Citogentica y Bandeo cromosmico

La citogentica estudia los cromosomas en relacin con la herencia.

En 1956 se descubre el nmero de cromosomas humanos 2n=46. Lo hacen
Levan y Tjio, mediante choque hipotnico (Esto hace que la clula se hinche y
se visualicen mejor los cromosomas).
Anteriormente se creia que los humanos tenian 2n=44 , ya que se observaban
slo 22 bivalentes puesto que el par X-Y no forma bien esta estructura. Sin
embargo, con la tcnica del choque hipotnico se pudieron visualizar
correctamente todos los cromosomas.
Los cromosomas slo son visibles al microscopio en el periodo de divisin
celular, sobre todo en metafase donde alcanzan el mayor grado de
condensacin. El tejido con ms actividad mittica es la mdula sea.
Cuando se hace un cariotipo se usan linfocitos, los cuales normalmente no se
dividen. Entonces los estimulamos con PHA (fitohemoaglutina) que es una
sustancia que se extrae de Phaseolus vulgaris.
Metodologa de la tcnica de choque hipotnico:
Depositamos sangre en un medio de cultivo.
Incubamos 72 horas a 37 grados.
Anadimos colchicina para que todas las clulas se paren en metafase.
Lavamos.
Producimos el choque hipotnico.
Incubamos 10 minutos.
Centrifugamos y lavamos.
Fijamos y aadimos colorantes a la muestra.
Los cromosomas se ordenan por tamao y por posicin del centrmero. Los
ms grandes y con el centromero en el centro, van antes.
Ademas los cromosomas estan clasificados por grupos:
A: 1-2-3
B: 4-5
C: 6-7-8-9-10-11-12-X
D: 13-14-15
E: 16-17-18
F: 19-20
G: 21-22-Y
En los grupos D y G es donde se producen normalmente las translocaciones
debido a la posicin del centrmero.
Bandeo Cromosmico
Consiste en someter a los cromosomas a desnaturalizaciones, a digestin
enzimtica o a ambos, seguido de una tincin con colorante especfico para
ADN. Esto hace que los cromosomas se tian con una serie de bandas claras y

oscuras. Hay diversos tipos de bandeo:

Bandeo G
Los cromosomas son sometidos a digestin con la enzima tripsina de manera
controlada. Los cromosomas se desnaturalizan mediante calor en solucin
salina (esto desnaturalizar ADN con abundantes AT) y, a continuacin,se tien
con Giemsa que es un colorante qumico que enlaza ADN. Las bandas oscuras
de tincin positiva, son las bandas G. Las plidas son G negativas, se
denominan bandas R. Las regiones oscuras son las que se replican ms tarde
en la fase S y contienen contienen cromatina ms condensada. Las bandas R
suelen replicarse temprano en la fase S y tienen menos condensada la
cromatina. Los genes se concentran sobre todo en esta banda, mientras que el
ADN de las bandas G es menos activo transcripcionalmente. Las bandas R son
Q negativas.
Bandeo Q
Se tien los cromosomas con un colorante fluorescente que se enlaza
preferentemente a ADN abundante en AT y se observan mediante fluorescencia
UV. Las bandas fluorescentes indican los mismos segmentos que las bandas G.
Bandeo T
Identifica un subgrupo de bandas R que estan concentradas sobre todo en los
telmeros. Las bandas T son las R que se tieron de manera ms intensa.
Bandeo C
Muestra heterocromatina constitutiva sobre todo en los centrmeros. Se hace
mediante un tratamiento alcalino drstico.
Mtodos dinmicos
Se aplica sobre las clulas en cultivo. Uno de ellos es aadir istopos
radiactivo, como la timidina tritiada, en un periodo temprano de la replicacin,
para que se vaya aadiendo al ADN. El resultado es un patrn de bandas de
replicacin temprana, que suele coincidir con las bandas R. Si se hubiese
aadido la timidina tritiada en un momento tardo de la replicacin, las bandas
coincidirian con las G.