UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS

CARRERA DE MEDICINA
ASIGNATURA: LABORATORIO DE MICROBIOLOGA
PRACTICA 1: Introduccin al Laboratorio y Bioseguridad en
microbiologa
Abril Agosto 2016

RESULTADOS DEL APRENDIZAJE: Aplica las normas de bioseguridad en los

Laboratorios Docentes de Microbiologa

INTRODUCCION
Los estudiantes estn expuestos de diversas formas a la adquisicin de infecciones
en el laboratorio de microbiologa. Entre esas formas figuran las siguientes:
- Frotarse los ojos o la nariz con las manos contaminadas
- Inhalar aerosoles producidos durante los procedimientos de centrifugacin, la
utilizacin de agitadores vorticiales o la manipulacin de lquidos con cultivos
que se derramaron
- Ingerir microorganismos por accidente, al llevarse los dedos o un lapicero a la
boca
- Sufrir inoculacin percutnea, por ejemplo, al pincharse con una aguja o
vidrios rotos
Los riesgos existentes en un laboratorio de microbiologa se pueden extender a los
laboratorios adyacentes y a las familias de los que trabajan en el laboratorio, es
interesante destacar que las personas de entre 17 y 24 aos son afectados con
mayor frecuencia1.
A partir del ao 1913, se incluyen por primera vez prcticas de seguridad para el
laboratorio de microbiologa. Estas pautas, se ampliaron en el siglo XXI, hasta incluir
no slo la manipulacin adecuada de los materiales biolgicos peligrosos hallados al
procesar las muestras o manipular microorganismos infecciosos, sino tambin
seguridad en caso de incendio o problemas elctricos, la manipulacin, el
almacenamiento y la eliminacin de compuestos qumicos y sustancias radiactivas.
En el ao 1983, la Organizacin Mundial de la Salud (OMS), public la primera edicin
del Manual de seguridad en el laboratorio, en el que alentaba a los pases a aceptar y
aplicar conceptos bsicos en materia de seguridad biolgica y a elaborar cdigos
nacionales de prcticas para la manipulacin sin riesgo de microorganismos
patgenos en los laboratorios que se encuentran dentro de sus fronteras nacionales.
Bioseguridad: Se define como una conducta que aplica un conjunto de medidas
preventivas, destinadas a mantener el control de factores de riesgo laborales
procedentes de agentes biolgicos, fsicos o qumicos, logrando la prevencin de
impactos nocivos, asegurando que el desarrollo o producto final de dichos
procedimientos no atenten contra la salud y seguridad de trabajadores de la salud,
estudiantes, pacientes, visitantes y el medio ambiente. En cambio, la proteccin
biolgica se refiere a las medidas de proteccin de la institucin y del personal
destinadas a reducir el riesgo de prdida, robo, uso incorrecto, desviaciones o
liberacin intencional de patgenos o toxinas.
Precauciones estndares: En 1987 los CDC (Centers for Disease Control) publico
Universal Precautions y que desde 1996 se conocen como Precauciones estndares

(Standard Precautions), sin ellas las prcticas seguras en laboratorio no se pueden

realizar.

a).- USO DE BARRERAS O EQUIPO DE PROTECCIN

Las barreras fsicas paras las infecciones en el laboratorio pueden clasificarse en
personales o institucionales. Las barreras personales son: la higiene personal y el
equipo de proteccin con guantes, proteccin ocular y mascarilla, proteccin
corporal con mandil, mandiln, gorras y zapatos. Mientras que las barreras
institucionales comprenden al equipamiento que mitigue el contacto directo con los
patgenos Ej.: cmara de flujo laminar, cabina de bioseguridad.

