Practica No.

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CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA Y COLUMNA
Jhon Burbano(28140219) , Marlon Riascos(27140275)
Departamento de Qumica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de
Nario. Sede Torobajo. Cra 18 Clle 50 , Pasto. Colombia
RESUMEN
En esta prctica se estudi y se aplic el concepto de cromatografa, tanto de
columna como de capa delgada, aplicndolas como tcnicas de separacin de
mezclas y como tcnica de anlisis de los componentes de una mezcla a
separar o ya separados respectivamente; utilizando la tcnica de cromatografa
en columna se logro la separacin de la mezcla de Naranja de metilo y Violeta
cristal utilizando como eluyentes etanol y etanol:trietilamina 9:1
respectivamente ; por la tcnica de cromatografa de capa delgada se observo
el comportamiento de los colorantes puros y de la mezcla de los dos colorantes
, determinndose tambin su Rf : 0.79 y 0.43 para naranja de metilo y violeta
cristal respectivamente, utilizando como eluyente etanol:trietilamina 1:9.
INTRODUCCION
La cromatografa es una tcnica de
fraccionamiento que permite
separar, aislar e identificar los
componentes de una mezcla. La
cromatografa constituye un mtodo
fsico de separacin en el cual los
componentes a separar se
distribuyen entre dos fases: una
estacionaria (solida o liquida) de
gran rea superficial , y una fase
mvil (liquida o gaseosa), esta
ultima pasa a travs de la fase
estacionaria.
La cromatografa de capa delgada
(C.C.D.) es una tcnica de adsorcin
solido-liquido, donde la fase mvil
asciende por capilaridad a travs de
una capa delgada de adsorbente
adherida a un soporte, esta tcnica
permite determinar la relacin de
frente (Rf), definido por:

Rf =

(a) Distancia recorrida por elcompuesto

(b) distanciarecorrida por el solvente

Este valor se encuentra en el rango

de 0 a 1, y es constante para cada
compuesto, teniendo en cuenta el
conjunto de variables en la
cromatografa como son : tipo de
adsorbente, eluyente, as como
tambin las condiciones de la placa,
temperatura, vapor de saturacin,
entre otras.1

Figura No.1. Cromatografa de capa

delgada1

La cromatografa de columna (C.C)

se emplea para separacin de
mezclas y sustancias a escala
preparativa; la fase estacionaria es
ubicada en una columna y el

disolvente pasa a travs de ella por

efecto de gravedad. Este mtodo
presenta ciertas ventajas frente a la
C.C.D. , como por ejemplo, permite
sembrar y separar mayor cantidad
de muestra, se pueden realizar
cambios secuenciales de la
polaridad del disolvente de elusin,
lo que mejora la eficiencia de la
separacin.2
La cromatografa en columna y en
capa delgada solo difieren en el
medio de soportar el adsorbente. En
ambas se emplea almina (Al2O3) o
gel de slice (cido silcico,
SiO2.xH2O) como fase estacionaria ,
y una fase mvil orgnica. Los
principios que se aplican a una
variante de la tcnica
cromatografa, se aplican tambin a
las dems variantes. 3

Figura No.2 . Estructura Silica gel

interacciones con algunos compuestos
polares4

RESULTADOS Y DISCUSION
1.Cromatografia de Columna
Para este procedimiento se utilizo
como fase estacionaria slica gel, de
la cual se peso 3 g , se mezclo con
etanol y se trasvaso a la columna,
buscando de esta manera obtener
la fase estacionaria lo ms
compacta posible.
Se logr la separacin de la mezcla
de tintes, obtenido en primer lugar
la fraccin de naranja de metilo, se
utilizo como eluyente etanol hasta

observar que se ha recogido en su

gran mayora el colorante naranja
de metilo; seguido de esto se
agreg como eluyente la mezcla
etanol:trietilamina 9:1, permitiendo
as recoger el colorante violeta
cristal, como se muestra en la
siguiente figura:

Figura No.3. Proceso separacin C.C.5

Analizando los resultados obtenidos

se observa que en el primer paso ,
donde se utiliza como eluyente
etanol, este permite la separacin
del colorante naranja de metilo;
teniendo en cuenta que la adsorcin
se debe a interacciones
intermoleculares del tipo dipolodipolo, dipolo-dipolo inducido o
enlaces de hidrogeno, entre el
adsorbente y el soluto, para este
caso el naranja de metilo, como se
muestra en la figura No.4, tiene tres
grupos polares como son SO3Na y 2
aminas , mientras que el violeta
cristal tiene 3 aminas ; generndose
de esta manera entre el colorante
naranja de metilo y la fase
estacionaria fuerzas
intermoleculares no tan fuertes
como las de el colorante azul cristal
y la silica gel..

