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Guias Bioqca 1-2011 PDF
Guias Bioqca 1-2011 PDF
201103 BIOQUMICA
GOLDA MEYER TORRES VARGAS
(Director Nacional)
DUITAMA
ENERO 2011
3. INDICE DE CONTENIDO
INTRODUCCIN
JUSTIFICACIN
11
22
33
48
64
71
76
91
99
110
119
FUENTES DOCUMENTALES
143
ANEXOS
SEGURIDAD INSUTRIAL
144
PREPARACIN DE REACTIVOS
147
4. LISTADO DE TABLAS
Tabla 1: reactivos prctica 114
Tabla 2: Marcha de la prctica 1.19
Tabla 3: Rbrica de la prctica 121
Tabla 4: reactivos prctica 224
Tabla 5: batera de tubos mtodo Biuret para la cuantificacin de protenas...28
Tabla 6: batera de tubos mtodo Folin Lowry cuantificacin de protenas...29
Tabla 7: Rbrica de la prctica 2...31
Tabla 8: reactivos prctica 335
Tabla 9: Marcha de la prctica 3.37
Tabla 10: Marcha de la prctica 3 alfa- amilasa..........40
Tabla 11: batera de tubos efecto de la concentracin, alfa-amilasa...42
Tabla 12: batera de tubos efecto del pH, alfa-amilasa..43
Tabla 13: batera de tubos efecto de la temperatura, alfa-amilasa..44
Tabla 14: Rbrica de la prctica 3.46
Tabla 15: bateras de tubos pH ptimo de la ureasa tubos blanco...52
Tabla 16: bateras de tubos pH ptimo de la ureasa, tubos problema.53
Tabla 17: resultados pH ptimos de la ureasa, tubos problema.......53
Tabla 18: resultados pH ptimos de la ureasa, mtodo espectrofotomtrico.54
Tabla 19: bateras de tubos pH ptimo de la ureasa tubos blanco mtodo 2.56
Tabla 20: bateras de tubos pH ptimo de la ureasa tubos problema mtodo 256
Tabla 21: expresin de resultados pH de la ureasa tubos problema mtodo 2..57
Tabla 22: bateras de tubos variacin concentracin de sustrato, tubos problema58
Tabla 23: expresin de resultados variacin concentracin de sustrato..58
5. CARACTERSTICAS GENERALES
Introduccin
Justificacin
Intencionalidades
PROPSITOS
7
formativas
prctica
los
conceptos
COMPETENCIAS
El estudiante reconoce mediante el uso de reacciones coloreadas y
cualitativas la presencia de aminocidos, protenas, carbohidratos, cidos
nucleicos y lpidos, como constituyentes de las biomolculas.
El estudiante cuantifica fracciones proteicas y glcidos mediante las tcnicas
de anlisis instrumental, volumtrico y gravimtrico.
30%
Curso Evaluado
por proyecto
SI___
Seguridad
industrial
NO_x_
10
6. DESCRIPCIN DE PRCTICAS
PRACTICA No. 1: METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE
AMINOACIDOS Y PROTEINAS
Tipo de practica
Presencial X Autodirigida
Otra Cul
Remota
Porcentaje de evaluacin
Horas de la practica
Temticas de la prctica
2,5%
1H
Unidad 1: Biomolculas, especficamente el captulo 1, aminocidos
y captulo 2, pptidos y protenas.
Intencionalidades formativas Propsitos
Reconocer a los aminocidos como unidades estructurales de las
protenas y su importancia en los diferentes procesos metablicos.
Analizar, mediante reacciones cualitativas coloreadas la presencia
de aminocidos y enlaces peptdicos en las muestras.
Establecer relaciones entre la estructura y la funcin de las
proteinas y prdida de esta al variar su pH y solubilidad
(precipitacin y desnaturalizacin).
Objetivos
Que el estudiante reconozca los aminocidos como unidades
estructurales de las protenas.
Que el estudiante analice, mediante reacciones
cualitativas
coloreadas la presencia de aminocidos y enlaces peptdicos en
las muestras.
Que el estudiante establezca la relacin entre la estructura y la
funcin de las proteinas y prdida de esta al variar su pH y
solubilidad (precipitacin y desnaturalizacin).
COMPETENCIAS
El estudiante describe y analiza de manera eficiente los resultados
observados en cada prueba cualitativa y relaciona el marco terico
y los resultados para dar el respectivo anlisis.
El estudiante conceptualiza en forma precisa la relacin que tiene
cada prueba y la estructura de aminocidos y protenas.
11
Fundamentacin Terica
El estudiante como parte de su autogestin en el desarrollo de su aprendizaje autnomo, se servir
investigar antes de la prctica y a manera de pre informe los siguientes temas:
1. Captulo 1 y 2 de la Unidad 1: Biomolculas del mdulo del curso, enfatizando en:
Clasificacin de aminocidos
Enlace peptdico
Niveles de estructuracin
2. Pruebas cualitativas: enfatizar en las reacciones qumicas que tienen lugar y el principio del mtodo.
1.
Reaccin de la ninhidrina
2.
Reaccin xantoproteica
3.
Reaccin de milln
4.
5.
Prueba de Pauly
6.
7.
Reaccin de Sakaguchi
12
8.
prueba de Biuret.
Descripcin de la practica
En esta prctica mediante pruebas coloreadas, se identifica los aminocidos que componen las protenas
de los extractos utilizados basados en las reacciones de los grupos R cadena lateral.
Se desarrolla pruebas para analizar el comportamiento y la solubilidad de protenas en tratamientos de
precipitacin y desnaturalizacin.
Estas prcticas corresponde a los temas que se tratan en la Unidad 1: Biomolculas, especficamente el
captulo 1, aminocidos y captulo 2, pptidos y protenas.
Es de vital importancia para los estudiantes de la formacin profesional y tcnica de los programas de
ingeniera de alimentos, agroforestal, agronmica, zootecnia, produccin animal y regentes de farmacia, el
desarrollo de estas prcticas, ya que profundizan y analizan la relacin e importancia que guardan los
aminocidos y la funcin biolgica de las proteinas en los tejidos biolgicos.
Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)
Material de vidrio
Reactivos
Equipos
Tubos de ensayo
Estufas ( 5)
gradillas
tapabocas
Agua destilada,
Solucin de CuSO4
1%
pHmetro (1)
esptulas
Libros de bioqumica
Centrifuga
Pipetas 1, 5 y 10
ml
Marcador de vidrio
HNO3 concentrado,
Cristales de sacarosa
Balanza analtica
Mallas de asbesto
HCl concentrado,
Acido triclorcetico
10%
Termmetros 120 C
Papel filtro
Cuaderno de laboratorio
Embudos
Bata blanca
Solucin de
(NH4SO4) al 50%,
acetona
Espectrofotmetro
13
Solucin de acetato
de plomo 0.5 %
Erlenmeyers 100
y 250 ml
Reactivo de
sakaguchi, cido
actico glacial
Vasos de
precipitado 250 ml
HSO4 concentrado,
Acido actico al 30%
Vasos precipitado
500 ml
Aminocidos: glicina,
tirosina, triptfano,
aminocidos
azufrados, leucina
Probeta 100 ml
Ninhidrina ( 2g/l)
preprese en fresco,
Hidrxido de amonio.
Vidrios reloj
grandes
Nitrito de sodio,
Carbonato de sodio
Mortero con
mango
Acetato de plomo,
Nitrato de mercurio.
Soporte para
embudos
Nitroprusiato de sodio
(20 g/l, preprese
fresco).
Vasos de
precipitado de
1000 ml plstico
cido fosfrico,
Molibdato de sodio
Vasos de
precipitado de 600
plstico
Tungsteno de sodio,
Sulfato de cobre,
Nitrato de sodio
Tabla 1: reactivos prctica 1.
14
PROTECCION
cidos inorgnicos
concentrados
RIESGO
Metodologa
Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica:
1. Captulo 1 y 2 de la Unidad 1: Biomolculas del mdulo del curso.
Forma de trabajo: Estimado estudiante a continuacin encontrar los pasos a seguir para el
vierta por l la clara en un vaso precipitado, dejando dentro la yema. Luego agregue a la clara 100 ml de
agua destilada y agite con el fin de disolverla.
Marcha de la prctica:
Prueba
PROCEDIMIENTO
VOLUMEN
RESULTADO
ANALISIS
RESULTADO
DEL
extracto problema
2 ml
NaOH al 30%
2 ml
MILLON
XANTOPROTEICA
LIEBERMAN
extracto problema
2 ml
Reactivo de milln
0.5 ml
extracto problema
2 ml
1m
2 ml
extracto problema
2 ml
Cristales de sacarosa
Una pizca
HCl concentrado
5 ml
GRUPOS SH
extracto problema
1 ml
1ml
1 ml
extracto problema
2 ml
16
0.5 ml
extracto problema
2 ml
2 ml
HSO4
concentrado,
dejar
caer
lentamente por las paredes del tubo
inclinado, hasta que se formen dos
capas. Observe el cambio de color en
la interfase. Si se forma un anillo violeta
en la interfase de los dos lquidos, la
reaccin se considera positiva
2 ml
Prueba
Pauly
de Acido sulfanlico
1 ml
Extracto problema
2 ml
Enfriar en hielo
Agregar solucin de NaNO2
enfriar por 3 min.
y dejar
colores
2m
0.5 ml
2 ml
0. 5 ml
Precipitacin de protenas
Prueba
PROCEDIMIENTO
VOLUM
EN
RESULTADO
ANALISIS
DEL
RESULTADO
2 ml
17
1 ml
extracto problema
2 ml
0.5 ml
1 ml
extracto problema
2ml
2 ml
extracto problema
2ml
Etanol al 95%.
2 ml
extracto problema
2ml
Acetona
2 ml
DE
extracto problema
2ml
2 ml
18
extracto problema
ZACIN
CALOR
POR
METALES
PESADOS
2ml
Extracto problema
2 ml
5 gotas
Cuestionarios:
1. Diga cules son los fundamentos qumicos de las pruebas estudiadas para el reconocimiento de
aminocidos. En esta parte Ud tiene que analizar el fundamento terico de la prueba y el resultado obtenido
( de donde se obtiene el color obtenido, que indica cada prueba?)
2. Explique con argumentos vlidos el comportamiento observado de las proteinas en cada una de las
pruebas de precipitacin. Que indica la presencia de precipitado?
3. Determine mediante graficas el extracto que ms pruebas positivas obtuvo y analice esta situacin.
4. Presente los clculos para la determinacin de la concentracin de protena a partir de los datos de
Absorbancia y concentracin de la curva patrn.
Sistema de Evaluacin
Evaluacin individual:
cada estudiante debe presentar en forma escrita u oral lo solicitado en el pre informe.
Evaluacin grupal:
el grupo de trabajo debe presentar un informe escrito en la fecha acordada por el tutor , que
contenga: portada, introduccin, objetivos, tabla de resultados, anlisis y confrontacin de
19
tem Evaluado
Asisti y particip
activamente del
desarrollo de la
prctica
Valoracin Baja
El estudiante no
asisti.
(Puntos = 0)
Valoracin Media
Valoracin
Alta
El estudiante
particip de
manera
pertinente con
la actividad
durante el
desarrollo del
laboratorio
Mximo
Puntaje
10
(Puntos =
7.0)
(Puntos = 0).
Hay entrega
de los
productos
solicitados y
contenido es
pertinente.
20
(Puntos = 5.0 )
(Puntos =10)
Estructura del
Informe( portada,
introduccin,
objetivos, desarrollo(
resultados y anlisis)
, conclusiones y
referencias)
El informe no presenta
una excelente
estructura.
(Puntos = 0)
El informe
presenta una
excelente
estructura y
presentacin.
(Puntos = 0.5 )
(Puntos =1.0)
mximo de hojas 8
Redaccin y
ortografa
El informe presenta
deficiencias en
redaccin y errores
ortogrficos
(Puntos = 0)
La redaccin
es excelente,
las ideas
estn
correlacionad
as, y el
20
El informe no da
respuesta a los
lineamientos de las
prcticas de laboratorio.
(Puntos = 0)
cuerpo del
texto es
coherente en
su totalidad
(Puntos 1.0)
45
Se evidencia la
profundidad de
los anlisis.
(Puntos = 8)
Referencias
Se maneja de manera
inadecuada el uso de
citas y referencias
(Puntos = 0)
Aunque presenta
referencias, estas no se
articulan adecuadamente
con el trabajo
(Puntos = 0.5)
El manejo de
citas y
referencias es
satisfactorio
(Puntos =
1.0)
90
Nota: La puntuacin anterior puede ser ponderada de acuerdo al # de sesiones en cada Cead, de
acuerdo a los recursos disponibles , para lo cual dicha ponderacin debe guardar relacin proporcional con
los tems de la rbrica general que se presenta,
Retroalimentacin
El tutor de la prctica tendr diez (10) das hbiles para enva o entregar la respectiva retroalimentacin
del informe de laboratorio siguiendo lo estipulado en la rbrica de evaluacin.
21
Tipo de practica
Presencial
X Autodirigida
Remota
Porcentaje de evaluacin
Horas de la practica
Temticas de la prctica
2.5%
2H
Unidad 1: Biomolculas, especficamente el captulo 2,
pptidos y protenas, leccin 10: Clasificacin y
Propiedades Fisicoqumicas.
Intencionalidades formativas
Propsitos
Comprobar la teora con la prctica en relacin al
comportamiento segn la solubilidad de protenas.
Obtener las fracciones de
albminas, globulinas,
prolaminas y glutelinas a partir de tejidos biolgicos.
Calcular mediante espectrofotometra, la concentracin de
proteinas en cada una de las fracciones anteriores.
Objetivos
Que el estudiante compruebe la teora con la prctica en
relacin al comportamiento
segn la solubilidad de
protenas.
Que el estudiante obtenga las fracciones de albminas,
globulinas, prolaminas y glutelinas a partir de tejidos
biolgicos.
Que el estudiante calcule mediante espectrofotometra, la
concentracin de proteinas en cada una de las fracciones
anteriores.
COMPETENCIAS
El estudiante describe y analiza de manera eficiente los
22
Fundamentacin Terica
El estudiante como parte de su autogestin en el desarrollo de su aprendizaje autnomo, se
servir investigar antes de la prctica y a manera de pre informe los siguientes temas,
enfatizando en la reacciones qumicas que tienen lugar y el principio del mtodo:
1. Solubilidad y precipitacin de las protenas
2. Clasificacin de Osborne de las protenas, por el criterio de solubilidad
3. Mtodos cuantitativos para la determinacin de protenas (Biuret, Folin- Lowry, Bradford).
Nota: algunas de las temticas las encuentra en el mdulo del curso.
Como fuentes documentales consulte:
Prez, G. (1992). Ciclo de krebs. En G. Prez, BIOQUIMICA (pg. 163). Bogot DC: Unisur.
Rodney, B. (1999). El ciclo del cido ctrico. En B. Rodney, Conceptos de Bioqumica (pgs. 489494). Mxico: International Thomson Editores S.A de C.V.
23
en
Reactivos
Equipos
Tubos de ensayo
Estufas ( 5)
gradillas
tapabocas
esptulas
Libros de bioqumica
Carbonato de sodio
en NaOH 0.1 mol/l.
Centrifuga
Pipetas 1, 5 y 10
ml
Marcador de vidrio
NaCI al 1%,
Balanza analtica
Balones aforados
Etanol al 75%,
24
Cuaderno de laboratorio
NaOH 0.1 N,
Vasos de
Bata blanca
precipitado de 600
plstico
Solucin patrn de
albmina de huevo de
concentracin
conocida.(0.25
mg/ml).
Agitador de vidrio
Reactivo de Biuret.
Erlenmeyers 100
y 250 ml
Vasos de
precipitado 250 ml
Vasos precipitado
500 ml
Probeta 100 ml
Vidrios reloj
grandes
Tabla 4: reactivos prctica 2.
25
Procedimiento:
Preparacin de la muestra
Pesar 2.0 g de muestra (en cada caso ser una de las harinas de: arveja, soya, frjol, haba,
trigo, cebada, etc.); pasarla a un tubo de ensayo, agregar 10 ml de H2O desmineralizada, agitar
manualmente durante 10 minutos y centrifugar la suspensin a 2500 rpm por 3 minutos. Vaciar
el sobrenadante a un baln aforado de 25 ml. Al residuo agregar de nuevo otros 10 ml de H2O
desmineralizada y repetir exactamente el proceso anterior.
26
Sobre el residuo que queda de la separacin de las albminas, se repite ahora todo el proceso
anterior, pero agregando esta vez NaCl al 1%. Despus de centrifugar, los sobrenadantes de la
primera y segunda extraccin con NaCl al 1%, se llevan a otro baln aforado de 25 ml y se
completa hasta el enrase con el mismo NaCI al 1%. Esta es la fraccin de las globulinas.
Sobre el residuo anterior se extrae en idntica forma la fraccin de las prolaminas, usando esta
vez alcohol etlico al 75% y una temperatura de extraccin cercana a 60C.
Por ltimo sobre el mismo residuo, con la adicin de solucin de NaOH 0.1 N y aplicando el
mismo procedimiento general, se separa la fraccin de las glutelinas.
Mtodo de Biuret :
Sobre cada uno de los extractos que contienen las diferentes fracciones cada grupo proceder
a la determinacin de protenas, aplicando el mtodo de Biuret.
