MANUAL DE PRÁCTICAS

CURSO DE PROPAGACION DE PLANTAS PARA LA FORMACION DE

INGENIEROS AGRÓNOMOS

Elaboró
EDWIN ANTONIO GUTIÉRREZ RODRIGUEZ.
Ingeniero Agrónomo – Universidad de los Llanos
T.P 25.526 M.A.D.R
Docente Propagación de Plantas

Universidad de los Llanos

Facultad de ciencias agropecuarias y recursos naturales
Escuela de Ingeniería en Ciencias Agrícolas
Programa de Ingeniería Agronómica
2010

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 TABLA DE CONTENIDO

 Introducción 3
 Criterios para la presentación de informes 4
 Practica 1. Selección de semillas, pruebas de viabilidad y métodos para
romper dormancia. 5
 Practica 2. Preparación de sustratos. 9
 Practica 3. Métodos de trazado. 11
 Practica 4. Propagación asexual. 13
 Practica 5. Cultivo in vitro de meristemos. 16
 Bibliografía 19

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Introducción

El contexto de actuación del Ingeniero Agrónomo, está caracterizado por la

pluralidad de componentes políticos, sociales, técnicos, económicos, que en
su interacción, generan diversidad de situaciones que requieren la actuación
crítica, analítica y propositiva para el planteamiento de alternativas de
solución.

El proceso de formación del profesional, está caracterizado por la

contextualización de acuerdo al curso desarrollado, de modo tal que el
componente teórico está acompañado de una serie de prácticas y visitas de
observación que buscan la aplicación y confrontación de las temáticas, y de
esta manera promover la capacidad de indagación, búsqueda e investigación
en los estudiantes.

En este sentido, este manual recopila una serie de prácticas que incitaran a los
estudiantes a la construcción de conocimiento desde la observación y análisis
de resultados en cada una de los ejercicios.

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Criterios para la presentación de informes

El informe presentado, debe evidenciar el desarrollo de las actividades

planteadas y ser consecuente con los resultados.

El informe debe responder al análisis crítico y comparativo de los resultados

obtenidos en cada una de las prácticas, para ello, es necesario en cada caso,
una consulta exhaustiva de bibliografía que permita desarrollar un adecuado
análisis.

La estructura mínima del informe que deben presentar en un plazo máximo

de 8 días a partir de la culminación de la práctica, es:

 Titulo.
 Objetivos
 Revisión de literatura
 Metodología desarrollada
 Resultados obtenidos.
 Análisis de resultados (Tablas, cuadros, etc.)
 Bibliografía

Nota. Debe presentarse evidencia física de los procedimientos realizados

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 LABORATORIO NO 1.
SELECCIÓN DE SEMILLAS, PRUEBAS DE VIABILIDAD Y MÉTODOS PARA
ROMPER DORMANCIA.

INTRODUCCIÓN
La selección de la semilla sexual es un proceso que se
realiza bajo criterios técnicos y que hace parte de las
primeras medidas dentro de un programa de manejo
integrado de cultivos, que busca en primer lugar,
garantizar las características genotípicas deseables en
cuanto a altura de la planta, calidad de frutos,
resistencia a enfermedades, colores, entre otros; y en
segundo lugar dar las condiciones adecuadas para la
germinación y normal crecimiento de las plantas.

El desarrollo de esta práctica, pretende que el

estudiante analice, comprenda y aplique, entre otros, los siguientes conceptos
básicos:
1. Germinación
a. Porcentaje de germinación
b. Prueba de viabilidad
c. Poder germinativo
d. Vigor germinativo
e. Latencia

2. Dormancia.
a. Factores que afectan la dormancia
b. Métodos para romper dormancia.

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Materiales

 100 semillas de tres especies vegetales diferentes (100 de c/u)

 Lija de agua fina
 Acido sulfúrico (250 ml para todo el curso).
 Cinco frascos o cajas de petri.
 Solución de tetrazolio 0,5%

