 ml Formalina .foxitsoftware.... c) Exudaciones (color..... 2... F... México...A Formol al 40% . Todo el material preservado debe llevar su etiqueta correspondiente.. En este caso se puede prensar o preservarse en refrigeración.... cuerpos fructíferos o cualquier estructura (hacer esquemas)..G................. e) Evidencia de daños mecánicos El material colectado puede emplearse para: a) Realizar aislamientos del agente causal.. F.. 10 ml...... *Preparación de soluciones preservadoras. empleándose el prensado.. o solución de Hesler.... b) Presencia de esporas...... Echandi...... Herrero Hnos... a) Características de las lesiones.........1000 ml.... Acido acético glacial ..... Zn K P __________ Mn __________ Mg __________ Otros _ __________ N __________ Bo __________ __________ __________ Datos del laboratorio que nos ayudarán al diagnóstico de la enfermedad y a la identificación del agente causal..

Los postulados de Koch son los siguientes. Acribia..El organismo debe ser aislado y cultivado en el cultivo puro. N. 7. El proceso de identificación de un patógeno requiere el aislamiento del mismo. Minneapolis. 8 . Washinton. López A.A. debe desarrollarse la enfermedad original.C. and Windham.Al inocular una planta susceptible sana. OBJETIVOS Adiestrar a los alumnos en la preparación de medios de cultivo y en las técnicas de aislamiento de agentes fitopatógenos más utilizadas. Windham. D. Marcel Dekker Inc. CRC Press. Técnicas de uso común en el manejo de Hongos fitopatógenos. Que revisten gran importancia dentro de la Fitopatología. para lo que es necesaria la elaboración de medios de cultivo que permitan el desarrollo de dicho patógeno.C. Narayanasamy.. R. G. Fundamentos de Patología Vegetal.A. Concepts and Laboratory. Trigiano. el trabajo de laboratorio de suma importancia.El agente causal debe estar constantemente asociado con la enfermedad. ya que deben seguirse siempre que se está frente a una enfermedad de la que desconozca o se dude del agente causal. 6. Roberts.. 2004.G. 1964. New York. Plant pathology. 8.foxitsoftware. González. REVISION BIBLIOGRAFICA El diagnóstico de las enfermedades se fundamenta en los Postulados de Koch.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. INTRODUCCION En el diagnóstico de las enfermedades vegetales. S. 4. Burges Pobl. Tuite. Introducción a la Fitopatología. P. A. L. 3. M. J. Méx. lo que permite la posibilidad de aplicar los métodos de control más adecuados. 3.N. 413 pp.. 2. T. y C.C. 5. London. San Jose de Costa Rica. Tesis. PRACTICA 2 PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO Y METODOS DE AISLAMIENTO. E. 1. Boca Raton. Plant pathogen detection and diseases diagnosis. 1972. 1977. Zaragoza. Fungi and Bacteria. 518 pp. Co. 2001. I.com For evaluation only. ya que ahí donde se efectúa la identificación del agente causal. Plant Pathological Methods.. 1978..I. Boothroyd.

del que se deben tomar nuevas muestras para realizar otros cultivos seleccionados de las diferentes colonias. un CULTIVO PURO. nitrógenos. Para poder estudiarlos y conocerlos se deben cultivar en modos adecuados y aislándolos del suelo o de partes vegetales enfermas. Medios de cultivo. de manera que encontramos bacterias. En la naturaleza abundan los microorganismos que se desarrollan estrechamente relacionados entre sí. generalmente requieren de 50% o más. K.El organismo patógeno debe ser aislado de la planta infectada bajo condiciones experimentales. los valores óptimos son muy variables. pero en general los hongos fitopatógenos se desarrollan y reproducen mejor en pH ligeramente ácido. deberán estar presentes elementos nutricionales tales como fuentes de carbono. hasta lograr que en el medio solo se desarrollen un tipo de organismo. Luz: Este factor afecta en algunos casos la reproducción de los fitopatógenos. 4. Mg. 9 . Para lograr el desarrollo y producción de las diferentes especies fitopatógenas. vitaminas. pero en general no influye. los medios de cultivos deben reunir características especiales. Temperatura: Los valores óptimos de éstas son muy variables para cada especie. tanto de vida libre como parásitos. Ca). utilizar cámaras húmedas. Mo ). tomando en cuenta los factores que se mencionan a continuación. Aislamiento.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. mientras que las bacteria en uno alcalino. reproducción y diagnóstico de aquellos organismos productores de enfermedades en las plantas. Nutrientes: en el medio de cultivo. a través de trampas. etc. etc. se obtiene un cultivo mixto. éstos es. pH: También en este caso. Este es un factor determinante para el desarrollo y reproducción. existen diversas técnicas como el de Placa Directa y el de Dilución en Serie. pero la mayoría de ellos pueden crecer en un rango de 10 a 25º C. A partir de la primera muestra que se coloca en un medio de cultivo. microelementos (Fe.. Humedad: Deberá proporcionarse una humedad relativa favorable a los fitopatógenos que se desee cultivar. determinación. En el caso de que el patógeno se encuentre en las partes vegetales se puede proceder a realizar aislamientos directos. hongos y otros organismos de muy diversos tipos. Los medios de cultivos son mezclas de sustancias nutritivas que se utilizan para el aislamiento. que se comportan como parásitos facultativos. colocar partes vegetales en el medio de cultivo.foxitsoftware.com For evaluation only. Para realizar aislamientos a partir del suelo. desarrollo. Cu. macroelementos (P. Zn Mn.

...Composición 1. 2. gelatina u otras sustancias solidificantes.MM ( medio de Martin) 8... Asepsia: Los medios de cultivo deben esterilizarse y mantenerse a salvo de cualquier contaminación.2. materiales que al enfriarse quedan completamente sólidos.agar) 7.VFA (vaina de frijol-agar ) 9. 1.sal.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. tubérculos.TSA (jugo de tomate.V8A ( jugo V8-agar) 5.3. por ejemplo: harina de maíz-agar. Se emplean para mantener cultivos por largo tiempo.. Los medios de cultivo pueden ordenarse de acuerdo a su consistencia. se emplean cuando se necesita incrementar el inóculo de hongos o bacterias. 2. o bien se componen de sustancias naturales y sustancias sintéticas.. al enfriarse permanecen en estado coloidal.. vainas.PDA ( papa-dextrosa-agar) 2. Consistencia 2.. quedando de la siguiente manera: composición o a su 1.AN (agar nutritivo ) 3. etc. 1.. Medios de cultivos naturales: Se forman a partir de material vegetal natural. ( 2-3 % ) gelatina ( 10-15 %) albumina etc. Clasificación de los medios de cultivo.2 Medios semisólidos. mezclados o separados.. Contienen esencialmente agar. Contienen bajas proporciones de agar y gelatina.3 Medios líquidos: Son preparados sin agar.AA ( agua-agar) 10. frutos.HFA ( harina de frijol-agar) 4.foxitsoftware. Medios complejos o semisintéticos: En estos la composición de uno de los componentes no se conoce de manera exacta. Muy empleados para el aislamiento y la reproducción de hongos y bacterias. por lo que permanecen líquidos aún al enfriarse.JTA (jugo de tomate-agar) 13.agar ) 6..1. Entre los medios de cultivos de uso frecuente en Fitopatología están los siguientes: 1.HMA ( harina de maíz-agar) 11. por ejemplo: Agar Czapek. Medios sintéticos: Son aquellos medios de cultivo en los que se conoce exactamente la composición de cada uno de sus componentes. raíces.1 Medios sólidos. 2. por ejemplo: tejidos vegetales...AVA ( avena .com For evaluation only.JFA ( jugo de frijol agar) 12..MSA ( malta-sal-agar) 10 .

... calentando ligeramente...........200gr Agar.. Se disuelve el agar en 500 ml............. crecimiento y reproducción de varios hongos y de bacterias como Xanthomonas y Agrobacterium. Procedimientos: Se disuelve el agar en el agua destilada............. Ingredientes: Agar...... calentando ligeramente..... 15gr.......foxitsoftware............... Ingredientes : Papa... AN ( agar nutritivo o extracto de carne-agar) Este medio de cultivo nos sirve para cultivar bacterias como Erwinia.. de papa sin cáscara y cubrirlo con agua destilada............PDA (papa-dextrosa-agar) Este medio de cultivo se utiliza para el aislamiento... se afora a 1000 ml y se esteriliza............ Pseudomonas y Corynebacterium. 14 ........com For evaluation only...... 2...........AA (agua-agar) Este medio de cultivo se utiliza para el aislamiento de hongos del suelo como Phytium y algunos Actinomicetos...Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www..aforar a 1000 ml 11 .... Concluido éste tiempo se cuela la infusión o caldo de papa a través de manta de cielo... 3....aforar a 1000 ml Dextrosa. Agua destilada....... Se añade la solución de agar daxtrosa al caldo de papa mezclando bien y se afora con agua destilada a 1000 ml.BA 15... de agua destilada....BK (Bonner..... se le agrega la dextrosa y se disuelve..................... Se deja hervir durante 15 min....20gr... Agua destilada.. Procedimiento: Partir 200 gr........15gr......Addicot) (medio B de King) Preparación de los medios de cultivo 1. y se esteriliza....

a 3000 RPM.... de agua destilada calentando ligeramente......com For evaluation only. La solución filtrada se clarifica centrifugando durante 20 min a 300 RPM..aforar a 1000 ml... a 60º C se filtra la infusión a través de manta de cielo.... Procedimiento: En 500 ml...………. agar. dextrosa.............. Ingredientes: Extracto de carne de res..... Agua destilada........ 4..aforar a 1000ml.. de agua destilada se agregan los 30 gr... Disolver el agar... agua destilada..... La solución filtrada se clarifica centrifugando por 20 min................. Ingredientes: Harina de maíz ................. Procedimiento: En 500 ml............................. por último aforar con agua destilada a 1000 ml...20gr........5 gr.................... Procedimiento: Disolver el agar en 500 ml.................15gr..... Esterilizar................ Añadir el líquido centrifugado a la solución de agardextrosa-peptona y aforar con agua destilada a 1000 ml.............. agar .. agar....... luego agregar la peptona y el extracto de carne y disolver...... Peptona............... la dextrosa y la peptona en 300 ml de agua destilada calentando ligeramente.... Se decanta y se junta el líquido sin sólidos... Se filtra la infusión a través de manta de cielo.... Peptona....agar) Este medio de cultivo se utiliza para cultivar algunas especies del género Phytophthora........Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www........................................HFA (harina de frijol..aforar a1000ml...... de harina de frijol........20gr......... de agua destilada a 70º C se agrega la harina de maíz y se calienta por 1 hr...................30gr.20gr.......HMA (harina de maíz-agar) Este medio de cultivo sirve para aislar hongos de los géneros Pythium y Phytophthora. producto de la centrifugación....... 5........ Ingredientes: Harina de frijol .....3gr...... Agua destilada........………...20gr.................... se calienta la solución a 60-70 ºC........foxitsoftware... Decantar y juntar el líquido sin sólidos producto de la centrifugación...... 12 ..20gr.........