La curva de calibracin se har utilizando como patrn una solucin de albmina de huevo de
concentracin conocida.
Para las muestras de soya, arveja y frjol, de las fracciones de albminas y glutelinas deber
tomarse para cada una y por aparte, una alcuota de 0,5 ml y llevarse a un volumen de 5 ml
27
(dilucin 1 a 10) con agua desmineralizada para las albminas y con NaOH 0,1 N para las
glutelinas. Estas diluciones se usarn como extractos problemas para dichas fracciones.
En 15 tubos de ensayo rotulados pipetear en c/u las cantidades de reactivos que se indican en
el siguiente cuadro.
Tubos
Condiciones
B
10
11
12
13
14
Sol. patrn
albumina, ml
0.
1
0.
3
0.
5
0.
7
0.
9
1.
2
Fraccin
albuminas, ml
0.
5
1.
0
Fraccin
globulinas, ml
0.
5
1.
0
Fraccin
prolaminas, ml
0.
5
1.
0
Fraccin glutelinas,
ml
0.
5
1.
0
H2O destilada, ml
1.
9
1.
7
1.
5
1.
3
1.
1
0.
8
1.
5
1.
0
1.
5
1.
0
1.
5
1.
0
1.
5
1.
0
Mezclar bien y dejar en reposo por 30 minutos a temperatura ambiente o introducir los tubos en
un bao de agua a 30C durante 10 minutos para desarrollo del color. Leer en cada tubo
porcentaje de transmitancia a 540 nm usando el tubo B para ajustar el 100% de transmitancia.
2. Clculos y resultados
Consultar tablas de conversin para pasar porcentajes de transmitancia a los correspondientes
valores de absorbancia o calclelos utilizando la frmula:
A = 2 - log (%T)
Trazar en papel milimetrado la grfica de calibracin (absorbancia en ordenadas vs.
concentracin (mg/mI) en abcisas) e interpolar las Absorbancias de los tubos problemas;
proceder, teniendo en cuenta las diluciones de cada caso, a calcular los porcentajes de cada
fraccin protenica.
28
Debern compararse los valores obtenidos con los que se hallen en la literatura consultada.
Mtodo de Foln- lowry :
Preparacin de los reactivos:
1. Solucin alcalina de carbonato de sodio (Na2CO3 20 g/l en NaOH 0.1 mol/l).Se debe
preparar primero el NaOH al 0.1 M y luego el carbonato se debe disolver en este, preparar 200
ml.
2. Solucin de sulfato de cobre tartrato-sdico potsico: Preparar una solucin de sulfato de
cobre SO4Cu en tartrato sdico potsico 10 g/l) preparar de esta solucin 300 ml.
3. El da de la prctica se debe preparar la solucin salina: mezclar 50 ml de (1) y 1 ml (2).
4. El reactivo de Folin se debe diluir: en un volumen igual de agua, el mismo da que se va a
utilizar. 1:1
5.Patrn de protena: 0.25 mg/l
Procedimiento: a 1 ml de muestra agregue 5 ml de una solucin alcalina (mezclar 50 ml de la
solucin alcalina de carbonato de sodio ms 1 ml de solucin de sulfato de cobre tartrato
sdico potsico). Mezcle vigorosamente y deje reposar a temperatura ambiente por 10 min o
ms. Agregue 0. 5 ml del reactivo de Folin en forma rpida y mezclando inmediatamente.
Despus de 30 minutos lea la Absorbancia a 750 nm. Utilice un blanco de reaccin.
REACTIVO
BLANCO
T1
T2
T3
T4
H 2O
1 ml
0.9
ml
08 ml
0.7ml
0.6
ml
T5
T6
M1
M2
0.5
-0
ml
PATRON ml
---
01
0.2
0.3
0.4
0.5
----
---
PROBLEMA
------
---
---
---
---
---
--
1ml
1ml
SOLUCION
ALCALINA (
Folin A+C)
REACTIVO DE
FOLIN DILUIDO
1:1
1:2
Tabla 6: batera de tubos mtodo Folin Lowry para la cuantificacin de protenas .
Absorbancia
(nm= )
Concentracin de protena (
mg/ml)
T1
T2
T3
T4
T5
T6
M1
M2
Tabla 7: presentacin de resultados prctica 2.
Para hallar la concentracin del patrn en mg/ml, debe realizar el respectivo anlisis de la
concentracin de la solucin patrn: 0.25 mg/ml y el volumen que se toma de la solucin
patrn.
5. Con los valores de Absorbancia y Concentracin graficar:
Concentracin de protena en las abscisas (X) y Absorbancia en la ordenadas (Y).
6. Obtenga la ecuacin de la recta por regresin lineal y el coeficiente de regresin.
Ecuacin del tipo y = m x + b. Se recomienda que el valor del coeficiente de correlacin sea
como mnimo de 0.995.
La ecuacin encontrada, servir para realizar los clculos de concentracin de protena en
mg/ml de M1 y M2.
Sistema de Evaluacin
Evaluacin individual:
cada estudiante debe presentar en forma escrita u oral lo solicitado en el pre informe.
desempeo y desenvolvimiento durante la sesin de laboratorio
Evaluacin grupal:
El grupo de trabajo debe presentar un informe escrito en la fecha acordada por el tutor , que
contenga: portada, introduccin, objetivos, tabla de resultados, anlisis y confrontacin de
resultados, desarrollo de cuestionarios. Conclusiones y bibliografa.
30
tem Evaluado
Asisti y particip
activamente del
desarrollo de la
prctica
Estructura del
Informe( portada,
introduccin,
objetivos,
desarrollo(
resultados y
anlisis) ,
conclusiones y
referencias)
Mximo
Valoracin
Baja
Valoracin Media
El estudiante
no asisti.
(Puntos = 0)
El estudiante asisti
pero su desempeo
no fue en la habilidad
del trabajo en grupo y
desempeo de la
prctica no fu
excelente. (Puntos
=3.0 )
Valoracin Alta
Puntaje
El estudiante
particip de
manera pertinente
con la actividad
durante el
desarrollo del
laboratorio
(Puntos = 7.0)
Hay entrega de
los productos
solicitados y
contenido es
pertinente.
No hay entrega
de los
productos
solicitados
(Puntos = 0).
(Puntos = 5.0 )
El informe no
presenta una
excelente
estructura.
Aunque el informe
presenta una
estructura base, la
misma carece de
algunos elementos del
cuerpo solicitado.
El informe
presenta una
excelente
estructura y
presentacin.
(Puntos = 0.5 )
(Puntos =1.0)
No hay errores de
ortografa y el
documento presenta
una mediana
articulacin de las
ideas y la estructura
de los prrafos
La redaccin es
excelente, las
ideas estn
correlacionadas, y
el cuerpo del
texto es
coherente en su
totalidad
(Puntos = 0)
10
20
(Puntos =10)
mximo de hojas 8
Redaccin y
ortografa
El informe
presenta
deficiencias en
redaccin y
errores
ortogrficos
(Puntos = 0)
31
El informe no da
respuesta a los
lineamientos de
las prcticas de
laboratorio.
Fines del informe
(Puntos 1.0)
Aunque presenta
El informe presenta
resultados y anlisis de una excelente
resultados estos no son articulacin entre
pertinentes. Se evidencia los resultados y el
la ausencia de anlisis y anlisis de
resultados.
deduccin.
(Puntos =4)
(Puntos = 0)
45
Se evidencia la
profundidad de los
anlisis.
(Puntos = 8)
Referencias
Se maneja de
manera
inadecuada el
uso de citas y
referencias
(Puntos = 0)
Aunque presenta
referencias, estas no
se articulan
adecuadamente con el
trabajo
(Puntos = 0.5)
El manejo de
citas y referencias
es satisfactorio
(Puntos = 1.0)
90
32
Porcentaje de evaluacin
Horas de la practica
Temticas de la prctica
Intencionalidades formativas
X Autodirigida
Remota
2.5%
1H
Unidad 1: Biomolculas, especficamente el captulo 3,
Enzimas.
Propsitos
Entender el papel de las enzimas como catalizadores de los
diferentes procesos bioqumicos y su importancia en los
diferentes procesos metablicos.
Analizar, mediante reacciones
cualitativas la actividad
enzimtica de la sacarasa y alfa-amilasa.
Establecer relaciones entre la estructura y la funcin de las
enzimas y prdida de esta al variar al variar su temperatura
ptima de trabajo.
Objetivos
Que el estudiante entienda el papel de las enzimas como
catalizadores de los diferentes procesos bioqumicos y su
importancia en los diferentes procesos metablicos.
Que el estudiante analice mediante reacciones cualitativas
la actividad enzimtica de la sacarasa y alfa-amilasa.
Que el estudiante establezca relaciones entre la estructura y
la funcin de las enzimas y prdida de esta al variar al variar
su temperatura ptima de trabajo.
COMPETENCIAS
El estudiante describe y analiza de manera eficiente los
resultados observados en cada prueba cualitativa y relaciona
el marco terico y los resultados para dar el respectivo
anlisis.
33
Fundamentacin Terica
El estudiante como parte de su autogestin en el desarrollo de su aprendizaje autnomo, se
servir investigar antes de la prctica y a manera de pre informe los siguientes temas:
1. Captulo 3: enzimas, de la Unidad 1: Biomolculas del mdulo del curso. Adicionalmente
realizar la siguiente investigacin:
2. Qu es la sacarasa, cual es su sustrato, a qu clase de enzima pertenece, cules son sus
productos de hidrlisis. En qu consiste la prueba de Fehling y para qu clase de carbohidratos
es indicativa, Por que se usa la prueba anterior en la actividad de la sacarasa?
3. Estructura qumica del substrato para la alfa-amilasa., enlaces que rompe o hidroliza la amilasa, clase de enzima que es la - amilasa, Productos de la hidrlisis de la - amilasa. En
qu consiste la reaccin de lugol el almidn? que entienden por temperatura ptima de una
enzima, en el cuerpo humano donde se encuentra esta la - amilasa?, que se entiende con pH
ptimo de una enzima?.
4. estructura del almidn y su mecanismo de hidrlisis: enzimas implicadas.
Descripcin de la practica
En esta prctica mediante pruebas coloreadas, se identifica los productos de hidrlisis de la
accin de la sacarasa sobre la sacarosa, y la accin de la alfa- amilasa sobre el almidn.
34
Vaso de precipitado de 50
ml
Material biolgico (
estudiantes)
Reactivos
Equipos
Levadura granulada
comercial. (No sirve
pulverizada).
300 ml Acetona
Estufa a 38C
Solucin de saliva.
Agua destilada
Balanzas (5)
Vaso de precipitado de 50
ml( para el grupo 2)
Vidrio reloj
Reactivo de Fehling
Mallas (4)
Hielo
Termmetros (4)
200 ml Solucin de
almidn 2%.
35
Agitador de vidrio
50 ml Solucin cido
tartrico al 1%
Termmetro de mercurio(
grupo 2)
Pipeta pasteur
50 Solucin de
NaOH al 0.1 N
Probeta de 100 ml
50 Solucin de
NaOH al 0.5 N
Embudos y soporte
50 ml de buffer
fosfato pH 6.9-7.0
Erlenmeyers 250 ml
50 ml de cido
clorhdrico al 10%
Erlenmeyers 50 ml
100 ml de solucin de
glucosa al 5%
Tubos de ensayo
Reactivo de
selliwanoff
gradillas
150 ml de
tartrico al 1%
Pipetas 1, 5,10 ml
Solucin de HCl al
5%,
Solucin
de
NaOH al 5%
Hielo y agua caliente
acido
PROTECCION
RIESGO
36
Metodologa
Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica:
Captulo 3: enzimas, de la Unidad 1: Biomolculas del mdulo del curso.
Forma de trabajo:
Estimado estudiante a continuacin encontrar los pasos a seguir para el desarrollo de la
prctica #3 del curso.
La metodologa es la siguiente:
Trabajo individual: el estudiante obtiene las guas de laboratorio, prepara un pre informe que
contenga: resumen conocimientos previos, diagrama de flujo de la marcha de la prctica y
tabla de resultados en blanco.
Trabajo grupal: En grupo de trabajo, todos los estudiantes realizan la prctica #3 de laboratorio,
para ello previamente deben identificar los materiales que se requiere. Tenga presente que el
desempeo individual como grupal, sern tenidos en cuenta en la rbrica de evaluacin del
informe de laboratorio.
Producto a entregar: Informe escrito de laboratorio mediante entrega personal al tutor.
Procedimiento:
1. Experimento No. 1 Sacarasa
1.1 extraccin de la enzima:
Tome 17 gramos de levadura granulada (no utilice levadura molida) en un mortero y tritrela.
Una vez reducida a polvo, transfirala a un vaso de precipitado que contenga 100 ml de agua
destilada y agite durante 10 minutos. Filtre a travs de tela y luego a travs de papel de filtro en
un embudo.
Vierta el filtrado en un vaso de precipitado y agregue 50 ml de acetona. Mezcle bien y deje la
mezcla quieta durante 10 minutos. Decante parte del lquido cuidando de no perder el
precipitado porque es donde esta la enzima sucrasa, colquela en hielo para evitar la
desnaturalizacin. Marque el recipiente como SOLUCIN DE ENZIMA.
1.2 marcha de la prctica:
37
PROCEDIMIENTO
V (ml)
RESULTAD
O
ANALISIS
DE
RESULTADOS
actividad
enzimtica
enzima
hervida
Solucin de enzima
3 ml
Agua destilada
3 ml
2 ml
1 ml
Solucin B de Fehling
1 ml
Agua destilada
3 ml
3 ml
Enzima hervida
5 ml
Reactivo de selliwanoff
5 ml
Solucin de enzima
3 ml
Agua destilada
3 ml
adicionar sacarosa
2 ml
38
1 ml
Solucin B de Fehling
1 ml
Agua destilada
3 ml
3 ml
Enzima cruda
3ml
Reactivo de seliwanoff
1 ml
3 ml
Cuestionario:
1. Por qu se utiliza acetona para precipitar la enzima?
2. Diga cules son los fundamentos qumicos de las pruebas estudiadas para el
reconocimiento de la hidrlisis de la sacarosa. En esta parte Ud tiene que analizar el
fundamento terico de la prueba y el resultado obtenido ( de donde se obtiene el color
obtenido, que indica cada prueba?
39
PROCEDIMIENTO
V(ml)
RESULTADO
ANALISIS DE
RESULTADOS
0.5 ml
Aparte en un beaker de 50 ml
Preparara r una solucin de
reaccin:
Solucin de almidn (hervir
durante 2 minutos).
Enfriar
y
destilada
agregar
Cloruro de potasio
incubar a 38C.
ACTIVIDAD
ENZIMATICA
DE LA
- AMILASA.
tiempo : cinco
minutos
6.0 ml
2.0 ml
agua
1.0 % e
2.0 ml
Solucin de reaccin*
10 ml
6 ml
3 ml
Agitar y tomar
inmediatament
e
Gotas
40
- AMILASA.
tiempo : 10
minutos
3 ml
- AMILASA.
tiempo : 30
minutos
de
Gotas
5
3ml
Prueba
Fehling
3 ml
ACTIVIDAD
ENZIMATICA
DE LA
Gotas
Gotas
1 ml
Solucin B de Fehling
1 ml
Agua destilada
2 ml
3ml
41
Cuestionario:
Explique y analice los resultados obtenidos
cuando reacciona con el lugol, que resultados se obtiene?
Que coloracin produce los productos de la hidrlisis del almidn y cuales son?
2.2 preparacin de la solucin de enzima y Efecto de la concentracin de la enzima
sobre la velocidad de reaccin
Se debe recolectar una muestra de saliva para obtener una solucin de enzima. Para ello
enjuguese varias veces con agua de bolsa y proceda a recoger en un beaker de 50 ml
aproximadamente 10 ml de saliva.
Adicione a la saliva 10 ml de agua destilada y mezcle bien. Filtre la solucin de saliva y rotule el
erlenmeyer como SOLUCIN DE ENZIMA - AMILASA e incube a 38C.
Prepare cuatro tubos de ensayo de la siguiente forma:
Tubo
reactivo
Cloruro
potasio
de
0.2 ml
0.2 ml
0.2 ml
0.2 ml
Solucin
almidn
de
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
1.2 ml
1.1ml
1.0
0.9
Agua destilada
0.5ml
2 ml
3.5 ml
5 ml
reactivo
enzima
42
Coloque cada tubo a incubar a 38C por 20 minutos. Transcurrido 20 minutos en cada tubo de
ensayo adicionar 0.2 ml de acido triclorcetico al 10% y adicione de manera inmediata a cada
tubo (o hasta el 4) t gotas del reactivo de lugol.
Cuestionario:
Cul es la relacin del efecto de la concentracin de la enzima sobre la velocidad de
reaccin en la enzima segn el experimento?
Cul es el papel del acido tricloroacetico?
