Uso del 2 Channel Spiker Box para el estudio del

efecto de la cafena en el cordn nervioso ventral

de Acheta Domesticus
Iveth Melisa Guatibonza Arevalo, Ana Mara Moreno Pea. Semillero de Talentos Matemticos y Cientficos de la
Konrad Lorenz

A lo largo de los ltimos nueve meses se llevo a cabo la

construccin del 2 Channel SpikerBox, la preparacin del terrario
para grillos y el estudio de la actividad neuronal del grillo Acheta
Domesticus. Para ello, se desarroll un algoritmo en Python que
asla los potenciales de accin, calcula su amplitud y la
frecuencia de disparo (PA/segundo), con el fin de identificar la
magnitud del aumento de estas caractersticas y la duracin del
Palabras clave: SpikerBox, PA, Acheta Domesticus, cafena.

INTRODUCCIN
El 2 Channel SpikerBox es un instrumento que permite visualizar la actividad
neuronal de pequeos animales, el cual fue diseado por una microempresa
americana llamada Backyard Brains , con el fin de hacer ms asequible la
experimentacin en neurociencia, siguiendo los lineamientos de una iniciativa del

gobierno estadounidense para el fomento del trabajo interdisciplinar en todos los

grados del colegio [1], hecholo cualque se refleja en nuestro proyecto, en la
necesidad de incursionar en reas como la electrnica, programacin,
neurociencias, biologa molecular y salud.
Debido a la influencia de internet, esta iniciativa se ha extendido ms all de
Norteamrica, formando una comunidad global en la cual podemos apoyarnos y a
su vez contribuir con mejoras, nuevos experimentos, comparacin de resultados y
herramientas de anlisis en mirasque contribuyan a lograr ptimos niveles de del
aprendizaje de conceptos fundamentales de neurociencia y para el desarrollo de
habilidades para en la investigacin cientfica en de los estudiantes, por lo cual, en
lugar de usar software ya existente o aparatos ya hechos, estos se realizan a lo
largodurante del proceso enseanza-aprendizaje, con la ventaja y posibilidad de
optimizar los de que en ocasiones esto significa recursos econmicos, que implican
un menor costomenos gastos.
Los experimentos son planteados con el objetivo de mostrar a las personas los
efectos sobre el SN de sustancias de consumo comn, tal como la nicotina y la
cafena.
MTODOS Y MATERIALES
Especmenes y anestesia
Los grillos son comprados por docenas y
colocados en un terrario de 70*30*30
centmetros el cual debe tener buena
ventilacin. Se suplen con vegetales
como lechuga y zanahoria, agua, tierra,
cartn y papel. Al realizar una
intervencin se
colocan en agua con hielo por
aproximadamente 8 minutos para
Ilustracin 1. Terrario de los grillos. Obsrvese dimorfismo
anestesiarlos y evitar interferencia de la
sexual, en la fotografa la mayora son hembras, poseen una
actividad muscular en las grabaciones,
prolongacin entre los dos cercos (ovopositor)DEBES
COLOCAR FLECHAS Y LETRAS, son ms grandes y sus alas
si sus antenas estn totalmente
exteriores lisas, no adaptadas para el canto. Fuente:
relajadas, se colocan en decbito dorsal sobre un corcho y se les entierra una aguja
en el trax y otra en el abdomen bajo [2], tratando de hacer el menor dao posible.
El computador debe estar desconectado a la toma de corriente y el WiFi apagado,
de lo contrario la interferencia anular la actividad elctrica de las neuronas. Al
inicio puede tomar un tiempo escuchar PA, pero a medida que las neuronas entran
en calor se escucha actividad neuronal espontanea, se recomienda rectificar la
respuesta del ganglio estimulando los cercos estructuras alargadas a lado y lado
de la parte inferior del abdomen soplando suavemente, antes de inyectar
sustancias estimulantes.
2 Channel SpikerBox

