ENFOQUE AGROECOLGICO DEL EMPLEO DE ENTOMOPATGENOS PARA EL CONTROL DE PLAGAS 1 RODRIGO VERGARA RUIZ2

INTRODUCCIN La utilizacin masiva de los entomopatgenos requiere an de muchos esfuerzos. Si bien es cierto, que existen productos comerciales y la investigacin ha avanzado con relacin al mejor conocimiento de la bioactividad controladora de estos microorganismos, se necesita de una mayor promocin de sus bondades para fomentar su empleo. Desde hace mucho tiempo, quienes fomentan los programas MIP, han credo en la utilidad de los entomopatgenos en una lnea de control microbial. Las enfermedades que padecen los insectos, tanto benficos como plagas, se han estudiado desde tiempos inmemorables. Dos especies tiles: Apis mellifera L. y Bombyx mori (L.), fueron tema de discusin y anlisis por las enfermedades que padecan en 1500 A.C. por Chinos, Egipcios y Griegos. Aristteles en su obra Historia Animalium se refiri en los aos 335-322 AC a las enfermedades de las abejas. La historia de la patologa de insectos no es reciente. Para el mundo acadmico este tema apareci con la publicacin del libro An Introduction to Entomology por Kirby y Spence en 1826, en el cual trataron el tema de la patologa de insectos. Esta debe entenderse como el estudio de la biologa de lo anormal. Aunque los microorganismos causantes de enfermedades en insectos son bacterias, hongos, rickettsias y protozoarios, el cupo se ha ampliado al incluir entre ellos a virus y nemtodos, que tambin son causa de enfermedades en insectos. Las preocupaciones sobre los entomopatgenos y su empleo en el MIP, debe cubrir no slo la posibilidad de acceder a las formulaciones comerciales y su adecuado manejo, tiene que considerarse que en forma natural los patgenos de inse ctos actan y deben preservarse. Los avances de la ingeniera gentica podrn adems en el futuro, mejorar los entomopatgenos y crear razas de mayor impacto en las poblaciones plagas. En los programas de MIP, se deben considerar los entomopatgenos. Estos constituyen una tecnologa de amplias posibilidades en la agricultura sostenible. Los microorganismos
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Conferencia dictada en el Octavo Seminario de Agroecologa Agromedicina y Medio Ambiente. Tunja 22 y 23 de Noviembre de 2004.
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I.A., M.Sc. Profesor Asociado. Universidad Nacional de Colombia, Sede Medelln. Facultad de Ciencias Agropecuarias. A.A. 1779. e-mail: rvergara@unalmed.edu.co

posibilitan su adopcin por parte de los usuarios, en especial cuando estos pueden multiplicarse de modo artesanal. Desde un enfoque agroecolgico los entomopatgenos representan una herramienta que ofrece bondades en el control de plagas. 2. ANOTACIONES PRECEDENTES Las enfermedades que padecen los insectos fueron conocidas por los antepasados sobre especies insectiles benficas que se multiplican masivamente. En tiempos de Aristteles se estudiaron las que afectaban las abejas. Las colmenas se mermaban notablemente y un especimen enfermo contaminaba el resto. En la edad media los Chinos enfrentaron los problemas que padeca el gusano de seda en las cras masivas que tenan en las comunidades. Es quizs el primer reporte de un patgeno del gnero Cordyceps desarrollndose sobre un Lepidptero de la familia Noctuidae, el que hace Reaumur en 1726. Adems del captulo de enfermedades que escriben en 1826 Kirby y Spence en un texto de Entomologa, hay un registro histrico en 1836 y es el tratado que escribe Agostino Bassi sobre la enfermedad del gusano de seda, la muscardina, cuyo agente causal es el Beauveria bassiana. Este hecho marca el inicio de la Patologa de Insectos y Bassi se constituye en su Padre. Las enfermedades del gusano de seda fueron abordadas por Pasteur en 1870 (Vergara y Varela, 1978). El desarrollo y aplicabilidad de la patologa de insectos, se inicia en 1879 con Hagen quien estudia el posible uso de hongos para el control de insectos. Esta tcnica se confirma en 1895 por Forbes. La historia de las bacterias entomopatgenas se inicia en 1870 con Pasteur y sus estudios en gusano de seda. Para 1853 Cheshire y Cheyne, hacen la descripcin de una Bacillus alvei, causante de una enfermedad en las abejas. En 1906 se logran importantes aportes sobre las bacterias que afectan insectos, Ishimori descubre el Bacillus sotto y en Thuringia (Alemania), Berliner reconoce por el Bacillus thuringiensis. El estudio sobre el efecto de una bacteria en un insecto daino que se divulg por primera vez, lo hizo en 1911 Dherelle, sobre Schistocerca sp. (Orthoptera), el agente causal se identific como Coccobacillus acridiourm que luego se conoci como Cloaca cloacae var acridiorum (dHerelle). En 1927 Mattes, reaisl el B. thuringiensis y hace un estudio ms detallado de este patgeno. No es difcil aceptar que el primer patgeno observado por el hombre, haya sido un hongo y este fue sobre larvas de Bombyx mori. Aparentemente el primer reporte de la accin patognica de un Phycomycete, parece ser el hecho por De Geer en 1776 y luego reconfirmado en 1782 y constatado en 1805 por Latreille sobre la infeccin en Musca domestica L. (Diptera: Muscidae) de Empusa muscae Chon. En 1907 Zender descubre el protozoario patognico Nosema apis afectando Apis mellifera. Entre 1914 a 1917,

Glasser contribuye con el descubrimiento de los virus de poliedrosis en insectos y para 1944 Paillot y Steinhauss, i vestigan en todas las reas de la patologa de insectos n (Vergara y Varela, 1978). Los hongos entomopatgenos se conocen desde hace dos milenios, cuando los Chinos identificaron especies de Cordyceps e Isaria de especmenes del gusano de seda y una especie de cicada (Chicharra o cigarra). Figuras de estos insectos elaboradas en piedra, colocaban en la boca de sus muertos, buscando algn grado de inmortalidad, que asociaban con los insectos momificados por los hongos. Las larvas de lepidpteros infectadas por Cordyceps se usaron y an se hace, en China e Indonesia, en la farmacopea tradicional, para tratar varios padecimientos, entre ellos la adicin al opio. Estas larvas afectadas por hongos se han usado como tnico, alimento y tambin como afrodisiaco. Parece ser, que Beauveria bassiana fue reconocida en la China, 1000 AD (McCoy, Samson y Boucias, 1988). 3. CONSIDERACIONES GENERALES Los agentes de control microbial no son tan numerosos como sera deseable. Pueden destacarse como grupos: Hongos, bacterias, nemtodos, virus, protozoarios y ricketsias. Algunos han logrado mejores procesos comerciales, pero entre todos no alcanzan a cubrir siquiera el 2% del total mundial de ventas de insecticidas. Su comportamiento est influenciado por factores biticos y abiticos. Cardona (1998) comenta que los patgenos se transmiten de un insecto a otro por tres vas: a) ingestin; b) por penetracin de un estado infectivo a travs de los espirculos de la cutcula; c) a travs de un vector que lo pasa de un insecto enfermo a uno sano. En algunos casos puede haber transmisin transovariana. Entre los patgenos hay algunos muy especficos y otros generalistas que atacan muchas especies de insectos. Explica Cardona (1998) que una caracterstica de un buen entomopatgeno es su habilidad de resistir condiciones fsicas (radiacin UV, temperaturas altas y desecacin) y la accin de otros microorganismos. La luz UV es el factor que ms afecta a persistencia de un patgeno en el campo. En el caso especfico de los hongos, una humedad ambiental alta (por lo menos del 90%) se requiere para la germinacin de las esporas (conidias) pero si persiste as alta, entonces afecta su longevidad. La supervivencia de los patgenos, contina sealando Cardona (1998) est muy influenciada por el sitio en que ocurren. El suelo es mejor hbitat que el follaje porque protege de luz, proporciona

humedad, evita desecacin. La persistencia de un patgeno en el ambiente depende en gran parte de su habilidad de formar estructuras que resistan condiciones adversas. Una de las caractersticas ms importantes de un buen agente microbial es su patogenicidad. A veces se expresa en trminos de DL50, pero no es la ms indicada. Es mejor expresarla en dosis-infeccin o dosis-mortalidad. Aquellos que tienen una alta DL5 0 son de baja patogenicidad. Pero esto puede cambiar si el patgeno es capaz de sobrevivir por largos perodos y as persistir. Tambin por su habilidad para causar epizootias . Los entomopatgenos que se produzcan com ercialmente deben someterse a un riguroso control de calidad. Tiene que asegurarse por los productores que la formulacin que entregan contiene el microorganismo que anuncian. Es posible que se promocione un hongo determinado y en el proceso de elaboracin ste se contamine con otros hongos. Esto no solo afecta la calidad y efectividad del producto, desprestigia adems esta tcnica de control de insectos nocivos. 3.1 HONGOS ENTOMOPATGENOS Los hongos entomopatgenos pueden ocasionar enfermedad y propagarse en la poblacin insectil, dependiendo de las interacciones y factores relacionados con: 1) El patgeno (patogenicidad, virulencia, dispersin y persistencia), 2) el hospedero (susceptibilidad, densidad y distribucin, comportamiento); y 3) el medio ambiente (abiticos: temperatura, humedad, viento, lluvias; y biticos: parsitos, depredadores, planta husped). Los hongos entomopatgenos pueden manejarse mediante tres estrategias: a) inundacin, liberacin de grandes cantidades del agente biolgico sobre poblaciones del insecto-plaga; b) inoculacin, del patgeno en cantidades mnimas en insectos capturados y dispersndolos para contaminar la poblacin plaga; c) conservacin de recursos, evitando la destruccin de la biodiversidad de hongos presentes d forma e natural en los agroecosistemas. Esto se puede conseguir racionalizando el empleo de plaguicidas, en especial fungicidas de amplio espectro. Los hongos constituyen un grupo de gran inters para el control de plagas. Considranse los hongos como una parte de la subdivisin de las plantas conocidas como Tallophytas. Los hongos que ocasionan enfermedades estn incluidos en cuatro clases a saber: Phycomicetes, Ascomycetes, Basidiomycetes y Deuteromycetes. El potencial de hongos entomopatgenos producidos masivamente para el control de plagas se inici con los estudios Metchnikoff en 1879 y Krassilstschick en 1888 para el control del escarabajo

