Facultad de Ingeniera y Tecnologa

Ingeniera Civil en Biotecnologa

Fisiologa y Biotecnologa Vegetal

LABORATORIO N6
Medios Nutritivos para Cultivo in vitro:
MS y B5

3 de mayo de 2013

INTRODUCCIN
La micropropagacin, corresponde a una tcnica que permite obtener, mediante
un ambiente controlado, productos de inters, como embriones somticos, rganos,
adems de tejido indiferenciado (callos). El ambiente, concierne a todo aquello que
rodea y posibilita externamente al explanto a desarrollarse y dirigir su crecimiento hacia
la ruta morfognica deseada. Los factores ambientales correspondes a la humedad,
temperatura, el tipo de luz y el fotoperodo, los cuales son controlados mediante
instalaciones especializadas o cmaras de cultivo. Por otra parte, los elementos como
la nutricin, el soporte, el pH y la estimulacin (fito-hormonas u otros agentes) son
determinados por el medio de cultivo.
El correcto diseo o eleccin del medio nutritivo y sus suplementos, determinar
el establecimiento y desempeo del explanto, es as como una especie vegetal que
tiene baja tolerancia a las sales, tendr menor xito de desarrollo, en un medio rico en
sales como el diseado por Murashige & Skoog (1962), por tanto podra verse
favorecido con un medio bajo en sales como el Woody Plant Medium (WPM). Es as,
como cada uno de los componentes del medio de cultivo, son los responsables directos
del xito de la micropropagacin.
La organizacin ms eficaz para el uso y almacenamiento de los medios
nutritivos es mediante soluciones concentradas o stock, las cuales, se separan en 5
grupos: A1, que es preparada con macronutrientes o sales; A2, correspondiente a
Calcio; B, con micronutrientes; C, de FeNa-EDTA y D las vitaminas. La razn
fundamental de la separacin, es precisamente para evitar la interaccin entre las
molculas, a fin de evitar, por ejemplo, que el fierro, como Fe-Na-EDTA, forme una
reaccin de precipitacin con los sulfatos, presentes en el grupo de macronutrientes.
Otra razn, es debido a que las bajas cantidades pesadas para micronutrientes, seran
imposibles de obtener por una balanza analtica convencional, con un grado de
exactitud adecuado, siendo inviable el pesar las cantidades justas a la concentracin
final a usar.
Los dems elementos, que no son considerados en el medio nutritivo
propiamente tal, pero son de vital importancia, corresponden a la fuente de carbono,
siendo la sacarosa (azcar de uso domstico), la ms usada debido a su bajo costo y
rpida metabolizacin y el soporte mecnico, el agar de uso microbiolgico para el que
se debe ajustar el pH para garantizar la solidificacin del mismo. Cuando se desea
estimular el explanto, se pueden utilizar reguladores de crecimiento, los cuales tambin
se incluyen en la preparacin del medio de cultivo.
Luego de establecer los elementos esenciales del medio, es necesario
considerar el recipiente de acuerdo a los resultados buscados. Tubos de ensayo,
frascos de vidrio, placas petri, (muy utilizados), deben ser capaces de soportar
presiones de autoclavado, a fin de que no sufran daos estructurales mediante el
proceso obligatorio de esterilizacin. Tambin deben considerarse los elementos de
sellado como papel aluminio, papel celofn y parafilm.

OBJETIVOS

Comparar la distinta composicin de los medios nutritivos utilizados en cultivo in

vitro de vegetales

Preparar las soluciones madres de los distintos medios nutritivos

MATERIALES
Agua destilada
Frascos o envases plsticos de 1000 ml y 250 ml
Etiquetas
Cinta adhesiva transparente
Refrigerador
Papel Celofn
Elsticos
Soga de algodn
Papel Aluminio
Parafilm
REACTIVOS
Macronutrientes*
Micronutrientes*
Vitaminas*
* Segn medio de cultivo.
METODOLOGA
Observe las diferencias con respecto al contenido de nutrientes y vitaminas para cada
uno de los medios de cultivo a preparar. Averige a que se debe esta diferencia. Calcule
como preparar las soluciones madres con la informacin que se le entregar.
Para cada medio nutritivo prepare los siguientes stocks:
Stock A1: macronutrientes
Stock A2: calcio
Stock B: micronutrientes
Stock C: FeNa EDTA
Stock D: Vitaminas