b).- ELIMINACIN DE DESECHOS

Elementos, sustancias, compuestos, residuos o mezclas de ellos que,
independientemente de su estado fsico, representen un riesgo para el ambiente, la
salud o los recursos naturales, por sus caractersticas corrosivas, reactivas,
explosivas, txicas, inflamables y biolgico infecciosas (CRETIB). Se conciben los
residuos como: Residuos No Peligrosos, Residuos Peligrosos, y material
cortopunzantes, stos a su vez tienen un impacto ambiental: Calidad del agua,
Calidad del suelo y Calidad del aire.
Residuos no peligrosos: Son aquellos producidos por el generador en cualquier lugar
y en desarrollo de su actividad, que no presenta ningn riesgo para la salud humana
y/o el medio ambiente; se consideran en este grupo los residuos biodegradables,
reciclables, inertes y ordinarios o comunes.
Residuos peligrosos: Son aquellos residuos producidos por el generador con algunas
de las siguientes caractersticas: infecciosas, combustibles, inflamables, explosivas,
reactivas, radioactivas, voltiles, corrosivas y/o txicas, que pueden causar dao a la
salud humana y/o al medio ambiente. As mismo se consideran peligrosos los
envases, empaques y embalajes que hayan estado en contacto con ellos.
Manejo de material cortopunzante: Se debe contar con contenedores de material
irrompible e imperforable, donde se debern desechar todas las agujas, hojas de
bistur, restos de ampolletas de cristal, bajalenguas, laminillas cubre y porta objetos
rotos, etc.
c).- AGENTES BIOLGICOS
Los CDC y el National Institute of Health clasificaron los organismos infecciosos
dentro de grupos de riesgo. El siguiente manual de biosegurida se puede obtener en
el
sitio
de
internet:
http://www.who.int/topics/medical_waste/manual_bioseguridad_laboratorio.pdf y su
revisin es obligatorio

En el laboratorio de Microbiologa disponemos de varios implementos, los cuales van

hacer utilizados en el presente ciclo, que son detallados a continuacin:

Frascos de plstico tapa rosca, que contienen los medios de cultivo en polvo
para preparar
Cajas petri estriles, tienen la capacidad para 15 ml de medio de cultivo
aproximadamente, en el cual al ser sembrado crecen los microorganismos, se
incuba en posicin invertida.
Asas de inoculacin, compuestas de mango y filamento de platino o nicromo
que terminan en aguja o aro calibrado para tomar volmenes de 0,01 y 0,001
ml.
Aplicadores de algodn estriles, que sirven para tomar la muestra.
Mechero Bunsen, encargado de suministrar la fuente de calor durante las
siembras, adems de esterilizar las asas para transferir cultivos vivos de un
recipiente a otro.
Placas portaobjetos y laminillas cubreobjetos, para llevar a cabo los frotis y su
observacin microscpica.
Equipos: Cabina de bioseguridad, autoclave e incubadora

MEDIDAS DE PREVENCIN Y BIOSEGURIDAD EN LAS PRCTICAS.

El conocimiento y la aplicacin adecuada de estas normas antes, durante y despus
de cada prctica es un deber de cada estudiante en el laboratorio de microbiologa.
LAVADO DE MANOS
Existen algunos tipos de lavado de manos, por su formacin nos interesa, el clnico y
el quirrgico. Esta vez nos enfocaremos en el clnico que ser el que se realice en el
Laboratorio de microbiologa. Es la medida ms econmica sencilla y eficaz, para
prevenir infecciones, ya que en las manos se transportan todo tipo de bacterias,
tanto flora residente como transitoria. La tcnica para el lavado de manos es:
Abrir el chorro de agua y humedecer las manos hasta las muecas, Tomar el jabn
lquido o en barra y frotarlo hasta generar espuma primero en las palmas de distal a
proximal, luego en los espacios interdigitales de arriba abajo la palma derecha con
dorso izquierdo y vsceras, despus espacio interdigital palma con palma y frotar
pulgar Luego las yemas de los dedos de mano izquierda en palma derecha y
viceversa, por ultimo frotar las muecas. Todo esto en aproximadamente 60
segundos. Secarse con papel desechable y luego con el mismo cerrar la llave y
eliminar en el tacho correspondiente.
Tambin revisar la siguiente informacin obligatoria:
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/tmi.12339/epdf