2.3 Determinacin del pH ptimo de la - amilasa salival
Mida el pH de:
cido tartrico al1%. Tomar pH ________
Acido clorhdrico al 10%. Tomar pH
NaOH al 0.1 N Tomar pH ____
NaOH al 0.5 N Tomar pH ____
Prepare cinco tubos de ensayo as:
Tubo
reactivo
cido
clorhdrico al
10%
cido
tartrico
1%
1.0 ml
1.0 ml
al
Buffer fosfato
pH 6.9
1.0 ml
NaOH 0.1 N
1.0 ml
NaOH 0.5 N
KCl
Solucin
almidn
Agua
de
1.0 ml
0.2 ml
0.2 ml
0.2 ml
0.2 ml
0.2 ml
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
0.5 ml
1.0 ml
1.0 ml
1.0 ml
1.0 ml
1.0 ml
43
4y5
4 ml
4 ml
4 ml
4 ml
reactivo
enzima
Coloque cada tubo a incubar a 38C por 20 minutos. Transcurrido 20 minutos en cada tubo de
ensayo colocar 0.2 ml de acido triclorcetico al 10% y adicione de manera inmediata a cada
tubo (o hasta el 4) tres gotas del reactivo de lugol.
Cuestionario:
Agua destilada
1.0 ml
1.0 ml
1.0 ml
KCL
0.2 ml
0.2 ml
0.2 ml
Solucin de almidn
1.0 ml
1.0 ml
1.0 ml
reactivo
44
2 ml
2 ml
2 ml
reactivo
enzima
Coloque cada tubo a incubar a 38C por 20 minutos. Transcurrido 20 minutos en cada tubo de
ensayo aadir 0.2 ml de acido triclorcetico al 10% y adicione de manera inmediata a cada tubo
(o hasta el 4) tres gotas del reactivo de lugol.
Cuestionario:
Cul es el papel de cloruro de potasio (KCL) presente en todo los experimentos al igual
que el cido tricloroacetico?
de acuerdo a los resultado grafique el comportamiento de la enzima frente a los
cambios de temperatura.
Escriba el valor de la temperatura ptima de la enzima y explique cmo llega Ud. A esa
conclusin
Experimento No. 3: Degradacin Enzimtica De Polisacridos2
45
cada estudiante debe presentar en forma escrita u oral lo solicitado en el pre informe.
desempeo y desenvolvimiento durante la sesin de laboratorio
Evaluacin grupal: El grupo de trabajo debe presentar un informe escrito en la fecha acordada
por el tutor, que contenga: portada, introduccin, objetivos, tabla de resultados, anlisis y
confrontacin de resultados, desarrollo de cuestionarios. Conclusiones y bibliografa.
Informe o productos a entregar
Pre informe antes de la prctica e Informe de laboratorio finaliza da la prctica.
Rbrica de evaluacin
Mximo
tem Evaluado
Valoracin Baja
Valoracin Media
Valoracin Alta
Puntaje
Asisti y
particip
activamente del
desarrollo de la
prctica
Entrega del
debido pre
informe y
sustentacin del
mismo
Estructura del
Informe(
portada,
introduccin,
objetivos,
desarrollo(
resultados y
anlisis) ,
conclusiones y
referencias)
El estudiante no
asisti.
(Puntos = 0)
El estudiante particip
de manera pertinente
con la actividad
durante el desarrollo
del laboratorio
10
(Puntos = 7.0)
(Puntos = 5.0 )
(Puntos =10)
El informe presenta
una excelente
estructura y
presentacin.
(Puntos = 0.5 )
(Puntos =1.0)
20
(Puntos = 0).
El informe no presenta
una excelente
estructura.
(Puntos = 0)
mximo de
hojas 8
46
Redaccin y
ortografa
El informe presenta
deficiencias en
redaccin y errores
ortogrficos
(Puntos = 0)
El informe no da
respuesta a los
lineamientos de las
prcticas de laboratorio.
Fines del
informe
No hay errores de
ortografa y el documento
presenta una mediana
articulacin de las ideas y
la estructura de los
prrafos
(Puntos = 0.5 )
Aunque presenta resultados
y anlisis de resultados estos
no son pertinentes. Se
evidencia la ausencia de
anlisis y deduccin.
(Puntos =4)
(Puntos = 0)
La redaccin es
excelente, las ideas
estn correlacionadas,
y el cuerpo del texto
es coherente en su
totalidad
(Puntos 1.0)
45
(Puntos = 8)
Referencias
Se maneja de manera
inadecuada el uso de
citas y referencias
(Puntos = 0)
Aunque presenta
referencias, estas no se
articulan adecuadamente
con el trabajo
(Puntos = 0.5)
El manejo de citas y
referencias es
satisfactorio
(Puntos = 1.0)
90
Nota: La puntuacin anterior puede ser ponderada de acuerdo al # de sesiones en cada Cead,
de acuerdo a los recursos disponibles, para lo cual dicha ponderacin debe guardar relacin
proporcional con los tems de la rbrica general que se presenta.
Tabla 14 : Rbrica de la prctica 3.
Retroalimentacin
El tutor de la prctica tendr diez (10) das hbiles para enva o entregar la respectiva
retroalimentacin del informe de laboratorio siguiendo lo estipulado en la rbrica de
evaluacin.
47
Porcentaje de evaluacin
Horas de la practica
Temticas de la prctica
Intencionalidades formativas
X Autodirigida
Remota
2.5 %
1H
Unidad 1: Biomolculas, especficamente el captulo 3,
Enzimas.
Propsitos
Entender el papel de las enzimas como catalizadores de los
diferentes procesos bioqumicos y su importancia en los
diferentes procesos metablicos.
Evaluar la capacidad enzimtica de la ureasa frente a
cambios de pH, concentracin de enzima y temperatura.
Comparar mediante dos mtodos (espectofotometrico y
volumtrico), la capacidad enzimtica de la ureasa frente a
cambios de pH.
Objetivos
Que el estudiante entienda el papel de las enzimas como
catalizadores de los diferentes procesos bioqumicos y su
importancia en los diferentes procesos metablicos.
Que el estudiante evale la capacidad enzimtica de la
ureasa frente a cambios de pH, concentracin de enzima y
temperatura.
Que el estudiante compare mediante
dos mtodos
(espectrofotomtrico y volumtrico), la capacidad enzimtica
de la ureasa frente a cambios de pH, concentracin de
enzima y temperatura.
COMPETENCIAS
48
Fundamentacin Terica
El estudiante como parte de su autogestin en el desarrollo de su aprendizaje autnomo, se
servir investigar antes de la prctica y a manera de pre informe los siguientes temas:
1. Captulo 3: enzimas, de la Unidad 1: Biomolculas del mdulo del curso. Adicionalmente
realizar la siguiente investigacin:
ureasa
2. presencia de grupos SH.
3. Oxidacin de los grupos SH
Descripcin de la practica
En esta prctica, se va a evaluar la presencia de la ureasa en leguminosas y tortas de
oleaginosas midiendo su actividad biolgica, mediante la hidrlisis de la urea. Se determinar su
actividad, a travs de dos mtodos: el espectrofotomtrico y por titulacin con HCl
49
a 0.05 M
0.1 N
0.1 M 50 ml de c/u
1%
Solucin fenol nitroprusiato de sodio : 4,7g fenol y 6mg de nitroprusiato de sodio en 100ml de
agua desionizada
Disolver 2g de NaOH en 100ml de agua desionizada y agregar 7,5ml de hipoclorito de sodio
comercial al 5%. Guardar en frasco mbar.
Solucin de HCI
50
REACTIVO
PROTECCION
cidos inorgnicos
concentrados
RIESGO
Metodologa
Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica.
Captulo 3: enzimas, de la Unidad 1: Biomolculas del mdulo del curso.
Forma de trabajo:
Estimado estudiante a continuacin encontrar los pasos a seguir para el desarrollo de la
prctica #4 del curso.
La metodologa es la siguiente:
Trabajo individual: el estudiante obtiene las guas de laboratorio, prepara un pre informe que
contenga: resumen conocimientos previos, diagrama de flujo de la marcha de la prctica y
tabla de resultados en blanco.
Trabajo grupal: En grupo de trabajo, todos los estudiantes realizan la prctica #4 de laboratorio,
para ello previamente deben identificar los materiales que se requiere. Tenga presente que el
desempeo individual como grupal, sern tenidos en cuenta en la rbrica de evaluacin del
informe de laboratorio.
Producto a entregar: Informe escrito de laboratorio mediante entrega personal al tutor.
Procedimiento:
Extraccin de la ureasa
Pesar 5 g de muestra (en cada caso ser una de las harinas de leguminosas o de las tortas de
oleaginosas), pasarla a un erlenmeyer, agregar 10 ml de NaCl 1%; agitar mecnicamente
durante 15 minutos y centrifugar la suspensin a 2.500 rpm por 15 minutos; transferir el
sobrenadante a un baln aforado de 25 ml. Al residuo agregar de nuevo otros 10 mI de NaCI
1% y repetir exactamente el procedimiento anterior.
Reunir los dos sobrenadantes y completar a 25 ml con NaCI 1%. Este es el extracto que
contiene ureasa. Dejar en bao con hielo
51
TUBOS BLANCO
Tubo
Condiciones
1
Buffer Fosfato pH 5, ml
4.5
Buffer Fosfato pH 6, ml
4.5
4.5
Buffer Fosfato pH 8, ml
4.5
4.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Urea 0.25 M, ml
Segunda Serie
TUBOS PROBLEMA
Tubos P
Condiciones
Urea 0.25 M, ml
1p
2p
3p
4p
5p
52
4.5
Buffer Fosfato pH 6, ml
4.5
4.5
Buffer Fosfato pH 8, ml
4.5
4.5
Extracto de Ureasa, ml
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Expresin de resultados
Tabular los resultados obtenidos as:
Tubo nmero
ml de HCl gastado
Titulacin corregida
Micromoles /ml de
HCl gastado
1p
2p
3p
4p
5p
Tabla 17: resultados pH ptimo de la ureasa, tubos problema
pH correspondiente
1p
2p
3p
4p
53
Mezclar bien el contenido de los tubos de ensayo y colocarlos en un bao termostatado entre 50
y 60o C por 10 min para el desarrollo del color. Dejar enfriar y leer la absorbancia a 630 nm; si la
absorbancia es mayor a 2.0, realizar la dilucin adecuada y volver a leer.
Cuestionarios:
54
Del mtodo 1: exprese grficamente en papel milimetrado, los micromoles de urea hidrolizados
(en las ordenadas Y) Vs el pH en las abscisas (X). , para ello debe buscar resultados del
grupo que realice dicha determinacin.
Del mtodo 2: Haga una grfica de pH vs Absorbancia y de temperatura vs Absorbancia e
identifique el pH ptimo de la ureasa, para ello debe buscar resultados del grupo que realice
dicha determinacin.
Compare los resultados del mtodo 1 y 2 y realice su propio anlisis y conclusiones.
Que efecto tiene el pH sobre la actividad biolgica de una enzima?
Mtodo 3:
El trabajo experimental se har en dos sesiones consecutivas de laboratorio as:
1. Primera sesin
1.1 Determinacin de la actividad a diferentes pH
Preprese 2 series de 5 tubos: 5 servirn como blanco y 5 para determinar el efecto de pH.
(Tubos p) rotulados claramente. Agregue lo indicado en el cuadro, incubndolos como se indica.
Terminada la incubacin transfiera el contenido de cada tubo a un erlenmeyer diferente,
agregando a cada uno 3 gotas de indicador de tashiro; finalmente titule con HCI de normalidad
conocida.
Primera Serie
TUBOS BLANCO
Tubo
Condiciones
1
Buffer Fosfato pH 5, ml
4.5
Buffer Fosfato pH 6, ml
4.5
4.5
Buffer Fosfato pH 8, ml
4.5
Urea 0.25 M, ml
55
4.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Segunda Serie
TUBOS PROBLEMA
Tubos P
Condiciones
1p
2p
3p
4p
5p
Buffer Fosfato pH 5, ml
4.5
Buffer Fosfato pH 6, ml
4.5
4.5
Buffer Fosfato pH 8, ml
4.5
4.5
Extracto de Ureasa, ml
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Urea 0.25 M, ml
ml de HCl gastado
Titulacin corregida
Micromoles/ml
HCl gastado
de
56
pH correspondiente
1p
2p
3p
4p
5p
Urea 0.25 M, ml
1.0
1.5
2.0
3.0
6.0
8.0
9.5
8.5
8.0
7.5
6.5
3.5
1.5
HgCl2, gotas
Colocar todos los tubos en un bao mara a 50 C por cinco minutos y sin sacarlos
agregar:
Ureasa, ml
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
57
Micromoles
de urea
ml de HCl
gastados
Titulacin
corregida
Micromoles de
HCl gastados
1
2
3
4
5
6
7
Micromoles
de
urea
hidrolizada
Velocidad en
moles/min
1/v
[S] moles de
urea inicia/ml
1/[S]
1
2
3
4
5
6
7
Tabla 23: expresin de resultados variacin concentracin de sustrato
58
En papel milimetrado y con datos de la tabla anterior construir las siguientes grficas:
Grfica No. 2 de su informe: En ordenadas datos de y o sea micromoles de urea hidrolizados
por minuto. En abscisas datos de [S] o sea micromoles de urea iniciales/ml.
Grfica No. 3 de su informe: Siguiendo el procedimiento Lineweaver-Burk, en ordenadas
datos de 1/v y en abscisas 1 / [S].
De estas dos grficas, deducir la constante de Michaelis y la velocidad mxima para esta
reaccin. El valor de Km (constante de Michaelis) debe expresarse en moles/litro.
Incubar en:
bao de agua a 37 C
bao de agua a 60 C
Luego proceda a agregar los reactivos y a mantener las condiciones que se indican enseguida:
Tubos
Condiciones
B
4.5
4.5
4.5
4.5
4.5
4.5
HgCl2, gotas
Temperatura de incubacin, C
16
16
37
60
92
Urea 0.25 M, ml
Buffer de fosfato pH ptimo, ml
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
59
Urea 0.25 M, ml
4.5
2.5
0.5
0.5
1.5
60
Nota: Si la actividad de la enzima es muy baja con las alcuotas utilizadas, repetir el ensayo
usando una alcuota del extracto de ureasa mayor. Por el contrario si la enzima presenta una
actividad afta repita el ensayo utilizando una dilucin del extracto de ureasa (por ejemplo: 1:5
v/v).
2.2 Expresin de resultados
Determine la actividad uresica de la leguminosa o la torta analizada, expresndola como
micromoles de urea hidrolizado / ml del extracto de ureasa.
Compare la actividad uresica de su extracto con los obtenidos por los dems grupos y con los
datos bibliogrficos.
Cuestionario
1.
2.
3.
4.
5.
Evaluacin individual:
cada estudiante debe presentar en forma escrita u oral lo solicitado en el pre informe.
desempeo y desenvolvimiento durante la sesin de laboratorio
Evaluacin grupal: El grupo de trabajo debe presentar un informe escrito en la fecha acordada
por el tutor, que contenga: portada, introduccin, objetivos, tabla de resultados, anlisis y
confrontacin de resultados, desarrollo de cuestionarios. Conclusiones y bibliografa.
Informe o productos a entregar
Pre informe antes de la prctica e Informe de laboratorio finaliza da la prctica.
Rbrica de evaluacin
tem Evaluado
Valoracin
Baja
Valoracin Media
Valoracin Alta
Mximo
61
Asisti y particip
activamente del
desarrollo de la
prctica
Estructura del
Informe( portada,
introduccin,
objetivos, desarrollo(
resultados y anlisis)
, conclusiones y
referencias)
El estudiante no
asisti.
(Puntos = 0)
No hay entrega
de los productos
solicitados
(Puntos = 0).
El informe no
presenta una
excelente
estructura.
El estudiante particip de
manera pertinente con la
actividad durante el desarrollo
del laboratorio
10
(Puntos = 7.0)
Hay entrega de los productos
solicitados y contenido es
pertinente.
20
(Puntos =10)
El informe presenta una
excelente estructura y
presentacin.
5
(Puntos =1.0)
(Puntos = 0)
(Puntos = 0.5 )
mximo de hojas 8
Redaccin y
ortografa
El informe
presenta
deficiencias en
redaccin y
errores
ortogrficos
(Puntos = 0)
El informe no da
respuesta a los
lineamientos de
las prcticas de
laboratorio.
No hay errores de
ortografa y el documento
presenta una mediana
articulacin de las ideas y
la estructura de los
prrafos
(Puntos = 0.5 )
Referencias
(Puntos = 0)
Se maneja de
manera
inadecuada el
uso de citas y
referencias
Aunque presenta
referencias, estas no se
articulan adecuadamente
con el trabajo
(Puntos = 0.5)
El manejo de citas y
referencias es satisfactorio
(Puntos = 1.0)
62
90
Nota: La puntuacin anterior puede ser ponderada de acuerdo al # de sesiones en cada Cead, de
acuerdo a los recursos disponibles, para lo cual dicha ponderacin debe guardar relacin proporcional
con los tems de la rbrica general que se presenta.
Tabla 26: Rbrica de la prctica 4.
Retroalimentacin
El tutor de la prctica tendr diez (10) das hbiles para enva o entregar la respectiva retroalimentacin
del informe de laboratorio siguiendo lo estipulado en la rbrica de evaluacin.
63
Porcentaje de evaluacin
Horas de la practica
Temticas de la prctica
Intencionalidades
formativas
Autodirigida
Remota
2.0%
1H
Esta prctica no se deriva de ninguna de las
contenidas en el curso, pero esta indirectamente
relacionada con la Unidad 1, en la parte de
biomolculas.
Propsitos
Reconocer la presencia de vitamina C en diferentes
muestras de alimentos.
Cuantificar el contenido de vitamina C en las
muestras analizadas y comparar su valor con datos
tericos.
Establecer la importancia biolgica de la vitamina C
en los procesos metablicos.
