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Guia Laboratorio 3
Guia Laboratorio 3
Cátedra de Microbiología
LABORATORIO Nº 3
1. Observación Macroscópica
2. Observación microscópica
Los microorganismos pueden ser observados directamente usando un
instrumento de precisión, el microscopio. Si la finalidad es ver microorganismos
vivos, para observar su movilidad o su reacción frente a elementos químicos, se les
debe observar SIN teñir. Por el contrario, si se desea observar detalles de forma,
estructuras o agrupación, es necesario tratar los microorganismos con colorantes,
proceso llamado tinción.
2.2. Tinciones
Preparación de la muestra a teñir: Para teñir microorganismos se debe
depositar una pequeña cantidad de la muestra a examinar sobre un portaobjeto
limpio (1 – 2 gotas de cultivo líquido). Si la muestra proviene de un medio sólido,
esta se emulsiona con unas gotas de suero fisiológico estéril. La muestra se
extiende con el asa, hasta que quede una fina película sobre el portaobjeto. Esta
película se denomina frotis.
Para teñir el frotis, éste debe estar seco. Esto se logra mediante un
procedimiento llamado fijación, que puede realizarse usando sustancias químicas o
calor. Lo más usado es la fijación por calor que consiste en pasar el portaobjeto, con
el frotis, varias veces sobre la llama del mechero. Este procedimiento deshidrata y
mata las células presentes en el frotis y hace que se adhieran al porta objeto.
Coloración de la muestra: Una vez fijado el frotis, se procede a aplicar el o los
colorantes, esto depende del tipo de tinción que se desea realizar. Los colorantes
son compuestos químicos, generalmente sales, que tienen afinidad por ciertas
estructuras celulares a las cuales se fijan.
Se pueden diferenciar tres tipos de tinciones:
1. Tinción simple hace uso de un solo colorante. Permite ver forma y
tamaño.
2. Tinción diferencial permite separar (diferenciar) las bacterias en
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grupos de acuerdo a su reacción diferencial frente a dos colorantes. Ej.
tinción de Gram y tinción de Ziehl-Neelsen.
3. Tinción especial útil para observar estructuras celulares (ej. cápsula,
esporas y flagelos) o microorganismos difíciles de teñir (ej. Micoplasma y
Rickettsias).
* El lugol es un mordiente que tiene por función aumentar la afinidad del colorante (en
este caso cristal violeta), por las estructuras celulares a las cuales éste se une.