Uso de guantes: Reduce el riesgo de contaminacin de microorganismos en

estudiantes, trabajadores e instructores. El uso de guantes nunca debe sustituir el
lavado de manos

Uso de mascarilla y lentes de proteccin: Es importante colocar la mscara

antes de calzar los guantes. Asegurar bien la mscara colocando las tiras elsticas
alrededor de las orejas, atando las tiras elsticas alrededor de la cabeza o atndola
firmemente a la cara utilizando los cabos que pasan alrededor de la cabeza y el
cuello. Doblar el accesorio metlico de la nariz sobre el puente de la misma para que
exista una unin ms firme y minimizar el espacio entre la mscara y la nariz.
AGENTES DESINFECTANTES Y ESTERILIZANTES:
La muerte microbiana (prdida irreversible de crecer y dividirse) 3 es importante en
algunos mbitos del que hacer mdico, por lo que existen algunos mtodos para
conseguir aquello. La esterilizacin es un procedimiento con el que se eliminan todas
las formas de vida microbiana3, incluidas las esporas bacterianas 1-2, se logra por
medios fsicos y qumicos. La desinfeccin es un proceso con el que se destruyen los
microorganismos patgenos, aunque no necesariamente todos los microorganismos
ni todas las esporas2. Se puede lograr por medios fsicos y qumicos.

METODOS DE ESTERILIZACION:
MTODOS FSICOS:
Incineracin: Es el mtodo ms comn los desechos peligrosos se convierten
enceniza1.
Calor hmedo. Autoclave. Se emplea en objetos termoestables; bsicamente es
una gran olla de presin. Produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas 1.
Calor seco. El calor seco deseca a la clula, lo que incrementa los niveles de
electrolitos, y provocan fusin de membranas. La accin destructiva del calor sobre
protenas y lpidos requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la
actividad de agua del medio es baja 1.
Filtracin: Se filtra la sustancia a travs de una membrana de acetato por efecto del
vacio1.
Radiacin ionizante: Son rayos gamma de longitud de onda corta y de gran energia 1.
MTODOS QUMICOS o BIOCIDAS:
xido de etileno (EtO) el ms comn, pero tambin usamos vapor de formaldehdo y
perxido de hidrgeno, glutaraldehdo, cido peractico 1, etc.
METODOS DE DESINFECCIN:
MTODOS FSICOS:
Ebullicin: Permite que el agua llegue a una temperatura de 100C por 15 mim 1. No
elimina esporas
Pasteurizacin: Es la aplicacin de una temperatura 63C durante 30 minutos 1.
Radiacin Ionizante: Luz ultravioleta (UV) longitud de onda larga y baja energa 1
MTODOS QUMICOS:
Alcoholes, Aldehdos, Halgenos, Metales pesados, Compuestos de amonio
cuaternario, fenoles1, etc. Usados en perodos de tiempo ms cortos desinfectan. Los
desinfectantes que se aplican sobre tejido vivo (piel) se denominan antispticos 1.
AUTOEVALUACION E INVESTIGACION
1. Defina los Conceptos de Esterilizacin, Asepsia, Antisepsia y Desinfeccin.
2. Qu materiales qumicos son utilizados para la Desinfeccin.
3. Cmo realizara la limpieza de los derrames de materiales infecciosos? 2

PARTE B: TOMA DE MUESTRA

A).- REQUISITOS PARA LA PRCTICA:
Normas y reglas para la toma de muestras
B).- RESULTADO DE APRENDIZAJE:
Aplicacin de toma de muestra en sus pacientes
C).- OBJETIVO:
Comprender los pasos necesarios para realizar la toma de muestra
D).- INTRODUCCIN
Es til considerar los exmenes de laboratorio como una secuencia de diversos
sucesos (fig N1), tradicionalmente, los microbilogos, al igual que los patlogos
clnicos, se concentraron en las mediciones cientficas, la fase analtica. En la
actualidad, est claro que los sucesos que ocurren antes de la medicin (fase
preanaltica) y luego de que la determinacin cientfica se haya completado (fase
postanaltica) son tan importantes como la exactitud de la medicion 2.