El 2 channel SpikerBox est compuesto por un bafle, un switch, un LED, una pila de
9v, 2 entradas RCA las cuales captan la seal de los electrodos , un circuito, y
una salida estreo para conectarlo al computador ( DEBES COLOCAR AQU LA
ILUSTRACIN, NO debajo del titulo Ver Ilustracin pgina 1).
Los electrodos son realizados a partir de tres agujas, una de
ellas est conectada al canal izquierdo de la salida estreo,
otra al derecho, y la ltima al polo a tierra, las cuales se
distinguen con los colores blanco, rojo y negro
respectivamente. Las agujas sufren una variacin en su
potencial de unos cuantos milivoltios al estar prximo a una
neurona en actividad [3]. El uso de estas agujas causa
problemas de interferencia en las grabaciones y dao al
individuo intervenido [4]. Sin embargo, hemos obtenido buenos
resultados usndolas cuidadosamente.
Una vez la seal es transmitida de las agujas a la entrada RCA,
los amplificadores operacionales utilizan 4.5v de la pila para
cada canal para hacer estas minsculas seales lo
suficientemente intensas para ser captadas por la entrada
estreo del computador, a la vez que disminuye la intensidad
de aquellas seales de frecuencias no deseadas (Ver figura 1),
como por ejemplo las ondas de radio. Sin embargo, a veces
stas se oyen claramente.
Software de anlisis
Dentro de las mltiples opciones para analizar las grabaciones
del SpikerBox [5], Audacity es un editor de audio libre que ofrece una interfaz
cmoda, en la cual se edita las grabaciones escogiendo fragmentos que muestran
actividad intensa despus de la administracin de las sustancias y
Figura 1. Diagrama de
bloque del 2 Channel
eliminando interferencia manualmente. Una vez seleccionado el recorte,
SpikerBox. La vieta en rojo
los datos se exportan a formato txt para analizarlo en un algoritmo
indica que este CI slo
amplifica la seal del canal
realizado en Python, usando las libreras NumPy y Matplotlib
derecho para el bafle,
principalmente [6]. Este algoritmo primero selecciona los picos por
Fuente: Elaboracin del
autor.
encima de 3.9 desviaciones estndar, valor considerado como el SNR
para el SpikerBox, es decir, las desviaciones estndar fuera del promedio donde se
encuentran los picos de los PAs [1]. Despus filtra estos picos a verdaderas spikes,
es decir, aquellas que tienen una hiperpolarizacin, la cual se defini a partir de 2.5
desviaciones estndar, ya que suelen ser ligeramente ms bajas que las
despolarizaciones. Finalmente se guarda en una matriz el segundo en el que se
identific el pico y el valor de ste, para graficar un diagrama de puntos tiempo
versus amplitud, un histograma de frecuencias (Ver figura 2), y una impresin de los
PAs clasificados por amplitud para una mejor visualizacin de su forma (Ver figura
3).

Estimulantes
Se inyect tanto nicotina como cafena a los grillos, lo ms cerca posible de la aguja
insertada en la parte baja del abdomen usando jeringas para pluma usualmente
vendidas para inyecciones de insulina.
Las concentraciones de nicotina fueron entre 0.6 mg/mL y 2.4 mg/mL, lo que
equivale aproximadamente a diluir un cigarrillo en un frasco de 15 mL. Se inyect
0,1 mL por grabacin.
Las concentraciones de cafena fueron de 0.011, 0.11 y 1.1 mg/mL en cantidades de
0.3 y 0.5. Esto equivale entre 0,033 y 13,75 tazas de caf proporcional a la masa
corporal del espcimen comparada con una persona promedio (Ver tabla 1)
[C 8 H 10 N 4 02Cantid
]
(mg/ml)

ad
(ml)

1,1
1,1
0.11
0.11
0.011
0.011

0.05
0.03
0.05
0.03
0.05
0.03

Equivalente en tazas de
caf
60 mg
150 mg
Cafena
Cafena

9,2104
5,5104
9,2105
5,5105
6
9,210
6
5,510

3,7104
2,2104
3,7105
2,2105
6
3,710
6
2,210

Proporcional a la masa
corporal
60 mg
150 mg
Cafena
Cafena
13,75
5,5
8,25
3,3
1,375
0,55
0,825
0,33
0,1375
0,055
0,0825
0,033

Tabla 1.Tabla de concentraciones y cantidades de cafena aplicadas a los grillos, Se convierte el valor a tazas de
caf promedio, las cuales contienen de 60 a 150 mg de cafena, y se hace una proporcin entre la masa corporal
de un grillo promedio (__ g) y un humano de __ Kg. Fuente: Elaboracin del autor.

RESULTADOS
Las inyecciones de nicotina muestran un claro aumento de la actividad neuronal.
Sin embargo, no logran verse PA aislados ni definidos. Con las concentraciones ms
altas de nicotina, las extremidades y apartos bucles del espcimen entran en
actividad.
Las inyecciones de cafena de concentraciones 0.011 y 0.11 mg/mL muestran un
claro aumento de la actividad neuronal, mientras que la concentracin de 1.1
mg/mL muestra dicho aumento solo a veces.

a)

b)
c)

Figura 2. a) Fragmento de una grabacin, despus de 30 segundos de la inyeccin de 0,1 mL de cafena a 1mg/mL.
De los 23 a los 78 segundos se ve una franja azul desde -0.2 a 0.2 voltios debido a la alta frecuencia de PAs. Se
observan algunos PAs de amplitud sobresaliente. b) Diagrama de puntos. Cada punto representa un PA, estn
coloreados segn su amplitud (valor desde 0 hasta su punto mximo de despolarizacin) por 6 intervalos iguales. Se
ratifica la mayor concentracin de espigas de los 23 a 78 segundos. c) Histograma de la frecuencia de los
PAs/segundo. Se observa una relacin de frecuencias sobresalientes con espigas de amplitudes sobresalientes en el
diagrama de puntos. Debido al efecto estimulante de la cafena, sta provoca que las neuronas se exciten con mayor
facilidad, resultando en un aumento de la frecuencia de PAs del segundo 20 al 50 (de 50 a 80 segundos despus de su
administracin), seguida de una fase de normalizacin, debida a mecanismos de degradacin de la cafena. Fuente:
Elaboracin del autor.
Figura 3. Potenciales de accin. Obsrvese Se observa que generalmente el pico de despolarizacin es mayor al de
hiperpolarizacin. Al graficar algunas de estas spikes individualmente puede observarse un ascenso hasta el umbral, a
partir del cual su pendiente se vuelve mayor debido a la apertura de canales de