Anisoplia austriaca y el picudo Cleonus punctiventris, respectivamente (Castillo et al, 1995). Estos patgenos de insectos se caracterizan porque: 1) pueden causar infeccin en cualquier etapa de desarrollo del insecto; 2) despus del contacto con la cutcula del insecto, la conidia inicia germinacin, la cual requiere condiciones especficas de temperatura (15-35C) y humedad (70% H.R.); 3) durante la germinacin, el tubo germinal, produce enzimas que destruyen la pared celular y permiten que el hongo penetre; 4) cuando el tubo germinal llega a la cavidad hemoclica, produce micelios vegetativamente que invaden los tejidos y fluidos corporales, hasta llenar todo el interior del hospedero y matarlo por el dao mecnico o por la liberacin de toxinas resultantes del metabolismo. El hospedero muere 5 a 6 das despus de la penetracin del tubo germinal. Si las condiciones son favorables, ocurre la esporulacin, lo cual se manifiesta por la emisin de los brotes de cuerpos fructferos, llamados conidioforos, del integumento del hospedero. Luego se producen las conidias, si la humedad es alta. El viento dispersa las conidias. Los insectos afectados se observan dbiles e inactivos, luego se cubren de un holln blanco (= micelios) y mueren lentamente, quedando momificados con moho algodonoso (= esporulacin) de color variable (Castillo et al, 1995). Los hongos entomopatgenos, formulados como micoinsecticidas, se producen en especial para plagas de gran importancia econmica. Para el control de la mosca blanca T. vaporariorum Westwood, estn disponibles en el mercado mundial, los productos incluidos en la Tabla 29 (Alatorre, 1998). El potencial de los hongos entomopatgenos no se ha desarrollado eficientemente por los pases. Los micoinsecticidas solo constituyen una pequea fraccin del mercado mundial de plaguicidas, esto a pesar de conocerse una 700 especies en unos 100 gneros, que podran aprovecharse. El empleo de hongos entomopatgenos puede hacerse mediante tres estrategias. En primer lugar se pueden introducir cepas exticas de hongos de gran virulencia o una nueva especie, desde un rea geogrfica a otra. En segundo lugar, se puede emplear como un producto qumico, con el hongo producido en cantidad y formulado, para que produzca una epizootia. Por ltimo, se pueden implementar prcticas que modifiquen el medio ambiente y favorezcan el incremento del hongo o posibiliten la infeccin del hospedero. Es destacable mencionar que los hongos fueron los primeros microorganismos empleados por el hombre como insecticidas microbiales (McCoy, Samson y Boucias, 1988). Diversas especies de hongos se han formulado en preparados comerciales. Aseronija, tiene como ingrediente Aschersonia aleyrodis, se produce en la U.S.S.R; con Beauveria bassiana se elabora Biotrol FBB (USA), Boverin (U.S.S.R.) y ABG-6178 (U.S.A.);

empleando Hirsutella thompsonii, se elabora Mycar (USA); con Metarhizium anisopliae, se fabrica Biotrol FMA (USA), Metaquino (Brasil); por ltimo en Inglaterra, con las marcas de Vertalec y Mycotol, se fabrica el Verticillium lecanii (McCoy, Samson y Boucias, 1988). Son diversos los gneros de hongos que podran servir para elaborar productos comerciales en diversos pases. Con algunos ya existen ofertas, pero pueden mencionarse: Culicinomyces, Lagenidium, Entomophthora, Aschersonia, Beauveria, Hirsutella, Metarhizium, Nomuraea y Lecanicillium. Tabla 1. Micoinsecticidas para el control de mosca blanca. Producto Mycotal Mycotrol WP PFR-97 Preferal Bea-SIN Pae-SIN Micobiol HE Hongo Verticillum lecanii B. bassiana Paecilomyces fumoroseus P. fumosoroseus B. bassiana P. fumosoroseus B. bassiana M. anisopliae L. lecanii H. Thompsonii Compaa Koppert, Holanda Mycotech USA Eco-Tek Biobsst, Blgica Agrobiosa - Mxico Agrobiosa - Mxico Fungicol - Colombia

3.1.1 EMPLEO AGROECOSISTEMAS DE COLOMBIA En Colombia las investigaciones con hongos controladores de insectos nocivos ha tomado un auge inusitado. En diversos agroecosistemas se han desarrollado trabajos para el control microbial de plagas claves. Es de anotar que el pas, caracterizado como uno de los de mayor megadiversidad biolgica del planeta, tiene en sus diversos pisos trmicos una riqueza incalculable de hongos con accin insecticida. Esta base, la existencia de la biodiversidad de hongos, es quizs el mayor estmulo para impulsar el empleo de estos microorganismos para el control de plagas. A. Caso Caf El hongo Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin, es un eficaz entomopatgeno. Los insectos afectados presentan infeccin a travs del integumento, donde el hongo produce enzimas extracelulares las cuales influyen en la penetracin y posterior infeccin (Hegedus y Khachatourians, 1988). El mecanismo de infeccin de B. bassiana se inicia cuando la conidia se adhiere a la cutcula del insecto husped susceptible. La conidia

germina en la superficie del cuerpo del insecto y de modo mecnico penetra el integumento a travs del tubo germinativo. Durante este proceso intervienen enzimas extracelulares relacionadas con la patogenesis tales como: proteasas, lipasas, ureasas y quitinasas entre otras, que hidrolizan los componentes cuticulares (Smith y Grula, 1981). El integumento del insecto est compuesto de protenas y quitinas con lpidos asociados y compuestos fenlicos los cuales actan como una barrera contra microorganismos invasores. Los hongos filamentosos son capaces de penetrar esta barrera a travs de la accin combinada de enzimas hidrolticas como quitinasas, proteasas y lipasas. La presencia de enzimas hidrolticas suele facilitar cada etapa de infeccin del hongo y adicionalmente puede ser importante en la invasin del hemocelo del insecto (Hegedus y Khachatourians, 1988). La broca del caf, Hypothenemus hampei (Ferrari), es el insecto plaga ms importante de la caficultura colombiana y su control se ha enfocado dentro del concepto del Manejo Integrado de Plagas (MIP). En Colombia Beauveria bassiana aparece atacando naturalmente la poblacin de broca. Cenicaf posee una coleccin de cepas de este hongo que han sido colectadas en diferentes regiones provenientes de diversos hospedantes de distintos ordenes y que presentan patogenicidad sobre broca. El hongo Beauveria bassiana se ha comercializado en varios pases. Sus formulaciones se utilizan para los agricultores en el control de diversas plagas. En Colombia se emplea contra la broca del caf Hypothenemus hampei (Ferrari) (Coleoptera: Scolytidae) y los resultados demuestran su efectividad. B. Caso Ornamentales y Hortalizas Los enemigos naturales de las plagas, pueden complementarse en su papel de controladores y/o reguladores de especies nocivas. La mosca blanca de los invernaderos Trialeurodes vaporariorum Westwood (Homoptera: Aleyrodidae), es uno de los insectos ms polfagos en el mundo y el cual ocasiona prdidas cuantiosas a los cultivos atacados. Entre sus enemigos naturales se conocen: el hongo Aschersonia aleyrodis y el parasitoide Encarsia formosa Gahan (Hymenoptera: Aphelinidae). Vargas et al (1995) investigaron el efecto interactivo del hongo y el insecto, dosis ptima del hongo y tratamientos con micelio contra ninfas de tercer y cuarto instar de la plaga en cultivos de frjol. Hallaron un parasitismo altamente significativo de E. formosa en todos los tratamientos del hongo, lo cual demuestra la compatibilidad de A. aleyrodis. El cuarto instar ninfal es el ms susceptible al patgeno, en dosis superiores a 1.3 x 10 7 esporas/ml.

La accin entomopatgena de Lecanicilliium spp sobre T. vaporariorum debe respetar la actividad de otros organismos benficos. Esto si se desea incluir el hongo en los programas MIP. El parasitoide ms frecuente y el cual se halla en forma natural en zonas cultivadas de frjol, es Amitus fuscipennis (Mac Gown y Nebeker) (Hymenoptera: Platygasteridae), el cual acta sobre el segundo y tercer estado ninfal. Pachn y Cotes (1997) estudiaron el efecto del hongo sobre el parasitoide en invernadero y en campo. Despus de haber tratado con Lecanicillium hojas de frjol que contenan ninfas de segundo instar de mosca blanca, se introdujo el parasitoide. Esto se hizo a las 0 - 24 - 48 y 72 horas. Se demostr que el hongo disminuye la actividad parastica de Amitus, por cuanto cuando se hizo la aplicacin del hongo, el parasitismo era del 19% y a las 24 horas del 10%, alcanzando los ms bajos porcentajes a las 48 y 72 horas con solo 0.5%. Pero el parasitoide no fue afectado por el hongo. En condiciones de campo, el hongo se aplic cada 10 das contados desde la siembra hasta los 80 das del cultivo. Se utilizaron dos pre-formulaciones y un producto comercial, VERTISOL, en este experimento se utiliz un tratamiento MIP para la mosca blanca, el cual se basa en el empleo de un insecticida granular a la siembra, ubicacin de trampas amarillas pegajosas, uso de control qumico con niveles de dao y un control absoluto. Los resultados lograron demostrar con las preformulaciones un 15% de parasitismo de A. fuscipennis, con Vertisol un 7%, con el MIP un 17% y en el control absoluto del 23%. Es importante resaltar que se logr comprobar que a mayor infeccin por el hongo, mayor parasitismo por Amitus. Estos porcentajes llegaron a niveles del 70% y 50% respectivamente. Los hongos entomopatgenos se presentan como una alternativa de control de la chinche subterrnea. Por tal motivo, Snchez y Bellotti (1997) adelantaron bioensayos de laboratorio para evaluar suspensiones de conidias de los hongos Beauveria bassiana (Bals.) Vuil; Metarhizium anisopliae (Metsch) Sorokin y Paecilomyces lilacinus (Thom.) Samson (Deuteromycotina: Hyphomicetes) sobre adultos de C. bergi, combinados con tres sustratos y dos mtodos de inoculacin, los insectos del tratamiento testigo se inocularon con agua destilada estril, ms Tween 40 al 0.1%. Para las aplicaciones de los hongos, los insectos fueron desinfestados con hipoclorito de sodio al 0.5% durante dos minutos y sometidos a cuarentena en cajas de petri, papel filtro hmedo con ADE y semillas de maz durante diez das. Los tres sustratos estaban constituidos por papel filtro humedecido con ADE, suelo esterilizado y no esterilizado. La inoculacin de los hongos se hizo por contacto tarsal y adems en aplicar el volumen del inculo en los sustratos. De los hongos, M. anisopliae fue la ms virulenta y el mtodo de inoculacin ms efectivo correspondi al de contacto tarsal. Las ninfas fueron ms susceptibles que los adultos a M. anisopliae, un aislamiento de este hongo, el 9236 alcanz mortalidades del 84%, su DL50 fue de 1.19 x 10 8 conidias viables/ml, con un tiempo letal de 4.7 a 8 das.