Figura N 1
Una vez que se sospecha una enfermedad infecciosa deben ordenarse las pruebas
apropiadas. Los enfoques diagnsticos posibles son: coloraciones, el cultivo, la
deteccin serolgica de antgenos o anticuerpos, o la deteccin molecular de cidos
nucleicos.
El primer paso del diagnstico microbiolgico comienza con la obtencin de la
muestra clnica adecuada. La muestra debe ser representativa del proceso infeccioso

que se pretende diagnosticar, teniendo siempre en cuenta que en determinadas

infecciones, muestras no relacionadas directamente con la focalidad clnica, pueden
tener tambin un buen rendimiento microbiolgico. Una muestra adecuada es la
base para un buen anlisis y para un resultado confiable, de ah la importancia de los
cuidados que debemos observar en la toma y manipulacin de las muestras. La
muestra debe ser representativa, no viciada, adecuada al procedimiento a ejecutar y
tener el tamao que permita hacer el anlisis y alcanzar resultados confiables. Por
ello, una toma mal realizada, pobremente recogida o mal transportada determinar
un posible fallo en la recuperacin de los agentes patgenos, que puede inducir a
errores diagnsticos, e incluso a un tratamiento inadecuado del enfermo. 2

E).- TOMA DE MUESTRAS

1. CONDICIONES PRE TOMA DE MUESTRA
Las condiciones se definen como los requisitos necesarios para obtener el resultado
deseado
Como reglas generales cabe indicar las siguientes:

1. Antes de recoger la muestra, considerar el riesgo/beneficio de la

recogida de la muestra para el paciente.
2. El material destinado a cultivo no debe estar en contacto con sustancias
desinfectantes o anestsicas,
3. La muestra se debe recoger, siempre que sea posible, antes de iniciar cualquier
terapia antimicrobiana.
4. Se debe evitar, siempre que sea posible, el contacto de la muestra con microbiota
normal del paciente, con el objeto de asegurar que la muestra refleje lo mejor posible
el lugar de la infeccin.
5. El envo al laboratorio de microbiologa debe ser lo ms rpido posible con objeto
de asegurar la supervivencia de microorganismos de difcil crecimiento y de evitar el
sobre crecimiento de la microbiota normal, acortar el tiempo de contacto con
anestsicos locales o con otras sustancias con accin antimicrobiana utilizadas en la
recogida de la muestra.
2. CONSERVACIN DE MUESTRAS
No Es recomendable mantener las muestras conservadas, pero si fuere el caso
dependiendo de la muestra: a temperatura ambiente, en estufa de 35-37C, en
nevera de 2-8C, o congeladas a -20C -70C un tiempo tras su recogida. El tiempo
de conservacin debe ser aquel que garantice la no contaminacin de la muestra. El
tiempo mnimo oscila entre 1-3 das.
3.- TRANSPORTE DE MUESTRAS
Cada vez es ms frecuente la realizacin de procedimientos microbiolgicos en
lugares distantes al de la toma de muestra. Aunque es obvio que las muestras
biolgicas, sean infecciosas o no, deben estar correctamente empaquetadas y
etiquetadas para su transporte y envo, se deben tener en cuenta las siguientes
indicaciones:
1. Los recipientes de las muestras deben ser hermticos y a prueba de fugas
de lquidos.
2. Si el recipiente es un tubo, debe estar cerrado hermticamente, con tapa de
rosca y colocado en una gradilla, de tal forma que mantenga su posicin
vertical.