Objetivos
Que el estudiante reconozca presencia de vitamina
C en diferentes muestras de alimentos.
Que el estudiante cuantifique
el contenido de
vitamina C en las muestras analizadas y comparar
su valor con datos tericos.
Que el estudiante establezca la importancia biolgica
de la vitamina C en los procesos metablicos.
COMPETENCIAS
El estudiante describe y analiza de manera eficiente
los resultados observados en cada prueba cualitativa
64
65
Material de vidrio
Material biolgico
Reactivos
Equipos
gradilla
Jugo de naranja,
limn,
tomate,
zanahoria y durazno
Solucin de almidn
al 5%
termmetros
Tubos de ensayo
Tabletas de Vitamina
C.
Lugol
Papel indicador
Pipetas de 5 y 10 ml
2-nitroanilina 0.16%
en actico HCI
Espectrofotmetro
Tapones de caucho
Nitrito de sodio
0,08% en H2O
mecheros
Probetas de 100 ml
Etanol 96%
mallas
Fruta
D1
Verdura
D2
2-nitroanilina, ml
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
Nitrito de sodio, ml
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
3.8
3.8
3.8
3.8
3.8
3.8
3.8
3.8
3.8
Patrn vitamina C, ml
0.1
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
cido oxlico, ml
1.0
0.9
0.8
0.6
0.4
0.2
Extracto problema, ml
1.0
1.0
1.2
1.2
1.2
1.2
1.2
1.2
1.2
1.2
1.2
Agua destilada, ml
3.8
3.8
3.8
3.8
3.8
3.8
3.8
3.8
3.8
1. Compare el mtodo que utiliz con otro mtodo de determinacin de la misma vitamina.
2. Qu ocurrira si no se decolora por completo la solucin de 2-nitroanilina al adicionar nitrito
de sodio?
3. Cul es la funcin del hidrxido de sodio en la determinacin de la vitamina C?
4. Cmo se afectara la determinacin si la muestra ha sido tratada previamente con calor?
5. Cmo se encuentra la vitamina C generalmente en los materiales vegetales?
6. Cite seis alimentos (verduras, frutas, leguminosas, tubrculos) ricos en vitamina C.
Sistema de Evaluacin
Evaluacin individual:
cada estudiante debe presentar en forma escrita u oral lo solicitado en el pre informe.
desempeo y desenvolvimiento durante la sesin de laboratorio
Evaluacin grupal: El grupo de trabajo debe presentar un informe escrito en la fecha acordada
por el tutor, que contenga: portada, introduccin, objetivos, tabla de resultados, anlisis y
confrontacin de resultados, desarrollo de cuestionarios. Conclusiones y bibliografa.
Informe o productos a entregar
Pre informe antes de la prctica e Informe de laboratorio finaliza da la prctica.
Rbrica de evaluacin
tem Evaluado
Asisti y particip
activamente del
desarrollo de la
prctica
Mximo
Valoracin
Baja
Valoracin Media
El estudiante no
asisti.
(Puntos = 0)
No hay entrega
de los productos
solicitados
(Puntos = 0).
Valoracin Alta
Puntaje
El estudiante particip de
manera pertinente con la
actividad durante el desarrollo
del laboratorio
10
(Puntos = 7.0)
Hay entrega de los productos
solicitados y contenido es
pertinente.
20
(Puntos =10)
69
El informe no
presenta una
excelente
estructura.
Aunque el informe
presenta una estructura
base, la misma carece de
algunos elementos del
cuerpo solicitado.
(Puntos = 0)
(Puntos = 0.5 )
mximo de hojas 8
Redaccin y
ortografa
El informe
presenta
deficiencias en
redaccin y
errores
ortogrficos
(Puntos = 0)
El informe no da
respuesta a los
lineamientos de
las prcticas de
laboratorio.
No hay errores de
ortografa y el documento
presenta una mediana
articulacin de las ideas y
la estructura de los
prrafos
(Puntos = 0.5 )
Referencias
(Puntos = 0)
Se maneja de
manera
inadecuada el
uso de citas y
referencias
(Puntos = 0)
Aunque presenta
referencias, estas no se
articulan adecuadamente
con el trabajo
(Puntos = 0.5)
El manejo de citas y
referencias es satisfactorio
(Puntos = 1.0)
90
Nota: La puntuacin anterior puede ser ponderada de acuerdo al # de sesiones en cada Cead, de
acuerdo a los recursos disponibles, para lo cual dicha ponderacin debe guardar relacin proporcional
con los tems de la rbrica general que se presenta.
Tabla 29: Rbrica de la prctica 5.
Retroalimentacin
El tutor de la prctica tendr diez (10) das hbiles para enva o entregar la respectiva
retroalimentacin del informe de laboratorio siguiendo lo estipulado en la rbrica de evaluacin.
70
Presencial
2.5%
Autodirigida
Remota
1H
Captulo 4 y 5 de la unidad 2: cidos nucleicos y bioenergtica.
Propsitos
Extraer el ARN de los dems componentes celulares
levadura.
a partir
de
la
Analizar, los reactivos con laso cuales se separa el ARN de los dems
componentes celulares
Analizar la composicin qumica del ARN
Objetivos
Que el estudiante aprenda a extraer el ARN de los dems componentes
celulares a partir de la levadura.
Que el estudiante analice , los reactivos con los cuales se separa el ARN
de los dems componentes celulares
Que el estudiante analice la composicin qumica del ARN
COMPETENCIAS
El estudiante describe y analiza de manera eficiente los resultados
observados en la prueba y relacionar el marco terico y los resultados para
dar el respectivo anlisis.
El estudiante conceptualiza en forma precisa
prueba y la estructura del ARN.
la
71
Metas
Al finalizar la prctica #6:
El estudiante obtendr su calificacin del respectivo pre informe personal
como resultado del estudio independiente.
El estudiante resolver los respectivos cuestionarios dados.
El estudiante presentar en forma escrita el informe del respectivo
laboratorio en forma grupal en donde sobresalga el anlisis de resultados.
Fundamentacin Terica
72
Material de vidrio
gradilla
Material biolgico
Levadura seca.
Reactivos
Equipos
Solucin de fenol
termmetros
Tubos de ensayo
Acetato de
potasio
Centrifuga
Pipetas de 5 y 10
ml
Etanol absoluto
Tapones de caucho
Etanol absoluto
Probetas de 100 ml
Vasos
de
precipitado de 250,
600 ml.
Tabla 30: reactivos prctica 6.
Estimado estudiante a continuacin encontrar los pasos a seguir para el desarrollo de la prctica
#6 del curso.
La metodologa es la siguiente: Trabajo individual: el estudiante obtiene las guas de laboratorio,
prepara un pre informe que contenga: resumen conocimientos previos, diagrama de flujo de la
marcha de la prctica y tabla de resultados en blanco.
Trabajo grupal: En grupo de trabajo, todos los estudiantes realizan la prctica #6 de laboratorio,
para ello previamente deben identificar los materiales que se requiere. Tenga presente que el
desempeo individual como grupal, sern tenidos en cuenta en la rbrica de evaluacin del
informe de laboratorio.
Producto a entregar: Informe escrito de laboratorio mediante entrega personal al tutor.
73
Procedimiento: Suspenda 30 g de levadura seca en 120 ml de agua a 37C. Deje reposar por 15
min a esta temperatura y agregue 160 ml de solucin concentrada de fenol (precaucin: muy
corrosivo). Agite mecnicamente la suspensin durante 30 min a T ambiente. Luego Centrifuge
en fro a 3000 g durante 15 min, para romper la emulsin.
Con una pipeta pasteur remueva cuidadosamente la capa superior acuosa y Centrifuge a 10000
g durante 5 min en una centrifuga refrigerada para separar la protena desnaturalizada. Agregue
acetato de potasio al sobrenadante hasta obtener una concentracin final de 20g/L y precipite el
ARN aadiendo 2 volmenes de etanol.
Enfre la solucin en hielo por 1 hora. Recoja el precipitado por centrifugacin en frio a 2000 g por
5 min. Lave el ARN con una mezcla de etanol-agua (3:1) , luego con etanol y finalmente con ter;
deje secar al aire y pese. El contenido de ARN en la levadura es de aproximadamente 4% de su
peso seco.
Sistema de Evaluacin
Evaluacin individual:
cada estudiante debe presentar en forma escrita u oral lo solicitado en el pre informe.
desempeo y desenvolvimiento durante la sesin de laboratorio
Evaluacin grupal: El grupo de trabajo debe presentar un informe escrito en la fecha acordada por
el tutor, que contenga: portada, introduccin, objetivos, tabla de resultados, anlisis y
confrontacin de resultados, desarrollo de cuestionarios. Conclusiones y bibliografa.
Informe o productos a entregar
Pre informe antes de la prctica e Informe de laboratorio finaliza da la prctica.
Rbrica de evaluacin
Mximo
tem Evaluado
Valoracin Baja
Valoracin Media
Valoracin Alta
Puntaje
Asisti y particip
activamente del
desarrollo de la
prctica
El estudiante no
asisti.
(Puntos = 0)
El estudiante particip de
manera pertinente con la
actividad durante el
desarrollo del laboratorio
10
(Puntos = 7.0)
74
(Puntos = 5.0 )
(Puntos =10)
(Puntos = 0.5 )
(Puntos =1.0)
La redaccin es excelente,
las ideas estn
correlacionadas, y el
cuerpo del texto es
coherente en su totalidad
(Puntos 1.0)
(Puntos =4)
Se evidencia la profundidad
de los anlisis.
20
(Puntos = 0)
mximo de hojas 8
Redaccin y ortografa
El informe presenta
deficiencias en
redaccin y errores
ortogrficos
(Puntos = 0)
El informe no da
respuesta a los
lineamientos de las
prcticas de laboratorio.
Fines del informe
45
(Puntos = 0)
(Puntos = 8)
Referencias
Se maneja de
manera inadecuada
el uso de citas y
referencias (Puntos =
0)
El manejo de citas y
referencias es satisfactorio
(Puntos = 1.0)
90
Nota: La puntuacin anterior puede ser ponderada de acuerdo al # de sesiones en cada Cead, de
acuerdo a los recursos disponibles, para lo cual dicha ponderacin debe guardar relacin proporcional
con los tems de la rbrica general que se presenta.
Tabla 31: Rbrica de la prctica 6.
Retroalimentacin
El tutor de la prctica tendr diez (10) das hbiles para enva o entregar la respectiva
retroalimentacin del informe de laboratorio siguiendo lo estipulado en la rbrica de evaluacin.
75
NUCLEICOS6
Tipo de practica
Presencial
Autodirigida
Remota
Porcentaje de evaluacin
Horas de la practica
Temticas de la prctica
2.5%
1H
Captulo 4 y 5 de la unidad 2: cidos nucleicos y bioenergtica.
Intencionalidades
formativas
Propsitos
Reconocer la presencia de ARN y ADN en los tejidos biolgicos.
Analizar, mediante reacciones cualitativas coloreadas de ADN y
ARN en los tejidos biolgicos.
Establecer relaciones entre la estructura y la funcin de ARN y
ADN en los procesos metablicos.
Objetivos
Reconocer la presencia de ARN y ADN en los tejidos biolgicos.
Analizar, mediante reacciones cualitativas coloreadas de ADN y
ARN en los tejidos biolgicos.
Establecer relaciones entre la estructura y la funcin de ARN y
ADN en los procesos metablicos.
COMPETENCIAS
El estudiante describe y analiza de manera eficiente
los
resultados observados en cada prueba cualitativa y relaciona el
marco terico y los resultados para dar el respectivo anlisis.
El estudiante conceptualiza en forma precisa la relacin que tiene
cada prueba y la estructura de ARN y ADN.
El estudiante comunica los conocimientos adquiridos a travs de
76
Fundamentacin Terica
El estudiante como parte de su autogestin en el desarrollo de su aprendizaje autnomo, se
servir investigar antes de la prctica y a manera de pre informe los siguientes temas,
enfatizando en la reacciones qumicas que tienen lugar y el principio del mtodo:
1. Unidad didctica 2: cidos nucleicos y bioenergtica: lecciones 16 a la 25.
2. EL estudiante puede complementar su gestin investigando en la bibliografa recomendada los
siguientes temas:
- cidos Nucleicos: ADN y ARN. Identificacin bioqumica.
Descripcin de la practica
Mediante esta prctica, se quiere separar el ARN ADN de los dems componentes celulares de
la levadura, del hgado de ternera y del tejido de una cebolla cabezona, para posteriores
identificaciones. Es una prctica cualitativa para identificar la extraccin de este tipo de
sustancias. Una vez obtenido el Acido Nucleico se puede aplicar tcnicas de identificacin de
pentosas y bases nitrogenadas.
Esta prctica corresponde a los temas que se tratan en los Captulo 4 y 5 de la unidad 2: cidos
nucleicos y bioenergtica.
Es de vital importancia para los estudiantes de la formacin profesional y tcnica de los programas
de ingeniera de alimentos, agroforestal, agronmica, zootecnia, produccin animal y regentes de
farmacia, el desarrollo de estas prcticas, ya que profundizan y analizan la relacin e importancia
que guardan los cidos nucleicos para en las reacciones bioqumica de los organismos vivos.
Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)
77
Material de vidrio
Material
biolgico
Reactivos
Levadura
seca
Solucin de fenol
Hgado de
ternera
Acetato de
potasio
Cebolla
cabezona
fresca
Etanol absoluto
Detergente
lavavajillas,
sal, zumo
de pia o
papaya.
ter etlico,
Equipos
Balanza analtica
Tabla
32:
reactivos la
prctica 7.
Termmetros
centrifuga
espectrofotmetro
alcohol de 96 muy
fro
batidora
Fenol/cloroform
o/isoamilico
(25:24:1).
Acetato sdico
3 M pH 5,2.
Tampn TrisEDTA: Tris 10
mM, EDTA 1
mM, pH 7,5.
Software a utilizar en la practica
Ninguno.
Seguridad industrial
REACTIVO
PROTECCION
Solucin de fenol.
Gafas de seguridad,
tapabocas.
RIESGO
Metodologa
78
Suspenda 30 g de levadura seca en 120 ml de agua a 37C. Deje reposar por 15 min a esta
temperatura y agregue 160 ml de solucin concentrada de fenol (precaucin: muy corrosivo).
Agite mecnicamente la suspensin durante 30 min a T ambiente. Luego centrifugue en fro a
3000 g durante 15 min, para romper la emulsin.
Con una pipeta pasteur remueva cuidadosamente la capa superior acuosa y Centrifuge a 10000
g durante 5 min en una centrifuga refrigerada para separar la protena desnaturalizada. Agregue
acetato de potasio al sobrenadante hasta obtener una concentracin final de 20g/L y precipite el
ARN aadiendo 2 volmenes de etanol.
Enfre la solucin en hielo por 1 hora. Recoja el precipitado por centrifugacin en frio a 2000 g
por 5 min. Lave el ARN con una mezcla de etanol-agua (3:1), luego con etanol y finalmente con
ter; deje secar al aire y pese. El contenido de ARN en la levadura es de aproximadamente 4%
de su peso seco.
2. experimento 2: AISLAMIENTO Y DETERMINACION DE ACIDOS NUCLEICOS8
79
en
julio,
16,2009
en
80
capas. A continuacin introduce la varilla y extrae una maraa de fibras blancas de ADN.
Cuestionarios
1. Valorar la pureza de la preparacin de cidos nucleicos obtenida y calcular su concentracin y
la cantidad de cidos nucleicos por gramo de tejido. Comentar el resultado.
2. Por qu las protenas tienen un mximo de absorcin a 280 nm?
3. Qu tipo de detergente es el SDS, y cmo acta frente a las membranas y protenas?
4. Por qu al extraer con fenol los cidos nucleicos van a la fase acuosa y no al fenol?
5. Accin del lavavajillas y sal sobre la pared celular y las membranas plasmtica y nuclear.
6. Accin de los zumos de pia y papaya
7. Accin del alcohol sobre el ADN
Sistema de Evaluacin
Evaluacin individual:
cada estudiante debe presentar en forma escrita u oral lo solicitado en el pre informe.
desempeo y desenvolvimiento durante la sesin de laboratorio
Evaluacin grupal:
El grupo de trabajo debe presentar un informe escrito en la fecha acordada por el tutor , que
contenga: portada, introduccin, objetivos, tabla de resultados, anlisis y confrontacin de
resultados, desarrollo de cuestionarios. Conclusiones y bibliografa.
Informe o productos a entregar
Pre informe antes de la prctica e Informe de laboratorio finaliza da la prctica.
Rbrica de evaluacin
tem Evaluado
Asisti y particip
activamente del
desarrollo de la
prctica
Valoracin Baja
El estudiante no
asisti.
(Puntos = 0)
Valoracin Media
Valoracin
Alta
El estudiante
particip de
manera
pertinente con
la actividad
durante el
desarrollo del
laboratorio
Mximo
Puntaje
10
(Puntos =
81
(Puntos = 0).
Hay entrega
de los
productos
solicitados y
contenido es
pertinente.
20
(Puntos = 5.0 )
(Puntos =10)
Estructura del
Informe( portada,
introduccin,
objetivos, desarrollo(
resultados y anlisis)
, conclusiones y
referencias)
El informe no presenta
una excelente
estructura.
(Puntos = 0)
El informe
presenta una
excelente
estructura y
presentacin.
