Práctica 3.

Obtención de celulasas de Aspergillus niger por fermentación semisólida y fermentación sumergida Equipo 9 León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth Jaqueline Objetivos. • • • Obtener celulasas a partir de Aspergillus niger por medio de fermentación sumergida y fermentación semisólida Determinar la actividad celulolítica y la actividad celulolítica especifica de las celulasas obtenidas por ambos métodos. Comparar las características de la fermentación sumergida y la fermentación semisólida.

Resultados (Tablas, gráficas) A) Determinación de la concentración de carbohidratos (azucares reductores).

La concentración de carbohidratos obtenida en cada fermentación a los tiempos 0h y 7 h se determinó por el método de DNS. Para dicha determinación se utilizaron los datos de la curva patrón obtenidos en la Práctica 1. Obtención de Ácido cítrico a partir de Aspergillus niger en cultivo sumergido. En la tabla 1 se presentan los resultados obtenidos para la curva patrón, mientras el Gráfico 1 muestra la curva patrón. Por otro lado, las tablas 2 y 3 muestran las concentraciones de carbohidratos obtenidas para cada fermentación.

Tabla 1. Curva patrón para determinación de CHO´s por el método DNS.

León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J.

515700161 800 20 10 15 0. . Curva patrón para determinación de CHO´s por el método DNS.Concentración de C O´ H s 1.173925197 400 44 29 36. Curvapatrón.9817 Tabla 2.5 0.0.2 0 -0.2 0 200 400 600 800 1000 1200 y=0.0286 R² =0.0011x .096910013 Gráfico 1.[CHO´ s](mg/ml) % Transmitancia1 % Transmitancia2 % Transmitancia prom Absorbanciaprom 0 100 100 100 0 200 72 62 67 0.2 1 0.4 0. León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J.6 0.8 0.437707136 600 35 26 30.5 0.823908741 1000 11 5 8 1. Determinación de concentración de carbohidratos en Fermentación Semisólida (FSS).

Los resultados obtenidos para la curva patrón se muestran en la tabla 4 y el gráfico 2.2784002 514. para dicha determinación se realizó una curva patrón utilizando Albumina Sérica Bovina (ASB).7290928 Fdil 1 1 [CHO´ ] (mg/ml)2.45462 B) Determinación de concentración de celulasas. León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J.9709 44264. mientras los obtenidos para la FSS y la FS se muestran en las tablas 5 y 6 respectivamente. F S t0 t7 % Transmitancia Absorbancia 54 29 0.040958608 0. Se determinó la concentración de celulasas en cada fermentación por la técnica de Lowry.30980392 [CHO´ ] (mg/ml) s 63. . Tabla 4. Determinación de concentración de carbohidratos en Fermentación Sumergida (FS).9418 Tabla 3.26760624 0. Curva patrón para determinación de proteínas por Lowry.7290928 10559.2784002 514.23509789 307.93726 20185.6399272 Fdil 350 400 [CHO´ ] (mg/ml)50% [CHO´ ] (mg/ml)100%sólidos s s 22132.28426 123055.FS % S Transmitancia Absorbancia t0 t7 91 49 0.537602002 [CHO´ ] (mg/ml) s 269.55% s [CHO´ ] (mg/ml)100%sólidos s 269.56852 246111.

455931956 500 34 32 33 0.3 y=0.977 i c n a r o s b A 0.001x +0.247951552 1 300 47 46 46.8 1 H2O (ml) 1 0.5 0. .8 0.5 0.6 0.4 0.6 0.6 0.2 0.1 0 0 100 200 300 400 500 600 Concentra ción AB (mg S /ml) León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J.4 0.110698297 1 200 58 55 56.4 0. Curva patrón para determinación de proteínas por Lowry.5 0. CurvapatrónAB S 0.0195 R² =0.2 0 Vol total (ml) [ABS] (mg/ml) % Transmitancia 1 % Transmitancia 2 % Transmitancia prom Absorbancia 1 0 100 100 100 0 1 100 79 76 77.48148606 Gráfico 2.5 0.332547047 1 400 36 34 35 0.Tubo # 1 2 3 4 5 6 ASB (ml) 0 0.2 0.

.León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J.

478795 1432.765 2755966.338214 1476.036 4012119.0934173 1157.305526406 59 0.142667504 2. FS % S Trans1 % Trans2 Absorbancia1 Absorbancia2 [Proteína ] (ug/ml)1 [Proteína](ug/ml)2 [Proteína](ug/ml)promedio Fdil t0 t7 92 63 86 0.036212173 3.997 542. F S t0 t7 % Trans1 % Trans2 Absorbancia 1 Absorbancia2 [Proteína ] (ug/ml)1 [Proteína](ug/ml)2 [Proteína](ug/ml)promedio Fdil 32 72 38 0.697540381 20.4173 1157898.4675036 2286.174938 1382.845674938 478.38214 29526.945418 2681.6500217 126. Determinación de concentración de proteínas en FS.898997 León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J.200659451 2.4594505 3424.072 8024239.441145418 43 0.026406 2826.529 2755.Tabla 5.340381 1722.899916 800 2800 [Proteína](ug/ml)50% [Proteína](ug/ml)100% [Proteína](mg/ml)100% 1377983.494850022 2.01217265 184.321221 10 20 [Proteína](ug/ml)2.239529 Tabla 6. Determinación de concentración de proteínas en FSS.42442 542093.966072 8024.55% [Proteína](ug/ml)100% [Proteína](mg/ml)100% 13823. .

2 1 0. Determinación de la actividad celulolítica especifica en FSS y FS Fermentación t0 t7 FSS 0.2 0 0 T po (h) iem 7 León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J.64933072 0.022368707 FS 0.9979087 672. Determinación de la actividad celulolítica en FSS y FS Fermentación t0 t7 FSS 1475. Com paracióndela actividad celulolíticaespecífica 1.8 0.8484873 Tabla 8. Tabla 7.731393 FS 351.C. Comparación de la de la Actividad celulolítica específica.581094283 E.535378731 1.4 FSS FS .485617 8203. p s í o u l e a d v i t c A 0.6 0. Cálculo de la Actividad celulolítica y actividad celulolítica específica. . Se realizó el cálculo de estos dos parámetros para comparar las dos fermentaciones llevadas a cabo en el laboratorio.

. Conclusiones Bibliografía León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J.Discusión y análisis de resultados TENEMOS Q DISCUTIR DESDE EL TIPO DE MEDIO . DE MUESRRA Y LOS RESUTLADOS DE ACTIV CELULLITICA Y CONC DE PROTEINAS CUAL METODO ES MEJOR Y PORQUE.

Anexo 1. Algoritmos de cálculo a) Peso seco b) Velocidad especifica de crecimiento c) Tiempo de duplicación d) Utilización de sustrato León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J. .

e) Eficiencia del uso del sustrato f) Rendimientos León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J. .