3. Los recipientes con muestras y gradillas deben colocarse en una caja

resistente de metal o plstico y a prueba de fugas de lquido, que contenga
una cubierta segura y que cierre perfectamente.
4. La caja donde se transportan los materiales deber ser asegurada
firmemente en el vehculo de transporte.
5. Cada caja de transporte deber estar etiquetada de forma adecuada y de
acuerdo a su contenido.
6. Los formularios con los datos de identificacin de los especmenes deben
acompaar a cada caja de transporte.
7. El vehculo de transporte deber ir provisto de material absorbente,
desinfectantes, un contenedor para desechos a prueba de fugas lquidas y
guantes resistentes de uso mltiple.
El transporte de material biolgico requiere una buena colaboracin entre el
remitente, la compaa de transporte y el destinatario, y cada uno debe
asumir sus responsabilidades para garantizar que el producto llega a su
destino oportunamente y en buenas condiciones.
4.- MODO DE TOMA DE LAS DISTINTAS MUESTRAS CLNICAS:
4.1- MUESTRAS DE ORINA
INDICACIONES PREANALTICAS: RECOMENDACIONES
La muestra idnea es la primera miccin de la maana, ya que permite la
multiplicacin y acumulacin de bacterias durante la noche. 2 En casos excepcionales
mnimo orina en vejiga 5 horas
TCNICA DE RECOLECCIN- Realizar higiene de genitales: a).- en mujeres, es
necesario lavar el vestbulo vaginal y la entrada de la uretra con agua jabonosa o no,
enjuagar con abundante agua. Secar y separar los labios, b).-en el hombre se debe
hacer retraccin del prepucio y lavar el meato urinario con agua
jabonosa o no, enjuagar con abundante agua y secar. c).- neonatos se utiliza funda
recolectora y d).- en pacientes con sonda vesical se recoge pinzando la sonda
mnimo por una hora limpiando y pinchando en el bulbo. Instruir al paciente para que
inicie la miccin, desechar la primera parte de la orina, introducir el
frasco colector, recoger la parte media de la orina sin detener el flujo urinario (5-10
cc.) y terminar de eliminar en el sanitario o pato. Tapar el frasco sin contaminar la
muestra, en mujeres recoger la muestra sin topar el frasco en la cara interna de los
muslos, en hombre el iniciar la miccin con el prepucio retrado.
TRANSPORTE transportar el frasco verticalmente y sin agitar.
Se recomienda en, no exceder de dos horas y a temperatura ambiente 3,
CONSERVACION
Lo ideal es no conservar la orina, llevar en los primeros 15 minutos de la recoleccin,
pero por cualquier situacin sucede lo recomendable es mximo hasta 2h00 a
temperatura ambiente y 24h00 en refrigeracin no en congelacin o adicionando
conservantes.
4.2. FARINGEO
INDICACIONES PREANALTICAS: RECOMENDACIONES
No hacer grgaras ni limpieza con ninguna solucin
bucofarngea.
Tomar la muestra preferiblemente en ayunas, no obligatorio.
TCNICA DE RECOLECCIN
colocar al paciente cmodamente e informales del
procedimiento
Colocar al paciente bajo una buena fuente de luz.

 Introducir el hisopo a la faringe posterior o amgdala evitando trauma.