C. Caso Langosta Llanera Desde 1994, en Colombia se tiene una plaga potencial para cultivos de arroz, sorgo y caa de azcar. En esa fecha se detect una invasin de la langosta llanera Rhammatocerus schistocercoides (Rehn) (Orthoptera: Acrididae), establecindose su capacidad de dao sobre pasturas nativas e introducidas (Espinel, Ebratt y Cotes, 1998). El hongo Metarhizium anisopliae (Metschnikov) (Deuteromycotina: Phialosporaceae), se aisla de un amplio rango de ordenes de insectos. Sobre la langosta R. schistocercoides, su actividad infectiva se realiza por medio de la invasin mediante la degradacin de su cutcula por medio de enzimas especializadas (St. Leger et al, 1991). La muerte es ocasionada por la liberacin de toxinas en la hemolinfa del insecto y por la colonizacin de sta por parte del hongo (Lysenko y Kucera, 1973). Evaluando cepas nativas de M. anisopliae para el control de R. schistocercoides, Espinel, Ebratt y Cotes (1998), lograron obtener mortalidades del 100% en langostas de octavo nstar. Pero explican que entre las cepas se presentaron diferencias en cuanto al tiempo de mortalidad. Las cepas nativas se evaluaron en campo, a una concentracin de 1 x 10 8 propgulos/ml. Las langostas son el grupo de insectos del cual se registran los efectos ms devastadores en la agricultura. Son plagas de tipo migratorio, cuyos ataques pueden prolongarse por 4 a 5 aos hasta que sucumbe. Debido a la presencia en Colombia (Arauca, Casanare, Guaviare, Meta y Vichada) de Rhammatocerus schistocercoides Rehn (Orthoptera: Acrididae) afectando un rea de 4 millones de hectreas de pastos, Bustillo, Lpez y Devia (1997) estudiaron la patogenicidad de Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) Sorokin en condiciones de laboratorio sobre ninfas de cuarto instar de la langosta. Se utiliz una concentracin de M. anisopliae de 1 x 107 esporas/ml, por inmersin en 50 ml de la suspensin de hongo durante 30 segundos. Las ninfas del testigo se trataron solo con agua destilada estril. Despus las ninfas se aislaron y alimentaron en cajas plsticas. Despus del segundo da de inoculadas las ninfas se observaron los sntomas y la mayor mortalidad se alcanz al quinto da. Los porcentajes de mortalidad fueron de 68.0 4.9 para Ma 9218 y 84.0% 7.5% para Ma 9236. D. Caso papa El cultivo de papa en Colombia es el principal sistema de produccin de clima fro, ste se ve afectado por diferentes insectos plaga entre los que se destaca el gusano blanco de la papa Premnotrypes vorax (Hustache), el cual tiene amplia distribucin y persistencia

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semestral. El control de este insecto por mtodos qumicos no siempre es exitoso y representa altos costos econmicos. El control biolgico, mediante la utilizacin de hongos entomopatgenos representa una alternativa promisoria para el control de P. vorax. El gusano blanco de la papa, P. vorax (Hustache) afecta el 63.71% de los tubrculos cosechados en el pas. Este impacto nocivo motiv a Torres y Lpez -Avila (1997) a evaluar y comparar cepas y dosis de Beauveria bassiana, B. brongniartii y Metarhizium anisopliae, en el control de adultos del gusano blanco de la papa bajo condiciones de laboratorio y casa de malla. Inicialmente se evaluaron los niveles d patogenicidad de e cuatro cepas de B. bassiana, una de B. brongniartii y cuatro de M. anisopliae sobre larvas de ltimo instar de P. vorax, aquellas cepas que causaron los porcentajes ms altos de mortalidad, se evaluaron sobre adultos de la plaga en concentraciones de 1 x 10 5 , 1 x 10 7 y 1 x 109 propgulos/ml; utilizando un diseo completamente al azar con 16 tratamientos y tres repeticiones. En materos con plantas de Solanum phureja y adultos de gusano blanco, se aplicaron los inculos de cepa en forma lquida y slida. En estas pruebas se evalu la mortalidad causada por el hongo a los adultos y la oviposicin durante 22 das. En la cosecha se evalu el dao a los tubrculos. Las cepas de B. bassiana provenientes de aislamientos de P. vorax infectados en campo, causaron el 100% de mortalidad en los adultos en el laboratorio. La actividad biocontroladora de cuatro cepas de Beauveria bassiana, tres de Beauveria brongniartii y una de Metarhizium anisopliae, se evaluaron bajo condiciones de laboratorio sobre adultos de Premmotrypes vorax. Estos se sometieron a una concentracin de 1 x 108 propgulos/ml de cada una de ellas. La mortalidad se verific a diario, para seleccionar aquellas que presentaron mayor control. De las ocho cepas evaluadas se seleccionaron la Mt. L1 de M. anisopliae y la B.v L2 de B. bassiana, las cuales produjeron el 100% de mortalidad en los insectos despus de 24 y 25 das. Las concentraciones letales 50 (CL50 ) y 90 (CL90 ) se estudiaron mediante concentraciones sucesivas desde 1 x 105 hasta 1 x 108 propgulos/ml. Los valores hallados fueron de CL50 1 x 10 5 y CL90 50 x 106 propgulos/ml para la cepa MTL1 y de CL50 55 x 105 y CL90 46 x 10 7 propgulos/ml para BvL2. En forma individual la mortalidad de la cepa MTL1 fue de 53.33% y con la cepa BvL2 de 43.44%, en el mismo tiempo (Torres y Cotes, 1999). E. Otros casos Perkinsiella saccharicida (Kirkaldy) (Homoptera: Delphacidae), es un insecto chupador cuyas poblaciones se vienen incrementando en Colombia. Debido a su incidencia en caa

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de azcar, no puede controlarse con productos qumicos. Gaviria et al (1997), estudiaron el efecto de tres cepas de M. anisopliae para el control de este delfacido. El origen de las cepas se relacionaba con: P. saccharicida (Ecuador); Collaria columbiensis Carvahlo (Hemiptera: Miridae) (Sabana de Bogot) y Strategus aloeus (L.) (Coleoptera: Scarabaeidae) (Santander). De cada cepa aislaron los metabolitos secundarios y sus conidias, y emplearon tres formulaciones: una a base de metabolitos secundarios, otra con solo conidias y una tercera que era mezcla de los anteriores. Esta ltima fue la que arroj los mejores resultados de control. En cuanto a las fases del ciclo ms susceptibles, estas fueron las ninfas de 4 y 5 instar y adultos menores de cinco das. Marn y Bustillo (2000) evaluaron tres aislamientos de B. bassiana, ms un testigo, para determinar su patogenicidad al picudo de los ctricos Compsus sp. Los tratamientos fueron los siguientes: T1 aislamiento obtenido por el ICA. T2-aislamiento de campo despus de una aspersin de la cepa Bb9205 activa para broca del caf. T3-aislamiento de insectos infectados con una formulacin comercial y T4-un testigo, sin inculo del hongo. Posteriormente se hizo otra evaluacin con estos aislamientos reactivados adicionando otro proveniente de Armero - Guayabal. Los resultados mostraron en la primera evaluacin para el T1 un 70 4,5% de mortalidad del insecto, en un tiempo de 6 das. En el T2 la mortalidad fue de 42 9.2% en 5,8 das; en el T3 fue de 64 7,8 en 5,9 das. el T4 (testigo) present 0% de mortalidad por el hongo, la supervivencia de los insectos fue del 74% a los 30 das de evaluacin. Los resultados obtenidos en la segunda evaluacin fueron los siguientes: T1 - 94 4,3% de mortalidad en un tiempo de 5,2 das. Los T2, T3 y T5 presentaron 100% de mortalidad sobre el picudo con tiempos de 5,2; 5,0 y 5,2 das respectivamente. El tratamiento testigo no present mortalidad por el hongo y la supervivencia de los insectos fue del 88% al mes de evaluacin. Las hormigas cortadoras de hojas Acromyrmex y Atta, presentan una organizacin social bien definida. Necesitan de un hongo simbionte (Attamyces sp), como fuente alimentaria de las larvas, de las reinas y obreras en cantidades diferentes. Si el hormiguero se contamina con hongos antagnicos, puede peligrar la existencia del mismo. Existen grupos de obreras las mnimas y medianas, son las encargadas de remover el material contaminante (hongos y bacterias) que llegan sobre las hojas o sobre el integumento de ellas mismas. Ortiz, Madrigal y Orduz (1999) trabajando con un nido de laboratorio, lo contaminaron con la cepa T-26 de Trichoderma lignorum; con ocho das de sembrada en papa - dextrosa-agar (PDA) aplicados en concentraciones de 103 , 106 y 108 conidias/ml. Cuando se utiliz la concentracin mayor (108 conidias/ml) se registr una alta mortalidad de obreras por la ingestin de algn componente del inculo, siendo imposible descontaminar el jardn de Attamyces.

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Un primer registro mundial de Metarhizium anisopliae infectando reinas de Atta cephalotes (L.) (Hymenoptera: Formicidae), reportado por Lpez et al (1999) constituye una excelente contribucin para el control microbial de hormigas cortadoras. De dos reinas muertas colectadas en San Luis (Antioquia-Colombia) se obtuvieron aislamientos del hongo. Se cultivaron en PDA, se identificaron como 136 y 137, y se evalu su patogenicidad contra obreras de A. cephalotes y se compar con aislamientos de otros insectos. Se determin la CL50 , la cual en el tiempo ms corto de lectura de los bioensayos (144 horas) fue de 9.9 x 107 y 4.5 x 107 conidias/ml para los aislamientos 136 y 137, otros valores fueron de 7.5 x 108 y 1.7 x 10 15 para los aislamientos 82 y 77. El tiempo medio de esporulacin (TE50) fue de 200.3 y 180.7 horas para los aislamientos 50 136 y 137, estos valores se obtuvieron en la concentracin menor de 5.4 x 105 conidias/ml. 3.2 BACTERIAS ENTOMOPATGENAS Este grupo a nivel mundial es el de mayor presencia en el mercado de plaguicidas. Al respecto Cardona (1998) seala que el 95% de las ventas de insecticidas microbiales est representado por productos basados en diferentes cepas de la bacteria Bacillus thuringiensis. De ellas las ms conocidas en Colombia son la B. thuringiensis var. israeliensis para el control de zancudos, conocida con los nombres comerciales de Vectobac (Sandoz) y Skeetal (Novo). Para el control de lepidpteros las ms usadas son las formulaciones de B. thuringiensis var. kurstaki que se vende con los nombres de Dipel (Abbott), Thuricide (Sandoz), Bactospeine (Rhone-Poulanc) y M-One (Mycogen). Ms recientes son las formulaciones de B. thuringiensis var. San diego para el control de colepteros. En Estados Unidos se vende con el nombre Foil por la compaa Ecogen. Otra bacteria que se ha formulado comercialmente es Serratia entomophila para el control de chisas. Las bacterias son microorganismos procariontes distribuidos prcticamente en todos los hbitats terrestres. Se reproducen normalmente por fisin binaria con gran p rofusin, en ambientes aerobios y anaerobios, en condiciones clidas o fras, lugares obscuros o luminosos, secos o hmedos y ocupan nichos que pueden ser saprofitos hasta obligadamente parsitos (Tanada y Kaya, 1993). Existen una gran diversidad de bacterias que ocasionan enfermedades infecciosas en los insectos, que se denominan bacteriosis. Las bacterias patgenas, relata Ibarra (1998), normalmente causan algn tipo de septicemia en los insectos. Invaden el hemocele, con una consecuente reproduccin y dao de la homeostasis del individuo infectado. La sola presencia de bacterias en la hemolinfa se le conoce como bacteremia; sin embargo, cabe hacer la aclaracin que existen bacteremias no patognicas. Al igual que en muchos otros patgenos bacterianos,