.4....... Finalmente aforar con agua destilada a 1000 ml.aforar a 1000ml.....foxitsoftware.....com For evaluation only....aforar a 1000 ml B) Para aislar a Phytophthora parasitica y Ph. Añadir la solución de agar al jugo de frijol y esterilizar.....5gr........JFA ( jugo de frijol .................. CaCo3 ..... 13 ............. según la especie de hongo que desee cultivar......15gr. Agitar hasta disolverlo. Ingredientes: Jugo V8 centrifugado*........ Añadir el líquido centrifugado a la solución de agar mezclándolo bien.100 ml. de agua destilada..........15gr.......………………………………... Procedimiento: Obtener el jugo de frijol prensado o moliendo las vainas verdes...………………………………......... Procedimiento: Agregar el CaCo3 al jugo V8 o de tomate..............agar) Este medio de cultivo se emplea para cultivar Colletotrichum lindemuthianum.. Agar......... resultante de la centrifugación..aforar a 1000ml..................... Agar .............Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www...... hasta completar la cantidad requerida.... Centrifugar para clarificar durante 20 min a 3000 RPM......V8A (jugo V8......... Agua destilada. Disolver el agar en 285 ml.......agar ) Este medio se prepara de dos formas. Ingredientes: Jugo V8 centrifugado*.............. Se decanta y se junta el líquido sin sólidos.. Ingredientes: Jugo de frijol proveniente de vainas prensadas o molidas........... *En ambas fórmulas se puede sustituir el jugo V8 por jugo de tomate simple..... Para aislar a Phytophthora infestans y Phythium...20ml................ Disolver el agar en 300 ml de agua destilada calentando ligeramente......... Esterilizar...... 7...... palmivora.......215 ml. Agua destilada ....................10 gr...... Agar..... calentando ligeramente..2gr.................... Agua destilada.. CaCo3. 6....... Dejar reposar la solución durante 10 min.

...6gr..... Para la fórmula B) utilizar 900 ml. MSA (malta -sal-agar)....60 ml.5 gr Agar…………………………12 g Agua destilada………aforar a 1000 ml Ca Co3... mezclando esta solución con el jugo V8 o de tomate centrifugado........ Ingredientes: Avena…………… …... Se disuelve el agar en otro poco de agua destilada (800ml.....AvA (avena-agar) Este medio de cultivo se utiliza para aislar especies de los géneros Phytophthora y Pythium... Se esteriliza. Ingredientes: NaCl…………………...aforar a 1000 ml... Filtrar la infusion a traves de una manta de cielo. Agar ....Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.......……. Añadir a esta solución la infusión de avena centrifugada....... Procedimieto: En 600 ml de agua remojar 60 gr de avena durante 24 hr....... a 300 RPM... mezclar bien y aforar con agua destilada a 1000 ml Esterilizar.0. Agar ………………………….... Procedimiento: Se muelen los tomates y se cuelan a través de una manta de cielo. Añadir a la solución de agar el jugo V8 o de tomate centrifugado y aforar con agua destilada a 1000 ml...60 gr Extracto de levadura…. Agua destilada.foxitsoftware. Ingredientes: Jugo de tomate natural..... 8. Para clarificar la solución colada.14gr. Este medio de cultivo se utiliza para aislar principalmente a los hongos que atacan granos almacenados. centrifugar durante 20 min.. de agua destilada para disolver el agar..... mezclando bien. Disolver el agar en 400 ml de agua destilada calentado ligeramente.. 2 gr... calentando ligeramente.7.. El jugo se mezcla con el CaCo3. 9... Se decanta y se junta todo el líquido centrifugado hasta completar la cantidad requerida.5 gr 14 . Disolver el extracto de levadura en la solución de agar. ) y se añade la solución centrifugada.. Decantar y juntar el líquido sin sólidos producto de la centrifugación.JTA ( jugo de tomate-agar) Este medio de cultivo se utiliza para aislar a Phytophthora capsici.... se agita bien y se deja reposar durante 10 min..com For evaluation only........ Después hervir durante 30 min. Para la fórmula A) disolver el agar en agua destilada.7... Para clarificar... se centrífuga durante 20 min a 3000 RPM.

15 gr (si se usa medio deshidratado) 30 gr (para jugo de tomate) Procedimiento: En 500 ml de agua destilada se disuelve el jugo de tomate-agar (medio deshidratado) y el agar. y se mezcla bien calentado ligeramente.0.000gr KCl (cloruro de potasio)…………. calentando ligeramente. En 500 ml de agua destilada disolver la sal calentando ligeramente.. TSA (JUGO DE TOMATE-SAL-AGAR).foxitsoftware.. mezclando bien.aforar a1000 ml..Addicott). Extracto de Malta …….20 gr Agua destilada ………………. 12.0. Disolver el extracto de malta en la solución de agar.0010 Agar ……………………25. 11.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. 15 . Se añade a esta solución la de jugo de tomateagar mezclando bien y se afora a 1000 ml. BA (Bonner. Este medio de cultivo sirve omnivorum.com For evaluation only. Ingredientes: KNO3 (nitrato de potasio)…0.808 gr MgSO4 o7H2C (sulfato de magnesio) .0. la solución de sal.aforar a 1000 ml Procedimiento: En 400 ml de agua disolver el agar calentando ligeramente. Si se mezcla con el agar y 200 ml de agua.00 gr Agua destilada………………aforar a 1000 ml. Procedimiento. Aforar con agua destilada a 1000 ml. Este medio de cultivo se utiliza para aislar hongos de granos almacenados. Añadir la solución de extracto de malta-agar. Agar………………………………. se centrifuga durante 20 min.0108 gr FeCl3 (tartato férrico)……0. Esterilizar.. Ingredientes: Jugo de tomate-agar (medio deshidratado) NaCl……………………………100 gr o 90 ml de jugo de tomate de lata Agua destilada …….0369 gr para aislar y desarrollar a Phymatotrichum Ca(NO3)H2O (nitrato de calcio)…0.6486 gr gr Glucosa ………………………… 20. Esterilizar por NO MAS de 15 min. a 3000 RPM.236 gr KH2PO4 Fosfato diácido de potasio …... En 400 ml de agua se disuelve la sal calentando ligeramente.

En 500 ml de agua destilada se disuelve el agar.05 ml de estreptomicina en solución a cada caja de Petri (esto es para inhibir el crecimiento de las bacterias) 14. 16 . KH2PO4…………….foxitsoftware. Se agrega 0.0. midiendo con papel pH y agregando HCl si se necesita acidificar o NaCl si se trata de alcalinizar.. VFA (vainas de frijol-agar).10 ml MgSO4…………………1.5gr.20 gr. 13. de esta solución se toman los 3. Este medio de cultivo sirve para aislar diferentes géneros de bacterias. Se disuelve 1 gr de estreptomicina en 150 ml de agua destilada estéril. Añadir a la solución de glucosa-agar la solución del resto de los componentes. Se mezcla bien y se esteriliza. En 500 ml de agua destilada disolver todos los demás componentes uno por uno. Agua destilada…………………aforar a 1000 ml Estreptomicina…………………………………. En 500 ml de agua destilada disolver el agar y la glucosa calentando ligeramente. K2HPO4………………………. Rosa de Bengala…………………………………3.glicerina. BK (B de King). calentando ligeramente. Ajustar el pH a 7.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.7H2O(sulfato de magnesio hidratado)….com For evaluation only.5 gr. 5 gr. mezclando bien. MM (medio de Martin). y en los restantes 500 ml se disuelven uno a uno los demás componentes.1 gr.1 gr. MgSO4. Peptona…………….5 ml.. Procedimiento: Se disuelve el agar en 500 ml de agua calentando ligeramente y después se le añade la glicerina. Ingredientes: Dextrosa……………10 gr.0-7. Este medio de cultivo se utiliza para aislar a los hongos del suelo.20gr.. Agua destilada…………………………aforar a 1000 ml..5 ml para agregarlos a 1000 ml de medio de cultivo. Este medio de cultivo sirve para aislar a Colletotrichum lindemuthianum.. 15.15 gr. En otros 300 ml de agua se disuelven los demás componentes agregándole a esta solución la de agar.. Glicerina……………….5 gr.5. Ingredientes: Peptona………………. Procedimiento: Para preparar la solución de Rosa de Bengala se disuelve 1 gr de colorante en 100 ml de agua. Agar……………………………. La estreptomicina se prepara separadamente.1.. momentos antes de vaciar el medio en las cajas de Petri. Después se mezclan bien las dos soluciones. Agar………………..

D. 1 Soporte universal con tela de asbesto 1 Probeta de 100ml. Deje solidificar. Distribuir uniformemente el medio con movimientos de rotación de la caja sobre una superficie horizontal. Colocar la tapa de la caja de Petri suavemente en su sitio y tapar el recipiente con el medio de cultivo. Conservar el tapón en la misma mano con que sostiene el recipiente del medio.250 gr. Se calienta a 60º C durante 30 min. Una vez solidificado el medio. realice lo siguiente: A. Colocar y encender el mechero o lampara de alcohol. pasar la boca del recipiente sobre la llama del mechero. 1 Balanza granataria* 12 Cajas de Petri limpias y estériles 1 Frasco de agar 2 Cjas de Petri para cámara humeda 1 Frasco de dextrosa* 2 Agujas de disección 1 Frasco de malta 1 Centrifuga 1 Frasco de carbonato de calcio NOTA: Los reactivos para la elaboración de los medios de cultivo puedes variar de acuerdo a la cantidad y diversidad de medios de cultivo que elabore el grupo. Para llenar las cajas de Petri con el medio de cultivo de una manera aséptica.com For evaluation only. Esterilizar. H. vaciar en cada caja de 10 a 12 ml.foxitsoftware. Vaciado del Medio de Cultivo a Cajas de Petri. Limpiar la mesa con una solución de cloro 2:1 en agua o benzal B. MATERIALES 2 Matraces de 250 ml limpios y ertériles.15 gr. 17 . Agua destilada……………….aforar a 1000 ml. realizar pruebas de esterilidad por incubación a 35 ºC durante 48 hrs. Poner las cajas y recipientes con el medio sobre la mesa. mezclando bien y se afora a 1000 ml. Ingredientes: Vainas de frijol………………. Tomar el recipiente con el medio de cultivo y destaparlo con la mano izquierda. de agua destilada estéril 4 Recipientes de plástico p/desif. Tomar con la mano derecha una caja y levantar la tapa lo suficiente para vertir el medio. 2 Pinzas de disección 1 Matraz con 500ml. de agua estéril 1 Pizeta con cloro al 50% 2 Vasos de precipitado p/calibrar * 2 Papel filtro estéril tamaño de 8 x 12 cm. Procedimiento: En 500 ml de agua destilada se añaden las vainas cortadas en trozos muy pequeños. 1 Mechero 1 Gradilla 1 Agitador 6 Tubos de ensaye c/9 ml. G.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Se filtran a través de una manta de cielo y papel filtro. se le añade la infusión filtrada. del medio. C. Agar…………………………. F. E. Se disuelve el agar en 300 ml de agua destilada calentando ligeramente.

Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Se recomienda usar agua-agar. Qué es la esterilización y cuales son los métodos mas frecuentes para esterilizar materiales fitopatológicos? 3. que contenga papel filtro esterilizado. A qué tipo de medios de cultivo (natural. Se deja reposar de 1 a 2 min. Incube a 24 ºC. 2. se recurre al uso de la cámara húmeda. Aislamientos a partir de vegetales enfermos.3. Se incuba a 24ºC y se observa después de 4 a 5 días. Incube a 24 ºC Cuando hayan crecido colonias de hongos o bacterias. a temperatura soportable por el dorso de la mano. los tejidos se lavan y se sumergen en un tubo con agua destilada estéril. Trampas. Cuando la planta presenta micelio y no hay fructificaciones o cuando no se aprecia el crecimiento del patógeno. Partes vegetales en medio de cultivo.1. 2. Incube a 24ºC y observe a los 7 días. etc. Se incuba a 24ºC durante 2 o 3 días y se observan resultados.1. transfiera pequeñas placas por separado a nuevas cajas o tubos con medio estéril..2. Sobre el papel se colocan pequeños trozos del vegetal enfermo y se cierra la caja. semisintético o sintético) pertenecen los utilizados en esta práctica? Explique su respuesta. Después de 4 a 5 días se podrá apreciar el crecimiento del patógeno. Incube las cajas a 24ºC y observe después de 5 días. 1. La porción que interesa se desinfecta en cloro (NaOCl). Aislamiento directo. 2.com For evaluation only. Cámara húmeda. En cajas de petri con medio de cultivo solidificado. Aislamiento a partir del suelo.4. TÉCNICAS DE AISLAMIENTO 1. 2. Cuando se desea aislar bacterias. se enjuaga con agua destilada estéril y se coloca en cajas con PDA solidificado. previamente. con ayuda de una aguja de disección.2. 2. En una caja de Petri estéril. agregue pequeñas porciones de suelo son una espátula. 18 . Se transfiere 1 ml del sobrenadante a otro tubo con 9 ml de agua destilada estéril y se repite así tres veces mas. se humedece con agua destilada estéril. Proceda a aislarlo con la técnica anterior CUESTIONARIO. Observe al microscopio de disección el ejemplar enfermo.foxitsoftware. agua-agar o medio de Martin. Posteriormente de cada tubo se toma 1 ml y se coloca en una caja de Petri. 1. Plante semillas o porciones vegetales en suelo infectado. Se toma una porción de tejido enfermo y se desinfecta en una solución 2:1de cloro (NaOCl). proporcione humedad e incube a temperatura ambiente. usando una para cada dilución. Dilución en serie. micelio. 1. si encuentra fructificaciones. Describa los tipos de colonias que surgieron en los aislamientos a partir del suelo y partes vegetales enfermas. Agregue a las cajas. tome una muestra de este material con una aguja de disección estéril y colóquelo directamente sobre el medio de cultivo solidificado. Placas directas. Se mezcla 1gr de suelo en 10 ml de agua destilada estéril. se hacen diluciones que se agregan a cajas con PDA. 2. Las colonias de microorganismos se observan de 2 a 3 días después .

Calcule el numero de organismos que surgieron en los aislamientos a partir del suelo por el método de dilución. Washinton. Boston. 4. 1994. R. A. En el proceso de diagnóstico de las enfermedades de las plantas. Costa Rica. Las técnicas de identificación particularizan en los agentes bióticos. Basic Plant Pathology Methods. CRC Press. bacterias. T. Trigiano. cit. Métodos de Investigación Fitopatológica. de organismos en 1ml Ejemplo: 2 colonias x 1 1000 x 10 ml = 0. algunos son tan pequeños o requieren de técnicas microscópicas tan elaboradas para su observación. Op. F.02 organismos por ml. 2005. 413 pp. 992 pp. E. and Windham. Singapore. Oxford. Schots. riquettsias.. espiroplasmas. and Sinclair J. cit. Paris.Plant pathology. G. de colonias x dilución empleada x volumen inicial = No. New York. B. D. Gaviño. D. es decir. Las enfermedades vegetales pueden ser causadas por agentes abióticos y bióticos. French. 8. Tokyo.. Op. Amsterdam. Boca Raton. and Oliver. Echandi. 267 pp. 9. C. Op. Narayanasamy. IICA. 1978. en los microorganismos fitopatógenos. 2004. S.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. 4. R. M. de la siguiente manera No.foxitsoftware. O. San Diego. P.. 1975. hongos y nemátodos. san Francisco. London. y Her. Plant pathology. la identificación del agente causal ocupa un lugar preponderante. a partir de vegetales enfermos? BIBLIOGRAFIA 1. Agrios. * 2. New York. De estos.R. Cómo realizaría un cultivo de Puccinia graminis tritici y del virus del mosaico amarillo del frijol.G. Heidelberg. Figueroa. C A B International. 7. que 19 . Juárez y H. cit.com For evaluation only. Plant pathogen detection and disease diagnosis. Sydney. G. Dewey. viroides. Marcel Dekker Inc. Dhingra. Elsevier academic Press. 1985. Concepts and Laboratory. N. M. Modern assay for plant pothogenic fungi... 518 pp. 2001. 355 pp 3. 6..C. 1980. 1975. London. López A. 5.. 5.. 5th ed. CRC Press. N. micoplasmas. Windham. C. A. PRACTICA 3 GENERALIDADES DE MICROORGANISMOS INTRODUCCION. entre los que encontramos virus..

Enjuagar con agua destilada estéril (150 ml en vaso de precipitado) sobre agitador magnético por un minuto. los que resultan mas fáciles de identificar son las bacterias. Lavarlo bajo el chorro de agua corriente 3. 6. Pesar un gramo del tejido cosechado 2. OBJETIVOS.5M (1:2 p/v). a los hongos y a los nemátodos. con 0. Solución 3: Fosfato de potasio 0. Decantar en un tubo tipo Ependorf. Dar un enjuage final con con agua destilada estéril (150 ml en vaso de precipitado) sobre agitador magnético por un minuto. pH=7. en caso necesario agregar 1 ml de solución 1 para facilitar la decantación. en tanto que otros se prestan a su trabajo en éstos. Someterlo a un lavado con Tween 20 sobre agitador magnético por 3 minutos 4. pH=7. 7. es imposible determinar su morfología en un laboratorio escolar. Lavarlo con una solución de cloro al 10% por 4 minutos en agitador magnético 5. 8. Solución 2: Glicol-polietileno al 6% (PEG). METODOLOGÍA 1. Colocar en bolsa para macerar 9.5.5% sulfito de sodio. El macerado se homogeniza durante un minuto.25 M.5 Solución 4: glicol-polietileno al 20.com For evaluation only. Agregar 2 ml de la solución 1 10. los hongos y los nemátodos.0% (PEG). Agregar 1 ml de la solución al macerado 12. Macerar 13. 20 . Concretamente. 14. PRIMERA PARTE: VIRUS (esta parte se hará con equipos que trabajen virus fitopatógenos en su seminario) Purificación de partículas virales REACTIVOS Fosfato potásico Sulfito de sodio Cloroformo Tetracloruro de carbono Glicol-polietileno (PEG) SOLUCIONES Solución 1: Fosfato potásico 0.foxitsoftware. en preparaciones temporales y permanentes. Reconocer las características morfológicas que distinguen a las bacterias. Macerar 11. Secar en papel filtro.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.

por lo que pueden ser cultivadas en medios artificiales.com For evaluation only. 20. La pared celular determina la forma de las bacterias y es selectiva. bacilar o espiralada. ACTIVIDADES. Se encuentran constituidos por una cápsula de secreción. y como tales benefician al hombre porque ayudan descomponiendo grandes cantidades de materia orgánica y deshechos animales y vegetales. de las cuales. 25. Tinción de cápsula y productos de excreción. se centrífuga a 10.000 rpm durante diez minutos. 18. ácido murámico y azúcar. Se centrífuga a 8 500 rpm durante diez minutos.5:1 v/p de cada uno). aunque no es el caso de las fitopatógenas. Todas las bacterias fitopatógenas conocidas hasta el presente son aerobias. 19. Después se resuspende en la solución 3 (0. carecen de núcleo verdadero. 21 . Ciertas bacterias son flageladas y pueden desplazarse en medios líquidos. membrana y citoplasma este último conteniendo gránulos de grasa. Tinción de bacterias por el método de Gram. Se conocen aproximadamente 1600 especies de bacterias. El sobrenadante que resulta se trata con la solución 2 y se agita en frío (4º C) durante dos horas. las bacterias pueden teñirse de rojo o de violeta al seguir la técnica de tinción de Gram. aún cuando existen anaerobias facultativas. Tinción de flagelos. 23. El manual de Bergey cita 180 especies de bacterias reconocidas como fitopatógenas. es decir.foxitsoftware. Su forma puede ser esférica.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. 17. 27. facultad que no ejercen dentro del tejido vegetal.000 rpm durante diez minutos. 16. Al sobrenadante se añade la solución 4 (2 ml PEG/5 ml sobrenadante). vacuolas. pigmentos y material genético disperso. con pocas excepciones. Después de doce horas. 2. Después se centrífuga a 10. Enseguida se agregan al homogenizado Cloroformo y Tetracloruro de carbono (0. Se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza. Elaboración de preparaciones temporales y permanentes de bacterias. 26. La mayoría son saprófitas obligadas. Dependiendo de la cantidad de estos. Se usa el sobrenadante para el diagnóstico. pared celular. 15. Algunas forman esporas. El precipitado obtenido se resuspende en la solución 3 y se incuba durante seis horas. RESULTADOS: SEGUNDA PARTE: BACTERIAS Las bacterias son microorganismos pertenecientes al reino Monera. 1. 21. pudiendo contener aminoácidos aromáticos. 24.000 rpm durante diez minutos. todas son saprófitas facultativas. 22. El precipitado se centrífuga a 12. Homogeneizar dos minutos más.5 ml de solución por cada 100 g de tejido). Se incuba durante una hora en frío (4º C). Centrifugar a 5000 rpm durante cinco minutos.