Procedimiento

En primer lugar, previamente cada grupo debe seleccionar los frutos que van
a servir como fuente de semillas a emplear. En el proceso de propagación
sexual, las semillas se retiran de los frutos maduros (en el caso de semilla con
arilo carnoso como maracuyá, guanábana o de frutos como guayaba, cítricos,
se recomienda una previa fermentación en el contenido del fruto para mejor
desprendimiento), posteriormente la semilla se limpia en un tamiz por
lavados sucesivos, después del lavado se dejan secar sobre papel absorbente
estéril bajo sombra, una vez que secan, los residuos de pulpa pueden
eliminarse con una leve fricción manual sobre ellas. Luego de lo anterior, la
semilla está lista para usar.
1.
1.1 Seleccione una especie, sumérjala en 100 ml de Agua destilada.
Agítela en forma circular por 1 minuto y deje decantar. Determine
el porcentaje de semillas que no flotaron. (Prueba de viabilidad)

1.2 De las semillas que se precipitaron, séquelas y haga cuatro

grupos de 20 cada uno; el primero sumérjalo por 15 segundos es
Acido sulfúrico 90%, deseche inmediatamente el acido y lave tres
veces las semillas con agua destilada. (Escarificación química)

6
 1.3 Tome el segundo grupo y frote contra la lija (u otro medio
áspero según el tipo de semilla) varias veces hasta que observe que
la testa ha cambiado su apariencia natural. (Escarificación física)

1.4 Caliente 50 ml de agua destilada a 40°, posteriormente sumerja

el otro grupo durante un minuto y deseche el agua.

1.5 Prepare 100 ml de una solución (Una para todo el curso) de

Acido giberelico (200 ppm), y aplique con atomizador sobre las
semillas, dejándolas protegidas de la luz durante el procedimiento.

1.6 Tome los cinco grupos de semillas, haga por separado cámaras
húmedas en cajas de petri.
Evalué y compare en cada una de ellas:
a. Porcentaje de germinación.
b. Días a emergencia de radícula
c. Tipo de germinación
d. Porcentaje de perdida

2. Tome las semillas de

otra Prueba de tetrazolio en Semilla de Maíz
especie, previamente embebidas
desde el día anterior (24 h) y
divídalas en dos grupos; el
primer grupo córtelo en dos
secciones, evitando destruir el
tejido embrionario y sumérjalo en una solución de tetrazolio 0,5 %
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 bajo completa oscuridad hasta que observe que el tejido se tiñe color
violeta (Durante ese tiempo los tejidos vivos se tiñen, mientras que los
muertos no), lave los excedentes y observe bajo el estereoscopio. Con el
segundo grupo, realice una cámara húmeda, y a partir de ella
determine el porcentaje de germinación. Realice un análisis
comparativo a partir de los resultados obtenidos.

3. Tome semillas de otra especie; siembre la mitad en bandejas o bolsas

(según las características de la semilla) utilizando suelo normal sin
desinfectar. Tome la otra mitad, sumérjala en hipoclorito de sodio 2%
por cinco minutos, deseche el hipoclorito y lávelas, posteriormente
póngalas en cámara húmeda. Compare las dos condiciones de
germinación.

La observación de los resultados se hará durante ocho días, durante los

cuales se debe tomar tiempos de germinación, y evaluar todos los parámetros
referentes a la práctica. Ocho días después de la práctica debe presentarse
informe técnico escrito a mano de los resultados obtenidos; el informe debe
presentar resultados y análisis de los mismos con base en comparación de
revisión de literatura realizada sobre la temática.

Cuestionario

Desde el punto de vista bioquímico, explique por qué se da la reacción de

tinción en la prueba química de viabilidad.

Por qué algunas semillas demoran más en el proceso de imbibición y

germinación?