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las bacterias entomopatgenas tambin pueden producir toxinas que aniquilan al hospedero para despus estas reproducirse saprofticamente en el cadver. En este caso la presencia de toxinas en la hemolinfa se le conoce como toxemia. Al igual que con otros microorganismos, no existe entre los investigadores un criterio nico para agrupar las bacterias asociadas a insectos. Vergara y Varela (1978) presentan dos clasificaciones. Una primera contiene seis categoras: 1. Bacterias no entomopatgenas presentes en el medio ambiente externo del insecto; 2. Bacterias regular u ocasionalmente presentes en el conducto alimenticio de insectos sanos; 3. Patgenos no formadores de esporas (generalmente facultativos); 4. Patgenos facultativos formadores de esporas; 5. Patgenos obligados formadores de esporas; 6. Patgenos formadores de esporas cristalferas. La segunda contiene cuatro categoras: 1) Patgenos obligados; 2) Formadores de esporas cristalferas; 3) Patgenos facultativos; 4) Patgenos potenciales. La gran mayora de las bacterias entomopatgenas invaden a sus hospederos al ser ingeridas (per. os.) causando inicialmente la destruccin parcial del intestino medio (mesentern) y sobreviniendo una septicemia consecuente. Estas bacterias son patgenas extracelulares (con excepcin de las ricketsias) y sus primeros efectos se reflejan en una prdida de apetito, diarrea, vmito, para despus invadir totalmente al hospedero y aniquilarlo. El cadver del insecto, contina explicando Ibarra (1998), se torna obscuro por la oxidacin de la hemolinfa y crecen gran cantidad de bacterias saprfitas, provenientes tanto de su propio tracto digestivo (flora intestinal y acompaante del alimento) como del medio que lo rodea. El cadver adquiere un olor ftido y el cuerpo se descompone en forma floculenta, con excepcin del integumento (exoesqueleto), para posteriormente secarse y endurecerse. Las bacterias ocasionan en las poblaciones plagas epizootias en condiciones de alta densidad del hospedero (productos almacenados, insectos en colonias, poblaciones en agua dulce bajo condiciones fsicas qumicas especiales); en otras circunstancias, raramente ocurren las epizootias o stas no son reconocidas (Castillo, Acosta y Cifiezar, 1995). En el mercado internacional se distribuyen productos formulados a base de cuatro bacterias. En la Tabla 2 se incluyen algunos insecticidas bacterianos.

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Tabla 2. Insecticidas bacterianos disponibles en algunos pases.

Producto Doom Japademic Milky Spore Grub Attack Dipel, Vectobac Diterra Thuricide, Certan Javelin, Teknar Trident Biobit, Novodor Foray, Skeetal MVP; M-TRAK; M-ONE Cutlass, Condor, Foil Bernan BT Acrobe Bactis, Bactucide Bactospeine, Futura Bathurin Endotobacterin, Insektin Bitoksibacillin (1) Bacillan, Moskitur (2) (1) Thuridan, Thurindhgin (3) Biotrol Baktukal Baturad, Nubilacid Moskitocid Dendrobacillin Larvo-B T Bactimos Eco Dart Invade ABG-6185 2362 Sphaerico Bacteria B. popilliae Compaa Fairfax (USA) Fairfax (USA) Reuter Lab (USA) Ringer Inc. (USA) Abbott (USA)

B. thuringiensis

Novo Nordisk (Dinamarca) Mycogen (USA) Ecogen (USA) Bactec (USA) Cyanamid (USA) C.R.C. (Italia) Duphar (Holanda) Chemapol-B (Checoslovaquia) Glaumikrobioprom (Rusia) All Union (Rusia) Gobierno: Polonia (1) Checoeslovaquia (2) y Rumania (3) Nutrilite (USA) Serumzabod (Yugoeslavia) Radonja (Yugoeslavia) Novosibirsk (Rusia) Knoll (USA) Duphar (Holanda) I.C.I (Inglaterra Maftec (N. Zelandia) Abbott (USA) Solvay (Blgica) Brasil

Serratia entomophila B. sphaericus

Hace unas cuatro dcadas que en Colombia se utilizan productos formulados a base de bacterias para el control de plagas agrcolas y de insectos de importancia en salud pblica. Como en otros pases se reconoce que slo las bacterias cristalferas formadoras de esporas son las promisorias para el control de los insectos nocivos, y ellas pertenecen al gnero Bacillus . Las principales especies son B. thuringiensis, B. cereus, B. popilliae, B. larvae, B. lentimorbus y B. sphaericus. Algunas bacterias, tales como B. t y B. popilliae, forman cristales (= paraesporas) de protenas txicas cuando esporulan. Las

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toxinas asociadas con B. t son cinco tipos: 1. delta-endotoxinas, codificadas por los genes Cry I, II, III y IV y se relacionan con la actividad biolgica de la toxina. Cry I (para Lepidpteros), Cry III (especfica para Colepteros), Cry IV (especfica para Dpteros). La activacin se logra por el pH alcalino y proteasas en el intestino medio del insecto, por eso no es activada en el estmago de mamferos (pH cido). Es susceptible al calor. 2. exotoxina. No requiere activacin y no es susceptible al calor. 3. a-exotoxinas. Bsicamente son enzimas. 4. Toxina antibitica bacteriana. Previene competencia con otras bacterias. 5. Toxina de factor piojo. Denominada as por mostrar actividad contra especies de Mallophaga. El modo de accin de las toxinas, es descrito por Castillo, Acosta y Cifiezar (1995), quienes sealan que las toxinas aparentemente se insertan en la membrana del intestino medio, donde aumentan la conductividad de potasio de las membranas apicales de las clulas columnares; esta accin lleva a la ruptura de los gradientes elctricos de potasio y un aumento del pH de la hemolinfa; la mortalidad resulta del desequilibrio del contenido bsico hipotnico del intestino medio y la hemolinfa; hay parlisis del cuerpo e intestino, y la muerte ocurre en 2-7 das; no ocurren cambios en la hemolinfa, solo se observa parlisis del intestino medio. En algunos casos de muerte resulta la septicemia despus de la germinacin en el intestino. 3.2.1 Utilizacin de bacterias en Colombia En el mercado mundial de bioinsecticidas, la bacteria Bacillus thuringiensis Berliner, se ofrece con diferentes nombres comerciales. Se emplea para el control de plagas de los rdenes Diptera, Coleoptera y en especial de Lepidoptera. La bacteria produce cristales simultneamente con la produccin de esporas. Los cristales son portadores de toxinas, denominados d-endotoxinas. Esta bacteria es una posibilidad de control de insectos, que como Spodoptera frugiperda, desarrollan resistencia a insecticidas. Bosa y Cotes (1997) establecieron una metodologa para evaluar la actividad insecticida de cepas nativas de B. t, contra larvas de S. frugiperda de primer instar en dieta artificial. Las cepas presentaron genes del tipo Cry I los cuales han sido sealados por codificar protenas con actividad contra Lepidteros. Se evaluaron las cepas de referencia HD-1 var Kurstaki y HD-137 var aizaway a una concentracin de 150 g/ml de protena total la cual se inocul en vasos que contenan una dieta artificial, colocndoles posteriormente una larva de S. frugiperda por vaso. A las 120 horas de exposicin se seleccion la cepa HD-137 por su alta actividad insecticida, para que sirviera de referencia. Luego se compararon con ella las cepas nativas Bt-127, Bt-147, Bt-292 y Bt-444, con diferentes orgenes geogrficos. El mejor resultado de 88% de actividad insecticida se logr con la cepa Bt-127.

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El cultivo de papa en Colombia tiene importancia socioeconmica porque representa el 80% de las 165.000 hectreas sembradas en Boyac, Cundinamarca y Nario, y casi 90.000 familias se dedican a l; as mismo, Colombia es el principal productor en Latinoamrica y es el pas que registra el mayor crecimiento tanto en produccin como en consumo (CIP, 1998). Tecia solanivora, insecto especializado en este agroecosistema, es el principal problema en campos de produccin de semilla, de produccin comercial y en bodegas de, almacenamiento (Jaramillo et al., 1998). El Manejo Integrado de la polilla guatemalteca en Colombia es la opcin ms racional y sostenible, siendo fundamental la evaluacin de alternativas de control biolgico como Bacillus thuringiensis. Castelblanco, Uribe y Torres (2000) estudiaron el efecto de cepas nativas de B. t sobre la polilla guatemalteca. El mtodo se estableci a partir de resultados de experimentos y bioensayos secuenciales teniendo en cuenta el comportamiento natural de las larvas. Experimentaciones diseadas para fijar cantidad de dieta natural por larva, calidad y cantidad de larvas, tiempo de ayuno de los individuos y forma de inoculacin del B.t., sealaron el mtodo de embebimiento de pedazos de papa en suspensin de liofilizado de B.t. como el ms adecuado y permitieron el perfeccionamiento del mismo; se determin la concentracin letal media (CL50) para la cepa de referencia HD-1 var. kurstaki, y con este valor se confront la efectividad del bioensayo valorando 9 cepas nativas de la coleccin del IBUN. Las cepas IBUN 17.4, IBUN 12.7 e IBUN 24.1 causaron mortalidades significativamente mayores en comparacin con la cepa HD-1. El complejo Diaphania (Lepidoptera: Pyralidae) constituye una de las plagas de mayor importancia econmica en el cultivo del meln. Sus larvas consumen follaje y son perforadoras de ramas y frutos. Explican Snchez, Vargas y Snchez (1999) que su control opera sobre el enfoque de manejo preventivo con aplicaciones calendario, que por temporada de cultivo alcanzan en promedio 24 aspersiones de insecticidas. Es de suponer que este uso indiscriminado de plaguicidas puede generar todo tipo de problemas en este agroecosistema y en el producto final. Una alternativa de control para estas plagas: Diaphania hyalinata (L.) y Diaphania nitidalis (Stoll), es el Bacillus thuringiensis. En efecto Snchez, Vargas y Snchez (1999) utilizaron dos formulaciones comerciales de B. t, a base de una de B. t kurstaki y otro B. t aizawaii, sobre estas plagas. Establecieron 3 niveles de poblacin que fueron: 0.1, 0.5 y 0.9 larvas por planta (LPP) o por terminal (LPT), para hacer las aplicaciones. Los bioinsecticidas se compararon en su efecto con monocrotofos. El ataque del complejo se inici 11 das despus de la emergencia (DDE) y la primera aplicacin se hizo 18 DDE, luego, de acuerdo a los niveles se hicieron aplicaciones de los productos. Los autores sealan que el B. t debe ser