(Puntos = 0.5 )
(Puntos =1.0)
mximo de hojas 8
Redaccin y
ortografa
El informe presenta
deficiencias en
redaccin y errores
ortogrficos
(Puntos = 0)
El informe no da
respuesta a los
lineamientos de las
prcticas de laboratorio.
Fines del informe
(Puntos = 0)
La redaccin
es excelente,
las ideas
estn
correlacionad
as, y el
cuerpo del
texto es
coherente en
su totalidad
(Puntos 1.0)
45
Se evidencia la
profundidad de
los anlisis.
82
Referencias
Se maneja de manera
inadecuada el uso de
citas y referencias
(Puntos = 0)
Aunque presenta
referencias, estas no se
articulan adecuadamente
con el trabajo
(Puntos = 0.5)
El manejo de
citas y
referencias es
satisfactorio
(Puntos =
1.0)
90
Retroalimentacin
El tutor de la prctica tendr diez (10) das hbiles para enva o entregar la respectiva retroalimentacin
del informe de laboratorio siguiendo lo estipulado en la rbrica de evaluacin.
83
Autodirigida
Remota
Porcentaje de evaluacin
Horas de la practica
Temticas de la prctica
2.5%
1H
La Unidad 3: Metabolismo: catabolismo y Biosntesis de
Biomolculas, especficamente el captulo 7, Metabolismo de
glcidos.
Intencionalidades formativas
Propsitos
Reconocer a los monosacridos
como unidades
estructurales de los polisacridos como la celulosa, almidn y
glucgeno y su importancia en los diferentes procesos
metablicos.
Analizar, mediante reacciones cualitativas coloreadas la
presencia de monosacridos y la presencia del enlace
glucocsidico en las muestras.
Establecer relaciones entre la estructura y la funcin de los
monosacridos y polisacridos y prdida de esta al variar
sus propiedades fisicoqumicas.
Objetivos
Que los estudiantes reconozcan los monosacridos como
unidades estructurales de los polisacridos como la celulosa,
almidn y glucgeno y su importancia en los diferentes
procesos metablicos.
Que el estudiante analice mediante reacciones cualitativas
coloreadas la presencia de monosacridos y la presencia del
enlace glucocsidico en las muestras.
10
84
Fundamentacin Terica
El estudiante como parte de su autogestin en el desarrollo de su aprendizaje autnomo, se
servir investigar antes de la prctica y a manera de pre informe los siguientes temas, :
1. estructura general de carbohidratos.
2. clasificacin de carbohidratos: monosacridos y disacridos (enfatizando en al formacin del
enlace glicosdico).
3. principio y reacciones de:
prueba de tollens
85
prueba de Fehling
reaccin del lugol y el almidn
prueba de Benedict
Prueba de Barfoed
Descripcin de la practica
En esta prctica mediante pruebas coloreadas, se identifica los monosacridos y la identificacin
del comportamiento qumico de los carbohidratos segn sus funciones qumicas (aldehdos y
cetonas).
Esta prctica es un apoyo
Metabolismo: catabolismo y
Metabolismo de glcidos.
Es de vital importancia para los estudiantes de la formacin profesional y tcnica de los programas
de ingeniera de alimentos, agroforestal, agronmica, zootecnia, produccin animal y regentes de
farmacia, el desarrollo de estas prcticas, ya que profundizan y analizan la relacin e importancia
que guardan los carbohidratos en las reacciones catabolismo y anabolismo para el aporte de
energa metablica.
Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)
Material de vidrio
Material
biolgico
Reactivos
Equipos
Tubos de ensayo
Trozo de pan
Solucin de glucosa
Mecheros de gas
Vasos de precipitado
de 250 y 600 ml
Una papa
Solucin de fructosa
Estufas, termmetros.
Pipetas de 10 ml
Solucin de almidn
Solucin de yodo o reactivo
de lugol
Solucin diluida de HCl
Alcohol etlico, reactivo de
tollens, reactivo de Fehlin A y
B).
gradilla.
3. Adicione 1.0 mL del reactivo de Tollens a cada tubo de ensayo.
4. Verifique que la temperatura en el bao Mara se sostenga a 60 C. Coloque dentro un vaso
de precipitado los diferentes tubos de ensayo y lleve este conjunto al bao Mara por 5
minutos. Anote sus observaciones.
5. Repita los pasos dos, tres y cuatro, pero en lugar del reactivo de Tollens utilice 0.5 mL del
reactivo A de Fehling y 0.5 ml. del reactivo B de Fehling.
6. Ahora, tome 2.0 mL de solucin de sacarosa y agregue tres o cuatro gotas de solucin
diluida de HCL Agite y caliente suavemente por un minuto. Permita que se enfre y luego
agregue 0.5 mL de reactivo A de Fehling y 0.5 mL de reactivo B de Fehling. Caliente en el
bao de Mara por tres minutos. Anote sus observaciones.
C: polisacridos
1. Prepare una solucin concentrada de almidn en agua. Caliente suavemente hasta que se
forme engrudo. Djela en reposo hasta que enfre. Luego aada dos gotas de solucin de
yodo o de reactivo de lugol. Anote sus observaciones.
2. Repita esta prueba utilizando reactivo de lugol en una rebanada de papa o de pan. Anote
sus observaciones.
Cuestionario:
1. Qu resultados muestra la prueba con el reactivo de Tollens? y con el reactivo de
Fehling?
2. Qu resultados muestra la prueba de solubilidad?
Sistema de Evaluacin
Evaluacin individual:
cada estudiante debe presentar en forma escrita u oral lo solicitado en el pre informe.
desempeo y desenvolvimiento durante la sesin de laboratorio
Evaluacin grupal:
El grupo de trabajo debe presentar un informe escrito en la fecha acordada por el tutor, que
contenga: portada, introduccin, objetivos, tabla de resultados, anlisis y confrontacin de
resultados, desarrollo de cuestionarios. Conclusiones y bibliografa.
Informe o productos a entregar
Pre informe antes de la prctica e Informe de laboratorio finaliza da la prctica.
Rbrica de evaluacin
88
tem Evaluado
Asisti y particip
activamente del
desarrollo de la
prctica
Valoracin Baja
El estudiante no
asisti.
(Puntos = 0)
Valoracin Media
Valoracin Alta
El estudiante
particip de
manera
pertinente con
la actividad
durante el
desarrollo del
laboratorio
Mximo
Puntaje
10
(Puntos = 7.0)
(Puntos = 0).
(Puntos = 5.0 )
Estructura del
Informe( portada,
introduccin,
objetivos,
desarrollo(
resultados y
anlisis) ,
conclusiones y
referencias)
El informe no presenta
una excelente
estructura.
(Puntos = 0)
Hay entrega de
los productos
solicitados y
contenido es
pertinente.
20
(Puntos =10)
El informe
presenta una
excelente
estructura y
presentacin.
5
(Puntos = 0.5 )
(Puntos =1.0)
mximo de hojas 8
Redaccin y
ortografa
El informe presenta
deficiencias en
redaccin y errores
ortogrficos
(Puntos = 0)
El informe no da
respuesta a los
lineamientos de las
No hay errores de
ortografa y el documento
presenta una mediana
articulacin de las ideas y
la estructura de los prrafos
(Puntos = 0.5 )
La redaccin es
excelente, las
ideas estn
correlacionadas,
y el cuerpo del
texto es
coherente en su
totalidad
(Puntos 1.0)
El informe
presenta una
excelente
articulacin entre
45
89
los resultados y el
anlisis de
resultados.
Se evidencia la
profundidad de los
anlisis.
(Puntos = 8)
Referencias
Se maneja de manera
inadecuada el uso de
citas y referencias
(Puntos = 0)
Aunque presenta
referencias, estas no se
articulan adecuadamente
con el trabajo
(Puntos = 0.5)
El manejo de
citas y
referencias es
satisfactorio
(Puntos = 1.0)
90
Nota: La puntuacin anterior puede ser ponderada de acuerdo al # de sesiones en cada Cead,
de acuerdo a los recursos disponibles, para lo cual dicha ponderacin debe guardar relacin
proporcional con los tems de la rbrica general que se presenta.
Retroalimentacin
El tutor de la prctica tendr diez (10) das hbiles para enva o entregar la respectiva
retroalimentacin del informe de laboratorio siguiendo lo estipulado en la rbrica de evaluacin.
90
X Autodirigida
Remota
Porcentaje de evaluacin
Horas de la practica
Temticas de la prctica
2.5%
1H
Unidad 3: Metabolismo: catabolismo y
Biosntesis de
Biomolculas, especficamente el captulo 7, Metabolismo de
glcidos.
Intencionalidades
formativas
Propsitos
Comparar
tres mtodos de hidrlisis de polisacridos,
determinando la cantidad de azcar reductor formado mediante la
reaccin de la glucosa con 3,5-dinitrosalicilato de sodio.
Reconocer los productos de hidrlisis de polisacridos.
Cuantificar la concentracin de glucosa residual como producto de
las hidrlisis cida, enzimtica por el mtodo 3,5-dinitrosalicilato
de sodio del almidn y celulosa.
Objetivos
Que los estudiantes comparen tres mtodos de hidrlisis de
polisacridos, determinando la cantidad de azcar reductor
formado mediante la reaccin de la glucosa con 3,5-dinitrosalicilato
de sodio.
Que los estudiantes rreconozcan los productos de hidrlisis de
polisacridos.
Que los estudiantes cuantifiquen
la concentracin de glucosa
residual como producto de las hidrlisis cida, enzimtica por el
mtodo 3,5-dinitrosalicilato de sodio del almidn y celulosa.
11
91
COMPETENCIAS
El estudiante describe y analiza de manera eficiente
los
resultados observados en cada prueba cualitativa y relaciona el
marco terico y los resultados para dar el respectivo anlisis.
El estudiante conceptualiza en forma precisa la relacin que tiene
cada prueba y los procesos de hidrlisis de polisacridos.
El estudiante comunica los conocimientos adquiridos a travs de
la elaboracin de informes escritos.
Metas
Al finalizar la prctica #9:
El estudiante obtendr su calificacin del respectivo pre informe
personal como resultado del estudio independiente.
El estudiante resolver los respectivos cuestionarios dados.
El estudiante presentar en forma escrita el informe del respectivo
laboratorio en forma grupal en donde sobresalga el anlisis de
resultados.
Fundamentacin Terica
El estudiante como parte de su autogestin en el desarrollo de su aprendizaje autnomo, se
servir investigar antes de la prctica y a manera de pre informe los siguientes temas,
enfatizando en la reacciones qumicas que tienen lugar y el principio del mtodo:
1. estructura y funcin biolgica del almidn, glucgeno y celulosa.
2. mtodo del reactivo 3,5-dinitrosalicilato para cuantificacin de azcares.
Descripcin de la practica
En esta prctica se compara tres mtodos de hidrlisis de polisacridos, determinando la
cantidad de azcar reductor formado mediante la reaccin de la glucosa con 3,5-dinitrosalicilato
de sodio.
Esta prctica es un apoyo
Metabolismo: catabolismo y
Metabolismo de glcidos.
92
Material
biolgico
Tubos de ensayo,
saliva
Vasos de
precipitado de
1000, 600, 50 ml.
200 gramos
de maizena.
Pipetas de 10 ml,
probetas de 100
ml, agitadores de
vidrio.
Reactivos
Equipos
centrifuga
93
Seguridad industrial
No hay situaciones o eventos de peligrosidad.
Metodologa
Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica: Los conceptos sugeridos en la
fundamentacin terica.
Forma de trabajo: Estimado estudiante a continuacin encontrar los pasos a seguir para el
desarrollo de la prctica #9 del curso.
La metodologa es la siguiente:
Trabajo individual: el estudiante obtiene las guas de laboratorio, prepara un pre informe que
contenga: resumen conocimientos previos, diagrama de flujo de la marcha de la prctica y
tabla de resultados en blanco.
Trabajo grupal: En grupo de trabajo, todos los estudiantes realizan la prctica #9 de laboratorio,
para ello previamente deben identificar los materiales que se requiere. Tenga presente que el
desempeo individual como grupal, sern tenidos en cuenta en la rbrica de evaluacin del
informe de laboratorio.
Producto a entregar: Informe escrito de laboratorio mediante entrega personal al tutor.
Procedimiento:
El tutor en el momento de la prctica distribuir el trabajo de tal manera que cada grupo realice
una hidrlisis diferente sobre el mismo polisacrido; por ejemplo el grupo 1 efectuar hidrlisis
cida sobre almidn proveniente de maizena y el grupo 2 efectuar la hidrlisis enzimtica
sobre la misma muestra a fin de que puedan comparar los resultados.
La solucin del polisacrido tendr una concentracin de 6 mg/ml y se preparar en Buffer
fosfato de sodio 0.02 M pH = 6,9.
Todos los grupos realizarn la hidrlisis cida de la celulosa en presencia de ZnCl2 (o reactivo
de Lucas)
1.1 Hidrlisis cida
Rotular ocho tubos de ensayo y agregar en orden los siguientes reactivos:
Tubos
Condiciones
B
94
0.4
0.4
0.4
0.4
0.4
0.4
0.4
Agua destilada, ml
0.4
0.6
0.6
0.6
0.6
0.6
0.6
0.6
0.6
NaOH, 2.4 N
HCl 4N, ml
12
15
25
Reactivo 3,5-dinitrosalicilato, ml
Introducir todos los tubos en el bao a ebullicin durante cinco minutos, enfriar y
agregar 7 ml de agua destilada. Agitar y medir transmitancia a 540 nm. Utilice el B
para ajustar el 100% de transmitancia.
Tabla 37: bateras de tubos cuantificacin de glucosa DNS hidrlisis qumica.
Solucin almidn, ml
0.4
0.4
0.4
0.4
0.4
0.4
0.4
Agua destilada, ml
0.4
Saliva diluida, ml
0.6
0.6
0.6
0.6
0.6
0.6
0.6
0.6
95
12
15
25
Coloque todos los tubos en un bao a ebullicin durante cinco minutos, enfre y
agregue 8 ml de agua destilada. Mida la transmitancia a 540 nm y use el tubo B para
ajustar el 100% de transmitancia.
Tabla 38: bateras de tubos cuantificacin de glucosa DNS hidrlisis enzimtica.
Sistema de Evaluacin
Evaluacin individual:
cada estudiante debe presentar en forma escrita u oral lo solicitado en el pre informe.
desempeo y desenvolvimiento durante la sesin de laboratorio
Evaluacin grupal:
el grupo de trabajo debe presentar un informe escrito en la fecha acordada por el tutor , que
contenga: portada, introduccin, objetivos, tabla de resultados, anlisis y confrontacin de
resultados, desarrollo de cuestionarios. Conclusiones y bibliografa.
Informe o productos a entregar Pre informe antes de la prctica e Informe de laboratorio finaliza da
la prctica.
Rbrica de evaluacin
tem Evaluado
Asisti y particip
activamente del
desarrollo de la
prctica
Valoracin Baja
El estudiante no
asisti.
(Puntos = 0)
Valoracin Media
Valoracin Alta
El estudiante
particip de
manera
pertinente con
la actividad
durante el
desarrollo del
laboratorio
Mximo
Puntaje
10
(Puntos = 7.0)
(Puntos = 0).
(Puntos = 5.0 )
Estructura del
Informe( portada,
introduccin,
objetivos,
desarrollo(
resultados y
El informe no presenta
una excelente
estructura.
(Puntos = 0)
Hay entrega de
los productos
solicitados y
contenido es
pertinente.
20
(Puntos =10)
El informe
presenta una
excelente
estructura y
presentacin.
97
anlisis) ,
conclusiones y
referencias)
(Puntos =1.0)
mximo de hojas 8
El informe presenta
deficiencias en
redaccin y errores
ortogrficos
(Puntos = 0)
Redaccin y
ortografa
El informe no da
respuesta a los
lineamientos de las
prcticas de laboratorio.
No hay errores de
ortografa y el documento
presenta una mediana
articulacin de las ideas y
la estructura de los prrafos
(Puntos = 0.5 )
La redaccin es
excelente, las
ideas estn
correlacionadas,
y el cuerpo del
texto es
coherente en su
totalidad
(Puntos 1.0)
El informe
presenta una
excelente
articulacin entre
los resultados y el
anlisis de
45
resultados.
Se evidencia la
profundidad de los
anlisis.
(Puntos = 8)
Referencias
Se maneja de manera
inadecuada el uso de
citas y referencias
(Puntos = 0)
Aunque presenta
referencias, estas no se
articulan adecuadamente
con el trabajo
(Puntos = 0.5)
El manejo de
citas y
referencias es
satisfactorio
(Puntos = 1.0)
90
Nota: La puntuacin anterior puede ser ponderada de acuerdo al # de sesiones en cada Cead, de
acuerdo a los recursos disponibles, para lo cual dicha ponderacin debe guardar relacin proporcional
con los tems de la rbrica general que se presenta.
Retroalimentacin
El tutor de la prctica tendr diez (10) das hbiles para enva o entregar la respectiva retroalimentacin
del informe de laboratorio siguiendo lo estipulado en la rbrica de evaluacin.
98
RECONOCIMIENTO CUALITATIVO DE
CARBOHIDRATOS: RECONOCIMIENTO DEL GLUCOGENO A
PARTIR DEL ALMIDN.
PRCTICA
No.