y cuando el líquido se haya extendido por el borde. séquelo al aire. indicando los nombres de las estructuras. Flamee el asa o aguja de disección para evitar contaminaciones. Porta y cubreobjetos Caja de petri Agujas de disección Cultivos de bacterias Preparaciones de bacterias Mordiente para tinción de flajelos Tejidos vegetales enfermos Cristal violeta para tinción de Gram Safranina para tinción de gram Tinta china bacteriológica Sulfato de cobre Lugol Cristal violeta para flagelos Alcohol etílico ANTES DE EMPEZAR A TRABAJAR. agregue una pequeña muestra de bacterias. MATERIALES Y METODOS. Lave con sulfato de cobre al 2 % Séquelo con papel absorbente. Reactivos: Solución de Cristal violeta con oxalato de amonio: Solución A: Cristal violeta……………………………2. Coloque en un portaobjetos una gota de tinta china bacteriológica. Recuerde que a 100X es necesario usar aceite de inmersión. Alcohol etílico……………………………20ml Solución B Oxalato de amonio………………………. Puede teñir la preparación siguiendo las técnicas adecuadas. coloque el cubreobjetos y observe. agregue cristal violeta durante 2 min. 3. COLORACION DE GRAM. Siempre se empieza por 10X. 2. 4.8g. Con el asa tome una pequeña muestra de microorganismos del cultivo.80ml Mezclar las soluciones A y B Solución lugol 22 . DESINFECTE LA MESA CON CLORO TECNICA PARA REALIZAR PREPARACIONES TEMPORALES Trabaje cerca de la flama. Agua destilada……………………………. Esquematización de lo observado. colóquela en un portaobjetos limpio con una gota de agua destilada. Haga un frotis.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.. Las cápsulas aparecen en color azul y violeta y los cuerpos bacterianos en azul obscuro.foxitsoftware. deje caer el cubreobjetos suavemente. Observe la preparación al microscopio usando diferentes objetivos. 1. Coloque el cubreobjetos. TINCION DE PRODUCTOS DE EXCRESION Y CAPSULA DE BACTERIAS. evitando que se formen burbujas colocando inclinado.0g.com For evaluation only. Observación de preparaciones temporales permanentes de bacterias.0.

Glicerina……………………………………80ml. Se lava con agua cuidadosamente... 1... Fije la preparación al aire o con calor (a la flama)... 4..... Se observa al microscopio con el objetivo de inmersión. En una gota de agua coloque una pequeña masa de bacterias esparciéndolas a lo largo.5g Fenol………………………………………2. Absorba el agua con papel sin frotar. Se cubre con cristal violeta se deja actuar 2 min.5% en alcohol etílico al 95%. Agua destilada…………………………………………100ml..0g... filtramos y usamos Cristal violeta Cristal violeta……………………………. *Mordiente: Acido tánico…………. debido al gran número de enfermedades que ocasionan.com For evaluation only.. Yodo…………………………………………1..5g Etanol a 97%.. finalmente dejamos reposar durante cuatro días a temperatura de 180.. agitando para una decoloración homogénea. Agua destilada………………………………100ml. 2.....100ml. Se prepara un frotis y se seca al aire..10ml. Se añade el mordiente filtrado y se deja de 1 a 5 min. KI……………………………………………. 7. lave con agua corriente.... Se seca la preparación al aire..5%. Debe de ser un cultivo de 24 horas. y decante. 5. Cubra la coloración con safranina 1 min.....0g Agua destilada………………………………..80ml Posteriormente adicionamos 15 ml Trióxido de Cromo al 2... Decolore con alcohol etílico por 30 seg.. Se repite el lavado de la misma forma.. TERCERA PARTE: HONGOS Los hongos comprenden al grupo más numeroso de microorganismos fitopatógenos... TINCION DE FLAGELOS DE BACTERIAS. y lave con agua corriente.....0.... Observe al microscopio...Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. 23 ..…20 gr Agua caliente…………….....2... 3... Colorante de contraste ( solución de afranina) Safranina al 2..20ml.. 6.... Cubra la preparación con lugol 1 min y lave con agua corriente.foxitsoftware..... Cubra la preparación con cristal violeta 1 min.. siendo además los causantes de las mayores pérdidas económicas agrícolas...

3. carentes de clorofila. Entre las estructuras de reproducción asexual están . ya que se encuentran en el suelo. ascas -libres o en apotecios. indicando los nombres de las estructuras. los oídos. que nacen directamente de una espora de resistencia o en basidiocarpos. Están constituidos por células redondas u ovales solitarias o en plasmodios. Con una asa estéril (o una aguja de disección ).com For evaluation only. y si el protoplasma es continuo en las hifas el micelio es cenocítico. acérvulos o picnidios. Cada hifa está constituida por una pared celular que protege a la membrana celular y al contenido protoplasmático. El hábitat de los hongos es muy amplio. peritecios y cleistotecios. ACTIVIDADES. ribosomas. en donde se encuentran dispersos sus núcleos verdaderos. esporodoquios.y basidios. o más frecuentemente por estructuras alargadas y ramificadas llamadas hifa. 1. utilizando diferentes técnicas de tinción.foxitsoftware. estos últimos solitario o agrupados en sinemas. esporangios y conidios. 2. retículo endoplásmico y gránulos de sustancias de reserva. Observación de preparaciones permanentes de hongos. Elaboración de preparaciones temporales y permanentes de hongos. cuyo conjunto se denomina micelio. Extienda el micelio y agregue una gota de azul de metileno. Porta y cubreobjetos Mechero o lampara de alcohol Caja de Petri Agujas de disección Tejidos vegetales enfermos Azul de lactofenol azul de metileno rojo congo lugol preparaciones de hongos cultivos de hongos Azul de algodón PREPARACIONES TEMPORALES DE HONGOS 1. 24 . y muchas son afectadas por un gran número de estos organismos. Algunas estructuras de reproducción sexual son las oosporas. en el agua y dentro o sobre plantas y animales. Esquematización de lo observado. clamidosporas. Se considera que todas las plantas son susceptibles al ataque de por lo menos un hongo. son microscópicos y macroscópicos. Si las hifas están separadas en celdas. Prosénquima y pseudoparénquima . así como las mitocondrias. tome una pequeña muestra de hongos y colóquela en un portaobjetos con una gota de agua destilada.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. MATERIALES Y METODOS. Pueden desarrollarse en condiciones climáticas muy variadas. Los hongos pertenecen al reino Fungi. se dice que el micelio es septado. encontrándolos en rangos de temperatura que van desde los 0ºC hasta los 50º . 2. uni y pluricelulares. En algunos hongos el micelio llega a formar pseudotejidos.

(2004) Objetivo. formación del tubo germinativo. and Windham. 25 . el siguiente paso para cumplir a cabalidad con el segundo postulado de Koch.com For evaluation only. sustituyendo colorantes.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. se lava. Se debe dar un manejo de tiempos en el desarrollo de los hongos para poder observar las estructuras desde el inicio de su formación. diferenciación de las estructuras reproductivas asexuales y sexuales. 2. Windham. usando lactofenol en lugar de agua para colocar el micelio. 1. al efectuar el preparado correspondiente. Al final de cada práctica todo el material biológico y medios de cultivo: Antes de lavarlo se esteriliza. los desechos sólidos se colocan en el lugar indicado para estos. Realice una preparación temporal de hongos. permita que se difunda y observe al microscopio. en caso que este agente causal sea un hongos como en la mayoría de las enfermedades que limitan la producción agrícola: es la técnica de microcultivo. Por ejemplo esta técnica resulta sumamente útil para aquellos hongos en los que es difícil observar la formación de los conídios sobre los conidióforos y la forma y estructura de éstos. Coloque el cubreobjetos y observe al microscopio. • Conocer la técnica de microcultivo para la caracterización de estructuras somáticas y reproductivas para identificar morfológicamente a los hongos fitopatógenos. su crecimiento y esporulación en todos sus detalles y así tener elementos morfológicos de estructuras somáticas y reproductivas completas para así poder hacer la identificación con mayor confiabilidad y conocer a los hongos como agentes causales de enfermedades en los cultivos de importancia agrícola Dhingra. con esta técnica se obtienen las distintas fases del ciclo de vida de los hongos. porque. • Esta técnica se puede seguir. 3. Mediante este método se puede observar bajo el microscopio. es la identificación del agente causal y una herramienta más para cumplir con este objetivo. se seca se vuelve a esterilizar y se entrega al laboratorista en las mismas condiciones en que lo recibió para llevar a cabo la práctica MICROCULTIVO Introducción. and Sinclair(1985) Trigiano. que va de germinación de la espora.foxitsoftware.. TINCION CON ROJO CONGO. Una vez que se tiene el resultado de las diferentes técnicas de aislamiento como lo es la obtención de la cepa pura. Coloque el cubreobjetos y por un extremo agregue una gota de rojo congo*.. micelio. IMPORTANTE. se desprenden y/o se rompen. hifas.

Caja de Petri estériles con PDA. Caja de Petri con portaobjeto. Bisturí. Pipeta. Pinzas de disección. Recipiente con alcohol al 96%.com For evaluation only.foxitsoftware. Papel parafí 26 . cubreobjeto y triangulo de vidrio (estéril). Aguja de disección.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Materiales y Métodos. Agua estéril. Caja con cepa pura. Puntas.

2002. Biodiversity of fungi inventory and monitoring methods.B. D. 2001. en el fondo de la cámara de microcultivo para mantener la humedad.este portaobjetos debe de estar sobre el triangulo de vidrio 3. G. UAM IB UNAM.56 P53 Ø Narayanasamy. Toriello. D. El crecimiento del hongo se detiene cada 24. New York. Se coloca el cubre objetos sobre el cuadro de PDA inoculado. 518 pp. este paso se realiza en el interior de una campana de flujo laminar preparada para trabajar bajo condiciones asépticas 2. Modern assay for plant pothogenic fungi. G. S. P. Concepts and Laboratory. Se agregan 2ml de agua estéril. procurando que quede bien centrado. C A B International. C. B. y detener su desarrollo a la 48. 90pp.. Los pasos 1-5 se llevan a cabo en el interior de una campana de flujo laminar o en mesas de trabajo en condiciones asépticas 6. Basic Plant Pathology Methods.. 518 pp. and Windham.. 7. 5. T. N.. C. London. R. 2004. CRC Press. M.foxitsoftware. 1994. M. 2001. F. and Foster. SB 731 N37. respectivamente BIBLIOGRAFÍA Ø Dhingra. Dewey. se repiten los pasos del 1 al 7 para mas microcultivos. A. y Ulloa..3 M84 Ø Narayanasamy.B.C. 72 y 96 hrs. M.. S.B. con la ayuda de un bisturí estéril. Bills. Plant pathogen detection and disease diagnosis. SB731 N37 Ø Schots. 1.. QK600. O..5 D45 Ø Mier. Ø Muller. and Oliver.. R. F. Dentro de la cámara de flujo laminar.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Windham. Marcel Dekker Inc. uno de los cuadros de PDA se transfiere al portaobjetos que esta en la cámara de microcultivo . Plant pathogen detection and diseases diagnosis. C.. Boca Raton. T.. 267 pp. Elsevier Academic Press. Hongos microscópicos saprobios y parásitos: Métodos de laboratorio. 355 pp SB 732. Plant pathology. 777pp. 27 . and Sinclair J.com For evaluation only. sin mojar el área de crecimiento del hongo. 413 pp. SB732. Washinton. Se sella el dispositivo de microcultivo con papel parafilm y se rotula. 1985. Con un bisturí estéril se cuadricula el medio de cultivo de la caja de Petri con PDA en cuadros de aproximadamente 1 cm2. QK 603 M55. Con la aguja de disección estéril o con una asa bacteriológica estéril se lleva el inóculo a las orillas superiores e inferiores del cuadro de PDA 4. CRC Press. M.B. 2004. A. M. Marcel Dekker Inc. C. C. SB733 M63 Ø Trigiano. P. 8.

Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. las claves que usa para la identificación de los diferentes grupos de hongos fitopatógenos están en función del tamaño de las estructuras somáticas y de reproducción de este grupo de fitopatógenos. Calibración de los lentes objetivos. MEDIDA DE ESTRUCTURAS DE AGENTES FITOPATÓGENOS CON MICROSCOPIO ÓPTICO Introducción. óptico para su identificación morfológica Material. Hay que evitar que quede invertida la escala (Ver Fig 1). peritecios. estructuras somáticas y reproductivas de importancia taxonómica de agentes fitopatógenos con el microscopio. Un micrómetro ocular.. 28 . Fig 1. de los datos morfológicos que hayan resultado de la técnica de microcultivo es necesario saber las medidas de las estructuras somáticas y reproductivas que se observan en el microscopio óptico para tener una identificación confiable del agente causal.A.. Un portaobjetos micrométrico. acérvulos. y B.Sobre la platina del microscopio se pone el micrómetro del objeto similar portaobjeto como si fuese una preparación. apotecios.Se coloca en el ocular del microscopio óptico el micrómetro ocular –aunque a menudo se trabaja con el ocular micrométrico permanente puesto en el microscopio. La The American Phytopathological Society en todas sus obras de enfermedades de los cultivos agrícolas. o de las colonias que hayan formado sobre las placas en medios de cultivo. • Que el alumno aprenda a calibrar y medir células. sinemas.com For evaluation only.foxitsoftware. Un microscopio óptico. Preparaciones permanentes y/o temporales de estructuras fitopatógenos. esporodoquios. clestotecios entre otras.. Objetivo.. Por ejemplo si se habla de hongos fitopatógenos las estructuras que se miden para identificarlos son: picnidios. Metodología.. La identificación del agente causal es básica para precisar el diagnóstico y así poder establecer el mejor método de control para estas limitantes biológicas en la producción agrícola. Para identificar a un agente fitopatógeno y cumplir cabalmente con el segundo postulado de Koch de además de los datos correspondientes al aspecto de los síntomas que hayan causado en su hospedante.Colocación de la reglilla ocular. 1.Escala de la reglilla ocular micrométrica 2.

con ese ocular y objetivos respectivamente. como cada línea del micrómetro del objeto corresponde a 10 micras. Puesto que cada división de éste equivale a 10 µm.009 mm = 9 µm y este valor es el que utilizamos para definir el tamaño de cada estructura que se mide. es obvio que esta calibración es para este microscopio.97 mm. el • 29 .Escala de la reglilla portaobjeto 3. Fig 2. se les puede ver superpuestas en el campo visual. Esta operación se deberá repetir cuando se cambie de microscopio o de objetivos para evitar errores.Cuando se observa a través del microscopio con ambas reglillas micrométricas colocadas.foxitsoftware. es decir 0... se hacen coincidir ambas reglillas en el cero. en el otro extremo de las reglillas se observa cual de las 100 líneas de la reglilla ocular coinciden con otra de la reglilla del portaobjetos. una línea del micrómetro ocular es equivalente a 0. y se puede saber cuántas líneas del micrómetro ocular concuerdan con cuántas líneas del micrómetro del objeto.com For evaluation only. 3.. Ejemplo 2: Se hace coincidir los ceros de ambas reglillas (ver imagen 2) y se observa que siete divisiones del ocular micrométrico coinciden con dos divisiones del portaobjetos micrométrico. la superposición de las líneas ha de ser siempre al comienzo del margen exterior de éstas. Puesto que las rayas del portaobjetos aparecen tanto más gruesas cuanto mayor son los aumentos. En el campo visual.. la reglilla ocular se encuentra graduada del 0 al 10 a un lado la reglilla del objeto con 100 divisiones.Moviendo la platina se observa a través de microscopio con ambas reglillas colocadas se les puede ver superpuestas en el campo visual. Ver figura 3 Fig 3.Moviendo la platina se hace coincidir el margen de una raya del ocular micrométrico con una del portaobjetos micrométrico. Y se hacen los cálculos correspondientes.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. y se puede saber cuantas líneas del micrómetro ocular concuerdan con cuantas lineas del micrómetro del objeto se hace coincidir el margen de una raya del micrómetro ocular con una del micrómetro del objeto. • Ejemplos 1: Se hace coincidir los ceros de ambas reglillas (ver imagen 1) y se observa que en el otro extremo de las reglillas el 100 de la reglilla ocular coincide con el 97 de los trazos de la reglilla del objeto. por lo tanto..Vista simultánea del ocular y de la reglilla micrométrica 4.

Omega editores.Una vez que se ha cuantificado el valor de cada línea en la reglilla del ocular ( 9 y 2.Medición de ejemplares y estructuras de micromicetes. 86pp. según se explicó antes. una división del ocular = 20/7 = 2. 2ª. España. España. B. J.foxitsoftware. donde coinciden la primera línea de las dos reglillas y la línea 2 de la reglilla portaobjetos con la siete de la ocular b). CECSA editor. Barcelona. Cárdenas 1997 El microscopio óptico FES. 4ª. Barthelemy.8 µm (Ver Fig 4). H y R. 1972. BIBLIOGRAFIA Barrera. Lee. Técnicas para el Laboratorio de Biología.. Guía de los hongos microscópicos. ____________.. D.com For evaluation only. 96 pp. y A.Si se llega a cambiar el objetivo por otro menor aumento se debe repetir la operación para encontrar nuevos valores en la reglilla. pero en este último caso se tiene que mantener inalterada la distancia interpupilar. 167 pp. D. en este caso. puesto que el cambio altera la distancia mecánica y el valor del micrómetro depende de ella. México. F. México. E. Edición. de manera que se puede colocar una célula o estructura celular cualquiera. Dawson. 1996.Iztacala-UNAM P y V editores. E. se puede retirar el portaobjetos micrómetro y en su lugar se puede colocar un portaobjetos normal con el espécimen a medir y se deja colocado el micrómetro ocular. El Microscopio Óptico. Atlas de Microscopia. 1984. Edición. Barcelona. 1999. FES Zaragoza UNAM. R. 2. R. F. por tanto el tamaño total de esta célula es de 16 x 9.Vista simultánea del ocular y de la reglilla micrométrica. Edición. E. México. M. 1.8 µm en los ejemplos). es decir 144 micras. Estado de México. • Ejemplo 3: Si la estructura del hongo se extiende a lo largo de 16 líneas y cada una de ellas vale 9 micras. México. se hace coincidir una raya de la escala con los márgenes de la estructura fúngica elegida. esta medición se puede realizar en un microscopio mono o binocular.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Jover Ediciones. 1ª. 148 pp. y se cuenta el número de divisiones de la escala comprendidas en la longitud y en el ancho de dicha estructura.. valor de cada división del ocular se obtiene mediante una simple regla de tres: 7 divisiones del ocular = 20 µm. Muntañola. 30 ... Mateu. Fig 4.

-. 9.....foxitsoftware. INTRODUCCIÓN: MATERIALES Y METODOS 100 g. 6.Aplicar 650 ul de la mezcla del paso 7.Tranferir el flujo del paso 5 a un nuevo tubo (no abatecido) sin provocar disturbios o perturbar el peller de desechos celulares.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. 31 . mezclar e incubar por 5 minutos en hielo. incluyendo el precipitado que pudo haberse formado a el DNeasy mini spin colum sentado en un tubo colector de 20 ml (abastecido). tejido vegetal Mortero con pistilo estéril Tubos eppendorf Hielo Nitrógeno líquido Espátula Pipetas de plástico Gradillas eppendorf y de unicel Balanza Baño maría Centrifuga Vortex Reloj Autoclave Horno Pipetas de 10 ul Pipetas de 100 ul Pipetas de 1000 ul DNeasy Plant Mini Kit 1.Pesar directamente en un mortero 100 mg de tejido fungico y macerarlo con nitrógeno líquido hasta un polvo fino usando el pistilo.. Mezclar dos o tres veces durante la incibación invirtiendo el tubo. Continúe inmediatamente con el paso 2. 3. Desechar el fluido y reusar el tubo colector en el paso 11. 4..com For evaluation only.Añadir 1.Colocar la DNeasy a un nuevo tubo colector de 2 ml (abastecido) añadir 500 ul de buffer AW a el DNeasy colum y centrifugar por un minuto a = 6000 xg ( = 8000 rpm).Añadir 400 ul de Buffer AP1 y 4 ul de RNAsa solución stock (100 mg/ml) para unmáximo de 100 mg (peso fresco) o 20 mg (peso seco) de tejido vegetal y agitar vigorosamente en vortex. 8. AISLAMIENTO DE DNA FUNGICO DE CULTIVOS PUROS CON DNeasy Plant Mini Kit (esta práctica solo se realizara sí los alumnos seleccionan a hongos fitopatógenos en su seminario) OBJETIVO: Obtener DNA de cultivos puros de hongos fitopatógenos.. 2..Aplicar o transferir el lisado a el QIA Shredder spin column (tubo lila) sentado en un tubo de 2 ml y centrifugar por 2 minutos a máxima velocidad.Añadir 130 ul de buffer AP2 a el lisado. 7. transferir el tejido en polvo a un tubo eppendorf permitiendo que el nitrógeno se evapore impidiendo que las muestras se descongelen. Centrifugar por 1 minuto a = a 6000 xg corresponde a = 8000 rpm para la mayoría de las centrífugas y desechar el fluido.5 volúmenes de buffer AP3/E a el lisado clarificado y mezcle por pipeteo. Opcional centrifugar el lisado por 5 minutos a alta velocidad 5.Incubar la mezcla por 10 minutos a 65o C.

