Práctica 3.

Obtención de celulasas de Aspergillus niger por fermentación semisólida y fermentación sumergida Equipo 9 León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth Jaqueline Objetivos. • • • Obtener celulasas a partir de Aspergillus niger por medio de fermentación sumergida y fermentación semisólida Determinar la actividad celulolítica y la actividad celulolítica especifica de las celulasas obtenidas por ambos métodos. Comparar las características de la fermentación sumergida y la fermentación semisólida.

Resultados (Tablas, gráficas) A) Determinación de la concentración de carbohidratos (azucares reductores).

La concentración de carbohidratos obtenida en cada fermentación a los tiempos 0h y 7 h se determinó por el método de DNS. Para dicha determinación se utilizaron los datos de la curva patrón obtenidos en la Práctica 1. Obtención de Ácido cítrico a partir de Aspergillus niger en cultivo sumergido. En la tabla 1 se presentan los resultados obtenidos para la curva patrón, mientras el Gráfico 1 muestra la curva patrón. Por otro lado, las tablas 2 y 3 muestran las concentraciones de carbohidratos obtenidas para cada fermentación.

Tabla 1. Curva patrón para determinación de CHO´s por el método DNS.

León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J.

2 0 200 400 600 800 1000 1200 y=0.096910013 Gráfico 1. Determinación de concentración de carbohidratos en Fermentación Semisólida (FSS).4 0.515700161 800 20 10 15 0.[CHO´ s](mg/ml) % Transmitancia1 % Transmitancia2 % Transmitancia prom Absorbanciaprom 0 100 100 100 0 200 72 62 67 0.6 0. León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J. Curva patrón para determinación de CHO´s por el método DNS.2 0 -0.0. Curvapatrón.8 0.2 1 0.5 0.437707136 600 35 26 30.9817 Tabla 2. .0286 R² =0.Concentración de C O´ H s 1.0011x .5 0.173925197 400 44 29 36.823908741 1000 11 5 8 1.

.040958608 0. para dicha determinación se realizó una curva patrón utilizando Albumina Sérica Bovina (ASB).537602002 [CHO´ ] (mg/ml) s 269.28426 123055.7290928 Fdil 1 1 [CHO´ ] (mg/ml)2. F S t0 t7 % Transmitancia Absorbancia 54 29 0.56852 246111.9709 44264.7290928 10559.55% s [CHO´ ] (mg/ml)100%sólidos s 269.30980392 [CHO´ ] (mg/ml) s 63. Se determinó la concentración de celulasas en cada fermentación por la técnica de Lowry.45462 B) Determinación de concentración de celulasas. Determinación de concentración de carbohidratos en Fermentación Sumergida (FS).FS % S Transmitancia Absorbancia t0 t7 91 49 0. Curva patrón para determinación de proteínas por Lowry.93726 20185.9418 Tabla 3.6399272 Fdil 350 400 [CHO´ ] (mg/ml)50% [CHO´ ] (mg/ml)100%sólidos s s 22132. mientras los obtenidos para la FSS y la FS se muestran en las tablas 5 y 6 respectivamente. Los resultados obtenidos para la curva patrón se muestran en la tabla 4 y el gráfico 2. Tabla 4.2784002 514. León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J.26760624 0.23509789 307.2784002 514.

4 0.48148606 Gráfico 2.5 0.247951552 1 300 47 46 46.2 0. Curva patrón para determinación de proteínas por Lowry.2 0 Vol total (ml) [ABS] (mg/ml) % Transmitancia 1 % Transmitancia 2 % Transmitancia prom Absorbancia 1 0 100 100 100 0 1 100 79 76 77.977 i c n a r o s b A 0.2 0.5 0.1 0 0 100 200 300 400 500 600 Concentra ción AB (mg S /ml) León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J.4 0.455931956 500 34 32 33 0.5 0.8 0.332547047 1 400 36 34 35 0. CurvapatrónAB S 0.5 0.8 1 H2O (ml) 1 0.Tubo # 1 2 3 4 5 6 ASB (ml) 0 0.0195 R² =0.001x +0. .110698297 1 200 58 55 56.6 0.6 0.6 0.4 0.3 y=0.

León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J. .

Determinación de concentración de proteínas en FS.529 2755.898997 León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J.340381 1722.142667504 2.494850022 2.4594505 3424.765 2755966.966072 8024.01217265 184.036 4012119.945418 2681.4675036 2286.441145418 43 0.4173 1157898.072 8024239.899916 800 2800 [Proteína](ug/ml)50% [Proteína](ug/ml)100% [Proteína](mg/ml)100% 1377983.0934173 1157.321221 10 20 [Proteína](ug/ml)2.305526406 59 0.478795 1432.036212173 3.845674938 478.55% [Proteína](ug/ml)100% [Proteína](mg/ml)100% 13823.38214 29526. Determinación de concentración de proteínas en FSS.026406 2826.997 542. FS % S Trans1 % Trans2 Absorbancia1 Absorbancia2 [Proteína ] (ug/ml)1 [Proteína](ug/ml)2 [Proteína](ug/ml)promedio Fdil t0 t7 92 63 86 0. .6500217 126.Tabla 5.200659451 2.239529 Tabla 6. F S t0 t7 % Trans1 % Trans2 Absorbancia 1 Absorbancia2 [Proteína ] (ug/ml)1 [Proteína](ug/ml)2 [Proteína](ug/ml)promedio Fdil 32 72 38 0.174938 1382.338214 1476.42442 542093.697540381 20.

Se realizó el cálculo de estos dos parámetros para comparar las dos fermentaciones llevadas a cabo en el laboratorio. p s í o u l e a d v i t c A 0.6 0.C.022368707 FS 0. Determinación de la actividad celulolítica especifica en FSS y FS Fermentación t0 t7 FSS 0.485617 8203.2 0 0 T po (h) iem 7 León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J. Com paracióndela actividad celulolíticaespecífica 1.731393 FS 351.4 FSS FS . Determinación de la actividad celulolítica en FSS y FS Fermentación t0 t7 FSS 1475.9979087 672. Comparación de la de la Actividad celulolítica específica.535378731 1. Cálculo de la Actividad celulolítica y actividad celulolítica específica.8 0.64933072 0. Tabla 7.8484873 Tabla 8.581094283 E.2 1 0. .

.Discusión y análisis de resultados TENEMOS Q DISCUTIR DESDE EL TIPO DE MEDIO . DE MUESRRA Y LOS RESUTLADOS DE ACTIV CELULLITICA Y CONC DE PROTEINAS CUAL METODO ES MEJOR Y PORQUE. Conclusiones Bibliografía León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J.

Algoritmos de cálculo a) Peso seco b) Velocidad especifica de crecimiento c) Tiempo de duplicación d) Utilización de sustrato León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J. .Anexo 1.

e) Eficiencia del uso del sustrato f) Rendimientos León Rodríguez César Rivas Medina Elizabeth J. .

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