10-
Tipo de practica
Porcentaje de
evaluacin
Horas de la practica
Temticas de la
prctica
Intencionalidades
formativas
Presencial
6%
Autodirigida
Remota
2H
Unidad 3: Metabolismo: catabolismo y Biosntesis de Biomolculas,
especficamente el captulo 7, Metabolismo de glcidos.
Propsitos
Extraer el glucgeno presente en materiales biolgicos como el
hgado.
Reconocer cualitativamente la presencia de glucgeno en
mediante su hidrlisis enzimtica.
Analizar, mediante reacciones
hidrlisis del glucgeno extrado.
hgado
el glucgeno presente en
cualitativas los
que es el glucgeno
donde se encuentra el glucgeno y cul es su funcin biolgica
cul es la composicin qumica del glucgeno
cules son los productos de la hidrlisis del glucgeno va enzimtica.
De qu organismos es caractersticos el glucgeno?
En qu otros tejidos fuera del hgado se almacenan glcidos en forma de
glucgeno?
g. Escriba con frmulas la estructura qumica del glucgeno y el almidn. Mencione las
diferencias encontradas.
h. Porque se relaciona la alfa amilasa con el glucgeno.
i. Porque se usa la prueba de Tollens y Fehling en el experimento?
Biomolculas,
Descripcin de la practica
MATERIALES
BIOLOGICO
REACTIVOS
EQUIPOS
Vasos de precipitado de
1000 ml (vidrio y plstico)
Incubadora
Erlenmeyers 250 ml
50 ml Solucin saturada de
Na2SO4
Centrifuga y tubos
Pipetas de 5 y 10 ml
Solucin amortiguadora:
tampn fosfato sdico 0,02 M;
NaCl 0,005 M pH
Estufas (1)
Agitadores de vidrio
Reactivo de Fehling A y B.
Mallas
micro pipetas
Reactivo de tollens.
Probetas 100 ml
10 ml de tolueno
101
Reactivo de Benedict
esptulas
Tubos de ensayo
hielo
gradillas
Sacarosa
Lactosa
Tollens
Fehling A y B.
PROTECCION
RIESGO
Metodologa
Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica:
de resultados en blanco.
Trabajo grupal: En grupo de trabajo, todos los estudiantes realizan la prctica #10 de laboratorio,
para ello previamente deben identificar los materiales que se requiere. Tenga presente que el
desempeo individual como grupal, sern tenidos en cuenta en la rbrica de evaluacin del
informe de laboratorio.
Producto a entregar: Informe escrito de laboratorio mediante entrega personal al tutor.
Sistema de Evaluacin
Evaluacin individual:
cada estudiante debe presentar en forma escrita u oral lo solicitado en el pre informe.
desempeo y desenvolvimiento durante la sesin de laboratorio
Evaluacin grupal:
El grupo de trabajo debe presentar un informe escrito en la fecha acordada por el tutor , que
contenga: portada, introduccin, objetivos, tabla de resultados, anlisis y confrontacin de
resultados, desarrollo de cuestionarios. Conclusiones y bibliografa.
Procedimiento:
EXTRACCION DE GLUCOGENO
OBSERVACIONES
103
Segunda
Se centrifuga de nuevo.
centrifugacin:
Tercera
centrifugacin:
Una vez acabada la centrifugacin se tira el sobrenadante.
El
sedimento
obtenido
representa
el
glucgeno
prcticamente exento de sustancias contaminantes. Secar
en la estufa a 35C hasta su utilizacin.
Cantidad de
glucgeno
Solucin de
glucgeno
Recoleccin
de
la
alfa
amilasa
Adicin de la
alfa
amilasa
PROCEDIMIENTO
VOLUMEN
RESULTADO
PRUEBA POSITIVA
PARA:
y en
104
el
de solucin de glucgeno
1 ml
solucin de saliva
3 ml
1 ml.
1 ml
Prueba de
Solucin B de Fehling
1 ml
FEHLING
Agua destilada
1 ml
2 ml
Prueba de
TOLLENS
Reactivo de tollens
2ml
2 ml
Extraccin de
las
enzimas
105
PROCEDIMIENTO
VOLUMEN
5 ml
5 ml
RESULTADO
PRUEBA POSITIVA
PARA:
Repetir:
Solucin de lactosa
preparada al 5%
y maltosa recin
5 ml
2 ml
106
Reactivo de Benedict
2m
Solucin enzimtica
2.0 ml
DE
Reactivo de BARFOED
2m
Solucin enzimtica
2.0 ml
DE
Prueba
tollens
de
107
tem Evaluado
Asisti y particip
activamente del
desarrollo de la
prctica
Valoracin Baja
El estudiante no
asisti.
(Puntos = 0)
Valoracin Media
Valoracin Alta
El estudiante
particip de
manera
pertinente con
la actividad
durante el
desarrollo del
laboratorio
Mximo
Puntaje
10
(Puntos = 7.0)
(Puntos = 0).
(Puntos = 5.0 )
Estructura del
Informe( portada,
introduccin,
objetivos,
desarrollo(
resultados y
anlisis) ,
conclusiones y
referencias)
El informe no presenta
una excelente
estructura.
(Puntos = 0)
Hay entrega de
los productos
solicitados y
contenido es
pertinente.
20
(Puntos =10)
El informe
presenta una
excelente
estructura y
presentacin.
5
(Puntos = 0.5 )
(Puntos =1.0)
mximo de hojas 8
Redaccin y
ortografa
El informe presenta
deficiencias en
redaccin y errores
ortogrficos
(Puntos = 0)
No hay errores de
ortografa y el documento
presenta una mediana
articulacin de las ideas y
la estructura de los prrafos
(Puntos = 0.5 )
La redaccin es
excelente, las
ideas estn
correlacionadas,
y el cuerpo del
texto es
coherente en su
totalidad
(Puntos 1.0)
108
El informe
presenta una
excelente
articulacin entre
los resultados y el
anlisis de
45
resultados.
Se evidencia la
profundidad de los
anlisis.
(Puntos = 8)
Referencias
Se maneja de manera
inadecuada el uso de
citas y referencias
(Puntos = 0)
Aunque presenta
referencias, estas no se
articulan adecuadamente
con el trabajo
(Puntos = 0.5)
El manejo de
citas y
referencias es
satisfactorio
(Puntos = 1.0)
90
Nota: La puntuacin anterior puede ser ponderada de acuerdo al # de sesiones en cada Cead, de
acuerdo a los recursos disponibles, para lo cual dicha ponderacin debe guardar relacin proporcional con
los tems de la rbrica general que se presenta.
Retroalimentacin
El tutor de la prctica tendr diez (10) das hbiles para enva o entregar la respectiva retroalimentacin
del informe de laboratorio siguiendo lo estipulado en la rbrica de evaluacin.
109
Autodirigida
Remota
Porcentaje de evaluacin
Horas de la practica
Temticas de la prctica
2%
2H
Unidad 3: Metabolismo: catabolismo y
Biosntesis de
Biomolculas, especficamente el captulo 8, Metabolismo de
lpidos.
Intencionalidades formativas
Propsitos
Reconocer los diferentes tipos de lpidos que se encuentran
en los tejidos biolgicos.
Analizar, mediante reacciones cualitativas la presencia de
algunos de los tipos de lpidos como fosfolpidos, cidos
grasos, colesterol y glucolipidos
en cada una de las
muestras.
Establecer relaciones entre la estructura y la funcin de las
los lpidos y su participacin en los diferentes procesos
metablicos.
Objetivos
Que el estudiante reconozca los diferentes tipos de lpidos
que se encuentran en los tejidos biolgicos.
Que el estudiante analice los resultados obtenidos en las
reacciones cualitativas, la presencia de algunos de los tipos
de lpidos como fosfolpidos, cidos grasos, colesterol y
glucolipidos en cada una de las muestras.
Que el estudiante establezca relaciones entre la estructura y
la funcin de las los lpidos
y su participacin en los
diferentes procesos metablicos.
COMPETENCIAS
El estudiante describe y analiza de manera eficiente
110
los
Marco terico
El estudiante como parte de su autogestin en el desarrollo de su aprendizaje autnomo, se
servir investigar antes de la prctica y a manera de pre informe los siguientes temas,
enfatizando en la reacciones qumicas que tienen lugar y el principio del mtodo:
1. Qu son los lpidos compuestos,
2. quines integran a los lpidos compuestos,
3. Qu es el colesterol,
4. cul es la importancia biolgica del colesterol,
5. estructura del colesterol,
6. que pruebas coloreadas existen para identificar el colesterol
7. a qu tipo de lpidos pertenece el colesterol.
8. composicin qumica de la yema de huevo.
9. que son los fosfolpidos,
10. Cul es la estructura qumica de los fosfolpidos
11. cul es la importancia biolgica de los fosfolpidos.
12. Qu son los esfingolpidos
13. Cul es la estructura de los esfingolpidos
111
Biosntesis de
MATERIALES
VIDRIO
DE MATERALES
BIOLOGICO
Probeta de 100 ml
3 huevos
Agitador de vidrio
20 gramos de
fresco de res.
REACTIVOS
EQUIPOS
180 ml de etanol
Estufa y malla
centrifuga
Vaso de precipitado
de 600 ml
50 ml de KOH 1.5N
Perlas de vidrio
Vaso de precipitado
de 1000 ml
50 ml de acetona
Vaso de precipitado
de 600 ml plstico
50 ml de HNO3
Corchos
orificios
Vaso de precipitado
de 1000 ml plstico
Vaso de precipitado
de 50 ml
50 ml de acetona
Plancha
de
calentamiento
esptula
20 ml de etanol
Papel filtro
con
112
mechero
20 ml de ter
Pipetas de 10 ml
Soporte
pinzas.
universal
10 ml de acetona
10 ml de HNO3
Solucin de molibdato
de amonio
Crisol
o cpsula
mediana y pequea.
30 ml de acetona
Pinzas de madera
10 ml de HCl
Embudos
50 ml de NaOH al 30 %
Reactivo
Fehling
Ay
DE
REACTIVO
PROTECCION
RIESGO
Metodologa
Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica:
1. Captulo 1 y 2 de la Unidad 1: Biomolculas del mdulo del curso.
113
Forma de trabajo: Estimado estudiante a continuacin encontrar los pasos a seguir para el
al 97% caliente, mezcle bien, centrifugue a 3000 rpm a 2 minutos, decante el etanol en un tercer
vaso de 50 ml y marcado como extracto III. Repita una vez ms el procedimiento desde la
adicin de los 5 ml de etanol caliente.
2.1 separacin de los lpidos del extracto II
Evapore a bao mara el extracto II. Agregue al residuo 5 ml de acetona, mezcle bien y
centrifugue por 2 min. Decante el lquido en el vaso de extracto I.
Al residuo que queda, agregu 5 ml de ter, mezcle bien, y centrifugue, decante el liquido en el
vaso del precipitado extracto II.
Al residuo adicione, 3 ml de etanol caliente, mezcle y centrifugue y decante el etanol en el vaso
de extracto III.
Evapore los extractos II y III, hasta sequedad. (en bao mara),
Tome el extracto II, adicione 4 ml de etanol caliente y realice las pruebas para fosfolipidos.
2.2 prueba para fosfolpidos:
Coloque el extracto en una cpsula de porcelana, evapore el etanol, contine calentando hasta
que el residuo quede completamente en cenizas, adicione 5 gotas de HNO3, y 5 ml de agua
destilada, disuelva bien las cenizas y filtre, al filtrado adicione 5 ml de Molibdato de amonio ,
observe la coloracin y formacin de precipitados.
Cuestionario:
Para qu clase de lpidos es positiva esta prueba?
Que sustancia se forme en el precipitado?
Dentro de la composicin de los lpidos que tomo o grupo de tomos es la que se identifica con
esta prueba.
2.3 prueba para glucolipidos y esfingolipidos
Disuelva el extracto III, en 3 ml de etanol, calentando para disolverla, agregue 4 ml de agua y
realice:
Agregue 1 ml de HCL concentrado, agite bien, caliente a bao de agua hirviendo por 15
minutos. Deje enfriar y adicinele gota a gota NaOH al 30% hasta alcalinizar (con tiras de papel
indicador de pH), realice la prueba de Fehling.
Cuestionario:
1. Qu indica esta prueba. Para quin es positiva esta prueba, que se deduce de la prueba.
2. que esperaban encontrar en el extracto I
116
Sistema de Evaluacin
Evaluacin individual:
cada estudiante debe presentar en forma escrita u oral lo solicitado en el pre informe.
desempeo y desenvolvimiento durante la sesin de laboratorio
Evaluacin grupal:
el grupo de trabajo debe presentar un informe escrito en la fecha acordada por el tutor , que
contenga: portada, introduccin, objetivos, tabla de resultados, anlisis y confrontacin de
resultados, desarrollo de cuestionarios. Conclusiones y bibliografa
Informe o productos a entregar Pre informe antes de la prctica e Informe de laboratorio finaliza da la
prctica.
Rbrica de evaluacin
tem Evaluado
Asisti y particip
activamente del
desarrollo de la
prctica
Valoracin Baja
El estudiante no
asisti.
(Puntos = 0)
Valoracin Media
Valoracin Alta
El estudiante
particip de
manera
pertinente con
la actividad
durante el
desarrollo del
laboratorio
Mximo
Puntaje
10
(Puntos = 7.0)
(Puntos = 0).
(Puntos = 5.0 )
Estructura del
Informe( portada,
introduccin,
objetivos,
desarrollo(
resultados y
El informe no presenta
una excelente
estructura.
(Puntos = 0)
Hay entrega de
los productos
solicitados y
contenido es
pertinente.
20
(Puntos =10)
El informe
presenta una
excelente
estructura y
presentacin.
117
anlisis) ,
conclusiones y
referencias)
(Puntos =1.0)
mximo de hojas 8
Redaccin y
ortografa
El informe presenta
deficiencias en
redaccin y errores
ortogrficos
(Puntos = 0)
El informe no da
respuesta a los
lineamientos de las
prcticas de laboratorio.
No hay errores de
ortografa y el documento
presenta una mediana
articulacin de las ideas y
la estructura de los prrafos
(Puntos = 0.5 )
La redaccin es
excelente, las
ideas estn
correlacionadas,
y el cuerpo del
texto es
coherente en su
totalidad
(Puntos 1.0)
El informe
presenta una
excelente
articulacin entre
los resultados y el
anlisis de
45
resultados.
Se evidencia la
profundidad de los
anlisis.
(Puntos = 8)
Referencias
Se maneja de manera
inadecuada el uso de
citas y referencias
(Puntos = 0)
Aunque presenta
referencias, estas no se
articulan adecuadamente
con el trabajo
(Puntos = 0.5)
El manejo de
citas y
referencias es
satisfactorio
(Puntos = 1.0)
90
Nota: La puntuacin anterior puede ser ponderada de acuerdo al # de sesiones en cada Cead, de
acuerdo a los recursos disponibles, para lo cual dicha ponderacin debe guardar relacin proporcional
con los tems de la rbrica general que se presenta.
Retroalimentacin
El tutor de la prctica tendr diez (10) das hbiles para enva o entregar la respectiva retroalimentacin
del informe de laboratorio siguiendo lo estipulado en la rbrica de evaluacin.
118
Presencial
Autodirigida
Remota
30%
16 horas divididas en 3 y 4 sesiones.
Unidad 1, 2, y 3 del mdulo del curso.
Intencionalidades formativas
Propsitos
Reconocer a los aminocidos como unidades estructurales de las
protenas y su importancia en los diferentes procesos metablicos.
Reconocer a los nucletidos como unidades estructurales de los
cidos nucleicos y su importancia en los diferentes procesos
genticos.
Reconocer a
los lpidos como unidades estructurales de
membranas biolgicas y su importancia en los diferentes procesos
metablicos.
Reconocer a los monosacridos como unidades estructurales de
las polisacridos y su importancia en los diferentes procesos
metablicos.
Analizar, mediante reacciones
cualitativas coloreadas
la
presencia de aminocidos y enlaces peptdicos, diferentes tipos de
lpidos, carbohidratos y cidos nucleicos en las muestras.
Establecer relaciones entre la estructura y la funcin de las de las
biomolculas.
Objetivos
Que el estudiante reconozca a los aminocidos como unidades
estructurales de las protenas y su importancia en los diferentes
12
119
procesos metablicos.
Que el estudiante reconozca como unidades estructurales de los
cidos nucleicos y su importancia en los diferentes procesos
genticos.
Que el estudiante reconozca a los lpidos como unidades
estructurales de membranas biolgicas y su importancia en los
diferentes procesos metablicos.
Que el estudiante reconozca a los monosacridos como unidades
estructurales de los polisacridos y su importancia en los
diferentes procesos metablicos.
Que el estudiante analice, mediante reacciones cualitativas
coloreadas la presencia de aminocidos y enlaces peptdicos,
diferentes tipos de lpidos, carbohidratos y cidos nucleicos en las
muestras.
Que el estudiante establezca relaciones entre la estructura y la
funcin de las de las biomolculas.
COMPETENCIAS
El estudiante describe y analiza de manera eficiente
los
resultados observados en cada prueba cualitativa y relaciona el
marco terico y los resultados para dar el respectivo anlisis.
El estudiante conceptualiza en forma precisa la relacin que tiene
cada prueba y la estructura de las biomolculas.
El estudiante comunica los conocimientos adquiridos a travs de
la elaboracin de informes escritos.