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 PRACTICA 2.
PREPARACIÓN DE SUSTRATOS

Introducción
Un sustrato es todo material sólido distinto del suelo, natural, de
síntesis o residual, mineral u orgánico, que, colocado en un
contenedor, en forma pura o en mezcla, permite el anclaje del sistema
radicular de la planta, desempeñando, por tanto, un papel de soporte
para la planta. El sustrato puede intervenir o no en el complejo proceso
de la nutrición mineral de la planta.

La preparación de sustratos adecuados para la multiplicación de

plantas, bajo método sexual o asexual es importante para el adecuado
desarrollo de los objetivos a alcanzar, bien si se trata de propagación
sexual a raíz desnuda o en envases, o si se van a emplear explantes
para propagación asexual. Así mismo, una adecuada preparación de
sustratos hace parte de un método legal para el manejo de
enfermedades e insectos plaga

Materiales
 60 vasos pequeños
 Suelo
 Arena
 Gallinaza
 30 semillas de una misma especie (para siembra en los vasos: Ej.:
Arroz, Cítricos, Papaya, Maracuyá, otros)

Metodología
1. Prepare los siguientes sustratos:
a. 100% suelo

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 b. Suelo – Arena 2:1
c. Suelo – Arena 1:1
d. Suelo – Gallinaza 2:1
e. Suelo –Arena – Gallinaza 2:1:1
f. 100% Arena

2. Con cada uno de los sustratos, llene 10 vasos pequeños perforados

en la base para evitar encharcamiento, riegue adecuadamente, y deje
drenar por 24 horas.

3. Pese un recipiente de cada sustrato, posteriormente seque en la mufla

(Laboratorio de suelos), y determine la cantidad de agua almacenada
en cada sustrato (Agua aprovechable por la planta). Registre el valor
de cada uno de los sustratos.

4. En cinco recipientes de cada sustrato, siembre una semilla, teniendo

cuidado de separar los tratamientos, y evalúe:

a. Geminación
b. Frecuencia de riego
c. Vigor
d. Sanidad
e. Otros
5. Registre y analice cada uno de los resultados.

Preguntas
 Que fitopatologías están asociadas al sustrato como fuente de
transmisión?.
 Cuál es la principal función de los sustratos?
 A que se le denomina un sustrato hidropónico?
 Por que se dice que existen algunos sustratos o suelos supresivos?
 Para que es utilizado el poliestireno expandido en algunos sustratos?.
 Que es, y que características químicas, físicas y organolépticas debe
presentar un buen compost para la preparación de sustratos?

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 PRACTICA 3
MÉTODOS DE TRAZADO EN CAMPO

Objetivo

 Aplicar los conceptos y criterios necesarios para el diseño, trazado y

establecimiento de un cultivo.
 Determinar la densidad de siembra y población de plantas del cultivo
asignado.

Introducción

La forma como se planifica y establece un cultivo en el terreno, de acuerdo

con las características particulares de cada sistema productivo, se denomina
método de trazado.

Entre los métodos más empleados, se encuentran: Cuadrado, triangulo o tres

bolillo, curvas de nivel, voleo.

Materiales
 Flexo metro
 Estacas (50)
 Cuerda
 Barreno

Metodología

Con base en los conocimientos adquiridos y los criterios para el

establecimiento de cultivos, en grupos de cuatro personas, será asignado un
caso, donde previa revisión de literatura, el grupo deberá plantear el

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 procedimiento a seguir, las posibles dificultades y arreglos que fueran
necesarios para el establecimiento del cultivo; en dado caso de considerar
que no es viable la siembra, argumente su respuesta.

Triangulo ó tres bolillo Cuadrado Rectángulo

Caso 1. Cultivo de Mango Tommy

Caso 2. Cultivo de plátano Hartón bajo penumbra del 45 – 50%
Caso 3. Cultivo de Cacao en asocio con plátano
Caso 4. Cultivo de piña como cultivo transitorio en cultivo de cítricos de un
año.

Cuestionario

 Qué criterios deben tenerse en cuenta al momento de definir un sistema de

trazado en campo
 Porque es importante conocer el nivel freático y la pendiente del terreno para
determinar el sistema de trazado?

