CONTROL DE

CALIDAD

CALIDAD
El grado en que un conjunto de
propiedades inherentes de un producto,
sistema o proceso cumple con los
requisitos

Control de Calidad
( QC ) :

Las pruebas realizadas durante la

fabricacin biofarmacutica para verificar
que los estndares apropiados de calidad
del producto se alcanzan

El grupo de organizacin real ( unidad de

control de calidad ) que ejecutan este
trabajo

La calidad debe ser incorporado en el

producto y probar por s sola no puede ser
invocado para garantizar la calidad del
producto "

Endotoxin
Prueba de endotoxina Qu es? Un lipopolisacrido De dnde
viene? La membrana externa de las bacterias Gram negativas

Prueba de endotoxina
Qu productos se prueban ?
Drogas inyectables y dispositivos
mdicos que se pondr en contacto de
sangre o lquido cefalorraqudeo
incluye materias primas, agua y en la
supervisin de procesos

La USP reconoce ahora dos

pruebas
La prueba de pirgenos
llevado a cabo con conejos
Prueba de endotoxinas
bacterianas , tambin
denominada la prueba de
lisado de amebocitos de
Limulus (LAL) .

Pyrogen Assay

USP XIX considera una solucin para

ser pirognica cuando 10 ml / kg se
inyecta en un conejo y hay un aumento
de la temperatura de 0,6 C o ms para
cualquier conejo, o un aumento total de
ms de 1,4 C durante tres conejos en
un conejo tres grupo de prueba .

LAL
Test
Limulus prueba de lisado de
amebocitos - basado en la reaccin de
coagulacin de cangrejo herradura
( Limulus polyphemus ) de clulas
sanguneas ( amebocitos ) lisado a la
endotoxina Desarrollado en 1960 de
por los Dres. Bang y Levin Ms rpido,
ms econmico , ms sensible que la
prueba de pirgenos conejo

Mtodo Gel
Clot
mtodo original El " rbitro
prueba " oficial La muestra
se incub con LAL de una
sensibilidad conocida . La
formacin de un cogulo de
gel es positivo para
endotoxina.

Mtodo cromognico
Concentracin de endotoxina se mide como una
funcin de la intensidad de color LAL contiene
enzimas que se activan en una serie de reacciones
en presencia de endotoxina. La ltima enzima
activada en la cascada divide la anilina
cromforo , para- nitro ( pNA ) , desde el sustrato
cromognico , produciendo un color amarillo.

Mtodo turbidimtrico
En la presencia de endotoxina LAL se vuelve
turbia y , en condiciones apropiadas ,
forma un gel slido - cogulo. En el
mtodo LAL cintico turbidimtrico , la
concentracin de endotoxina se mide como
una funcin de cualquiera de la tasa de
aumento de la turbidez o el tiempo
necesario para alcanzar un determinado
nivel de turbidez.

Comparacin de los
mtodos
Gel Clot

cromognico cromognico Turbidimtric

Punto de
cintico
o
llegada

Semiquantitative

Quantitative

Quantitative

Quantitative

Simple, Least
expensive,
Requires 37C bath

Requires
spectrophotometer
or plate reader

Requires
incubating plate or
tube reader

Requires
incubating plate or
tube reader

Manually read and

recorded

Manual or can be
automated,
allows electronic
data storage

Is automated,
allows electronic
data storage

Is automated,
allows electronic
data storage

Sensitive down
to 0.03 EU/ml

Sensitive down
to 0.1 EU/ml

Sensitive down
to .005 EU/ml

Sensitive down
to .001 EU/ml *

* ( Las sensibilidades varan segn las condiciones del fabricante de reactivos ,

instrumentacin y pruebas )

VALORACIN DE ENDOTOXINAS BACTERIANAS

EN EL INYECTABLE HEPARINA SDICA
INTRODUCCIN
De accin anticoagulante indicada tromboemblica,
tromboembolismo arterial perifrico.Las farmacopeas
exigen dentro de sus monografas para productos
inyectables la aplicacin del mtodo del lisado de
amebocitos de Limulus (LAL) para la determinacin de
endotoxinas bacterianas. Las endotoxinas bacterianas son
principalmente lipopolisacridos (LPS) que se localizan
exclusivamente en la membrana externa de las bacterias
gramnegativas,s como Escherichia coli, Salmonella,
Shigella, Neisseria y otros patgenos importantes.

.PARTE

EXPERIMENTAL

. Materiales y Mtodos
Es importante tener en
cuenta que para realizar
una prueba de LAL todo
el material de vidrio
debe ser apirgeno y la
preparacin de la
muestra debe ser de
modo asptico, para
evitar contaminacin.

MTODO DE GELIFICACIN:
El mtodo empleado es
semicuantitativo (17). La prueba
consiste en la adicin de 0,1 mL de
lisado y 0,1 mL de producto a evaluar
en tubos despirogenizados, que se
colocan al bao Mara a 37 oC y luego
se invierte el tubo con cuidado a 180.
Si la solucin ha formado un gel y
permanece en el fondo del tubo la
prueba es positiva; de lo contrario, si
la solucin permanece lquida la
prueba es negativa.

ENSAYOS PRELIMINARES

Confirmacin de la sensibilidad del etiquetado:

Mediante este ensayo se verifica que no haya variacin en
la sensibilidad del rtulo del reactivo. Esta se determina
preparando una serie de diluciones del control estndar de
endotoxina (CSE) Escherichia coli por cuadruplicado con
concentraciones , donde es la sensibilidad marcada del
reactivo LAL, dada en unidades de endotoxina por mililitro
UE/mL, a las que se le agrega reactivo de LAL, se llevan a
incubacin y se leen.

ENSAYOS PRELIMINARES
Mxima dilucin vlida:
Para realizar el clculo de la
mxima dilucin vlida (MVD) se
hace referencia al lmite de
endotoxinas permitido (10
UE/mL) por la Farmacopea
britnica (PB 2009) del producto
a evaluar, por ser una formulacin
con un contenido nominal menor
que 100 mL. Se debe tener en
cuenta el lmite de sensibilidad de
LAL de trabajo.

VALIDACIN DE LA TCNICA
Validacin del analista: Se
prepararon una serie de
diluciones: ejemplo 0,06; 0,03;
0,015; 0,0075 UE/mL por
cuadruplicado a partir de la CSE
de 10 UE/mL de potencia, segn
certificado de la calidad.
Validacin de la dilucin de
trabajo: Se realiza en base a los
resultados obtenidos en los
ensayos preliminares segn la
farmacopea.

RESULTADOS
Se realiza una validacin de la tcnica de endotoxinas
bacterianas por medio del mtodo de lisado de
amebocitosde Limulus LAL, para el producto heparina
sdica 5000 UI/mL. Segn farmacopea de los parmetros
establecidos.
El clculo de la MVD puede arrojar valores segn la
dilucin permitida en la que se puede determinar el lmite
de endotoxinas de la muestra.

CONCLUSIONES
la deteccin de endotoxinas bacterianas por el mtodo de
LAL, es un medio que logra identificar la dilucin de un
trabajo para los ensayos de rutina que se le realiza al
producto terminado de heparina sdica 5000 UI/mL
inyectable.
La validacin por el mtodo de gelificacin es una prueba
sencilla y rpida que se encuentra en la USP armonizado
con la Farmacopea Europea.
La validacin del rtulo del reactivo LAL y de los analistas
sehace con el objetivo de confirmar la sensibilidad del
reactivo.