DISCUSIN

+
Na

(Uy.esto realmente no lo

Aqu debes mencionar que significa cada resultado, que se ha publicado con el
mismo modelo y puedes especular al respecto

Hola Dr. Ana:

Excelente trabajo. Yo lo revisar con detalle tan pronto salga de unos proyectos urgentes.
Lo mir por encima, se ve interesante y es lo que tena pensado, hay mucha tela para cortar y tienes la oportunidad de
aprender ms.
Me gustara que me lo volvieras a enviar cuando est un poco ms completo y tenga una introduccin ms amplia. En
ella sera interesante que intentaras mencionar los resultados de otras personas, artculos ya publicados donde hayan
hecho algo igual o parecido para al final comparar tus resultados. Tambin sera bueno escribir sobre la importancia,
alcance, fallas, errores comunes y tus ideas sobre ese tipo de actividades y equipos.
Por qu usar grillos? Por qu usaste Nicotina? Qu es un potencial de accin? Esas preguntas deben quedarle
claras al lector interesado.
Si puedes, muestra figuras con el Wi Fi prendido o el computador conectado. Qu tal esa interfencia la podamos
entender y extraer digitalmente? Es decir, escribir un cdigo que la busque y la extraiga. Eso le ayudara a mucha
gente.
Debes ser cuantitativa en el anlisis. No podemos decir que los aumentos ocurren "slo a veces", tenemos que hacer
una anlisis estadstico, que no es difcil, de tus datos, en el que digas el promedio y por ejemplo, la desviacin
estndar.
Te tengo otra tarea. Busca un congreso, evento o simposio de Neurociencia o Biologa en el pas, me mandas el link y yo
te ayudo a escribir el resumen y a arreglar la propuesta para que participes este ao. Te interesa? Quiz te quede ms
fcil preguntarle a un profesor o quiz haya un evento en el Nacional como tal.
SIEMPRE debes socializar los resultados y tu experiencia, adems quiero que te vayas formando cientficamente.
P.D. "Word" no funciona bien!! Es una verdadera molestia abrir y arreglar los documentos desde con las versiones libre
que tengo. No me sorprende que no pudieras generar el PDF usando Word.
P.D. 2. Estamos haciendo, a cierto nivel, ciencia y por eso no hay fechas limites. No quiero que este proyecto te cause
estrs o dejes de hacer cosas de la Universidad por hacer esto. Quiero que hagas un bonito trabajo, que puedas
presentar en congresos tus resultados pero, para m, lo ms importante es que aprendas por el camino. Adems, estoy
seguro que para alguna materia, eventualmente, este trabajo te servir!
Saludos,
Alejandro

CONCLUSIONES

REFERENCIAS
[1] Marzullo, T. C., & Gage, G. J. (2012). The SpikerBox: A Low Cost, Open-Source
BioAmplifier for. Plos One, Issue 3.
[2] Dagda, R. K., Thalhauser, R. M., Dagda, R., Marzullo, T. C., & Gage, G. J. (2013).
Using Crickets to Introduce Neurophysiology to Early Undergraduate Students.
The Journal of Undergraduate Neuroscience Education (JUNE), 66-74.
[3] Ramos, R. L., Moiseff, A., & Brumberg, J. C. (s.f.). SUPPLEMENTAL MATERIAL AND
METHODS FOR EXTRACELLULAR RECORDINGS NEUROPHYSIOLOGICAL
INSTRUCTION AND DEMONSTRATION. New York: Queens College-CUNY.
[4] Prabhakaran, G., & Voit, W. (University of Texas). Using Spikerbox as An
Education Toolikt Body Sensor Network for Brain Activity Monitoring.
[5] Backyard Brains. (4 de March de 2015). Data Analysis. Obtenido de:
http://wiki.backyardbrains.com/Data_Analysis
[6] Moreno Pea, A. M. (7 de Febrero de 2015). Github. Obtenido de
https://github.com/SemilleroKonradLorenz/SpikerBox
[7] Shannon, K. M., Gage, G. J., Jankovic, A., Wilson, J. W., & Marzullo, T. C. (2014).
Portable conduction velocity experiments using earthworms for the college
and high school neuroscience teaching laboratory. Advances in Physiology
Education, 62-70.