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aplicado por lo menos 11 DDE para lograr mayor efectividad, esto por cuanto es el momento en el cual las larvas de primer instar inician la colonizacin del cultivo. 3.3. LOS ENTOMONEMT ODOS Exactamente no se conoce cuanto hace que existe la asociacin entre nemtodos e insectos. Probablemente data desde hace millones de aos. Los registros bibliogrficos ms antiguos son los de Aldiovaneli en 1623 en el libro Die Animalibus Insectis, donde escribe acerca del hallazgo de gusanos bien largos en el cuerpo de saltamontes (Orthoptera) muertos. Los Nemathelmites que emplean insectos como hospederos primarios estn incluidos en las clases Adenophorea y Secermentea y en las familias Mermithidae, Steinernematidae (= Neoaplectanidae) y Heterorhabditidae se encuentran las especies de inters como insecticidas biolgicos. Fue hacia el ao 1930 cuando se consider la posibilidad de usar nemtodos para el control de la plaga Popillia japonica (Coleoptera: Scarabaeidae). Al respecto se hicieron investigaciones, con exitosas pruebas de campo y desde ese entonces se despert el inters en el uso de los entomonemtodos como agentes de control biolgico. Todos los nemtodos son semejantes en su morfologa externa. Su cuerpo no segmentado y alargado tiene poca o ninguna variacin en dimetro, aunque terminan en punta en uno o ambos extremos. La mayora de los nemtodos presentan como estados de desarrollo: huevo, larva (cuatro estados) y adulto. En general son bisexuales. La hembra produce huevos frtiles despus de la cpula. Unos 16 rdenes de la clase insecta tienen hospederos de nemtodos. Se encuentran con mayor frecuencia en Lepidoptera y luego en Coleoptera, Orthoptera, Diptera e Hymenoptera. Las relaciones existentes entre nemtodos e insectos, se consideran de tres formas: 1) Asociacin comensal. Cuando el nemtodo vive en el conducto alimenticio del insecto; 2) Semiparsito, cuando el nemtodo combina sus hbitos de saprfago y parsito; 3) Pars itos obligados. En el control biolgico son de inters los que se ubican en las dos ltimas categoras (Vergara y Varela, 1978). Para identificar los entomonemtodos debe acudirse a taxnomos. El tcnico en su trabajo cotidiano puede tener en cuenta, que si la muestra del insecto muerto, tiene uno o dos gusanos largos, es factible que pertenezcan a la familia Mermithidae. Si encuentra uno o pocos nemtodos de tamao medio y aproximadamente 500 larvas, es posible que pertenezcan a la familia Sphaeluridae. S lo que se encuentra son muchas hembras y i machos de tamao mediano y adems de 100.000 a 200.000 larvas pequeas de

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nemtodos y adems bacterias, es bien probable que sean del gnero Steinernema, familia Steinernematidae (Nickle, 1972). 3.3.1 Familias con investigacin FAMILIA MERMITHIDAE Los miembros de esta familia tienen una fase parastica corta en comparacin con el estado libre. La forma parastica no madura en el hemocele del hospedero sino que emerge de este como post parsito juvenil, caen al suelo donde maduran y alcanzan el estado adulto, fecundan y producen progenie. Alatorre (1998) dice que en la mayora de los casos, las formas juveniles infectivas buscan a su hospedero penetrando a travs de la cutcula como en el caso de los nemtodos asociados a los lepidpteros, como Hexamermis truncatus, H. albicans. Pero pueden ocurrir otras formas de infeccin. Los huevos de Mermis nigrescens son ingeridos e incubados en el intestino de langostas (Orthoptera). La forma infectiva al salir del huevo penetra al hemocele donde se desarrolla aprovechando las sustancias nutritivas presente en la hemolinfa y tejido graso. En esta familia se encuentran especies parsitas de insectos, gastrpodos y araas. En la cavidad del insecto aumenta su tamao de 0.5 mm hasta 20 cm. Los huevos son colocados en suelos hmedos, al incubar la larva del segundo estado penetra al hospedero, en el cual se desarrolla como parsito solitario. La larva del cuarto estado emerge del hospedero eliminndolo. El adulto vive libre en el suelo como saprfago. De las especies ms importantes pueden destacarse: Romanomermis culicivorax , el cual se expende con el nombre de Skeeter Doom y se emplea en el control de mosquitos; en el gnero Hexamermis se incluyen varias especies tiles en el control de insectos nocivos. H. albicans afecta Diatraea saccharalis F. (Lepidoptera: Pyralidae); Spodoptera frugiperda J.E. Smith (Lepidoptera: Noctuidae) y Hypsipyla grandella; Amphimermis spp, invade a sus hospederos a travs de la cutcula. Tiene gran habilidad de bsqueda y puede subir por la planta buscando su hospedero; Mermis nigrescens ataca Orthopteros y tiene muy buena capacidad parastica. FAMILIA STEINERNEMATIDAE Las especies de esta familia son parsitos obligados de insectos. El estado infectivo lleva la bacteria simbitica en una cmara de su intestino. Ambos, hembra y macho son necesarios para la reproduccin. Los representantes de esta familia constituyen un potencial como agentes de control biolgico debido a su alta virulencia y amplio rango de

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hospederos. Estos nemtodos pueden matar al insecto entre las 24 a 48 horas, pudiendo infectar diversas especies de insectos. En el gnero Steinernema se han descrito una 16 especies (pueden existir ms) y todas tienen una asociacin mutualista con la bacteria Xenorhabdus (= Achromobacter). En esta interesante relacin el nemtodo necesita de la bacteria para matar al hospedero, creando un ambiente favorable para su desarrollo y produciendo antibiticos que limitan el desarrollo de microorganismos secundarios, desdoblan los tejidos del hospedero en nutrientes favorables y les sirven de alimento. La bacteria necesita del nemtodo para protegerse del medio ambiente y lograr penetrar dentro del hemocele del hospedero. Se dice que el nemtodo acta como vector o jeringa (Alatorre, 1998). Los mermitidos pueden mantenerse por 5 meses sin refrigeracin y 12 meses con refrigeracin. Son muy susceptibles a la deshidratacin, con humedad relativa alta solamente viven un poco ms de 90 minutos en el follaje. La radiacin solar los afecta, pero con protectantes se puede aumentar su longevidad. Requieren suelos hmedos. La actividad de los daueres es dinmica entre los 22C a 32C, pero el desarrollo ptimo se logra entre 15 a 30C. Son atrados a pH bsico. FAMILIA HETERORHABDITIDAE Los nemtodos de esta familia son parsitos obligados de insectos. Las formas infectivas llevan en su intestino la bacteria simbitica Photorhabdus luminescens Akhurst. De acuerdo con Alatorre (1998) esta familia fue creada con Heterorhabditis bacteriophora. El ciclo biolgico es similar a los esteinemermtidos, con la excepcin de que estos tienen un ciclo heterognico con hembras hermafroditas y sexuadas. La bacteria simbitica presenta una fase primaria y una secundaria. Las clulas de la forma primaria estn mejor adaptadas a las condiciones presentes tanto en el insecto como el nemtodo y la forma secundaria est mejor adaptada a las condiciones existentes en el suelo como organismo libre. La forma primaria produce compuestos antibiticos, lecitinasa y absorbe colorantes, la forma secundaria es deficiente en estas caractersticas. El cambio de fase se debe a condiciones de cultivo artificial o debido al cambio de condiciones ambientales, en el momento en que la bacteria almacenada en el intestino del nemtodo es liberada en el hemocelo del insecto parasitoide. El gnero tiene pocas especies. Se han descrito de Heterorhabditis unas ocho especies, todas asociadas a la bacteria simbitica. Entre las ms conocidas se encuentran: H. bacteriophora Poinar, H. megidis Poinar, H. brevicaudis Liu, H. zelandica Wouts, y H. indicus Poinar.

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3.3.2 Empleo de entomonemtodos en Colombia La utilizacin de nemtodos para el control de plagas tiene ventajas comparativas con el uso de insecticidas orgnicos de sntesis. Tienen alta especificidad con lo cual se protegen los enemigos naturales y vida silvestre. Son tolerantes a ciertos plaguicidas y por ello se pueden incluir en programas de manejo integrado. Las especies patognicas presentan buena capacidad de adaptacin a nuevos ambientes, siempre y cuando no existan condiciones extremas. Los nemtodos son fciles de producir en forma masiva. Cuando se utilizan en el campo, requieren condiciones apropiadas de humedad y temperatura necesarias para su desarrollo y diseminacin, si las condiciones son deficientes la aplicacin puede fallar. La produccin masiva de los entomonemtodos puede hacerse en fermentadores de 15.000 a 80.000 litros. Pero en el caso de Heterorhabditis, no puede producirse e n fermentacin lquida de manera eficiente. Se propaga en medio slido. Para incrementar la longevidad de los nemtodos, se ha logrado reducir su metabolismo. Se han hecho formulaciones humectables, en las que los nemtodos son suspendidos en polmeros. En algunos pases se consiguen productos comerciales con entomonemtodos, tales como Bio-vector para ctricos, Exhibit para pastos y ornamentales y Biosafe para plagas caseras y de jardn. La aplicacin de los nemtodos en el campo puede hacerse con cualquier tipo de equipo: aspersoras presurizadas, aspersoras electrostticas, aplicaciones areas va helicpteros. Adems se pueden utilizar con el agua de riego, incluyendo el riego por goteo. Requieren de buena humedad y evitar la radiacin solar para evitar su inactivacin. La temperatura del suelo debe ser de 13C a 33C. Una plaga del suelo, limitante en cultivos de papa, es el gusano blanco Premnotrypes vorax (Hustache) (Coleoptera: Curculionidae). En zonas paperas de Villapinzn (Cundinamarca-Colombia), Garzn et al (1996) aislaron, identificaron y determinaron la patogenicidad de un nemtodo de la familia Steinernematidae, que se encontr afectando larvas del P. vorax. El nemtodo se identific como perteneciente al gnero Steinernema y probablemente una nueva especie. La patogenicidad sobre la plaga, se compar con la de un producto comercial Exhibit, cuyo ingrediente activo es Steinernema carpocapsae Raza 25. Se determin que la concentracin letal media (CL50) del nemtodo aislado del suelo fue de 526.43 nemtodos/ml y de 26.30 nemtodos/ml para el producto comercial, lo que significa que este ltimo es 20 veces ms patognico que el nativo. La existencia de especies locales es un apoyo para futuros programas de manejo de esta plaga.