. una vez que se ponen las muestras en el gel. Se colocan directamente del tubo al pozo. Se colocan directamente del tubo al pozo. P26.5 ml o de 2 ml (no abastecidos) pipetesr 100 ul de buffer AE precalentado (65oC) directamente en la membrana de DNeasy. el marcador se pone en los pozos de los extremos delas muestras.. 12. el marcador se pone en los pozos de los extremos.foxitsoftware.com For evaluation only.Repetir la dilución (paso 12) como esta descrito. S28. son las siguientes muestras: P16. S27. b) Cubrir el gel con el amortiguador TAE1X hasta que quede sumergido a 4 mm de profundidad respecto a la superficie del TAE. P27. cuidar de no formar burbujas en la placa de gel. TA29 (10 µl por muestra) Tinte para electroforesis 2 µl para cada una de las muestras de DNA Gradilla Gel de agarosa en TAE1X (ver elaboración de gel de agarosa) Rotulador Papel de parafilm rotulado con el nombre de las muestras (diseño de corrimiento) en el orden que se colocan en el pozo del gel. marcador XIV se usa para DNA de banda pequeña. retirarlas con la pipeta de 10 µl 32 . O bien. RESULTADOS ELECTROFORESIS PARA DE DNA DE HONGOS FITOPATOGENOS Kit (esta práctica solo se realizara sí los alumnos seleccionan a hongos fitopatógenos en su seminario) MATERIAL. P25. se si formaran. EQUIPO Y SUSTANCIAS Recipiente de unicel con hielo Marcador λ 50 ng/µl se usa para DNA de banda grande o 3 µl para un pozo del gel y 6 µl para otro pozo. CAB.Transferir el DNeasy colum a tubos de cetrífuga de 1. Muestras de DNA de productos DNeasy en este caso. Micropipetas de 10 µl Puntas blancas estériles Pipetas de plástica Centrífuga Equipo de electroforesis Analizador de geles Flúor-S - - PROCEDIMIENTO a) Colocar el gel de agarosa dentro de la cámara de electroforesis. 13. 3 µl para un pozo y 6 µl para otro pozo.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.Añadir 500 ul buffer AW a el DNeasy colum y centrifugar dos minutos a una máxima velocidad para secar la membrana. Incubar por 5 minutos a temperatura de la boratorio y después centrifugar por un minuto a = 6000 xg (= 8000 rpm) para diluir. 11.. S26.

355 pp SB 732. C. D. O. C. and Windham... B.B.com For evaluation only. d) Centrifugar las muestras de DNA a alta velocidad durante 5-10 segundos y se colocan en un recipiente de unicel con hielo. C. A. New York. Washinton. 1985. Basic Plant Pathology Methods.5 D45 Ø Narayanasamy. SB732. 1994.. M 3 µl 50 ng/µl P16 Todas P25 las P26 P27 S27 10 µl S26 M +2 µl 6 µl de de 50 DNA tinte ng/µl S28 CA8 TA29 muestras llevan f) Colocar en el papel parafilm 2 µl de tinte y en esta gota formada en el papel .B. 2001. evitando derramarlas en los pozos adyacentes. D. 518 pp. S. i) Tapar la cámara de electroforesis. Marcel Dekker Inc. Dewey. Marcel Dekker Inc. 413 pp. A.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Modern assay for plant pothogenic fungi. M. e) En un trozo de papel parafilm. F. N. P. Resultados Bibliografía Ø Dhingra. como lo indica el esquema h) En el mismo orden. Plant pathology.. Asegurarse de que los electrodos de la tapa tengan el rojo al frente y el azul atrás en la tapa y en la consola de mando el rojo (+) en la parte de arriba y azul (-) en la parte de abajo. CRC Press. 2004. en un extremo se colocan 3 µl a una concentración de 50 ng/µl y en el otro extremo se colocan 6 µl a la misma concentración.. SB 731 N37 33 . CRC Press. colocar cuidadosamente las muestras de ADN tenidas (gotas) en los respectivos pozos de gel. R. M.56 P53 Ø Narayanasamy.foxitsoftware.. SB731 N37 Ø Schots.C.. 267 pp. encender la fuente deponer a 75 voltios y dejarla que corra durante 40-45 minutos. and Oliver. T. 518 pp. P. se colocan los 10 µl de DNA de la correspondiente muestra. Este mismo procedimiento se lleva a cabo para cada una de las muestras de ADN. London. Boca Raton. R. and Sinclair J. rotular en el siguiente orden las muestras de DNA y marcadores. Windham. SB733 M63 Ø Trigiano. Plant pathogen detection and disease diagnosis. C A B International. c) Sacar las muestras de DNA del congelador y descongelarlas a temperatura de laboratorio en una gradilla. (Se forma en el papel una gota de 12 µl de cada muestra) g) Los marcadores se aplican directamente del tubo que los contiene. Concepts and Laboratory.. 2001. Plant pathogen detection and diseases diagnosis.B.

com For evaluation only. Algunos ejemplos de estos son Meloidogyne.etc. En algunas especies de nemátodos la primera y segunda etapa larval no puede infectar a las plantas y sus funciones metabólicas son realizadas a expensas de la energía almacenada en el huevecillo. Otros géneros pasan una parte de su vida como endoparásitos y la otra parte la pasan en el suelo que se encuentra alrededor de las raíces que parasitan . Los nemátodos son gusanos cilíndricos con cuerpo alargado y delgado con simetría bilateral. Ditylenchus. Plástico de 1 m 2 Probeta 2 cubetas Tamices de 100. Esquematización de lo observado. en donde permanecen o migran hacia otros órganos de las plantas.Cricononemoides. Observación de nemátodos vivos.foxitsoftware. 4. o bien llegan hasta el cilindro central de las raíces hospederas. 100 y 325 mallas /cm2 Pizeta Vasos de precipitados Preparaciones permanentes Muestra de suelo Tubos de centrífuga Centrífuga Agitadores Cajas de petri pequeñas Caolín Solución azucarada (55 gr. Aphelenchoides. nervioso. produciendo lesiones internas en los tejidos vegetales. después de los insectos. no segmentados y carecen de patas u otros apéndices. MATERIALES Y METODOS. por ejemplo. Los nemátodos fitopatógenos presentan géneros ectoparásitos. Su tamaño fluctúa entre unas cuantas micras hasta 0. 3. Observación de preparaciones permanentes y temporales de nemátodos. 1. los cuales pasan toda su vida en el suelo y se alimentan externamente de las raíces de las plantas hospederas. Anguina. Durante el ciclo de vida de los nemátodos se llegan a presentar cinco estados y cuatro mudas. Generalmente se ubican en el parénquima cortical. reproductor y digestivo. ACTIVIDADES.5-1 mm. Extracción de nemátodos . 2. Heterodera y Tylenchus. Cacopaurus. de azúcar +100 ml de agua) 34 . Hemicycliophora. CUARTA PARTE: NEMATODOS Los nemátodos son organismos fitopatógenos que pertenecen al reino Animal y son probablemente los organismos pluricelulares más abundantes en el mundo. a estos se les conoce como nemátodos semiendoparásitos. indicando los nombres de las estructuras. Su cutícula es lisa. etc. Presentan todos los sistemas fisiológicos principales de los animales como lo son el sistema excretor.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. por ejemplo . Otros géneros son endoparásitos.

Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. ya que de esta forma el agua ayudaría a pasar a los nemátodos a través de la malla del tamiz y los dañaría. Esto se hace con el objeto de tener una referencia del tamaño de la población que se encuentra en 200 ml de suelo. 3.foxitsoftware. Se tira el sobrenadante. 11. etc. Se remueve bien la tierra para homogeneizarla. 2. 5. 6. Esta mezcla se vacía en una cubeta A con un poco más de agua. 35 . 10. 13. raíces. se deshacen los terrones y se retiran las basuras. La arenilla que quedo en el tamiz de 325 se recoge en un vaso de precipitados con una pizeta. 9. 7. 15. se deshacen los grumos y se vacía el sobrenadante en los tamices de 100. 16. Esta operación se repite dos veces más. EXTRACCION DE NEMATODOS POR EL METODO DE TAMIZADOCENTRIFUGADO 1. La arenilla recogida se distribuye en los tubos de centrífuga y se le agrega un poco de caolín a cada tubo. 8. Se recoge el sedimento con una pizeta y se pasa a una caja de petri pequeña con un poco de agua. Al sedimento se le agrega la solución azucarada y se agita bien. Se agitan bien. se vierte a través del tamiz de 325 y se recoge en la cubeta A. sobre todo si se desea hacer un estudio cuantitativo. 14. 4. 5 y se pasa al mismo vaso de precipitados. Se observa al microscopio. El agua que se recogió en la cubeta B. 200 y 325 sobrepuestos y se recoge en la cubeta B. a 2900 rpm. Esta operación se repite 2 veces más. Se centrifugan durante 3 min. Se coloca la muestra de suelo sobre un plástico.com For evaluation only. Se centrifugan durante 5 min. procurando que el ángulo que forma el chorro de agua con el tamiz sea lo más agudo posible. 12. a 2900 rpm. Se pasa el sobrenadante por el tamiz de 325 y se lava perfectamente bien hasta eliminar por completo la solución azucarada. En una probeta o vaso de precipitados se ponen 200 ml de agua y se agrega suelo hasta que la marca del agua llegue a 400 ml. piedritas. nunca recto. La arenilla que quedó en el tamiz se recoge con una pizeta de la misma forma que se mencionó en el núm.

foxitsoftware. Indique si es Gram (+) o Gram (-). 1.com For evaluation only. La solución azucarada. hace que estos floten y queden suspendidos en la solución. de diámetro Una pinza Mohr CUESTIONARIO. normalmente los nemátodos parásitos tienen escasa movilidad. Este método de extracción brinda la oportunidad de obtener casi todos los nemátodos del suelo de una forma rápida. Se emplea el caolín para sedimentar a los nemátodos y poder eliminar el agua sobrenadante de la muestra. El suelo retenido en los tamices se centrifuga para separar a los nemátodos de las partículas orgánicas mediante la flotación de los mismos en una solución de gravedad específica mayor de la que poseen los nemátodos. Embudos preferentemente de vidrio de 15 cm.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. mencionando la 36 . Cómo están organizadas las células de los hongos? 4. En qué se diferencian bioquímicamente las bacterias Gram (+) y las Gram( -)? 3 . por lo que este método funciona solamente para nemátodos muy móviles. EXTRACCION DE NEMATODOS POR EL METODO DE EMBUDOS DE BAERMAN Este método se basa en los principios de movilidad de los nemátodos y de mayor densidad de estos que el agua. Describa la morfología de la que obtuvo su colonia de bacterias. siendo los de vida libre los que más se mueven y los que más abundantes resultan en este método de extracción MATERIALES. 2. como tiene una gravedad específica mayor a la que presentan los nemátodos. Señale 3 ejemplos de hongos fitopatógenos de cada clase de hongos.