Metas
Al finalizar la prctica #12:
El estudiante obtendr su calificacin del respectivo pre informe
personal como resultado del estudio independiente.
El estudiante resolver los respectivos cuestionarios dados.
El estudiante presentar en forma escrita el informe del respectivo
laboratorio en forma grupal en donde sobresalga el anlisis de
120
resultados.
fundamentacin Terica
Debido a las diferencias qumicas que existen entre las molculas de carbohidratos, lpidos,
protenas y cidos nucleicos, stas presentan diferente solubilidad en solventes orgnicos y
adems en cidos semejantes al tricloroacetico (ATA) de acuerdo con la temperatura. Es posible
entonces utilizar tales solubilidades diferenciales para separarlos, una vez que los tejidos han sido
triturados y se han roto sus membranas.
Accin del cido tricloroacetico a baja temperatura
Sobre carbohidratos
A baja temperatura los monosacridos son estables en medio cido, mientras que si se tratan en
caliente, sufren deshidratacin producindose los furfurales.
Los polisacridos en medio cido sufren hidrlisis del enlace glicosdico, reaccin que aumenta su
velocidad a medida que se eleva la temperatura. A temperaturas interiores a 4C, la velocidad de
hidrlisis es tan lenta que para fines prcticos se considera que no ocurre reaccin.
En general se puede decir que los carbohidratos son solubles en solucin de cido tricioroactico al
20% a temperaturas inferiores a 4C y que no sufren cambios qumicos en estas condiciones.
Sobre lpidos
Segn sus propiedades fisicoqumicas, estos compuestos son poco solubles en soluciones
acuosas y no son extrados si se trata el tejido con soluciones acuosas de cido tricioroactico.
Sobre protenas
Forman sales insolubles en cidos como tricloroacetico o perclrico, por tanto no son solubles en
soluciones de cido tricioroactico al 20% en fro.
Sobre cidos nucleicos
Lo mismo que las protenas, estos cidos son insolubles en soluciones fras de cido
tricloroacetico. Por otra parte el cido desoxirribonucleico (DNA) est unido a histonas, lo cual lo
hace ms insoluble en estas condiciones.
En conclusin, al tratar un tejido previamente triturado con cido tricioroactico al 20% y a 4C y
someter a centrifugacin la suspensin resultante, en el sobrenadante se obtienen los azcares,
mientras que los lpidos, protenas y cidos nucleicos quedan en el residuo.
121
Los polisacridos son solubles en soluciones acuosas cidas, pero insolubles en etanol.
Los polisacridos como el almidn, el glicgeno y los dextranos, forman compuestos
coloreados caractersticos cuando se combinan con yodo molecular.
A pesar de que la naturaleza de estos complejos no est bien definida, la evidencia disponible
indica a formacin de complejos de absorcin entre las cadenas helicoidales del polisacrido y el
yodo. Para que haya estructura helicoidal se necesita por lo menos una cadena con ocho unidades
de monosacrido.
Los polisacridos que a todo lo largo de su molcula muestran estructura helicoidal, dan coloracin
azul intensa, ej. la amilosa. Aquellos que son ramificados con hlices interrumpidas, producen
coloraciones menos intensas, ej. la amilopectina. Los altamente ramificados con segmentos cortos
de ramificacin, producen color pardo o rojizo, ej. el glicgeno.
Reaccin de Molisch
122
Un azcar tratado con a-naftol y cido sulfrico concentrado, produce una coloracin violeta. Se
presume que el cido sulfrico acta como deshidratante formando derivados del tipo de los
furfurales que reaccionan con el a-naftol para dar productos coloreados.
Reaccin de Benedict
Azcares reductores tratados con solucin alcalina suave (citrato-carbonato de sodio) de in
cprico, lo reducen a xido cuproso de color ladrillo.
Lpidos
En cuanto a solubilidad, los lpidos son insolubles en agua pero solubles en solventes orgnicos.
Los triglicridos forman un complejo coloreado (vino tinto) con el cido hidroxmico y el hierro en
medio cido y oxidante.
Los hidroxiesteroides con insaturacin en la posicin 5 reaccionan con el anhdrido actico para dar
steres, que en medio sulfrico se deshidratan produciendo una coloracin verde.
Los fosfolpidos por accin del NaOH se hidrolizan produciendo fosfatos inorgnicos, que con el
cido molbdico dan fosfomolibdato y estos, por accin de reductores como el cido 1,2,4aminonaftolsulfnico o el cido ascrbico, producen complejos de xidos de molibdeno de color
azul.
Si los jabones resultantes de la hidrlisis alcalina se someten a la accin del ter, los jabones se
sedimentan y en el sobrenadante queda el glicerol. Los compuestos que en su estructura tienen
grupos ( > CHOH)n forman complejos con iones metlicos como el Cu+2 por tanto si el
sobrenadante anterior se evapora al bao de mara el residuo se disuelve en agua caliente y se
acidifica con HCI; si los jabones no se haban separado totalmente, los cidos grasos de estos se
separan en una capa insoluble en agua. Despus de evaporar la capa acuosa, el residuo se
disuelve en etanol y por la adicin de solucin de sulfato de cobre se formar un quelato de cobre
de color verde, luego de agregar NaOH 0.1 N.
cidos nucleicos
Hidrlisis
123
Los lcalis diluidos (0.3 a 1.0 N) hidrolizan los enlaces ster del cido ribonucleico.
En cambio los enlaces ster del cido desoxirribonucleico son relativamente estables, lo mismo que
los enlaces N-glicosdicos de DNA y RNA. La facilidad de hidrlisis en el RNA parece estar
asociada a la presencia de hidroxilos en los carbonos 2 y3, lo cual permite la formacin de
intermedios
cclicos
2,
3-fosfonucletidos,
que
finalmente
dan
los
complejos
monofosfonucletidos- 2 o 3. Como la deoxirribosa del DNA no forma tales intermediarios, es
relativamente estable en presencia de lcali diluido. La acidificacin de la solucin despus del
tratamiento alcalino precipita las molculas de DNA intactas.
Los nucletidos obtenidos en la hidrlisis anterior fluorecen a la luz ultravioleta.
Con orcinol
Los nucletidos del RNA, debido a la presencia de ribosa, reaccionan con el reactivo cido de
orcinol (cloruro frrico en HCI concentrado + solucin alcohlica de orcinol), dando coloracin
verdosa.
Desnaturalizacin de protenas
Por accin de pHs extremos se destruyen los puentes de hidrgeno que mantienen la estructura
secundaria de las protenas. Las protenas a temperaturas mayores de 50C precipitan, por
formacin de agregados que resultan de la destruccin de la estructura secundaria y terciaria.
Millon
Las protenas que contienen tirosina reaccionan con mercurio disuelto en cido ntrico, produciendo
nitroderivados mercuriales de color rojo.
Ninhidrina
Los grupos amino terminales de las protenas reaccionan con la ninhidrina en caliente, dando
complejos de color violeta. En ellos, el amonaco desprendido reacciona con una molcula de
ninhidrina en estado oxidado y con otra en estado reducido.
124
Biuret
Los nitrgenos del enlace peptdico forman complejos coloreados con los iones cpricos en medio
alcalino.
Reaccin Xantoproteica
Esta reaccin se basa en la nitracin del anillo bencnico por el HNO3 concentrado, dando
derivados amarillos de nitrobenceno. Las protenas que contienen tirosina y triptfano dan esta
reaccin, pero el color amarillo resultante se transforma en naranja si se le adiciona NH4OH. Para
nitrar la fenilalanina se requiere H2SO4 como catalizador.
2. EXTRACCIN DE LA YEMA DE LPIDOS DEL HUEVO
La separacin de los lpidos es extremadamente difcil por extraccin con vanos solventes
orgnicos puros. Se hace uso de la propiedad que tienen la mayora de los lpidos de ser solubles
en mezclas de etanol: ter o etanol: cloroformo. La yema de huevo contiene buenas cantidades de
grasas neutras, lecitinas y colesterol.
Las lecitinas tienen un pH aproximadamente neutro, ya que contienen grupos cidos (HPO4-2) y
bsicos (Colina) formando Zwiteriones muy polares. Se dispersan coloidalmente en agua en
contraste con las grasas neutras que no se emulsionan. Las lecitinas se precipitan a partir de una
solucin etrea por adicin de acetona y su reconocimiento se basa en un test para saponificacin
y en un test para Colina. Las esfingomielinas tambin tienen Colina pero son solubles en ter y se
presentan en cantidades despreciables en el huevo crudo.
El colesterol no precipita por tratamiento con acetona de una solucin etrea y como no es
saponificable despus del tratamiento con KOH puede extraerse con ter, en tanto que los
triglicridos se han saponificado dando jabones solubles en agua. Para el reconocimiento del
colesterol se aplica el test de Liebermann-Burchard. El colesterol requiere de 15 a 20 minutos para
el desarrollo de un color verde profundo, precedido de un color lila.
Se requieren condiciones completamente anhidras para esta reaccin.
125
Digestin:
N orgnico + H 2 SO 4
NH 4 SO 4 + CO 2 + SO 2 + SO 3
Mezcla Caral
Destilacin:
NH 4 HSO 4 + NaOH
NH 4 OH + NaHSO 4
Arrastre con Vapor
126
Absorcin:
NH 4 OH + H 3 BO 3
NH 4 H 2 BO 3 + H 2 O
Titulacin:
NH 4 H 2 BO 3 + HCl
NH 4 Cl + H 3 BO 3
El desarrollo de esta prctica puede reemplazar a las practicas #1, 6, 7, 8,10 y 11, puede ser una
prctica de complemento, ya que contiene el desarrollo de las principales temticas de la Unidad
1, 2, y 3 del mdulo del curso.
En esta prctica mediante pruebas coloreadas, se identifica los aminocidos que componen las
protenas de los extractos utilizados basados en las reacciones de los grupos R cadena lateral.
Se desarrolla pruebas para analizar el comportamiento y la solubilidad de protenas
tratamientos de precipitacin y desnaturalizacin.
en
127
Es de vital importancia para los estudiantes de la formacin profesional y tcnica de los programas
de ingeniera de alimentos, agroforestal, agronmica, zootecnia, produccin animal y regentes de
farmacia, el desarrollo de estas prcticas, ya que profundizan y analizan los principales
componentes de los tejidos, haciendo referencia a aminocidos, protenas, lpidos y cidos
nucleicos, temticas de relevancia dentro de un curso general de bioqumica para los programas de
las ciencias bsicas biolgicas.
Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)
Tabla 46: reactivos prctica 12.
Material de vidrio
Material biolgico
Reactivos
Equipos
Probeta de 100 ml
Huevos
ATA al 10%
Equipo de digestin
para protenas.
Agitador de vidrio
Harina de
leguminosas.
Arena lavada
Centrifuga
Vaso de precipitado de 50
ml
esptula
Equipo de titulacin
Reactivo de Benedict
Reactivo de Milln
Reactivo de Biuret
Erlenmeyer de 250 ml
Fenolftalena , Acido
molbdico, Acido 1,2,4aminonaftolsulfnico
Pipetas de 10 ml
Reineckato de amonio al
2% en etanol, Glicina,
Tirosina, Solucin de
pentosa
Mezcla de alcohol-ter
(2:1), ter etlico, Acetona,
Ba(OH)2 saturado, Acido
actico al 10%
Mezcla catalizadora
Sysoev: K2SO4 100 g,
CuSO4 25 g, KMnO4 7.5 g
y Se metlico 0.5 g.
Pinzas de madera
Embudos
129
REACTIVO
PROTECCION
cidos inorgnicos
concentrados.
RIESGO
Metodologa
Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica:
1. Unidades 1,2 y 3 del curso de Bioqumica.
Forma de trabajo: Estimado estudiante a continuacin encontrar los pasos a seguir para el
130
Procedimiento
Cada grupo har el fraccionamiento qumico sobre un tejido determinado. Para comparar los
diferentes tejidos desde el punto de vista del contenido de carbohidratos, lpidos, protenas y cidos
nucleicos, deber confrontar sus resultados con los obtenidos por los otros grupos.
NOTA: Las diferentes fracciones obtenidas en esta prctica, deben guardarse para la siguiente
sesin de laboratorio.
A cada grupo se le entregar una muestra de tejido en ATA al 10% con los siguientes datos:
Este tejido se tratar conforme al diagrama esquemtico del mtodo para fraccionar un tejido en
sus constituyentes que se encuentra en la siguiente pgina.
Cada grupo recibir cinco frascos donde guardar y marcar adecuadamente cada fraccin que
obtenga.
Cuando tenga que evaporar las fracciones, lo har en una plancha de calentamiento sobre una
malla de asbesto; para secar, debe utilizar la estufa.
Expresin de resultados
Compare sus resultados con los obtenidos por los dems grupos y con los datos bibliogrficos. De
acuerdo con la funcin fisiolgica y con los resultados, diga cules son los tejidos que
cualitativamente contienen ms protenas, lpidos, cidos nucleicos y carbohidratos.
Cuestionario
131
132
Molisch
A una nueva fraccin de los compuestos anteriores, agrgueles 1 ml de agua destilada, 2 gotas de
reactivo de Molisch. Mezcle cuidadosamente y con los tubos inclinados agregue 1 ml de cido
sulfrico concentrado de manera que se forme una capa de cido debajo de la fase acuosa. Anote
el color del anillo formado en la interfase.
Benedict : Coloque al bao mara durante 2 minutos, fracciones de las muestras y patrones, con 2
ml de solucin de Benedict. Observe los resultados y contine calentando por 15 minutos. De
nuevo observe los tubos.
Lpidos: Muestra M3 y patrones de lecitina, colesterol y triglicridos.
cidos hidroxmicos: A una fraccin de las muestras, agregue 1 mI de hidroxilamina al 10% a la
cual se le ha incorporado 0.01% del indicador timolftalena. Adicione lentamente solucin de NaOH
al 10% hasta color azul permanente. Caliente en bao mara por 10 minutos, enfre al chorro y
adicione HCI al 10% lentamente y con agitacin, hasta desaparicin del color azul. Agregue unas 2
gotas del mismo cido en exceso. Por ltimo adicione 0.5 ml de solucin de FeCl3 al 5%. Observe
los cambios de coloracin que ocurren y anote los resultados.
3.2.2 Prueba de Lieberman-Burchard: Tome una fraccin de cada una de las muestras,
agrgueles 3 ml de cloroformo, mezcle bien. Agregue despus 1 ml de anhdrido actico, agite y
adicione con cuidado 3 gotas de cido sulfrico, por las paredes del tubo. Observe la coloracin en
la interfase al minuto y a los 15 minutos. Explique.
3.2.3 Saponificacin: A una cantidad anloga a la anterior de las fracciones, agregue 3 ml de
NaOH al 15% coloque en la boca del tubo una estera de vidrio y ponga al bao mara durante 20
minutos. Aada 15 ml de ter etlico y filtre los jabones resultantes. Despus de la hidrlisis
neutralizar con cido actico al 10% usando fenolftalena como indicador.
Colina: A 10 ml del filtrado anterior aadir 6 ml de Reineckato de amonio al 2% en etanol y
colocarlo en nevera por 30 minutos hasta que cristalice.
cidos nucleicos
Muestra M5: Tome una traccin de la correspondiente a los cidos nucleicos, adicione 3 mI de
KOH 2 N y coloque en la boca del tubo una esfera de vidrio. Ponga el tubo al bao mara durante
30 minutos. Acidifique la solucin con HCI y observe si se forma precipitado. Separe ste por
centrifugacin.
Pentosas: A 0,5 ml del sobrenadante anterior adicione 0,5 ml de solucin de bencidina al 0,4% en
cido actico caliente la solucin al bao mara durante 10 minutos, colocando una bola de vidrio
en la boca del tubo. Observe la coloracin. Repita la experiencia con 0,5 ml de solucin patrn de
133
pentosa.
135
136
Expresin de resultados
Calcular el porcentaje de lpidos totales, lecitina, colesterol y triglicridos presentes en la yema de
huevo.
Comparar con los valores reportados en la bibliografa.
Escribir las reacciones de caracterizacin de cada uno de los lpidos extrados.
Cuestionario
1.
2.
3.
4.
5.
Para todo el grupo se corrern nicamente dos blancos. En tales balones se coloca lo mismo a
excepcin de la muestra.
Llevar los balones al digestor, calentar al principio suavemente-aproximadamente durante 15
minutos-con el fin de sacar por evaporacin la mayor parte de la humedad que acompaa a la
muestra. Aumentar luego gradualmente el calor hasta una temperatura tal, que los vapores de SO3
(precaucin: estos son producidos por descomposicin del H2SO4, causan irritacin y producen tos
de no hacerse la operacin en vitrina) no alcancen sino la mitad del cuello del baln de digestin.
Mantener estas condiciones aproximadamente por una hora, hasta obtener una solucin de color
verde esmeralda. Dejar enfriar los balones al aire.
137
Destilacin y absorcin
En la figura 66 se muestra el aparato correspondiente. Al baln del generador de vapor se agregan
perlas de vidrio o trozos de corcho o vidrio para ayudar a regular la ebullicin.
Operar el generador de vapor hasta alcanzar un flujo constante de vapor, lo que se consigue
aumentando o disminuyendo el calor. Entre tanto, la llave de doble paso debe conducir el vapor al
vertedero. Agregar con cuidado un poco de agua destilada al baln de digestin y agitar para
disolver la suspensin. Transferir totalmente la mezcla digerida al baln de destilacin que tiene
cuello esmerilado.
