Universidad Autnoma Benito Jurez De Oaxaca

Facultad de Odontologa

Bioqumica

Cintica Enzimtica

mayo de 2010

GENERALIDADES

as ENZIMAS son catalizadores proteicos

que aceleran la velocidad de una
reaccin. Actan en condiciones muy
suaves, a temperatura por debajo de

70C,
con un PH de +- 7.
Tienen un alto Grado De Especificidad, solamente
catalizan la reaccin en que participa un sustrato
un grupo de sustratos con ciertas caractersticas
qumicas y geomtricas comunes.

Sustrato es una molcula sobre la que acta una enzima

El sustrato se une al sitio activo de la enzima, y se forma un complejo
transformado en enzima-sustrato.
El sustrato por accin de la enzima es producto y es liberado del sitio activo,
quedando libre para recibir otro sustrato.
ESPECIFICIDAD, SITIO ACTIVO Y GRUPOS CATALTICOS
Las enzimas se unen a los sustratos por medio de interacciones hidrofbicas y
electrostticas, puentes de hidrgeno y fuerzas de van der Waals.
Los residuos de aminocidos de la enzima que participan en la interaccin con el
sustrato estn alejados unos de otros; pero
como resultado de la unin del plegamiento
de la protena, se agrupan para formar el sitio
activo de la enzima. Algunos residuos
participan solo en la unin del sustrato y
definen una regin del sitio activo que se
llama sitio de fijacin o de unin de los
sustratos.
Los catalticos (residuos), se encargan de la
transformacin del sustrato en producto.
Normalmente, el nmero de residuos que
intervienen en la unin del sustrato es mayor que el de residuos catalticos.
Debido al plegamiento de la protena, su localizacin se encuentra en los surcos o
huecos de la superficie de la encima.
COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO

La unin del sustrato a la enzima se puede explicar por medio de dos

mecanismos:
Modelo De La Llave Y La Cerradura
Considera que el sitio activo de la enzima est
preformado, de tal manera que los residuos de
aminocidos mantienen una posicin fija y complementaria
los grupos del sustrato.

La lisozima presente en las lagrimas es capaz de

hidrolizar uno de los polisacridos presentes en las
paredes bacterianas, es uno de los pocos casos que se
adapta a este modelo.
Modelo Del Ajuste Inducido
Se propone que al interactuar el sustrato con la
enzima se inducen cambios conformacionales en
sta, que dan lugar a la formacin del sitio activo.
Se ha dicho que la enzima asemeja a un guante
vacio, y la presencia del sustrato equivale a
introducir la mano en el guante, con lo que da la
forma precisa al sitio activo.

NOMENCLATURA DE LAS ENZIMAS

El sistema de nomenclatura de la Unin Internacional de Bioqumica (UIB) clasifica
a las enzimas con base en la reaccin qumica que catalizan.

LIs iaigo msa as esa r s a s a s

OTH r ixad indr sfo l rae sare a d sas u cs t a sa s

CINTICA ENZIMTICA

VELOCIDADES INCIALES

Se muestra la aparicin del Producto (P) en

Funcin del Tiempo (t). En los primeros minutos,
la formacin del producto es lineal. En esta regin
se obtiene la velocidad inicial de reaccin.

Produ
cto
(P)

Antes de comenzar con el estudio de la cintica enzimtica es conveniente

aclarar el significado de VELOCIDAD INICIAL de
Pendiente a t =
una reaccin.

Tiempo

En tiempos ms largos se desva, se puede deber a

que la concentracin de sustrato disminuye en
forma apreciable, a que la enzima se inhibe con el
producto conforme pasa el tiempo.
Por tanto, cuando se realiza un estudio de cintica enzimtica, es fundamental
que las velocidades que se obtienen sean las inciales.
ORDEN DE LA REACCIN
Segundo Orden
La velocidad Inicial en una reaccin en que participan 2 reactantes depende de
la concentracin de cada uno de ellos y de su tendencia inherente a reaccionar.
Si se mantienen constantes las condiciones de la reaccin, pero se duplica la
concentracin de uno de los reactantes. Ocurre lo mismo en la velocidad de
reaccin si se duplica la concentracin del otro reactante.
Se trata de un caso en que la velocidad de reaccin es proporcional a la
concentracin de las dos reactantes.
Primer Orden
La velocidad de la reaccin es proporcional a la concentracin de solamente uno
de los reactantes y su tendencia inherente a reaccionar.
En el caso, en que una reaccin se descompone en 2 productos; o bien, una
reaccin en la que uno de los reactantes es el agua y el otro esta disuelto en el
agua.
La adicin de ms reactantes disuelto en el agua aumentar proporcionalmente la
velocidad de reaccin.
Orden Cero
Se refiere las que la velocidad de la reaccin es independiente de la
concentracin de reactantes.