Figura No.4.Estructura Naranja de

Metilo5

Para extraer el colorante violeta

cristal , se utilizo como eluyente
etanol:trietilamina 9:1, debido a que
segn la estructura del colorante
como se muestra en la figura No.5,
este tendr ms afinidad con el
eluyente que con la silica gel ,
puesto que el eluyente contiene en
cierta proporcin una amina,
permitiendo as atraer el colorante
por la disminucin de fuerzas
intermoleculares mayores entre el
colorante y la fase estacionaria.

Figura No.5. Estructura Violeta Cristal.5

2.Cromatografia de capa
delgada (C.C.D)
La mezcla de colorantes, y las
fracciones obtenidas de cada
colorante por la tcnica de
cromatografa de columna, se
analizaron en cromatografa de capa
delgada , utilizando como
adsorbente gel de slice; debido a
que los colorantes ya separados, se
encontraban muy diluidos en los
respectivos eluyentes, no fue
posible observar las distancias
recorridas por cada uno de los
colorantes. Teniendo en cuenta este
resultado, se analizaron por esta
misma tcnica la mezcla de
colorantes y los colorantes puros,
obteniendo los siguientes
resultados:

La cubeta de cromatografa
contena etanol:trietilamina en una
proporcin 9:1, por lo tanto la
proporcin de etanol ser mucho
mayor y por la baja polaridad del
naranja de metilo en comparacin
con el violeta cristal, el colorante
naranja de metilo fue arrastrado por
este eluyente mucho ms que el
colorante violeta cristal ; la
proporcin de trietilamina arrastr
hasta cierta posicin el colorante
violeta cristal, por la razones ya
expuestas.
Con los resultados obtenidos de
distancia recorrida para cada
solucin, se calculo el valor de Rf
para cada caso as:

Colorante Naranja de metilo:

a = 3.1cm
b = 3.9cm

Rf =

3.1cm
=0.79
3.9 cm

Colorante Violeta cristal:

a = 1.7cm
b = 3.9cm

Rf =

1.7 cm
=0.43
3.9 cm

Teniendo en cuenta estos

resultados, se compararon los
valores de Rf de los colorantes
empleados:

Naranja de metilo
cristal
0.79
>

Violeta
0.43

Por lo tanto se reafirma que el

colorante Naranja de metilo es
menos polar que el colorante Violeta
cristal.
CUESTIONARIO
1.Explique con base en las
estructuras de los tintes,
porque y como se separan los
compuestos de la mezcla de
tintes?
La cromatografa en capa fina y de
columna son las tcnicas de
separacin e identificacin de
sustancias qumicas colorantes, por
la diferente retencin que
experimentan los componentes de
la mezcla de tintes, al ser ms o
menos adsorbidos por los
componentes de una fase fija,
cuando son arrastrados por un
disolvente. Este adsorbente,
generalmente con un adhesivo, se
deposita sobre una hoja de vidrio o
de otro material que acta como
soporte inerte de la capa.
Intervienen los fenmenos de
adsorcin y disolucin, por
consiguiente es fundamental tener
en cuenta la polaridad, tanto de las
sustancias a arrastrar como del
disolvente, si queremos tener una
buena separacin.6
2.Cual es el desarrollo mltiple
y el desarrollo bidimensional en
CCD?
El desarrollo mltiple implica la
vaporizacin del disolvente despus
de que el frente de disolventes ha
alcanzado el extremo de la hoja ,
seguida de la repeticin del
desarrollo en la misma direccin.

El desarrollo bidimensional , implica

el uso de dos disolventes sucesivos,
el cromatograma se desarrolla
primero en una direccin , se seca
luego para evaporar el primer
disolvente, se gira 90, y se
desarrolla por segunda vez con un
segundo disolvente.7
3.En que consiste la
cromatografa de CCD
preparativa?
La cromatografa preparativa se
diferencia de la tcnica bsica en
muchos aspectos; la preparacin de
la capa delgada, debe hacerse con
menos agua que de ordinario. Una
mezcla ms espesa ayuda a
estabilizar el grosor de las placas
que se precisa para una carga de
mayor magnitud. El espesor ptimo
oscila desde un mnimo de 1 mm.
Hasta un mximo de 2 mm. Las
placas utilizadas en cromatografa
preparativa son placas grandes, de
aproximadamente 20x20 cm. que
permiten separar aproximadamente
1 g. de mezcla utilizando unos 35 g.
de adsorbente.
La siembra de la muestras realiza a
lo largo de una lnea recta, si al
terminar la primera siembra todava
queda muestra, se seca la primera
siembra y se aplica la segunda,
intentando que sta quede sobre la
anterior, para as conseguir que el
frente sea lo ms estrecho posible.
La siembra debe realizarse a lo
ancho de la placa.
Una vez sembrada la muestra se
desarrolla la cromatografa.
Una vez localizados los compuestos,
stos se extraen de la fase
estacionaria, uno a uno, con la
ayuda de una esptula, sobre un
papel de filtro u otro soporte.
Posteriormente se coloca cada
componente en un erlenmeyer, y se

mezcla con un disolvente (metanol).