Lavar unas tres veces el baln de digestin con pequeas porciones de agua destilada y agregar
estas aguas de lavado al baln de destilacin.
Medir 10 ml de H3BO3 al 4% en un erlenmeyer de 125 ml, agregar 3 gotas de indicador y colocarlo
debajo del refrigerante, de modo que la punta del tubo interior del mismo quede sumergida en el
cido brico, ver figura 66.
Coloca el baln de destilacin que contiene la mezcla digerida en el extremo del tubo que conduce
el vapor y asegurarse que quede perfectamente ajustado para prevenir escapes. Levantar la tapa
del embudo (cuidando de dejar un pequeo nivel en el mismo para que acte como sello) para
permitir el paso de aproximadamente unos 5 ml de NaOH del 50%. Tapar rpidamente el embudo y
operar la llave de doble paso para que el vapor penetre al baln de destilacin al cual se le acaba
de agregar la soda concentrada.
A partir del momento en que empiecen a condensarse vapores de NH3 en la parte superior del
refrigerante, lo cual se conoce porque la solucin de cido brico vira a un violeta o azul,
cronometre cinco minutos. Transcurrido este tiempo, baje el erlenmeyer de modo que el extremo
del tubo interior del refrigerante quede por encima del nivel del lquido en el erlenmeyer. Hecha la
138
anterior operacin, esperar tres minutos ms para que el refrigerante escurra y se lave.
Con el frasco lavador, lave la punta del refrigerante y reciba estas aguas de lavado en el
erlenmeyer. Desmontar el baln de destilacin y dejar pasar el vapor para efectos de lavado.
Operar enseguida la llave de doble paso para dirigir el vapor hacia el vertedero.
Por ltimo, con el frasco lavador, lavar tambin el extremo del tubo que conduce el vapor al baln
de destilacin, con el fin de dejarlo limpio para la prxima destilacin.
Titulacin : Titular el destilado del blanco recogido sobre el cido brico, con el HCI estndar,
hasta alcanzar la misma coloracin que tena antes de recibir el destilado.
El destilado de cada muestra recogido sobre el cido brico, que por efecto del NH3 absorbido ha
tomado color azul, se titula con el mismo cido, hasta obtener una coloracin final igual a la
alcanzada con el blanco.
Expresin de resultados
A partir de los volmenes de cido gastados en las titulaciones de la muestra (Vm) y el blanco (Vb),
calcular el porcentaje de nitrgeno total con la ecuacin:
%N =
Donde:
Nt = nitrgeno total
Vm = Volumen de HCI gastado en la muestra
Vb = Volumen de HCI gastado en el blanco
N = Normalidad del HCI
y el porcentaje de protena bruta, aplicando la ecuacin:
% Pr otena Bruta = %Nt x
100
16
Comparar los valores obtenidos con los que se hallen en la literatura consultada para la leguminosa
o el cereal analizado.
Incluir en su informe el contenido de protenas en: soya, maz, trigo, cebada, frjol, arveja, lenteja,
garbanzo, papa y leche.
139
Cuestionario
1. Qu se conoce con el nombre de protena bruta?, de protena real? Cmo se determinara
cada una utilizando el mtodo de micro-Kjeldahl?
2. Al comparar los mtodos de Biuret y Kjeldahl qu ventajas y desventajas encontrara en cada
uno?
3. Explique porqu el contenido total de protena determinado sobre una muestra de harina
vegetal, no es el mismo que se determina sobre un extracto de la misma harina con NaCI 1%.
4. El factor de conversin usado (6,25) es vlido cuando se determina el contenido de protena
en leches? Explique su respuesta.
Sistema de Evaluacin
Evaluacin individual:
cada estudiante debe presentar en forma escrita u oral lo solicitado en el pre informe.
Evaluacin grupal:
el grupo de trabajo debe presentar un informe escrito en la fecha acordada por el tutor , que contenga:
portada, introduccin, objetivos, tabla de resultados, anlisis y confrontacin de resultados, desarrollo de
tem Evaluado
Asisti y particip
activamente del
desarrollo de la
prctica
Valoracin Baja
El estudiante no
asisti.
(Puntos = 0)
Valoracin Media
Valoracin Alta
El estudiante
particip de
manera
pertinente con
la actividad
durante el
desarrollo del
laboratorio
Mximo
Puntaje
10
(Puntos = 7.0)
140
(Puntos = 0).
(Puntos = 5.0 )
Estructura del
Informe( portada,
introduccin,
objetivos,
desarrollo(
resultados y
anlisis) ,
conclusiones y
referencias)
El informe no presenta
una excelente
estructura.
(Puntos = 0)
Hay entrega de
los productos
solicitados y
contenido es
pertinente.
20
(Puntos =10)
El informe
presenta una
excelente
estructura y
presentacin.
5
(Puntos = 0.5 )
(Puntos =1.0)
mximo de hojas 8
Redaccin y
ortografa
El informe presenta
deficiencias en
redaccin y errores
ortogrficos
(Puntos = 0)
El informe no da
respuesta a los
lineamientos de las
prcticas de laboratorio.
No hay errores de
ortografa y el documento
presenta una mediana
articulacin de las ideas y
la estructura de los prrafos
(Puntos = 0.5 )
La redaccin es
excelente, las
ideas estn
correlacionadas,
y el cuerpo del
texto es
coherente en su
totalidad
(Puntos 1.0)
El informe
presenta una
excelente
articulacin entre
los resultados y el
anlisis de
45
resultados.
Se evidencia la
profundidad de los
anlisis.
(Puntos = 8)
Referencias
Se maneja de manera
inadecuada el uso de
citas y referencias
(Puntos = 0)
Aunque presenta
referencias, estas no se
articulan adecuadamente
con el trabajo
(Puntos = 0.5)
El manejo de
citas y
referencias es
satisfactorio
(Puntos = 1.0)
141
90
Nota: La puntuacin anterior puede ser ponderada de acuerdo al # de sesiones en cada Cead, de
acuerdo a los recursos disponibles, para lo cual dicha ponderacin debe guardar relacin proporcional con
los tems de la rbrica general que se presenta.
Retroalimentacin
El tutor de la prctica tendr diez (10) das hbiles para enva o entregar la respectiva retroalimentacin
del informe de laboratorio siguiendo lo estipulado en la rbrica de evaluacin.
142
7. FUENTES DOCUMENTALES
DE
143
ANEXO
ASPECTOS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
13
El trabajo en el laboratorio requiere la observacin de una serie de normas de de seguridad que eviten
posibles accidentes debido a desconocimiento de lo que se est haciendo.
3.1 NORMAS PERSONALES
Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su material.
Es conveniente la utilizacin de bata, ya que evita que posibles proyecciones de sustancias qumicas
lleguen a la piel. Por supuesto adems, evitars posibles deterioros en sus prendas de vestir.
Antes de utilizar un compuesto, asegurarse bien de que es el que se necesita, fijarse bien el rtulo.
No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados sin consultar con
el profesor.
Verifica el voltaje de trabajo del instrumento antes de enchufarlo. Cuando los instrumentos no estn
siendo usados deben permanecer desenchufados.
Usa siempre guantes de asbesto, para el aislamiento trmico, al manipular material caliente.
Es muy importante que cuando los productos qumicos de desecho se viertan en la pila de desage,
aunque estn debidamente neutralizados, debe dejarse que circule por la misma, abundante agua.
No tocar con las manos y menos con la boca, los productos qumicos.
No pipetear con la boca, se debe utilizar una pera manual o dispositivo que se disponga para tal fin.
Los cidos requieren un cuidado especial. Nunca se debe adicionar agua sobre ellos, cuando se
quiera diluirlos; siempre al contrario, es decir, cido sobre agua. Tenga en cuenta que normalmente
hay desprendimiento de calor.
Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) no deben estar cerca de fuentes de calor. Si
hay que calentar tubos con estos productos, se har al bao Mara, nunca directamente a la llama.
Si se vierte sobre ti cualquier cido o producto corrosivo, lvate inmediatamente con mucha agua y
avisa al profesor.
Cuidado con los bordes y puntas cortantes de los tubos u objetos de vidrio.
El vidrio caliente no se diferencia a simple vista del vidrio fro. Para evitar quemaduras, dejarlo enfriar
antes de tocarlo.
Las manos se protegern con guantes o trapos cuando se introduzca un tapn en un tubo de vidrio.
Si tienes que calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo, observa cuidadosamente estas
dos normas:
o Ten sumo cuidado y ten en cuenta que la boca del tubo de ensayo no apunte a ningn
compaero. Puede hervir el lquido y salir disparado, por lo que podras ocasionar un
accidente.
o Calienta por el lateral del tubo de ensayo, nunca por el fondo; agita suavemente.
Cuando se determinan masas de productos qumicos con balanza, se colocar papel de filtro sobre
los platos de la misma y si es necesario, porque el producto a pesar fuera corrosivo, se utilizar un
vidrio de reloj.
Se debe evitar cualquier perturbacin que conduzca a un error, como vibraciones debidas a golpes,
aparatos en funcionamiento, soplar sobre los platos de la balanza, etc.
3.2 NORMAS PARA EL MANEJO DE REACTIVOS Y SOLUCIONES
La alta calidad en un anlisis qumico requiere reactivos y soluciones de excelente pureza. Las siguientes
normas deben observarse para prevenir la contaminacin accidental de los reactivos y de las soluciones:
13 13
144
Seleccionar el reactivo qumico de mejor calidad que se encuentre disponible. Elegir la botella de
menor volumen para obtener la cantidad deseada.
Tapar la botella inmediatamente despus de haber tomado la cantidad deseada. Por ningn motivo
delegue a otro esta accin.
Mantener los tapones de las botellas de los reactivos entre los dedos, nunca debe colocarse un
tapn sobre la mesa.
A menos que se diga otra cosa, nunca se debe devolver el reactivo a una botella. El dinero ahorrado
por retornar el exceso de reactivo rara vez supera el riesgo de contaminar toda la botella.
A menos que se diga otra cosa, nunca se deben insertar esptulas, cucharas, o cuchillos en una
botella que contenga un reactivo slido.
Sustancias slidas
Como costumbre se debe leer la etiqueta de un reactivo antes de usarlo. Los reactivos slidos
normalmente se almacenan en recipientes de boca ancha y antes de abrirlos se gira e inclina la
vasija de tal manera que algo del contenido pase a la tapa plstica. A continuacin se remueve
cuidadosamente la tapa con slido dentro de ella y se golpea suavemente hasta obtener la cantidad
deseada. Cuando se requieren cantidades apreciables comparadas con el contenido del frasco, se
inclina la botella suavemente y se gira hacia atrs y hacia adelante hasta retirar lo necesario. Si el
reactivo se encuentra compactado, se tapa el recipiente y se agita fuertemente para lograr romper los
terrones. Evitar introducir elementos como destornilladores, esptulas de hierro u otro objeto que
pueda contaminar el slido. Si el reactivo es muy fino y libera polvo fcilmente, debe utilizarse una
mascarilla apropiada.
Sustancias lquidas
Los lquidos se almacenan por lo general en recipientes de boca angosta o en frascos con gotero.
Para medir una cantidad de lquido, sea una solucin o un lquido puro, se debe sacar una pequea
porcin a un vaso limpio y seco, y de all se toma la cantidad requerida mediante una pipeta. No
deben introducirse pipetas o cualquier otro dispositivo directamente dentro de la botella que contiene
el lquido, esto conduce generalmente a la contaminacin de todo el contenido.
Cuando se van a transferir lquidos desde un gotero tipo medicinal, la manera ms correcta es verter
el lquido sin introducir el gotero en el recipiente en el cual se va a almacenar el lquido, para evitar la
posibilidad de contaminacin del gotero y de la solucin original.
145
Sustancias explosivas
Peligro. Este smbolo sealiza sustancias que pueden explotar bajo determinadas condiciones.
Ejemplo: dicromato de amonio.
Precaucin. Evitar choques, percusin, friccin, formacin de chispas y contacto con el calor.
Lquidos inflamables
En trminos muy sencillos, los lquidos inflamables son aquellos que fcilmente pueden arder. El que
un lquido arda con ms o menos facilidad depende de su punto de llama. Entre ms bajo sea este
punto ms fcilmente arde el reactivo y por lo tanto mayor cuidado se ha de tener en su manejo,
almacenamiento y transporte. Con estos lquidos se ha realizado una clasificacin teniendo en cuenta
lo anteriormente expuesto y su solubilidad en el agua:
o
Peligro Clase A
Esta clasificacin se le asigna a lquidos que tienen un punto de llama por debajo de 100 C
y que no se disuelven en el agua a 15 C.
AI
AII
AIII
Peligro Clase B
Esta clasificacin se le asigna a lquidos que tienen punto de llama por debajo de 21 C y
que se disuelven en agua a 15 C, o a aquellos cuyos componentes inflamables se
disuelven en agua tambin a 15 C. Este tipo de lquidos no se puede apagar con agua.
146
Sustancias txicas
Peligro: Tras una inhalacin, ingestin o absorcin a travs de la piel pueden presentarse, en
general, trastornos orgnicos de carcter grave o incluso la muerte. Ejemplo: trixido de arsnico,
cloruro
de
mercurio
(II).
Precaucin: Evitar cualquier contacto con el cuerpo y en caso de malestar acudir inmediatamente al
mdico.
Sustancias nocivas
Peligro: La incorporacin de estas sustancias por el organismo produce efectos nocivos de poca
trascendencia. Ejemplo: tricloroetileno. Precaucin: Evitar el contacto con el cuerpo humano as
como la inhalacin de vapores. En caso de malestar acudir al mdico.
Sustancias corrosivas
Peligro: Por contacto con estas sustancias se destruye el tejido vivo y tambin otros materiales.
Ejemplo: bromo, cido sulfrico. Precaucin. No inhalar los vapores y evitar el contacto con la piel,
los ojos y la ropa.
Sustancias irritantes
Peligro: Este smbolo destaca en aquellas sustancias que pueden producir accin irritante sobre la
piel, los ojos y sobre los rganos respiratorios. Ejemplo: amonaco, cloruro de bencilo. Precaucin.
No inhalar los vapores y evitar el contacto con la piel y los ojos.
PREPARACIN DE REACTIVOS14
14 14
147
Procedimiento
Cuando se requiera el reactivo, se debe mezclar en un tubo de ensayo dos gotas de una disolucin de NaOH
al 5% y 1.0 mL de disolucin acuosa de AgNO3 al 5%. Agitar el tubo y aadir gota a gota NH4OH 2N, hasta
que se consiga disolver el precipitado de AgOH, que previamente se haba formado. Si es necesario se debe
filtrar la solucin.
No se debe exceder en el uso del NH4OH 2N para que el reactivo as preparado sea bastante sensible. Debe
trasladarse a un frasco opaco ya que la solucin puede ser alterada por la accin de la luz.
Precaucin
El isocianato de plata, AgNCO, compuesto muy explosivo en seco, puede estar presente en los residuos de
las soluciones del reactivo de Tollens; por esta razn, es conveniente tirar el resto de la disolucin de Tollens
no utilizada y lavar los tubos con HNO3 diluido (disuelve el espejo de plata formado).
4.4 REACTIVO DE FEHLING DETECCIN DE AZCARES REDUCTORES
El reactivo de Fehling, tambien conocido como Licor de Fehling, es una disolucin descubierta por el qumico
alemn Hermann von Fehling y que se utiliza como reactivo para la determinacin de azcares reductores.
Sirve tambin para demostrar la presencia de glucosa en la orina.
El ensayo con el licor de Fehling se funda en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehdo. ste se
oxida a cido y reduce la sal de cobre (II) en medio alcalino a xido de cobre (I), que forma un precipitado de
color rojo. Un aspecto importante de esta reaccin es que la forma aldehdo puede detectarse fcilmente
aunque exista en muy pequea cantidad. Si un azcar reduce el licor de Fehling a xido de cobre (I) rojo, se
dice que es un azcar reductor.
Se utiliza como reactivo para la determinacin de azcares reductores, y es til para demostrar la presencia
de glucosa en la orina, y tambin para detectar derivados de la glucosa como la sacarosa o la fructosa.
148
Cuando se requiera su utilizacin se mezclan volmenes iguales de cada una de las soluciones. Ambas
soluciones se guardan separadas hasta el momento de su uso para evitar la precipitacin del hidrxido de
cobre (II).
4.5 REACTIVO DE BIURET DETECCIN DE PROTENAS
Para la deteccin de protenas en los alimentos se usa el reactivo de Biuret. cual se fundamenta en la
formacin de un complejo coordinado entre los iones cpricos del reactivo y el enlace peptdico de la protena,
reaccin que transcurre en medio alcalino.
Si al agregar unas gotas del reactivo la muestra no cambia de color, la reaccin es negativa; en este caso se
puede decir que la muestra no contiene protenas o presenta una cantidad que no es posible detectar. Si la
muestra cambia de color, primero a un tono rosado, luego se pone azul y, finalmente, violeta, la reaccin es
positiva, lo que indica la presencia de protena.
Reactivos
1.
2.
3.
Procedimiento
Disuelva 2.5 g de sulfato cprico en un litro de agua destilada. Disuelva 440 g de hidrxido de sodio en un litro
de agua destilada. Luego mezcle estas dos soluciones. Esta preparacin debe almacenarse en botellas
oscuras (color mbar).
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