G. 5.. P.B. APS Press. San Diego.. Second edition. SB733 M63 13. SB731 N37 12. 2002. T. F. New York. La Sintomatología es la rama de la Fitopatología que estudia la los síntomas y los signos que producen los patógenos en las plantas que atacan. I. QK 625 D1 B3 2. A.A..Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Fourth edition. Marcel Dekker Inc. N. CRC Press. and Sinclair J. 5th ed. 1985. 6. 518 pp. Boca Raton. Dewey. L. Costa Rica. Sydney. B. 777pp.56 P53 PRACTICA 4 SINTOMATOLOGIA INTRODUCCION. Uredinales (royas) de México. S. QK 623. London. T. Mier.A1 H35 7. Toriello. Hanlin.I.. C. Trigiano. UAM IB UNAM. N. C. Muller. D. M.. APS Press. Heidelberg. CRC Press. C. 2004. Kálman Vánky. P. B. y Ulloa. International. 1994. 413 pp. 1998.. Hongos microscópicos saprobios y parásitos: Métodos de laboratorio. and Hiratsuka. 6. end Hunter B. Elsevier academic Press. M. Oxford. León Gallegos. G. Y. Elsevier Academic Press. G. M. 2005. 1997. Applications of PCR in mycology. 238 pp. Illustrated genera of rust fungi. D.Agrios. C3 8. Cummins. En qué se diferencian los nemátodos de vida libre de los fitopatógenos? Señale por lo menos 3 características. Third Edition. 263 pp. Illustrated genera of ascomycetes. 90pp.. French. O. M. APS Press 225 pp.com For evaluation only. Singapore.. Illustrated genera of imperfect fungi. M. Amsterdam.foxitsoftware. Schots. London. and Oliver. Basic Plant Pathology Methods. El conocimiento de la sintomatología es indispensable para el diagnóstico de las enfermedades.B. 2002. Narayanasamy.B. New York. Boston. C.5 D45 5. CAB. OK 627. A.T. 2003. Illustrated genera of smut fungi.. T. * 1. 9. S. 1980 Métodos de investigación fitopatológico.C. 2004. Windham.... M. San José. MacMillan Publishing Company. Plant pathogen detection and disease diagnosis. G. B. Volume 1. SB732. 37 . Vol 1. 440 pp. san Francisco. QK600. R. y Cummins. H. Barne H. 992 pp. R. C A B International. D. Herbert. SARH. E. H. Biodiversity of fungi inventory and monitoring methods. T. R. 1981. Modern assay for plant pothogenic fungi. and Windham. Plant pathology. B. Concepts and Laboratory. y Vol 2 492 pp. enfermedad que provocan.C. Dhingra.B. and Foster. Washinton. QK603 A66 3. 355 pp SB 732. 1987. Paris. 267 pp.B.R. A1 4. Bridge. 2001. C. 218 pp. C. 1. Tokyo. 10. QK 628 A1 V35. QK 603 M55. Bills.. F. Qué importancia tienen las técnicas de tinción de microorganismos? BIBLIORAFIA.Plant pathology. G.3 M84 11.

utilizando la lupa y el microscopio cuando sea necesario. producida dentro o fuera de los tejidos del hospedero. y se siguen las claves indicadas a continuación. Desde el punto de vista morfofisiológico. no atacado directamente por el patógeno. se han agrupado bajo diversas condiciones. Identificación de síntomas y signos en ejemplares vegetales enfermos utilizando las claves incluidas en la metodología. Típicamente cada enfermedad produce varios síntomas característicos. se dice que un SINTOMA es la manifestación visible de una condición patológica en una planta sensible. OBJETIVOS. sino como una secuela de este.com For evaluation only. a los que aparecen en otro órgano de la planta. debido a condiciones ambientales favorables al patógeno. mediante la observación de material fresco y de herbario. provocando síntomas complejos. ACTIVIDADES. Debido a la gran cantidad de síntomas que existen. MATERIALES Y METODOS Ejemplares fitopatológicos de herbario Ejemplares fitopatológicos frescos Lupas Microscopios compuestos Microscopio estereoscópico Agujas de disección Navaja Los ejemplares a identificar se observan cuidadosamente. En algunas ocasiones los hospederos son atacados simultáneamente por más de un patógeno. hipoplasias e hiperplasias. A dicha serie se le denomina síndrome. tenemos que los síntomas que ocurren en los órganos directamente atacados por los patógenos se llaman Síntomas primarios. del efecto del medio ambiente. se llaman síntomas secundarios.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. dependiendo de diversos factores tales como el lugar de aparición.foxitsoftware. Otras veces los síntomas no se expresan totalmente. Identificar los diferentes síntomas y signos que ocurren en enfermedades vegetales. los síntomas se agrupan en necrosis. que generalmente aparecen en series subsecuentes durante el curso de la enfermedad. Así. en cambio. del número de patógenos involucrados. 38 . y un SIGNO es la estructura o evidencia del patógeno mismo. etc. denominado a estos síntomas enmascarados.

..2...........2....…. MANCHAS Manchas necrótica que posteriormente se rasga y cae.......2...... 1...2.2.1... 1..1.. acuosas. MARCHITEZ Manchas traslúcidas....2..….2.. seco duro.2...……………………............……………………...2.1.1.4....2....…...1......1.. PUDRICIÓN BLANDA. AMARILLEO Presencia de tejidos débiles. Si se presentan tejidos leñosos.. Estas acumulaciones de líquidos provienen de células que han sufrido daños en sus membranas celulares.1...2...………………………………………. PODREDUMBRE 1....1...1...........1.......….2.2. por lo que el órgano atacado se seca........1...1..... NECROSIS....1..2.1.2.......3..com For evaluation only......2....2... 1.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www... PLESIONECROSIS Si se manifiestan hasta que las células y los tejidos mueren.......... HIDROSIS 1.Tejidos de almacenamiento Los tejidos sufren rápidamente una pudrición.......……………………...2.1.......2..5........ como pequeñas gotas de agua contenidas dentro de los espacios intercelulares........ quedando con un aspecto arrugado.1. PODREDUMBRE Si es antecedida por hidrosis con un reblandecimiento de los tejidos………………..2... PLESIONECROSIS El tejido foliar toma coloraciones amarillentas debido a la destrucción de la clorofila... flácidos........foxitsoftware......1........... 1. CHAMUSCADO Necrosis extendida en toda la lamina foliar de forma irregular……...............1...2.....1.1.... dejando pequeños agujeros........1.1.. HOLONECROSIS 1................... Tejidos verdes..3.………………………. bien definidas.1. Marchitez y caída de las plantitas de almácigo.TIRO DE MUNICION 39 ...1... MOMIFICACIÓN 1.. Caracterizadas por la degeneración y muerte celular Si se presentan antes de que ocurra la muerte celular......... debido a la pérdida de la turgencia celular provocada por la carencia de agua.1. El agua es eliminada rápidamente de los tejidos........2. en ocasiones rodeadas por un borde púrpura o de algún otro color.. como consecuencia de la necrosis del cuello del tallo....2...1..3. casi siempre por el taponamiento de los vasos conductores a causa de los patógenos. diversos colores y tamaños......1....1..1.............1........2.2.. TIZON Zonas de tejido necrótico.2. Si se presentan tejidos verdes. HOLONECROSIS Si se presentan en tejidos de almacenamiento...1 AHOGAMIENTO ó "DAMPING-OFF" Necrosis localizada alrededor del borde de la hoja………1...

AGOSTAMIENTO Necrosis extensiva que provoca la caída de los frutos……………………………… ... 1....2. a lo largo de venas y tallos…........1....13.2............ RONCHA ó ERUPCION Manchas necróticas muy pequeñas extendidas en todo el órgano.1.......foxitsoftware.....7.....2...12....2.2. Tejidos leñosos Necrosis restringida a los tejidos corticales del tallo o raíz......2....2.... DESGRANAMIENTO 1.................. ..... ………………….....10...2.............3..... HIPOPLASIAS..1..2.........4........MUERTE REGRESIVA Exudado de tejidos leñosos....…….. generalmente después de la hibernación..1....... GOMOSIS 2.3..2.BANDEADO Repentina desecación debilitación y muerte de toda la hoja debido a la acción indirecta de la actividad del patógeno....2.1.......2......................... ABIGARRADO Zonas alargadas en necrosis..3.............. CLOROSIS Moteado de colores verdes y amarillos o bien de tonos verdes.............4... generalmente coloreados vivamente..com For evaluation only..11..1..CANCER(CANCRO) Necrosis extensiva que se origina en el apéndice de brotes corre hacia su base..1....... Debilidad para alcanzar un tamaño normal.2....... ENANISMO Crecimiento escaso de los entrenudos.......2..... ...2.........Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. MOSAICO 40 .. 1.............................. Síntomas caracterizados por la debilidad de órganos o plantas para desarrollarse completamente........... ESCALDADURA Muerte repentina de brotes o yemas foliares………...3.....QUEMADURA Necrosis epidérmica que da como resultado un blanqueado de la epidermis y de los tejidos adyacentes en el fruto y hojas.. RAYADO Zonas necróticas alargadas...2....2..........2.BLANQUEO Las plantas adquieren una coloración amarillenta.................... ARROSETADO Supresión completa de color en hojas o frutos..2.1..2.......generalmente en frutos ………………..2.......2..2.....2....3.............2............8..........3....2. 1...……............1.………......3........... SANGRADURA Exudados de consistencia viscosa (gomosa)...6.. debido a la no formación de clorofila.2...5. Mancha necrótica sobre la cual hay crecimiento micelial obscuro…………..2.……1..........1.. generalmente rodeado de un callo de tejido sano....... en las regiones intervenales de la lámina ........ de consistencia acuosa. Lo que ocasiona que las hojas estén muy juntas....9.......

..………….............2....5..4..……………………..... GIGANTISMO Síntomas con acumulación excesiva de pigmentos………… 3.3. CALLO 3. que se tornan quebradizos (aparece en plantas mantenidas en la obscuridad)...6.. 3..1.1...1... nódulos ó agallas) Desarrollo de órganos adventicios alrededor de un punto local. como respuesta a una lesión.7...Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.3. Síntomas con desarrollo excesivo....…………. en forma de pequeñas lesiones.foxitsoftware.3.…………...1. proviene de la difusión del patógeno dentro de las áreas adyacentes al tejido sano.7.. FASCICULACION "ESCOBA DE BRUJA" Crecimiento laminar de tallos u otros órganos cilíndricos....TUMEFACCION (tumores..1.. RIZAMIENTO (VERRUCOSIS) Sobrecrecimiento de tejido epidérmico. elevadas. extendida……………………………....…. 3..8.. INTUMESCENCIA Hinchazón provocada por la acumulación excesiva de material nutritivo.....3...2. que envuelve a órganos completos…………………………. generalmente encima de un área constreñida.1.. SARCOSIS Hinchazón localizada. .. de algún órgano de la planta o de la planta completa..9.. GIGANTISMO. formadas por células con paredes suberizadas…………………………….... FASCIACION Desarrollo continuado después de que se alcanza el desarrollo normal..6.2. ETIOLACION 3. Debilidad completa de la planta para desarrollar algún órgano….. SUPRESION (EXTINCION) Tono amarillento blanquecino. ....1.. o bien por un desarrollo precoz de los órganos..1. provocada por la acumulación excesiva de agua...…. ásperas..2.1. PROLIFERACION Crecimiento de tejido sano... en ocasiones acompañado por enanismo.. Síntomas que resultan de un desarrollo excesivo en tamaño y color....1. generalmente rodeando cánceres.com For evaluation only... provocando que estos tomen forma aplanada.3.. los tallos con crecimiento excesivo..……………….3...1.3..3.…………………………………………….1. METAPLASIA 3........ 3... HIPERPLASIAS.2. HIPERCROMIA 41 .. Se da un torcimiento de los brotes o enrollamiento de las hojas por crecimiento excesivo de una parte del órgano……….3....... HIPERCROMIA Los órganos se desarrollan fuera de lugar o con otras formas…3. COSTRA (ESCARA) Marchitez causada por hinchamientos de las células epidérmicas y subepidérmicas..