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En los cultivos de yuca (Manihot esculenta Crantz) en Colombia, se registra como una plaga limitante la chinche subterrnea de las races Cyrtomenus bergi Froeschner (Hemiptera: Cydnidae). Las ninfas y adultos se alimentan de la epidermis y corteza de las races, con sus estiletes producen orificios que permiten la penetracin de patgeneos y adems de ello el producto pierde calidad y se deteriora por completo. Caicedo y Belloti (1996), consideran que el uso de nemtodos entomopatgenos de las familias Steinernem atidae y Heterorhabditidae (Rhabditida), puede ser una alternativa de control de esta plaga. En ocho localidades de Colombia tomaron muestras de suelo de varios cultivos, con o sin la presencia de la chinche. Despus de procesar las muestras de suelo, hallaron varias razas geogrficas de la especie Heterorhabditis bacteriophora Poinar (Heterorhabditidae). El hallazgo de razas nativas del nemtodo es positivo y de importancia para programas MIP, ya que estn adaptadas al husped y a las condiciones ambientales del mismo. La patogenicidad de H. bacteriophora sobre las larvas de segundo instar de Hypothenemus hampei (Ferrari), fue evaluada por Vergara, Lpez y Chaves (1997), a nivel de laboratorio. Se emplearon seis dosis del nemtodo a saber: 1, 5, 15, 30, 50 y 100 nemtodos /50 L de solucin ringer. A las 120 horas de cada tratamiento, se evalu la mortalidad de larvas de la broca. Esta fue de: 48.0; 64.0; 77.6; 84.0; 84.8; y 97.6. No se encontraron diferencias significativas entre las dosis 10, 50 y 30; 50, 30 y 15; 15 y 5 y entre 5 y 1. Los autores hallaron una relacin directamente proporcional, entre la mortalidad y el tiempo de evaluacin, e igual comportamiento verificaron entre las dosis y los porcentajes de mortalidad encontrndose el mayor porcentaje de mortalidad a las 72 horas de la evaluacin. Los nemtodos entomopatgenos pueden tener diversos hospederos. Un insecto husped puede ser afectado por varias especies de nemtodos. Lpez y Vergara (1997), estudiaron el efecto de tres aislamientos a saber: Steinernema glaserie de USA, S. carpocapsae All Strain y Hetrorhabditis bacteriophora de Italia, sobre larvas de la broca del caf. De cada aislamiento se utiliz una concentracin de 50 nemtodos juveniles infectivos J3, en un volumen de 50 l de solucin ringer. Para cada tratamiento se utiliz una cmara de acrlico de 11 x 14 cm con 125 orificios. Cada orificio correspondi a una unidad experimental la cual contena 0.27 g de arena estril, la dosis respectiva de los nemtodos y una larva viva de segundo instar de H. hampei. Las cmaras se sellaron con papel vinipel y se colocaron en total oscuridad, a temperatura de 25C 2C. Los autores comprobaron como los aislamientos ms patognicos, S. glaserie y H. bacteriophora, con porcentajes de mortalidad de 86.7% y 83.2%. Con S. carpocapsae este fue de 69.9%.

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Los nemtodos que afectan insectos tienen ventajas sobre otros agentes de control con organismos. Tienen diversos hospederos y adems los procesos de produccin masiva son sencillos, logrndose obtener elevadas cantidades de ellos. La especie Heterorhabditis bacteriophora Poinar (Rhabditia: Heterorhabitidae), tiene una asociacin mutualstica con la bacteria Protorhabdus luminiscens, que ocasiona septicemia en el hospedero, 48 horas despus de haber penetrado. Barberena y Belloti (1998) estudiaron el efecto de dos razas de nemtodo sobre la chinche Cyrtomenus bergi Froeschner (Hemiptera: Cydnidae) a nivel de laboratorio. Despus de varios ensayos comprobaron que las razas de H. bacteriophora son capaces de parasitar todos los estados de desarrollo de C. bergi. El parasitismo es diferencial en el quinto instar ninfal y en los adultos. A medida que se incrementa la dosis de los nemtodos, el parasitismo es mayor. La DL50 de las razas fue de DL50 de 702 n/ml (LFR92) y de 826 n/ml para la raza SQC92. 3.4 LOS VIRUS COMO PATGENOS DE INSECTOS Este grupo patognico de insectos es muy importante en los programas MIP. Pueden ocasionar fuertes epizootias en las poblaciones plagas. Los virus son altamente especficos e infecciosos y no se pueden propagar in vitro en medios artificiales. De especies de los rdenes: Lepidoptera, Hymenoptera, Diptera, Coleoptera, Orthoptera, Hemiptera, Neuroptera y Trichoptera, se han aislado virus patognicos. Aunque se conocen desde hace muchos aos solo fue hasta la segunda dcada del siglo XX, cuando se reconocieron las virosis en la clase insecta. Las primeras enfermedades ocasionadas por virus fueron encontradas por los Chinos en cras de gusano de seda y en la abeja Apis mellifera. Desde el ao de 1527 el poeta italiano Vida, en su poema De Bombicum menciona a la enfermedad observada en el gusano de seda, la cual recibi nombres como ictericia grasserie giallume, gelbsucht durante el siglo XIX. Al respecto comenta, Rodrguez (1992) que Nysten en 1808 escribi artculos sobre la ictericia,que errneamente se identific como una bacteria. Los virus pueden presentar cuerpos de oclusin. Los primeros en investigarlos fueron Maestri y Comalia en 1856 y fueron es tos autores quienes relacionaron la presencia de estas estructuras con el colapso de una poblacin de gusanos de seda que presentaban la enfermedad (Faulkner, 1981). En 1926, Paillot describe por primera vez un virus de la granulosis (granulovirus, GV). As mismo, relatan Ibarra y Del Rincn (1998) en 1934 Ishimori describe por primera ocasin un nuevo tipo de poliedrosis en el gusano de seda, el cual se caracterizaba por formar cuerpos de oclusin (COs) en el citoplasma de las clulas infectada el cual ms tarde se conocera como virus de la poliedrosis citoplasmtica (VPC).

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Es fascinante el apoyo aportado por la microscopia electrnica al estudio de los virus. Mazzone (1985) afirma que Pergold en 1947 confirma la existencia de nucleocpsides con forma de bastn dentro de los COs de baculovirus del tipo de la poliedrosis nuclear (ncleo poliedrovirus, NPV). Posteriormente se hicieron las aplicaciones en campo con baculovirus. El primer insecticida viral fue el ELCAR, elaborado a partir de NPV de Helicoverpa zea (Ibarra y Del Rincn, 1998). En Colombia fue usado entre 1970 y 1973, el Trichovirus, un virus NPV para el control de la plaga Trichoplusia ni (Hbner) (Lepidoptera: Noctuidae), insecto polfago de amplia dispersin en zonas algodoneras. El control ejercido por el NPV fue espectacular hasta el punto de que en pocos aos desapareci casi completamente el insecto (Rodrguez, 1992). En los ltimos aos se ha investigado con los NPVs recombinantes con el fin de incrementar su potencial insecticida mediante la insercin de genes heterlogos, y as mismo sobre la utilizacin de estos virus como vectores de expresin. La clasificacin de los virus patgenos de insectos ha tenido modificaciones en el tiempo. En una primera etapa se agruparon de acuerdo con la presencia o ausencia de COs y por la morfologa del virion. Luego se emplearon los criterios de grupo de hospederos y tipo de tejido afectado. Rodrguez (1992) e Ibarra y Del Rincn (1998) sostienen que los virus entomopatgenos se clasifican de acuerdo a las consideraciones que se tienen para clasificar los virus de animales, dentro de las cuales se pueden citar: el tipo de cido nucleico, la morfologa de la partcula, la simetra de las sub-unidades de la cubierta de protena, la presencia o ausencia de una envoltura que rodea a la partcula y el tamao de la partcula. Los insectos son afectados por virus pertenecientes a las familias: Baculoviridae, Poxviridae, Reoviridae (todos ellos con COs), Iridoviridae y Polydnaviridae, que presentan las caractersticas incluidas en la Tabla 3, de acuerdo con Castillo, Acosta y Cifiezar (1995):

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Tabla 3. Grupos de virus entomopatgenos. Familia Baculoviridae Poxviridae Reoviridae Iridoviridae Polydnaviridae A.N. DNAdc DNAdc RNAdc DNAdc DNAdc Morfologa Baciliforme Ovoide Tabique Icosaedrica Icosaedrica Ovoide dc = doble cadena cs = cadena simple V.E. + + + V.O. + + + -

AN = Acido Nucleico V.E = Virion envuelto V.O. = Virion incluido (Adams, 1991). BACULOVIRIDAE:

Es la familia de mayor importancia para el control de insectos.

Poseen estos virus, una molcula de ADN circular superembobinada. Envolviendo el cido nucleico hay protenas compuestas de subunidades denominadas capsmeros, los cuales forman una capa denominada cpsido. Uno ms ncleo-cpsidos estn envueltos por una membrana que normalmente est constituida de material celular del hospedero. El conjunto compuesto por la envoltura y el ncleo-cpsido se conoce como virion, los cuales son unidades infectivas del virus. Los viriones tienen forma baciliforme y son envueltos en una matriz proteica; a todo este conjunto, se conoce como cuerpo de inclusin. Existen dos tipos de bactulovirus: virus de poliedrosis nuclear (NPV) y virus de granulosis (VG). Los baculovirus contaminan a los insectos por va oral; normalmente los viriones se encuentran en las hojas y tallos de la planta y son ingeridos por los insectos al alimentarse. Despus de la ingestin los poliedros que contienen los virones se disuelven en condiciones alcalinas (pH > 7.5) del intestino medio y liberan los viriones. Una vez en contacto con las microvellosidades del intestino, los viriones liberan los cpsidos a las clulas epiteliales del intestino donde el virus normalmente realiza su primera vuelta de replicacin. Posteriormente el virus afecta otros tejidos susceptibles del hospedero, donde contina su reproduccin y multiplicacin. Los tejidos del cuerpo graso, epidermis del intestino, hemocitos, trqueas y glndulas de seda, tambin son afectados. Las larvas infectadas se tornan lentas en sus movimientos, dejan de alimentarse y se paralizan. Cuando la enfermedad viral hace sus efectos, se pueden observar las larvas en