MODELOS EN CINTICA ENZIMTICA

Con el modelo se puede predecir el comportamiento de la enzima en otras
condiciones experimentales.
MODELO CINTICO DE MICHAELIS-MENTEN
En este modelo se inicia con la suposicin de que las reacciones catalizadas por
una enzima procede en dos etapas.
Para explicar la relacin observada entre la velocidad inicial (v0) y la
concentracin inicial de sustrato ([S]0) Michaelis y Menten propusieron que las
reacciones catalizadas enzimticamente ocurren en dos etapas:
~En la primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato (ES).
~En la segunda, el complejo enzima-sustrato da lugar a la formacin del producto
(P), liberando el enzima (E) libre:

Se puede distinguir entre enzima libre (E) y enzima unido al sustrato (ES), de
forma que la concentracin total de enzima, [ET], (que es constante a lo largo de
la reaccin) es:
[ET] = [E] + [ES]
Como [E] = [ET] - [ES], resulta que: v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES]
Este modelo cintico adopta la hiptesis del estado estacionario, segn la cual la
concentracin del complejo enzima-sustrato es pequea y constante a lo largo
de la reaccin (Figura de la derecha). Por tanto, la velocidad de formacin del
complejo enzima-sustrato (v1) es igual a la de su disociacin (v2+ v3):
v1 = v 2 + v 3
Adems, como [ES] es constante, la velocidad de formacin de los productos es
constante:
v = v3 = k3 [ES] = constante.

Como v1=v2+v3, podemos decir que:

k1[S] [ET] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] + k3 [ES]
Despejando [ES], queda que:

Siendo:

En donde la expresin (k2+k3)/k1 se ha sustituido por KM, o constante de

Michaelis-Menten.
Por lo tanto, en el estado estacionario, la velocidad de formacin del producto es:
v =v3 = k3 [ES] =
Para cualquier reaccin enzimtica, [ET], k3 y KM son constantes.
Vamos a considerar dos casos extremos:
A concentraciones de sustrato pequeas ([S] << KM),
v = (k3 [ET]/KM) [S].
Como los trminos entre parntesis son constantes, pueden englobarse en una
nueva constante, kobs, de forma que la expresin queda reducida a:
v = kobs [S], con lo cual la reaccin es un proceso cintico de primer orden.

 A concentraciones de sustrato elevadas ([S] >> KM),

v = k3 [ET].
La velocidad de reaccin es independiente de la concentracin del sustrato, y
por tanto, la reaccin es un proceso cintico de orden cero. Adems, tanto k3
como [ET] son constantes, y nos permite definir un nuevo parmetro, la velocidad
mxima de la reaccin (Vmax): Vmax = k3 [ET], que es la velocidad que se
alcanzara cuando todo el enzima disponible se encuentra unido al sustrato.
Si introducimos el parmetro Vmax en la ecuacin general de la velocidad, (la
frmula recuadrada anteriormente), obtenemos la expresin ms conocida de la
ecuacin de Michaelis-Menten:

Hay enzimas que no obedecen la ecuacin de Michaelis-Menten.

Se dice que su cintica no es Michaeliana. Esto ocurre con las enzimas
alostricos, cuya grfica v frente a [S] no es una hiprbola, sino una sigmoide
(Figura).
En la cintica sigmoidea, pequeas variaciones en la [S] en una zona crtica
(cercana a la KM) se traduce en grandes variaciones en la velocidad de reaccin.

GRFICA DE LINEWEAVER-BURK
Se emplea como herramienta grfica para calcular los parmetros cinticos de
una enzima.
Su utilidad consiste en que el recproco de la cintica de Michaelis-Menten es
fcilmente representable y que de l emanan mucha informacin de inters.

Cuyo recproco es:

La representacin grfica de Lineweaver-Burk permite identificar el KM y Vmax; el

punto de corte con el eje de ordenadas es el equivalente a la inversa de Vmax, y el
de abscisas es el valor de -1/Km.
INHIBICIN
Los inhibidores son molculas que interactan con la enzima y disminuye su
actividad cataltica.
Tienen gran importancia desde un punto de vista mdico, debido a que un buen
porcentaje de los medicamentos trabajan como inhibidores de alguna actividad
enzimtica. Su importancia industrial radica en su uso como pesticidas e
insecticidas.
Dentro del campo de la investigacin, como herramientas que se usan para
indagar el orden de los componentes de una va metablica o una estructura
y el mecanismo de reaccin de una enzima.
Conviene pensar en los inhibidores como herramientas poderosas de gran utilidad
y no como molculas que estorban en un ensayo enzimtico.
INHIBICIN COMPETITIVA
La caracterstica ms importante de este tipo de inhibicin es que el sustrato y el
inhibidor son mutuamente excluyentes.
Generalmente, se encuentra que el inhibidor es una molcula con estructura
similar a la del sustrato.

