TCNICAS BASADAS EN LA

REACCIN
ANTGENO-ANTICUERPO

Inmunologa 05 1

Interaccin Ag-Ac

Diferentes interacciones no covalentes dbiles

2

Acercamiento ( 1 angstrom ) y complementariedad Ag y Ac

Especificidad
Ensayos inmunolgicos
Ag o Ac

Molculas 4

Afinidad del Ac : fuerza de unin Ac-Ag

Ag + Ac

K1
K-1

Ag-Ac

k 1 / k-1 = Ka

Acs. baja afinidad ( 104 y 105) unen Ag debilmente

Acs. alta afinidad ( 1011) unen Ag fuertemente
Ka Dilisis en equilibrio
6

Dilisis en equilibrio
A

Equilibrio [ligando radioactivo] es

igual en los dos compartimientos

Inicial

Ac

Equilibrio

Equilibrio # [ligando radioactivo] en

los dos compartimientos Lig-Ac

Ligando *

Inicial

Equilibrio

Avidez: fuerza de interaccin mltiple

entre un Ac multivalente y un Ag
complejo
Afinidad funcional

Reacciones Ag-Ac especificidad

Especificidad

Ag1
Ag2
Ag3

Ac

Ag1

Reaccin cruzada Ac

Sistema ABO
Exposicin Ags bacterianos

Ag2

Eptopo

Tipo

Ag Gr

Acs sricos

A
A
B
B
AB
AB
O

A
A
B
B
AyB
AyB
Ninguno

Anti-B
Anti-B
Anti-A
Anti-A
Ninguno
Ninguno
10
Anti-A / B

Reacciones de precipitacin
Interaccin Ag-Ac malla precipitado
Ac divalente y Ag di-polivalente

11

Reacciones de precipitacin en solucin

Ag-Ac solubles
Cambiar solubilidad
2% PEG

50% Sulfato Amonio

Anti-Inmunoglobulina
Ac para Ig

Protena A

12

Reacciones de precipitacin en geles

K F6.6

Usos: [ Ag ] o [Ac ], pureza preparacin antignica , comparacin13

Ags

Reacciones de precipitacin en geles

Ensayo cuantitativo [ Ag ]
rea anillo precipitacin [ Ag ]
Curva patrones de concentracin conocidos

Ensayo cualitativo Ag

14

15

Identidad
Ag eptopo A
A

Antisuero anti-A

16

Separacin por electroforesis + Identificacin por Inmunodifusin doble

17

18

Cuantitativa

19

Reacciones Aglutinacin
Interaccin Ac y Ag particulado:
GR o bacteria efecto prozona
( Ac, Acs. incompletos )
Ventajas: simple, econmico, ng/ml

.- Coombs (Rh)

.- Aglutinacin pasiva: Ags solubles

Ag soluble + Gr tto Ac. Tnico o
Cloruro de cromio
.- Inhibicin de aglutinacin:20

Radioinmunoensayos ( RIA )
Tcnica muy sensible para detectar Ag o Ac . Unin
competitiva entre Ag* y Ag por Ac de alta afinidad

Desventajas: prdida de sensibilidad durante el almacenamiento

radioactividad, deterioro marcaje y precausiones exposicin humana
a radioactividad
21

ELISA

Quimioluminiscencia: Substrato luxognico Sensibilidad (5. 10

18

M Ag)

22

Western Blotting
Identificar protena
Ag

Ac

23

Inmunoprecipitacin
Ags (clulas o Tejidos) Su uso posterior
Ag-Ac precipitado Perlas + Ac , Perlas + proteina A o G, perlas magnticas/Ac

24

Fluorescencia
1944, A. Coons Acs conjugados fluorocromos

Fluorescencia
Directa
Indirecta
(Ac primario)

(Ac.

25

Fluorescena,
Rodamina, Ficoeritrina

26

Citometra
de Flujo
(FACS)
Cuantitativa
Automticamente
analizar y
separar clulas
teidas Ac
27
fluorescente

Aplicaciones:
.- Determinar tipo y
nmero de poblacion
de GB separar
.- Densidad de un Ag
en una misma
poblacin de cel.
.- Tamao cel.

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Microscopa Inmunoelectrnica:
Componentes intracelulares Acs conjugados a
marcadores electrodensos

Oro

Oro
Ferritina
Radio
Es
DAB
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Purificacin de Antgenos / Anticuerpos

Cromatografa de Afinidad

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FIJACION DE COMPLEMENTO
Detectar Ag o Ac (suero) utilizando una fuente de
C' y un sistema indicador (GR carnero sensibilizados)

Controles:
.- Suero + No hemlisis
.- Suero Neg. Hemlisis
.- Gr solos Lisis espontnea
.- Suero en estudio Ag + C' + GR: Lisis
.- Ag Suero en estudio + C' + GR Lisis

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32