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las partes superiores de las plantas pendiendo con la parte ceflica hacia abajo y adheridas de las pseudopatas. El integumento se vuelve blando y de color pardo o negro, los tejidos internos se licuan, quedando la larva como una bolsa lquida. La epizootias se dinamizan en presencia de tejido animal susceptible. El insecto muerto es la fuente del inculo ms importante. El virus se dispersa desde insectos enfermos que expulsan lquidos con viriones, as mismo los depredadores pueden distribuir el virus. Es de anotar que los virus se pueden producir pero en clulas vivas, por lo cual se requiere multiplicar el hospedero. Los agricultores en el campo pueden recolectar larvas enfermas, hacer un macerado o licuado y luego aplicar el producto obtenido, para generar epizootias. POXVIRIDAE: Esto virus se han aislado de especies de Orthopteros, Lepidpteros, Dpteros y Colepteros. Se les denomina entomopoxvirus, y son muy especficos. En esta familia se incluyen tres grupos, el A que infecta colepteros, el B que afecta los lepidpteros y el C, que es tpico en dpteros. La replicacin del virus ocurre generalmente en los tejidos grasos del cuerpo del insecto enfermo; los cuerpos de inclusin se desarrollan tanto en el citoplasma como en el ncleo de la clula infectada, sin embargo las clulas epidrmicas y nerviosas tambin pueden ser afectadas. REOVIRIDAE: Son virus de ARN, se les denomina como virus poliedrosis citoplasmtica, por cuanto se desarrollan en el citoplasma de las clulas infectadas del intestino medio de los insectos. Se disemina por heces o como contaminante de huevos, mediante transmisin transovrica. En el control de plagas tienen poca efectividad y que causan solamente enfermedad tipo crnica en los insectos. IRIDOVIRIDAE: Los virus de esta familia poseen DNA de doble cadena, presentan una partcula viral grande (125-300 nm) de forma icosadrica y tienen la particularidad de presentar iridiscencia, por el arreglo cristalino de sus viriones en el citoplasma de las clulas infectadas. Es por esto que los tejidos de los insectos enfermos presentan apariencia iridiscente de color azuloso o ndigo. Se transmiten por ingestin y se replican en el cuerpo graso de los insectos enfermos, en ocasiones pueden hallarse en las clulas sanguneas epidrmicas y en el tejido embrionario imaginal, se localizan en el citoplasma celular (Rodrguez, 1992). Se han aislado de 65 especies de lepidpteros (26 familias), 8 de colepteros (7 familias), 2 de hymenpteros (2 familias), 2 de dpteros (2 familias) y 2 de orthopteros (1 familia) (Ibarra y Del Rincn, 1998). POLYDNAVIRIDAE: Este es un grupo de gran inters, debido a que se encuentran en simbiosis con hymenpteros parasticos. Se han reconocido dos grupos: 1) los bracovirus que se encuentran en especies de tres subfamilias: Cheloninae, Microgastrinae y

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Cardiochilinae, de la familia Braconidae; 2) los Ichnovirus, que se han encontrado en dos subfamilias: Campopleginae y Banchinae, de la familia Ichneumonidae. Cada especie de parasitoide lleva un polidnavirus diferente y caracterstico de esa especie. La replicacin ocurre en el ncleo de las clulas del cliz del oviducto. Cuando la hembra parasitoide deposita un huevo dentro del hospedero, tambin inyecta el polidnavirus. Los viriones entran y se dispersan en los tejidos y permanecen en el hospedero durante el desarrollo del parasitoide. Se considera que los polidnavirus son generalmente inmunosupresivos, perturbando o desactivando las defensas inmunolgicas del hospedero. Las larvas del parasitoide no pueden desarrollarse en un hospedero sin el polidnavirus. La larva del parasitoide adquiere este virus durante su desarrollo y se replica en la pupa del insectobenfico. La alta especificidad entre los PVs y los parasitoides de la superfamilia Ichneumonoidea, ha hecho que a su vez estos se especialicen en hospederos del orden Lepidoptera, sin que hasta el momento se haya detectado la presencia del virus en otras familias de enemigos naturales u rdenes de hospederos (Urrego, 1998). Los virus comercializados se registran en la Tabla 4. Tabla 4. Virus entomopatgenos comercializados. Virus VPN Producto Compaa - Pas El Car Sandoz USA Gypchek Serv. Forestal - USA Virin-Ensh; Virin Diprion; Virin-KSH; Virin-LS EX - URSS Matsukemin, Spodpterin Multigen Virtuss, Lecontvirus VPN 80, VPN 82 Virox VG Decyde Hifatrin Virin-AAB, Virin-GYAP Matsukemin Calliope - Francia Agrogen - Brasil Serv. Forestal - Canad Agr. Elsol - Guatemala Oxford Virol - Inglaterra Microgenesys - USA Gobierno - Bulgaria Gobierno - EX URSS --- Japn

VPC

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3.4.1 Aplicabilidad de los virus entomopatgenos en Colombia. Los virus entomopatgenos son excelentes auxiliares del Control Biolgico de Insectos plagas, lo afirma Rodrguez (1992), quien adems seala que las epizootias causadas por los virus reducen significativamente las poblaciones plagas. Poseen alta c apacidad de dispersin y de adaptabilidad al husped y a las diferentes condiciones ambientales. Tanto el husped principal como los huspedes intermedios actan en la dispersin del inculo; las regurgitaciones y excrementos de larvas enfermas contienen partculas virales que pueden llegar a contaminar insectos sanos. El canibalismo constituye una forma de diseminacin de las enfermedades virales entre insectos. En Colombia se han registrado enfermedades virales en cerca de 50 especies de insectos-plagas. La ms comn es el virus de la poliedrosis nuclear que ataca varios hospederos: Heliothis virescens (F.) en algodonero; Spodoptera ornithogalli (Guene) en algodonero y arroz; Trichoplusia ni (Hbner) en algodonero. En esta plaga la accin del VPN se calific como espectacular al inicio de la dcada de 1970. El NPV, es tambin registrado afectando Celerio lineata (F.) (Lepidoptera: Sphingidae); Dirphia peruvianus (Lepidoptera: Attacidae); Agraulis vanillae (L.) y Mechanitis veritabilis (Butler) (Lepidoptera: Heliconiidae), Euprosterna elaeasa Dyar; Natada pucara (Lepidoptera: Limacodidae) y en varias especies de plusinidos (Rodrguez, 1992). En plantaciones de palma africana se registraron controles del 95 al 100% del defoliador Sibine fusca Stoll (Lepidoptera: Limacodidae), empleando suspensiones de 50 y de larvas infectadas por NPV, empleando 416 litros de agua por hectrea. Las lecturas de mortalidad se hicieron a los 15 das de la aplicacin de la suspensin viral (Genty, 1978). La presencia natural de virus que afectan insectos es frecuente en zonas de Colombia. Se han hallado virus de la poliedrosis citoplasmtica en S. fusca, Sibine apicalis Dyar (Lepidoptera: Limacodidae), en plantaciones de palma; en bosque de ciprs y pino, se ha detectado enfermedad viral afectando Glena bisulca Rindge (Lepidoptera: Geometridae). En el complejo Spodoptera ocurren varias virosis, tanto S. frugiperda, como S. ornithogalli (Guene) son hospederos de NPV y virus de la granulosis. En el defoliador Euprosterna elaeasa Dyar (Lepidoptera: Limacodidae) Pedraza (1988) aisl e identific por microscopa electrnica el virus mltiple de la poliedrosis nuclear de esta plaga de la palma africana. El VMPN ataca los instares IV y V de la plaga con mayor virulencia. En los bosques de conferas, la incidencia del defoliador Glena bisulca Rindge (Lepidoptera: Geometridae) pudo ser controlada utilizando suspensiones de un virus granular. A partir de 10.000 larvas de los estadios L2 y L3, obtuvo 13 L de suspensin viral en concentraciones de 5 x 107 y 1 x 108 poliedros/ml (Rodrguez, 1992).

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Genty (1978) registr un virus de la densonucleosis en las plagas de la palma africana, S. fusca y Darna sp. Este autor logr desarrollar la tcnica de recolectar larvas enfermas para macerarlas y aplicar el filtrado de stas en aspersin por avin en las plantaciones. Se emple de 10 a 25 gramos de larvas en 5 litros de agua por hectrea, logrando un control de 70 al 90% de S. fusca. 4. CONSIDERACIONES FINALES Colombia, al igual que el resto de pases de habla hispana, tiene un elevado dficit de investigacin y utilizacin prctica de los microorganismos patgenos de insectos-plagas. Las contribuciones de los expertos en el tema son restringidas a aspectos tales como identificacin de cepas, caracterizacin y medida de su patogenicidad en laboratorio. El pas no tiene una entidad que apoye a los interesados en la produccin de entomopatgenos. Si bien es cierto que existen varios laboratorios, an se requiere de un mayor impulso al control microbial. Debidamente registradas en el Instituto Colombiano Agropecuario - ICA, hay ocho empresas, seis de las cuales trabajan con Bacillus thuringiensis, dos con B. bassiana, una se dedica al trabajo con V. lecanii y M. anisopliae. La produccin de entomopatgenos no es una empresa fcil. En la actualidad las compaas transnacionales que elaboran bioplaguicidas lo hacen utilizando tecnologas patentadas o que se rigen bajo secreto industrial, lo cual dificulta el acceso al conocimiento sobre los mtodos empleados para tal fin. Cotes (1999) seala que el logro de un bioplaguicida implica el cumplimiento de diversas etapas tcnicas que comprenden: el aislamiento del microorganismo, su conservacin, la evaluacin de su actividad biocontroladora, el estudio de los mecanismos de accin implicados en dicha actividad, su produccin masiva, estudios de preformulacin, formulacin, determinacin de dosis y formas de aplicacin, evaluacin del producto en el campo, estudios de impacto ambiental y caracterizacin molecular del microorganismo para su posterior obtencin de patente. Sostiene Cotes (1999) que el desarrollo de bioplaguicidas en Colombia ha sido deficiente por cuanto se encuentran limitantes en: 1. Aspectos biolgicos. - Existe una experiencia de resultados inconsistentes en campo, que ha generado prdidas de credibilidad en su accin. La accin lenta de los microorganismos tambin genera desconfianza en el agricultor sobre su efectividad.

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Los microorganismos en general, son poco estables en almacenamiento y de campo. En consecuencia su vida til es corta.

condiciones

de

El uso de microorganismos exige muchas precauciones para su manejo. No existen o son escasos los estudios de impacto ambiental. No se ha dado importancia al entendimiento de los mecanismos de accin implicados en la interaccin microorganismo-insecto-medio ambiente.

2. Aspectos tecnolgicos - La tecnologa disponible para el desarrollo es escasa. No se ha hecho exigencia de normas de calidad en la produccin. Son deficientes los procesos de preformulacin, formulacin y control de calidad. Existe una precaria infraestructura. Los bioplaguicidas que se producen no tienen una concepcin integral y multidisciplinaria.

3. Aspectos educativos. - La universidad no prepara los egresados en bioplaguicidas. - No hay campaas masivas de promocin. En los consumidores no hay conciencia para exigir alimentos protegidos con bioplaguicidas.

4. Aspectos econmicos. En el pas no hay programas de financiacin para investigacin en desarrollo y produccin industrial de productos. No es un negocio rentable por su produccin en pequea escala.

5. Aspectos legales. - No hay incentivos tributarios para su produccin y uso. No existe una poltica de vigilancia sobre la venta y utilizacin de plaguicidas qumicos altamente contaminantes y peligrosos.