Una vez disuelto el compuesto se
filtra varias veces para separar el
compuesto y la fase estacionaria.
Una vez separado se elimina el
disolvente (destilacin), con lo cual
se obtiene el componente
separado.8
4.Que es una resina de
intercambio anionica?y una
resina cationica?
Las resinas de intercambio inico,
permiten el intercambio entre los
iones presentes en un slido:
Resinas Cationicas:
Intercambia iones positivos
(cationes)
Estructura con grupos funcionales
cidos
(Resina cido fuerte/cido dbil)
Ej. Fuerte: Ac. Sulfnica
Resinas Anionicas:
Intercambia iones negativos
(aniones)
Estructura con grupos funcionales
bsicos
(Resina base fuerte/base dbil)9
CONCLUSIONES
Segn los resultados obtenidos
usando la tcnica de cromatografa
de columna y cromatografa de
columna, se observ que la
separacin de las mezclas de
colorantes como este caso ,
depende de las fuerzas
intermoleculares generadas al
entrar en contacto con una fase
estacionaria como la silica gel ,
como tambin depender en gran
parte de la naturaleza del eluyente,
pues su composicin y proporcin
en cuanto a mezcla de eluyente ,
permitir la separacin de los
componentes de la mezcla.

Un aspecto importante para tener

en cuenta en la separacin de
mezclas utilizando la tcnica de
cromatografa por columna , la
eficiencia del mtodo depender
adems de escoger la fase
estacionaria y el eluyente
adecuado, de la manera en que se
empaca la fase estacionaria, pues
para este caso , una manera muy
efectiva de empaquetamiento fue
mezclar la silica gel y el eluyente
(etanol), en un beaker y
posteriormente trasvasar a la
columna, obteniendo una fase
estacionaria muy compacta, sin
presencia de fisuras, ni burbujas,
permitiendo as una optima
separacin.
Teniendo en cuenta el desarrollo de
la prctica, la tcnica de
cromatografa por capa delgada
permite en gran medida conocer el
comportamiento de los
constituyentes de una mezcla al ser
separados por esta tcnica, a
pequea escala, para segn los
resultados obtenidos, montar un
sistema de cromatografa por
columna para as llevar a cabo el
proceso de separacin; como
tambin la tcnica C.C.D permite
verificar si la separacin de los
componentes de una mezcla se
realizo de manera correcta , pues en
el barrido realizado para cada
colorante o compuesto mostrara
una sola mancha, indicando una
separacin efectiva, y dos o varias
manchas en el mismo camino de
corrido, indicara una separacin
fallida.
REFERENCIAS
[1]. Enlace web:
http://organica1.org/1311/1311_6.p

df, visitado el da 29 de Abril de

2012.

Facultad de Farmacia, Universidad

de Alcal.

[2].lamerque, A..Fundamentos
teorico-practicos de Qumica
Orgnica. Ed.Encuentro Argentina,
2008. 55-64.

[6].Enlace web:
http://www.panreac.es/spanish/pract
icas/practicas24.htm, visitado el da
29 de Abril de 2012.

[3].Durst, H.; Gokel, G..Qumica

Orgnica Experimental. Ed. Revert,
Espaa, 2007, 79.

[7].Harris, W.; Laitinen, H.. Anlisis

Qumico, Ed.Reverte S.A., Espaa,
1982, 550.

[4].Cruz, A.; Padilla, I.; Garca,

E..Manual de prcticas. Laboratorio
de Qumica Bioorganica, Academia
de Qumica, Unidad Profesional
Interdisciplinaria de Biotecnologa,
Mxico, 2009, 121.

[8]. Enlace web:

http://www.textoscientificos.com/qui
mica/cromatografia/bidimensional,
visitado el da 29 de Abril de 2012.

[5].Manual de Prcticas de
Laboratorio de Qumica Orgnica.
Departamento de Qumica Orgnica,

[9].Enlace web:
http://webdelprofesor.ula.ve/ingenie
ria/csalas/OPIV/intercambio_ionico.p
df, visitado el da 29 de Abril de
2012.