Sin embargo tambin se puede dar el caso de que el inhibidor sea

estructuralmente diferente al sustrato y que, al interactuar con otro sitio diferente
de la enzima, induzca un cambio conformacional que modifique el sitio para el
sustrato.
INHIBICIN NO COMPETITIVA
Es un tipo de inhibicin que reduce la tasa mxima de una reaccin qumica
(Vmax) sin cambiar la afinidad aparente de unin del catalizador por el sustrato.
La inhibicin no competitiva normalmente se aplica a enzimas, y difiere de la
inhibicin competitiva en que el inhibidor siempre se une a la enzima por un
sitio diferente al centro activo de la enzima.
Esto afecta a la tasa de la reaccin catalizada por la enzima ya que la presencia
del inhibidor produce un cambio en la estructura y la forma de la enzima.
En este tipo de inhibicin, no hay competicin entre en inhibidor y el sustrato, as
que incrementar la concentracin del sustrato no produce un aumento de la tasa
de actividad enzimtica.
INHIBICIN ACOMPETITIVA
En la inhibicin acompetitiva, el inhibidor slo se une al complejo enzima
sustrato, y no a la enzima libre.
La adiccin de ms sustrato a la reaccin da lugar a un aumento de la velocidad
de reaccin, pero no hasta el grado que se observa en las reacciones sin inhibir.
La inhibicin acompetitiva suele observarse en las reacciones en las que las
enzimas unen ms de un sustrato.
INHIBICIN IRREVERSIBLE
Los inhibidores irreversibles normalmente se unen covalentemente a la enzima,
con frecuencia a una cadena lateral del lugar activo.
EFECTO DEL PH
El pH no afecta la actividad enzimtica directamente sino que modifica la
concentracin de protones.
Los protones adems de alterar la estructura de la enzima y el sustrato, pueden
participar tambin en la reaccin como sustrato o producto. En esos casos, la
concentracin de protones afecta directamente la velocidad de la reaccin.
Cualquier cambio brusco de pH, sabiendo que las enzimas son protenas, puede
alterar el carcter inico de los grupos amino y carboxilo en la superficie proteica,
afectando as las propiedades catalticas de una enzima.

A pH alto o bajo se puede producir la desnaturalizacin de la enzima y en

consecuencia su inactivacin.
La concentracin de ion hidrgeno afecta a las enzimas de diversas formas.
En primer lugar la actividad cataltica est relacionada con el estado inico del
lugar activo. Las variaciones de la concentracin de ion hidrgeno pueden afectar
a la ionizacin de los grupos de lugar activo.
En segundo lugar, los cambios de los grupos ionizables pueden alterar la
estructura terciaria de la enzima. Los cambios drsticos del pH frecuentemente
conducen a la desnaturalizacin. La mayora de las enzimas son activas dentro
de un intervalo estrecho de PH. Por esta razn. Los seres vivos emplean
amortiguadores para regular estrechamente el pH. El valor de pH al que la
actividad de una enzima es mxima se denomina pH ptimo, y vara
considerablemente segn la enzima.

Efecto De La Temperatura
Cuando se estudia la velocidad de una reaccin qumica en funcin de la
temperatura, y en ausencia de una enzima, se observa un incremento de la
velocidad conforme se aumenta la temperatura. Se debe a dos razones:
a. Al incremento en el nmero de choques por unidad de tiempo, debido al
aumento en la energa cintica de las molculas con la temperatura.
b. Al aumento en el nmero de molculas con la energa de activacin
adecuada para que el choque entre los reactivos sea productivo.

Cuando la reaccin est catalizada por una enzima, es ms complejo, y presenta

un aumento de la actividad.
El aumento inicial en la velocidad se debe las dos razones expuestas. Sin
embargo conforme la temperatura aumenta, la energa trmica de la cadena
polipeptdica crece y predomina sobre las fuerzas que mantienen la estructura
nativa de la enzima.
Debido a la accin conjunta de los factores se produce un mximo en el patrn de
actividad contra Temperatura.
A la temperatura asociada a este mximo de actividad, se le ha llamado,
errneamente temperatura ptima.
COOPERATIVIDAD Y ALOSTERISMO
Existen enzimas que no se ajustan al modelo de Michaelis-Menten y que
presentan el fenmeno de cooperatividad. Esta puede ser Positiva o Negativa.
El origen de la cooperatividad en un sistema enzimtico se encuentra en las
interacciones que existen entre los diferentes sitios de unin de la enzima.
Cuando los ligandos son idnticos, la cooperatividad es homotrpica y, si son
diferentes, es heterotrpica.
La cooperatividad positiva, la unin de un ligado facilita la interaccin de la
enzima con el siguiente ligando; en la cooperatividad negativa, la unin de un
ligando disminuye la afinidad de la enzima por la unin con el siguiente ligando.
Generalmente, las enzimas que presentan el fenmeno de cooperatividad tienen
adems del sitio activo en donde se une el sustrato, otros sitios, llamados
alostricos.
Una de las principales ventajas que aparecen con la cooperatividad positiva es el
incremento de la respuesta de la protena a los cambios en la concentracin de
sustrato.