A pesar de las anteriores consideraciones el control microbial es una alternativa real e ideal en el control de plagas. Esto se demuestra con la utilizacin de las diferentes formulaciones comerciales de bacterias, hongos, nemtodos y virus que se encuentran en varios pases. La alta especificidad hace de los entomopatgenos productos seguros, el desarrollo de la resistencia en los insectos es lenta y son productos ptimos para programas MIP. Es por esto que se debe buscar a los productos formulados comercialmente un excelente control de calidad. En tal sentido el ICONTEC, ya ha

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expedido las normas tcnicas sobre la produccin y especificaciones para el productor de preparados a base de hongos y bacterias. BIBLIOGRAFA ALATORRE, R.R. Hongos entomopatgenos. En: IX Curso Nacional de Control Biolgico (Memorias). Ro Bravo, Tamaulipas, Mxico: Sociedad Mexicana de Control Biolgico, 1998. p.104-112. BARBERENA, M.F. y BELLOTTI, A.C. Parasitismo de dos razas del nemtodo Heterorhabditis bacteriophora sobre la chinche Cyrtomenus bergi (Hemiptera: Cydnidae) en laboratorio. En: Revista Colombiana de Entomologa. Vol. 24, No. 1 / 2 (1998); p.7-11. BOSA, F.C. y COTES, A.M. Evaluacin de la actividad insecticida de cepas nativas de Bacillus thuringiensis contra Spodoptera frugiperda (J.E. Smith). En: Revista Colombiana de Entomologa. Vol. 23, No. 3 / 4 (1997); p.107-112. BUSTILLO, P.A.; LPEZ, N.J.C. y DEVIA, H. Patogenicidad de Metarhizium anisopliae en la langosta migratoria Rhammatocerus schistocercoides Rehn, en Colombia. En: Revista Colombiana de Entomologa. Vol. 23, No. 1/2 (1997); p.39-43. CARDONA, M.C. Entomologa econmica y manejo de plagas. Palmira: Universidad Nacional de Colombia, 1998. p.99. CASTELBLANCO, Alexandra; URIBE, Daniel y TORRES, Enrique. Diseo de un bioensayo en dieta natural para la evaluacin de cepas nativas de Bacillus thuringiensis en larvas de primer instar de Tecia solanivora (Povolny) Lepidoptera: Gelechiidae. En: Resmenes XXVII Congreso Sociedad Colombiana de Entomologa. Medelln: Socolen, 2000. p.42. CASTILLO, P.; ACOSTA, N.; y CILIEZAR, A. Control microbiolgico de plagas artrpodas. En: Manual para la enseanza del control biolgico en Amrica Latina. DPV-EAP No. 622. Honduras: Zamorano, 1995. p.51-72. COTES, A.M. Estado actual y perspecitvas del desarrollo de bioplaguicidas en Colombia. En: XXVI Congreso Sociedad Colombiana de Entomologa (Memorias). Santaf de Bogot: Socolen, 1999. p.65-72.

31

ESPINEL, C.C.; EBRATT, E.E. y COTES, A.M. Evaluacin de cepas nativas de Metarhizium anisopliae para el control biolgico de Rhammatocerus schistocercoides (Orthoptera: Acrididae). En: Revista Colombiana de Entomologa. Vol. 24, No. 1 / 2 (1998); p.1-6. FAULKNER, P. Baculovirus. En: DAVIDSON, E.W. (ed.). Pathogenesis of invertebrate microbial diseases. Totowa, New Jersey: Allanheld, Osmun Co. Publ. Inc, 1981. p.3-37. GARZN, C.M.Y.; AZA, T.B.O.; JIMNEZ, G.J. y LUQUEZ, J.E. Potencial del nemtodo Steinernema sp para el control biolgico del gusano blanco de la papa. En: Revista Colombiana de Entomologa. Vol. 22, No. 1 (1996); p.25-30. GAVIRIA, G.L.F.; FERNNDEZ, V.S.; GAVIRIA, M.J.; DE LA CRUZ, J. y DELGADO, R.C.H. Evaluacin de tres cepas de Metarhizium anisopliae (Metchnikoff) Sorokin, para el control de Perkinsiella saccharicida (Kirkaldy) (Homoptera: Delphacidae) en el Valle geogrfico del ro Cauca. En: Resmenes del XXIV Congreso Sociedad Colombiana de Entomologa. Pereira: Socolen, 1997. p.8. GENTY, P. Las plagas de la palma aceitera en Amrica Latina. En: Oleagineux (Francia). Vol. 33, No. 7 (1978); p.325-420. HEGEDUS, D.D.; KHACHATOURIANS, G.G. Production of an extracellular lipase by Beauveria bassiana. En: Biotechnology Letters. Vol. 10, No. 9 (1988); p.637-642. IBARRA, R.J.E. Bacterias entomopatgenas. En: IX Curso Nacional de Control Biolgico (Memorias). Ro Bravo, Tamaulipas, Mxico: Sociedad Mexicana de Control Biolgico, 1998. p.76-89. IBARRA, J.E. y DEL RINCN M, C. Virus entomopatgenos. En: Curso Nacional de Control Biolgico. Ro Bravo, Tamaulipas, Mxico: Sociedad Mexicana de Control Biolgico, 1998. p.90-103. JARAMILLO NOREA, Jorge E. y LONDOO ZULUAGA, Martha E. Evaluacin de aislamientos nativos de Bacillus thuringiensis var. Kurstaki en el control de la polilla dorso de diamante Plutella xylostella (L). En: Resmenes XXVII Congreso Sociedad Colombiana de Entomologa. Medelln: Socolen, 2000. p.52.

32

LPEZ, E.; ROMERO, M.; ORTIZ, A.; Y ORDUZ, S. Primer registro de Metarhizium anisopliae infectando reinas de Atta cephalotes (Hymenoptera: Formicidae) en Colombia. En: Revista Colombiana de Entomologa. Vol. 25, No. 1 / 2 (1999); p.49-56. LPEZ, N.J.C. y VERGARA, O.J.D. Efecto de tres aislamientos de nemtodos entomopatgenos sobre larvas de Hypothenemus hampei (Ferrari) en condiciones de laboratorio. En: Resmenes del XXIV Congreso Sociedad Colombiana de Entomologa. Pereira: Socolen, 1997. p.4. LYSENKO, O.; KUCERA, M. Microorganisms as sources of new insecticidal chemicals: toxins. En: BURGUES, H. and HUSSEY, N. Microbial control of insects and mites. 2ed. London: Academic Press, 1994. p.218-222. MARIN MARIN, Patricia y BUSTILLO P., Alex E. Pruebas de patogenicidad de Beauveria bassiana sobre el picudo de los ctricos Compsus n. sp. (Coleoptera: Curculionidae). En: Resmenes XXVII Congreso Sociedad Colombiana de Entomologa. Medelln: Socolen, 2000. p.108. MAZZONE, H.M. Pathology associated with baculovirus infection. En: MARAMOROSCH, K. and SHERMAN, K.E. (eds.) Viral Insecticides for Biological Control. Orlando, Florida: Academic Press, 1985. p.81-120. MC COY, C.W.; SAMSON, R.A. and BOUCIAS, D.G. Entomogenous fungi. En: Handbook of natural pesticides. v.5. Microbial Insecticides. O.M. Ignoffo, N. Bhushan Mandaba (eds.) Florida: CRC. Press, 1988. 243 p. NICKLE, W.R. Nematodes parasites of insects. En: Proc. Am. Tall. Timbers Conference, 1972. 163p. ORTIZ, A.; MADRIGAL, A. y ORDUZ, S. Evaluacin del comportamiento de las hormigas Atta cephalotes (Hymenoptera: Formicidae) frente a la contaminacin del hongo con Trichoderma lignorum. En: Revista Colombiana de Entomologa. Vol. 25, No. 3 / 4 (1999); p.169-177. PACHN, B. M. del P. y COTES, A.M. Efecto de Verticillium lecanii entomopatgeno de la mosca blanca Trialeurodes vaporariorum sobre la actividad parastica de Amitus fuscipennis en un cultivo de frjol. En: Revista Colombiana de Entomologa. Vol. 23, No. 3/4 (1997); p.171-175.

33

RODRGUEZ, S.D.A. Uso de los virus entomopatgenos en programa de control biolgico. En: II Simposio Nacional sobre Control Biolgico en Colombia (Memorias). Medelln: Sociedad Colombiana de Entomologa - Comit Nacional de Control Biolgico, 1992. p.189-210. SNCHEZ, S.D. y BELLOTTI, C.A. Patogenicidad de hongos hyphomycetes sobre Cyrtomenus bergi Froeschner (Hemiptera: Cydnidae) chinche subterrnea de la yuca. En: Revista Colombiana de Entomologa. Vol. 23, No. 1/2 (1997); p.31-37. SNCHEZ, R.M.Y.; VARGAS, B.H.L. y SNCHEZ, G.G. Evaluacin de dos variedades de Bacillus thuringiensis para el control de Diaphania spp (Lepidoptera: Pyralidae) en meln. En: Revista Colombiana de Entomologa. Vol. 25, No. 1 / 2 (1999); p.17-21. SMITH, R.J.; GRULA, E.A. Nutritional requirements for conidial germination and hyphal growth of Beauveria bassiana. En: Journal Inv.Pathology. Vol. 37 (1981); p.222-230. TANADA, Y. and KAYA, H.K. Insect pathology. New York: Academic Press, Inc. 1993. 666p. TORRES, T.L. y COTES, A.M. Actividad biocontroladora de hongos entomopatgenos contra Premnotrypes vorax (Coleoptera: Curculionidae) mediante su utilizacin individual o combinada. En: Revista Colombiana de Entomologa. Vol. 25, No. 3 / 4 (1999); p.121129. TRRES, P.R. y LPEZ-AVILA, A. Estudios bsicos para el control microbiolgico del gusano blanco de la papa (Premnotrypes vorax) con Beauveria spp y Metarhizium sp. En: Revista Colombiana de Entomologa. Vol. 23, No. 1 / 2 (1997); p.83-88. URREGO, D.C.H. Los Polydnavirus simbiontes asociados con algunos insectos parasitoides. En: Boletn Tcnico Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Nacional de Colombia, Sede Medelln. No. 7 (1998); p.39-50. VARGAS, S.M.M.; RODRGUEZ, S.D.A.; SANABRIA, J.; y LPEZ-AVILA, A. Ensayo de diferentes dosis de Aschersonia aleyrodis Webber y parasitismo de Encarsia formosa Gahan en ninfas de tercer y cuarto instar de la mosca blanca de los invernaderos. En: Revista Colombiana de Entomologa. Vol. 21, No. 3 (1995); p.159-170.

34

VLEZ, A.P.E. Tcnicas para el control de calidad de formulaciones de hongos entomopatgenos. Chinchin, Caldas: CENICAF, 1997. p.37. VERGARA, O.J.D.; LPEZ, N.J.C. y CHAVES, C.B. Evaluacin de la patogenicidad de nemtodo Heterorhabditis bacteriophora Poinar (Rhabditida: Hetrorhabditidae) sobre la broca del caf Hypothenemus hampei (Ferrari) en condiciones de laboratorio. En: XXIV Congreso Sociedad Colombiana de Entomologa (Resmenes). Pereira: Socolen, 1997. p.4. VERGARA, R.R. y VARELA, L.A.L. La importancia de la patologa de insectos en el control biolgico. Tunja: Universidad Pedaggica y Tecnolgica de Colombia, 1978. 42p.