Lectura a Prueba de Errores de la

interacción codón-anticodon

L.A. Q. B. Claudia Rebeca González Ruiz

Autores: Robert C. Thompson y Pamela Stone

Proc. Nati. Acad. Sci. USA
Vol. 74, No. 1, pp. 198-202, Enero de 1977
Bioquímica
Introducción
 Lafidelidad de la síntesis de proteína es substancialmente
mayor que la especificidad del reconocimiento del
complejo codón-anticodón de la que se esperaría una
energética conocida de las pares de bases en solución.

 Para probar la sugerencia de que la especificidad de

reconocimiento se puede incrementar por “lectura a
prueba de errores cinética” asociada a hidrólisis de GTP
se estudiaron los complejos ternarios del Factor de
Elongación polipetídico Tu(EFTu ) y el GTP con
ribosomas programados con poli-u.
 Con la mayoría de los complejos ternarios no
análogos, incluyendo 2 que se aparean con las bases
UUU 5’ y 3’, el rechazo ocurre sin hidrólisis de
GTP, presumiblemente por una reacción de unión
inversa.
 Sin embargo con complejos que contienen Leu e Ile
tRNAs las cuales se aparean correctamente con el
sitio 3’ y las bases intermedias, la hidrólisis del GTP
se estimula aunque el aatRNA no fue retenido por
los ribosomas.
 Estos resultados nos demuestran la existencia de un
paso de lectura a prueba de errores dependiente de
GTP en el reconocimiento de aatRNA ribosomal.
Estas investigaciones han demostrado que todos los
pares estándar posibles entre G-U se acercan en
energía de unión a los pares estándar.
La energía liberada de la unión de un par G-U
difiere de los pares que son correctos A-U y G-C
por tan solo 2-3kcal/mol.
Con excepción de la base del codón 3’ donde el
“bamboleo” permite a G-U se un par de bases
estándar en el código genético, el apareamiento de
G-U casi siempre resultaría en una unión con el
aatRNA incorrecto.
El ribosoma y sus asociados deben por lo
tanto aumentar la especificidad del
apareamiento codón-anticodón, a través de
un mejoramiento en la exactitud del
apareamiento de bases.
Hopfield propuso un mecanismo alternativo
para incrementar la especificidad de la
union de aatRNAs; un paso de lectura a
prueba de errores.
La lectura a prueba de errores debera ser
conducida por la energia de la hidrólisis de
GTP.
 Esta característica sugiere un método de detección de
lectura a prueba de errores, ya que sólo ese método de
rechazo de error debe consumir GTP.
 Hemos estudiado el mecanismode rechazo de error en la
reacción de ribosomas poli(U)-programados con una
variedad de no analogos de aa-tARN, en presencia de
factor de elongación del polipéptido Tu (EFTu) y GTP.
 Los resultados indican que ciertos aa-tARN estimulan la
hidrólisis de GTP y todavía no se conservan en la
ribosoma.
 Nuestras conclusiones por lo tanto implican una reacción
de lectura a prueba de errores, del tipo postulada por
Hopfield, en la síntesis de proteínas
Material y Métodos
 Ribosomas y EFTu de E. coli MRE600
 En la preparación de aatRNA se usaron
aminoácidos etiquetados con H3 preparados con
una sola tanda de una mezcla de aatRNA
sintetasas, preparadas de E. coli MRE600 estos
fueron Phe25; leu65; Ile84; Lys30; Tyr60 y
Val12.5
 Los ribosomas con Poli-u y N-acetil-fenilalanil-
tRNA en el sitio P (donador), se prepararon
enzimáticamente por incubación de ambos
componentes.
Para preparar el complejo ternario EFTu-GTP-
aatARN, EFTu-PIB se incubó con el
fosfoenolpiruvato y piruvato quinasa, se agrego
GTP para proveer actividad especifica y por
ultimo se agrego Aminoacil–tRNA y se filtro
para eliminar EFTu no acomplejados.
La reacción de unión se inicio por medio de la
mezcla de 4 volúmenes del complejo ternario y
un volumen de Ribosoma-PolyU-AcPhetRNA
a 0˚C.
Se determinaron las uniones de [H3]aatRNA
con los Ribosomas mediante el metodo de
Niremberg y Leder.
 Resultados
El postulado del mecanismo
de rechazo de error se
esperaría que este asociado
con una pequeña cantidad
de la hidrólisis de GTP, ya
que representa una segunda
vida de la defensa, la
mayoría de los errores son
detectados en el primer
paso discriminativo antes de
la hidrólisis de GTP.

FIG. 1. La hidrólisis de GTP en complejos ternarios análogos y no

análogos. Un complejo ternario [1600 μl (alrededor de 300 pmol)] de [3H]
- aa-tRNA, [. γ-32PJGTP, y EFTu (Material y Métodos) fue añadido a 400
μL (1nmol) de un complejo preformado AcPh-tRNA-poli (U)-ribosoma a
0 °. Las muestras (150 μl) fueron retirados en el momento indicado y el
contenido de 32P, fue determinado.
 Hidrólisis de GTP asociada a complejos
ternarios análogos y no análogos
Como se observo en trabajos previos cuando se
incuba un complejo ternario Phe-tRNA, EFTu, y
[γ-32P]GTP con ribosomas programados con
poly(U), GTP se hidrolizó rápidamente con la
producción de Pi32i (Fig. 1), y la Phe-tRNA se unió
a los ribosomas.

En comparación con el complejo ternario que

ocupaba la Lisina que debería interactúan muy mal
con el codón UUU,
mostró una muy baja tasa de hidrólisis de GTP.
 Con otros complejos ternarios las tasas de
hidrólisis de GTP variaban ampliamente.
 Con Val y Tir la tasa no excedia el valor de fondo.
 Con Ile la tasa fue tres veces el valor de fondo.
 Con Leu era aún mayor
(aunque todavía sólo una pequeña fracción de la
observada con Phe).
 Con Leu la actividad GTPasa declinó rápidamente
al nivel de fondo, mientras que con la Ile se
mantuvo elevado mucho más