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 PRACTICA 4
PROPAGACIÓN ASEXUAL

Objetivo

Analizar los factores fisiológicos y morfológicos que inciden sobre los

métodos de propagación asexual.

Desarrollar habilidades básicas en los diferentes métodos de

propagación asexual por estructuras especializadas.

Materiales

 Navaja para injertacion

 Hipoclorito de sodio
 Plástico negro
 200 ml de citoquinas 500 ppm (Para todo el grupo)
 200 ml de Auxina 500 ppm (Para todo el grupo)
 Hormonagro
 Trichoderma sp.

Metodología

Estacas:

En bolsa pequeña o vasos pequeños con drenaje, siembre 60 estacas

con características similares (las estacas deben tener la misma
longitud, diámetro y el mismo grado de lignificación) de una misma
especie en cuatro grupos diferentes (15 cada uno); a cada uno de los
grupos aplique uno de los siguientes tratamientos:

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  Aplicación de ANA (Hormonagro 1) en la zona proximal, y
sembrar en posición vertical.
 Aplicación de ANA (Hormonagro 1) en la zona proximal y
sembrar con inclinación de 45°.
 Siembra de las estacas en posición vertical sin aplicación de
ANA.
 Siembra de las estacas con la polaridad invertida.

Acodos

 Seleccione una especie (Liquidámbar styraciflua, Euphorbia

cotinifolia, Guadua angustifolia, Azadirachta indica, Gliricidia
sepium).

 Realice los siguientes tratamientos, cada uno por cinco

repeticiones, preferiblemente en horas de la tarde (después de
las 4:00 pm), utilizando un mismo sustrato previamente
esterilizado, preferiblemente limo de rio:

a. Escisión de medio anillo de la corteza, aplique con atomizador una

solución de ANA en el sitio de corte, y tape con suficiente sustrato
húmedo, hasta que se observe abundante formación de raíz.

14
b. Escisión completa de un anillo en la corteza, aplique con
atomizador una solución de ANA en el sitio de corte, y tape con
suficiente sustrato húmedo, hasta que se observe abundante
formación de raíz. Es necesario revisarlos periódicamente para
mantener las condiciones de sanidad y humedad adecuadas.
c. Realice el mismo procedimiento indicado en el literal a y b, pero en
cambio, aplique la solución de ANA en el follaje.
d. Realice seguimiento y anote los cambios observados

Cuestionario

 Como afecta la polaridad, el enraizamiento de explantes?.

 Por qué algunas especies, tienen respuesta más rápida para la
rizogénesis?
 Que hormonas están implicadas en la rizogénesis?

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 PRACTICA 5.
CULTIVO in vitro DE MERISTEMOS

Introducción

Las técnicas de cultivo de tejidos, como herramienta de la biotecnología

vegetal, se basan en dos principios fundamentales; la totipotencia, que
según G. Haberlant 1902, considerado el pionero del cultivo de células,
se define como la capacidad que tiene cualquier célula, de formar un
organismo idéntico al que proviene, y la diferenciación celular, como el
grado de especialización de una célula, de acuerdo a la función dentro
del organismo.

El cultivo de meristemos, dentro de las técnicas de cultivo de tejidos, es

empleada principalmente como una herramienta para la producción de
plantas libres de enfermedades, pues las características de rápida
división celular y ausencia de tejidos conductor diferenciado,
generalmente hacen de la zona meristematica un tejido libre de
patógenos.

Objetivos
Identificar el proceso general para la extracción y siembra in vitro de
meristemos con fines de micro propagación

Reconocer los equipos e instalaciones para procesos básicos de cultivo

de tejidos.