...com For evaluation only.. debido a la producción y acumulación de ésta en los órganos………….....1. producidos por Meliolaceas o Capnodiaceas.3. o bien. con apariencia de fieltro suave.foxitsoftware.5....... En algunas ocasiones se observan conidios y cleistotecios. ROYA BLANCA O MAL DE LA CAL Presencia de pústulas que contienen una gran cantidad de esporas de uredinales...6... resultado de diversos procesos....... con micelios...... 3.. ROYA Se presenta una masa de color negro.... FUMAGINA U OLLIN 42 ...FILODIOS Desarrollo de hojas juveniles en plantas maduras……….…………………..2.....4......3.2. HETEROTOPIAS Desarrollo de Pétalos u otros órganos florales en forma de hojas.............…... como un micelio de color blanquecino o grisáceo..... ANTOCIANESCENCIA Coloración cobriza......de color oscuro.....2.... frutos o ramas.......3.. 4.4. pudiendo ser anaranjadas...... casi siempre se observa en el haz una mancha en correspondencia. etc. de color blanco... puede estar desnuda…………..……………………………………….......2...1...... son circulares en dicotiledóneas y alargadas en monocotiledóneas. Estructura de hongos -micelio y conidios... Todos son producidos por Erysiphales.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www..3...... 4.... MILDIU O CENICILLA VELLOSA Se caracteriza por la presencia de pequeñas pústulas o ampollas subepidérmicas. 3..4..... compuesta por teliosporas de Ustilaginales... Son producidos por Peronosporales…………...3. 3.. METAPLASIA Desarrollo de órganos en posiciones anormales.3..3.3..3.. Coloración verdosa..... localizado en el envés de las hojas. BRONCEADO 3....... en pequeños manchones o de forma continua.... VIRESCENCIA Coloración púrpura resultante del desarrollo excesivo de antocianinas……………. OIDIO O CENICILLA POLVOSA Se observa el crecimiento del hongo.....3..... la cual puede estar cubierta por una membrana... en tejidos normalmente carentes de clorofila....... CARBON O HUITLACOCHE... Llegan a formar sobre la epidermis de las hojas.. SIGNOS Se observa el crecimiento vegetativo del hongo.. verdaderas costras………………………………………4............ algunas veces por deficiencia de potasio.. constituidas por fructificaciones de Albugináceas....... 4... esporangios.2... JUVENILODIOS 4. Su color varía del amarillo al café oscuros..1..….....3..

1999Hand boock of Plant virus diseases. ZOOGLEAS. * 1. 2004.T.S.B. Schwartz. Boca Raton. Ford. insect.* 2. Boston. 1990. Plant Virology. Tosic. N.com For evaluation only. Singapore. * 6. 1990. London.* 2.E. CAB International Australian Center for International Agricultural Research (ACIAR).* 3. R. R. Compendium of cucurbit diseases. Heidelberg. Thomas.F. 1. Agrios. Brunt.8 EFLORESCENCIAS GRISACEAS. 2005. U. Boston. Toronto.. 1980. Oxford. Sydney.4.E. 9.F.. BIBLIOGRAFIA. PUNTUACIONES NEGRAS Es la apariencia de polvo sobre manchas de diversos órganos. APS Press. 553 pp* * En Biblioteca de la FES Cuautitlán C-4 PRACTICA 5 43 . 897 pp. apotecios. 374 pp. y son las fructificaciones como acérvulos..Plant pathology.A. amarillento u otros………………………………………………………………4. U. Lucas 1991. Shew H. Sydney. Academic Press. H:F. Crabtree K. 4. London. San Diego.A. 1001 pp.E. Plant virus infections. Matthews´ Plant Virology. Centro Internacional de Agricultura Tropical Cali Colombia.. San Francisco. España. New York. 5. USA. Sutic. 8. New York. Elsevier academic Press. Sydney. 1991..L. Alan. P-A Signoret. 5th ed. Identificar. Francisco.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. soil climatic contraints of Phaseolus vulgaris. Mundi-Prensa. Paris France. Dragoldjub D. E. Galves (eds). Elselvier/North-Holland. Ed. Florida. Luchar. Hull. 1991. Descriptions and List from the VIDE Database. 1996. 707 pp. CRC Press LLC. corresponden casi siempre a fructificaciones de Moniliales………………. London. Paul Minnesota American Phitopatologhical Society.E. Dominique. de color blanquecino. A. virases diseases of Poaceae (Gramineae).S. New York. Lapierre H. Matthews. Hopkins. C.R. Viruses of Tropical plants. R. Luchar. 1. 1992. Amsterdam. and G. España. G. Tokyo. 424 p. Tokyo.7. 992 pp.foxitsoftware. Dominique. Se presentan casi siempre sobre manchas foliares o de frutos. St Paul. INRA. San Diego. London.C. Son exudados bacterianos. Matthews. Blancard. Kurstak. Redwood Press Ltd.F. picnidios. Biomedical Press. * 4. Press. R. Fourth Ed.9. 10. de tipo cremosos. D.E. Minn. Gibbs A. Compendium of tobacco diseases. 7.D. Zitter Th. Paris. St. 1991.K. Enfermedades del Tomate: Observar. U. Bean production problems: diseases. san Francisco. Academic Press. 2002. etc…………………………. C. S. 857 pp. Mundi-Prensa. Enfermedades de Cucurbitaceas: Observar. M. Blancard. R. Diagnosis of Plant Virus Diseases. Identificar.

o bien. 44 . Inorgánicos 2. d. Se aplica al suelo contra fitopatógenos transmitidos por esta vía y para algunos sistémicos de transmisión aérea. las bacterias. a. entre los que se encuentran los virus. basipétalos si el movimiento es a la inversa. Modo de aplicación. GENERALIDADES SOBRE EL CONTROL QUIMICO DE ENFERMEDADES INTRODUCCIÓN. Se aplica a la semilla contra fitopatógenos transmitidos por el suelo y contra los transmitido por la misma semilla. basipétalos si se mueven de las raíces al follaje. Orgánicos b. La principal excepción la constituyen los virus.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www.com For evaluation only. c. los hongos y los nemátodos. Se requieren varias aplicaciones para proteger los nuevos brotes y para reforzar la capa de crecimiento antes de la infección. a. El tratamiento se realiza. El tratamiento se realiza después del periodo de incubación 4. b. Tratamiento postcosecha. o bien. que hasta ahora han desafiado todos los intentos de control directo mediante compuestos químicos. Sitio de aplicación. 3. c. De contacto o residuales. Sistémicos. Modo de acción. Foliar. La acción se restringe al sitio de aplicación. durante el período de incubación. Su origen químico. OBJETIVOS. Se aplica al follaje.foxitsoftware. pudiendo ser acropétalos si se mueven de las raíces al follaje. Erradicativos. La necesidad de prevenir o controlar el desarrollo de las enfermedades ha motivado la creación de nuevos químicos capaces de obtener la deseada toxicidad selectiva hacia los patogenos problema. Los compuestos químicos utilizados para prevenir o controlar el desarrollo de las enfermedades se clasifican por: 1. a. Protectivos/ Profilácticos. Curativos. Tratamiento al suelo. a. La producción agrícola mundial sufre anualmente grandes perdidas debido a enfermedades causadas por agentes de diversa índole. Se aplica para proteger a los productos cosechados. tratamiento a la semilla. b. Hoy día se tiene la capacidad de controlar algunos patogenos con un amplio espectro de compuestos químicos. Son transportados en la savia de la planta. b.

390 pp SB 750 I54 2. así como su manejo y modo de acción. Conocer algunos productos fitosanitarios . Los alumnos serán los encargados de conseguir las etiquetas en las casas comerciales o directamente con los fabricantes de dichos productos... 2. and Bent. Deacon J. Etiquetas de productos químicos comercialmente utilizados para el control o prevención de enfermedades. A. D. Usos i..833. Defina que es un fungicida. and Jones. sus características mas importantes. residual o de contacto. Durante una entrevista a un productor. un nematicida y un bactericida. Pathogens and integrated defense responses to infection. Nombre químico c. 826. J. b. 88 pp. Nombre (s) comercial (es) b. BIBLIOGRAFIA 1. Explique cada uno de ellos. 45 . Fungicida protectivo. APS Press. este menciona que nunca utiliza la dosis indicada en la etiqueta del producto. A. Formulación g. a. con la finalidad de obtener la siguiente información: a. Plant. Cómo respondería usted a este comentario?. 2001.com For evaluation only. Washington.foxitsoftware. Nature 411. G. L. E. 1. Induce plant defensor against pathogens and herbivores. S. MATERIALES Y METODOS.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. 1. berkshire. Dosis k. Fitotoxicidad CUESTIONARIO. Tuzun. Origen e.: Van Nostrand Reinhold. Agrawal.utilizados para el control de enfermedades. 1983. Defina. 2000. 2. Aplicación l. h. J. W. Tipo o modo de acción d. puesto que el fabricante solo quiere ganar mas dinero haciendo que el productor aplique una dosis superior a la realmente necesaria. Información adicional. Fungicida curativo o sistémico. Deng. Precauciones m. Microbial control of plant and diseases. 3. Toxicidad f. Enfermedades importantes que controla o previene j. Mencione los principales factores que afectan la efectividad de campo de un producto químico al momento de su aplicación.pesticidas.

R. 354 pp. 346 pp. Principles of diagnostic techniques in plant pathology. Maloy. SB 731 F69 5. Press. Vidhyasekaran. Plant Diseases Control. CAB International. Principles and practice. O. T.foxitsoftware. Volume 1. 1993. Volume 2 pp 128. 1993.com For evaluation only. John Wiley & Sons Inc.. 46 . pp 149 SB 750 V54. 1988.Generated by Foxit PDF Creator © Foxit Software http://www. Plant diseases control. 7. Fox. N. Towards environmentally acceptable methods. Physiology of Disease Resistance in Plants. 213 pp. CRC. R. Strange. SB 731 M338 6. P. C. 4. Chapman & Hall. SB 750 V54. SB 7326 S77. 1993.

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