Prctica 3.

Obtencin de celulasas de Aspergillus niger por fermentacin semislida y fermentacin sumergida Equipo 9 Len Rodrguez Csar Rivas Medina Elizabeth Jaqueline Objetivos. Obtener celulasas a partir de Aspergillus niger por medio de fermentacin sumergida y fermentacin semislida Determinar la actividad celuloltica y la actividad celuloltica especifica de las celulasas obtenidas por ambos mtodos. Comparar las caractersticas de la fermentacin sumergida y la fermentacin semislida.

Resultados (Tablas, grficas) A) Determinacin de la concentracin de carbohidratos (azucares reductores).

La concentracin de carbohidratos obtenida en cada fermentacin a los tiempos 0h y 7 h se determin por el mtodo de DNS. Para dicha determinacin se utilizaron los datos de la curva patrn obtenidos en la Prctica 1. Obtencin de cido ctrico a partir de Aspergillus niger en cultivo sumergido. En la tabla 1 se presentan los resultados obtenidos para la curva patrn, mientras el Grfico 1 muestra la curva patrn. Por otro lado, las tablas 2 y 3 muestran las concentraciones de carbohidratos obtenidas para cada fermentacin.

Tabla 1. Curva patrn para determinacin de CHOs por el mtodo DNS.

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[CHO s](mg/ml) % Transmitancia1 % Transmitancia2 % Transmitancia prom Absorbanciaprom 0 100 100 100 0 200 72 62 67 0.173925197 400 44 29 36.5 0.437707136 600 35 26 30.5 0.515700161 800 20 10 15 0.823908741 1000 11 5 8 1.096910013

Grfico 1. Curva patrn para determinacin de CHOs por el mtodo DNS.

Curvapatrn.Concentracin de C O H s
1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 -0.2 0 200 400 600 800 1000 1200 y=0.0011x - 0.0286 R =0.9817

Tabla 2. Determinacin de concentracin de carbohidratos en Fermentacin Semislida (FSS).

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FS % S Transmitancia Absorbancia t0 t7 91 49 0.040958608 0.30980392

[CHO ] (mg/ml) s 63.23509789 307.6399272

Fdil 350 400

[CHO ] (mg/ml)50% [CHO ] (mg/ml)100%slidos s s 22132.28426 123055.9709 44264.56852 246111.9418

Tabla 3. Determinacin de concentracin de carbohidratos en Fermentacin Sumergida (FS).

F S t0 t7

% Transmitancia Absorbancia 54 29 0.26760624 0.537602002

[CHO ] (mg/ml) s 269.2784002 514.7290928

Fdil 1 1

[CHO ] (mg/ml)2.55% s [CHO ] (mg/ml)100%slidos s 269.2784002 514.7290928 10559.93726 20185.45462

B) Determinacin de concentracin de celulasas.

Se determin la concentracin de celulasas en cada fermentacin por la tcnica de Lowry, para dicha determinacin se realiz una curva patrn utilizando Albumina Srica Bovina (ASB). Los resultados obtenidos para la curva patrn se muestran en la tabla 4 y el grfico 2, mientras los obtenidos para la FSS y la FS se muestran en las tablas 5 y 6 respectivamente.

Tabla 4. Curva patrn para determinacin de protenas por Lowry.

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Tubo # 1 2 3 4 5 6

ASB (ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1

H2O (ml) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0

Vol total (ml) [ABS] (mg/ml) % Transmitancia 1 % Transmitancia 2 % Transmitancia prom Absorbancia 1 0 100 100 100 0 1 100 79 76 77.5 0.110698297 1 200 58 55 56.5 0.247951552 1 300 47 46 46.5 0.332547047 1 400 36 34 35 0.455931956 500 34 32 33 0.48148606

Grfico 2. Curva patrn para determinacin de protenas por Lowry.

CurvapatrnAB S
0.6 0.5 0.4 0.3 y=0.001x +0.0195 R =0.977

i c n a r o s b A

0.2 0.1 0 0 100 200 300 400 500 600 Concentra cin AB (mg S /ml)

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Tabla 5. Determinacin de concentracin de protenas en FSS.

FS % S Trans1 % Trans2 Absorbancia1 Absorbancia2 [Protena ] (ug/ml)1 [Protena](ug/ml)2 [Protena](ug/ml)promedio Fdil t0 t7 92 63 86 0.036212173 3.441145418 43 0.200659451 2.697540381 20.01217265 184.4594505 3424.945418 2681.340381 1722.478795 1432.899916 800 2800

[Protena](ug/ml)50% [Protena](ug/ml)100% [Protena](mg/ml)100% 1377983.036 4012119.765 2755966.072 8024239.529 2755.966072 8024.239529

Tabla 6. Determinacin de concentracin de protenas en FS.

F S t0 t7 % Trans1 % Trans2 Absorbancia 1 Absorbancia2 [Protena ] (ug/ml)1 [Protena](ug/ml)2 [Protena](ug/ml)promedio Fdil 32 72 38 0.494850022 2.305526406 59 0.142667504 2.845674938 478.6500217 126.4675036 2286.026406 2826.174938 1382.338214 1476.321221 10 20 [Protena](ug/ml)2.55% [Protena](ug/ml)100% [Protena](mg/ml)100% 13823.38214 29526.42442 542093.4173 1157898.997 542.0934173 1157.898997

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C. Clculo de la Actividad celuloltica y actividad celuloltica especfica. Se realiz el clculo de estos dos parmetros para comparar las dos fermentaciones llevadas a cabo en el laboratorio. Tabla 7. Determinacin de la actividad celuloltica en FSS y FS
Fermentacin t0 t7 FSS 1475.485617 8203.731393 FS 351.9979087 672.8484873

Tabla 8. Determinacin de la actividad celuloltica especifica en FSS y FS

Fermentacin t0 t7 FSS 0.535378731 1.022368707 FS 0.64933072 0.581094283

E. Comparacin de la de la Actividad celuloltica especfica.

Com paracindela actividad celulolticaespecfica

1.2 1 0.8 0.6 0.4 FSS FS

. p s o u l e a d v i t c A

0.2 0 0 T po (h) iem 7

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Discusin y anlisis de resultados

TENEMOS Q DISCUTIR DESDE EL TIPO DE MEDIO , DE MUESRRA Y LOS RESUTLADOS DE ACTIV CELULLITICA Y CONC DE PROTEINAS CUAL METODO ES MEJOR Y PORQUE.

Conclusiones

Bibliografa

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Anexo 1. Algoritmos de clculo a) Peso seco

b) Velocidad especifica de crecimiento

c) Tiempo de duplicacin

d) Utilizacin de sustrato

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e) Eficiencia del uso del sustrato

f) Rendimientos

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