Materiales
 8 semillas de especies diferentes (4 de cada especie) sin embeber.
 8 semillas de especies de las anteriores especies embebidas por 24
Horas (Las semillas deben ser desinfestadas con una solución de
hipoclorito al 5% por 5 minutos y embebidas en agua destilada estéril)

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  10 Explantes apicales de cinco especies diferentes (2 de cada especie)
 Medios de cultivo MS
 Instrumentos para trabajo en cámara (Pinzas, Mangos de bisturí, otros)
 100 ml de Hipoclorito 5%
 50 ml de Hipoclorito 0,5%
 Dos frascos de Agua destilada estéril
 50 ml de Alcohol 70%
 Dos cajas de petri con toalla absorbente (Estériles )

Metodología

1. Germinación in vitro
 Tome las semillas de las especies seleccionadas sin embeber, realice
el proceso de desinsfestacion de la siguiente manera:
 Sumerja las semillas en una solución de Hipoclorito de sodio 5%
más dos gotas de Tween por 10 min.
 Llévelas en la solución a la cabina de flujo laminar, previamente
adecuada para el trabajo aséptico.
 Elimine la testa de todas las semillas, evitando dañar el tejido
embrionario, posteriormente sumerja la semilla desnuda en alcohol
70% por 10 segundos e inmediatamente llévelas a la solución de
NaOCl 0,5% por tres minutos.
 Lave dos veces las semillas con ADE y séquelas antes de la siembra.
 Tome dos semillas de cada especie, extraiga el meristemo y siembre
en medio de cultivo (En frascos distintos cada especie).
 Tome las otras dos semillas con cotiledón y siémbrelas.
 Realice el mismo procedimiento para las semillas embebidas
 Márquelas adecuadamente e incube a 27° C y 12 horas luz.

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 2. Extracción y siembra de meristemos

- Identifique previamente la filotaxia de las especies a introducir.

- Elimine hojas, estipulas y demás hasta obtener un explante de
aproximadamente tres (3) centímetros.
- Introdúzcalos a la cabina de flujo, en una solución de NaOCl 5% más
dos gotas de Tween 20.
- Con la ayuda del estereoscopio, retire cuidadosamente el tejido
externo, hasta que tenga un explante de 1 cm aproximadamente.
- Sumerja los explantes en una solución de alcohol por 10 segundos.
- Introduzca el explante en la solución de NaOCl por 3 minutos.
- Lave dos veces en agua destilada estéril
- Siembre en el medio de cultivo.
- Tape y marque adecuadamente.

OBSERVACIONES:

- En ambos procedimientos, en caso de presentarse crecimiento de

microorganismos, identifíquelos a nivel de género.
- Tenga en cuenta el protocolo de trabajo en cabina de flujo.

Cuestionario

1. ¿Qué ventajas presenta el desarrollo embrionario, cuando se retiran

los cotiledones?. Analice ésta situación.
2. Analice desde el punto de vista fisiológico, el efecto de la imbibición de
las semillas sobre el desarrollo embrionario en condiciones in vitro?.
3. ¿Qué diferencias presentó el tejido meristematico de las diferentes
especies?.
4. Desde un enfoque agronómico, ¿cuales considera que pueden ser las
aplicaciones de la siembra de embriones y meristemos en condiciones
in vitro?
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Bibliografía

 OSORIO M. Diego L. PROPAGACIÓN DE PLANTAS. Editorial

Guadalupe, 1998
 Vegetative propagation techniques. Jalalabad, Afganistan,
November 18, 2007.
 Scianna, Joseph D.; Susan R. Winslow; Mark E. Majerus; Lori M.
Gruber; and Sam A. Reid. Asexula Plant propagation: Special
techniques considerations for sucessful high altitude
revegetation.
 http://www.cesaf.uchile.cl/cesaf/n14/4.html
 BEWLEY, J. Derek. Seed germination and dormancy. The plant
cell, vol 9, pag 1055 – 1066. Unyversity of Guelph.

 STANISLAV V. Magnitskiy y GUIDO A. Plaza. Fisiologia de

semillas recalcitrantes de arboles tropicales. Agronomía
Colombiana 25(1), 96-103, 2007

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