La técnica de ELISA (Enzyme Linked Inmuno Sorbent

Assay) es un procedimiento de ensayo

inmunoenzimático. Se basa en la detección antígeno
(Ag) o anticuerpo (Ac), inmovilizado sobre una fase
sólida y mediante anticuerpos que directa o
indirectamente producen una reacción, la prueba
recurre al empleo de inmunógenos, haptenos ó
anticuerpos marcados con una enzima cuyo producto
colorido, puede ser medido
espectrofotométricamente.
 ELISA

• Es uno de los métodos más utilizados para el

diagnóstico serológico de distintas enfermedades
infecciosas.
•
•Técnica altamente sensible y de gran especificidad.

•Sencilla y económica.

•Buena reproducibilidad y facilidad en la interpretación

de los resultados.

•.Se han adaptado varios tipos de ELISA tanto para la

determinación de ANTÍGENOS como de ANTICUERPOS.
 Tipos de ELISA

• Anticuerpos marcados:

ELISA Directo
ELISA Indirecto
ELISA sándwich
Doble (DAS)
Heterólogo (HADAS)

• Antígeno marcado
ELISA competitivo
 ELISA Directo.

Consta de las siguientes etapas:

• Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de antígenos

específicos. Lavado para eliminar los antígenos fijados
deficientemente.
• Adición de anticuerpos marcados (“conjugados”) con una
enzima; si los anticuerpos reaccionan con los antígenos, el
complejo quedará solubilizado.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la
enzima marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
Fases de la técnica Elisa Sandwich. (1) Un anticuerpo monoclonal o
policlonal anti antígeno suele estar ya unido a la placa. (2) se incuba con la
muestra problema. (3) se añade el conjugado. (4) por último el sustrato.
Todos los pasos van precedidos de incubaciones y lavados.
 ELISA Indirecto.

Consta de las siguientes etapas:

• Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos para

los anticuerpos.
• Adición del suero problema, de tal forma que sus
anticuerpos reaccionarán específicamente con los
antígenos fijados al soporte.
• Adición de anti-anticuerpos conjugados con una enzima,
los cuales reaccionan con los anticuerpos específicos que
se encuentran fijados a los antígenos.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar
la enzima marcadora.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
Fase de la técnica Elisa indirecto. (1) El antígeno se pega a la

Fase de la técnica Elisa indirecto. (1) El antígeno se pega a la placa

(2) Se añade el suero problema. (3) posteriormente, el conjugado. (4)
y por último, el sustrato.
 ELISA Sándwich “DAS”

Consta de las siguientes etapas:

• Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del
agente patógeno a detectar.
• Adición de la muestra problema de tal forma que si está
presente el agente patógeno (antígeno), reaccionará
específicamente con los anticuerpos fijados al soporte.
• Adición de anticuerpos específicos del antígeno a detectar
conjugados con una enzima, los cuales reaccionan con los
antígenos añadidos con la muestra problema y que se
encuentran fijados a los anticuerpos.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la
enzima marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
 ELISA Sándwich “HADAS”.

• Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del agente

patógeno a detectar.
• Adición de la muestra problema de tal forma que si está presente el
antígeno, reaccionará específicamente con los anticuerpos fijados al soporte.
• Adición de anticuerpos específicos del antígeno a detectar (deben tener un
epítope diferente de los anticuerpos con los que se han tapizado el soporte),
los cuales reaccionan con los antígenos añadidos con la muestra problema y
que se encuentran fijados a los anticuerpos.
• Adición de anticuerpos conjugados con una enzima anti-anticuerpos
empleados en el paso anterior.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima
marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
 ELISA Competitivo.

• Fijación al soporte insoluble de anticuerpos específicos del agente patógeno

a detectar.
• Adición en concentración conocida una mezcla de antígenos de anticuerpo
marcados con una enzima y antígenos desconocidos. Paralelamente, añadir
únicamente antígenos del anticuerpo usado en el paso anterior, marcados con
una enzima.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima
marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado de ambas pruebas
y comparar los resultados. Si las lecturas de ambas pruebas son análogas, el
antígeno a estudio no tienen nada que ver con los anticuerpos empleados para
tapizar el soporte. Si hay diferencia en las lecturas de ambos pocillos, el
antígeno objeto de estudio, está relacionado serológicamente con el anticuerpo
empleado para tapizar el soporte y la diferencia de densidad óptica, es
proporcional a la concentración del antígeno problema en la muestra.
Fases de la Técnica Elisa de competición. (1) Se incuba el suero problema
con el antígeno. (2) La mezcla anterior se deposita sobre los pocillos donde
previamente se ha fijado un suero anti antígeno (3) se añade el conjugado.
(4) después,  el sustrato. En este caso la ausencia de color sería positivo.
 Aplicaciones del ELISA.

• Enfermedades producidas por parásito, tripanosomas,

Toxoplasmosis , Triquinosis
• Enfermedades producidas por Micoplasmas
• Enfermedades producidas por bacterias,
Mycobacterium tuberculosis
Enterotoxinas Vibrio cholerae, Estreptococos
• Enfermedades producidas por virus , Fiebre aftosa,
Rotavirus
•Otras aplicaciones , Hormonas , Gonadotropina
coriónica , Testosterona, Hormonas tiroideas
• Cuantificación de inmunoglobulinas ,IgG , IgE
•Hongos