Rotar el hisopo por 5 a 10 segundos para permitir la impregnacin.
Retirar lentamente evitando contaminacin con estructuras de la boca.
TRANSPORTE
Se recomienda en los primeros 15 minutos transportar el frasco verticalmente y sin
agitar.
CONSERVACION
Lo ideal es no conservar la muestra, pero por cualquier situacin sucede lo
recomendable es menor a 72h00 en refrigeracin sin medio de transporte.
4.3. ESPUTO
INDICACIONES PREANALTICAS: RECOMENDACIONES
Recolectar la primera muestra en la maana.
Instruir al paciente para realizar cepillado de dientes y lavado de la lengua slo con
agua para remover el exceso de flora oral y retirar prtesis dental en pacientes de
edad.
TCNICA DE RECOLECCIN
Instruir al paciente para que inspire profundamente retenga de 3 a 4 segundos y tosa
con fuerza, esto lo repita por 2 o 3 ocasiones, la cual debe expectorar directamente
en un recipiente estril de boca ancha de tapa rosca. De no producirse expectoracin
espontnea, puede inducirse el esputo con nebulizaciones de suero fisiolgico estril
tibio, siendo til adems realizar un drenaje postural o fisioterapia respiratoria. 2 Para
pacientes peditricos incapaces de producir un esputo, se debe obtener la muestra a
travs de succin gstrica.
TRANSPORTE
Se recomienda a temperatura ambiente, transportar el frasco verticalmente y sin
agitar
CONSERVACION
Lo ideal es no conservar la muestra, lo ideal en 15 minutos pero por cualquier
situacin sucede lo recomendable es mximo hasta 2h00 a temperatura ambiente y
24h00 en refrigeracin no en congelacin.

5.3.4. MUESTRAS DE PIEL

INDICACIONES PREANALTICAS: RECOMENDACIONES
No aplicarse cremas humectantes ni antibiticas en la herida
TCNICA DE RECOLECCIN
Limpiar la herida del borde hacia afuera con gasa impregnada con solucin salina
normal y alcohol isoproplico al 70%, con el fin de evitar la contaminacin de la
muestra con flora colonizante que no est realmente implicada en el proceso
infeccioso.
Lavar la parte interna de la herida con solucin salina abundante, sin presin. No
usar antispticos.
En el caso de abscesos cerrados denar la recoleccin del mismo, previa antisepsia
de piel 2, en el caso de aerobios, se lava con SS 0.9%, se limpia la sangre y con un
hisopo se recoge el exudado dentro de la herida. Tome la muestra con dos hisopos.
Si emplea medio de transporte coloque uno en dicho medio y con el otro haga un
extendido en lmina de vidrio.
Si no tiene medio de transporte coloque los hisopos en un tubo estril con tapa.
TRANSPORTE
Transportar el frasco verticalmente y sin agitar.
CONSERVACION

Lo ideal es no conservar la muestra, Se recomienda en los primeros 15 minutos de la

recoleccin, pero por cualquier situacin sucede lo recomendable es mximo hasta
24h00 a temperatura ambiente, pero en medio de transporte nunca la muestra sola.
5.3.5. MUESTRAS DE HECES
INDICACIONES PREANALTICAS: RECOMENDACIONES
No cultive muestras de consistencia dura.
Al recoger las heces que no estn contaminadas con orina
No se recomienda realizar coprocultivo de rutina para pacientes con estancia
hospitalaria mayor de 3 das, a no ser que el diagnstico de ingreso haya sido
gastroenteritis.
TCNICA DE RECOLECCIN
Recolectar en lo posible +/-2 cc. de materia fecal.
Recoger de la cima del cmulo de heces
En el caso de pacientes peditricos, si no es posible recoger muestra de materia
fecal se puede tomar la muestra a travs de frotis rectal.
TRANSPORTE
Se recomienda protegida de la luz directa, transportar el frasco verticalmente y sin
agitar.
CONSERVACION
Lo ideal es no conservar la muestra, debe enviarse hasta los 15 minutos al
laboratorio pero por cualquier situacin sucede lo recomendable es mximo hasta
2h00 a temperatura ambiente y 24h00 en refrigeracin no en congelacin.
BIBLIOGRAFA
1. Bailey y Scott, Diagnstico Microbiolgico, 12 edicin, Editorial mdico
panamericana, Madrid, Espaa 2006
2. Koneman, E. Diagnostico microbiolgico, 6 a Edicin, Editorial mdico
panamericana, Madrid, Espaa 2006.
3. de Jawetz, Melnick y Adelberg. Microbiologa mdica, 18 edicin en espaol 23
edicin en ingls, Editorial Manual Moderno, Mxico, D. F., Mxico, 2004.

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