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PROBLEMAS: FOTOCOLORIMETRA
MARCO TERICO
El anlisis colorimtrico contempla al conjunto de mtodos de anlisis cuantitativo que se fundamenta en la
medicin de la intensidad de la luz transmitida a travs de una solucin coloreada, ya sea que se trate de
sustancias naturalmente coloreadas o que se han hecho de tal calidad mediante reacciones qumicas
adecuadas. Casi todas las sustancias en solucin tienen la capacidad de absorber en forma selectiva
determinadas radiaciones luminosas unas ms que otras, dejndolas pasar. La longitud de onda en la que las
molculas de dicha sustancias absorben con mayor intensidad la luz, se denomina longitud de mxima
absorcin o lambda mximo. Si consideramos que cada molcula absorbe una determinada cantidad de luz, la
intensidad de la luz transmitida por una solucin disminuir en relacin con el aumento del nmero de
molculas que se interpongan entre la fuente luminosa y el observador. Este nmero vara de acuerdo a la
concentracin del soluto y al espesor del recipiente que contiene la solucin, estos factores estn
considerados en la LEY DE LAMBERT Y BEER, que rige los principios de la colorimetra.
LEY DE LAMBERT: Expresa la proporcionalidad que existe entre la absorbancia de una solucin coloreada y la
distancia que recorre el haz de luz monocromtica en ella (sin variacin de la concentracin).
LEY DE BEER: Expresa la proporcionalidad que existe entre la absorbancia de una solucin coloreada y la
concentracin de sta en un haz de luz monocromtica (sin variacin de la longitud que recorre el haz)
CURVA DE CALIBRACION: El mtodo consiste en emplear soluciones de concentraciones conocidas y crecientes
denominadas estndares o patrones a las cuales se les determinar su absorbancia ya sea en un
fotocolormetro o en un espectrofotmetro y pueden ser expresadas en absorbancia.; en cualquier caso los
resultados se grafican en un sistema de coordenadas donde en el eje "X" se grfica la concentraciones y en el
"Y" la absorbancia. Los puntos resultantes en el sistema empleado se traza una recta de tal manera que pase
por el origen y que una en la medida posible a todos los punto o a la mayora de estos. La lnea obtenida
constituye la curva de calibracin; tambin se le denomina curva estndar.
FACTOR DE CALIBRACION (Fc)
El factor de calibracin es un trmino que relaciona la concentracin de una sustancia con su absorbancia.
Tiene la caracterstica de ser un nmero constante o muy aproximado entre s, a lo largo de la curva de
calibracin y se cumple slo en la zona lineal de la misma. Matemticamente el factor de calibracin es la
inversa de la pendiente de la recta generada en la curva de calibracin. El factor de calibracin es la relacin
entre la concentracin del estndar (St) y la absorbancia del mismo
Fc[ ] = [St ]/ DOSt
Si hay ms de un estndar, entonces se obtendr un promedio de los Fc.
Si la muestra problema ha sido diluida previamente, se determinar el FACTOR DE DILUCIN (Fd) que
matemticamente es la inversa de la dilucin, o sea 1/dil de donde se deduce:
dil = Vol MP/Vol T
donde:
Vol MP: es el volumen de la muestra problema tomada para hacer la dilucin.
Vol T: es el volumen total (volumen de la muestra ms el volumen del diluyente).
Para este segundo caso, para conocer la concentracin de una MP se aplicar la siguiente frmula:
[MP] = AMP. Fc[ ]. Fd
Donde:
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA I: EFECTO DE LA TEMPERATURA Y EL pH
Las enzimas son en su gran mayora protenas que catalizan las reacciones biolgicas que tienen lugar en
los seres vivos, sin alterar el equilibrio de la reaccin. En general las reacciones catalizadas por enzimas,
son especficas y esenciales para las funciones fisiolgicas. La velocidad de reaccin y por ende el
consumo de sustrato o aparicin de productos, est controlado por las concentraciones de sustrato y
enzima as mismo se modifica de manera variable por cambios de pH y/o temperatura de reaccin. La
presencia de activadores o inhibidores en tambin pueden afectar la velocidad de reaccin. As mismo, la
actividad de las enzimas depende de la temperatura en las que se encuentren. No todas las enzimas
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actan a la misma temperatura; si bien muchas de ellas pueden actuar en un rango ms o menos amplio,
existe una temperatura en la cual la actividad de la enzima en mxima y por lo tanto su capacidad de
interactuar con el sustrato; a este nivel trmico se le denomina temperatura ptima. La actividad de la
enzima y por ende el consumo de sustrato o aparicin de productos, est controlado por el medio es decir
por el pH, debido a que el estado de ionizacin de la enzima, del sustrato o de ambos condiciona la
velocidad con que puede ocurrir la reaccin, de manera tal que cada enzima tiene un pH adecuado en el
que la actividad es mxima; a este valor se le considera como el pH ptimo. En esta prctica se utilizar
al sistema enzimtico glucosa oxidasa peroxidasa en el cual se observa que su sustrato, la glucosa, es
oxidada por la glucosa oxidasa a cido glucnico y perxido de hidrgeno y en una segunda; la reaccin
es acoplada a la peroxidasa en presencia de fenol y 4-amino fenazona formando un cromgeno coloreado
que es la oxazona, de color rojo cereza y se lee a 505 nm. De tal manera que la intensidad del color o y
por lo tanto la lectura, es directamente proporcional a la actividad enzimtica.
DIGESTIN ENZIMTICA DEL ALMIDN.
MARCO TERICO
Uno de los polisacridos ms comunes en la dieta del ser humano es el almidn, el cual se encuentra en
muchos alimentos de origen vegetal y en muchos productos elaborados como pan, fideos, etc. El almidn
estructuralmente est constituido por la amilosa (cadena lineal) y la amilopectina (cadena ramificada). la
cadena lineal o amilosa, es la sucesin de unidades de 300 a 350 unidades glucosa unidas por enlaces alfa
1-4. Las cadenas ramificadas de la amilopectina tienen enlaces alfa 1-4 y enlaces alfa 1-6, entre cada 24
a 30 molculas de glucosa. La digestin enzimtica del almidn consiste en hidrolizar los enlaces alfa 1-4
por la enzima amilasa ya sea salival o pancretica, originando dextrinas lmites, maltotriosa y hasta
maltosa; posteriormente por accin de las enzimas intestinales o la degradacin total llega hasta glucosa.
La alfa amilasa presente en la saliva y en la secrecin pancretica tiene un pH ptimo de 6,7 a 7,2.
DETERMINACIN DE GLUCOSA EN SUERO (METODO ENZIMATICO)
MARCO TEORICO
La glucosa es una molcula de seis carbonos, es una hexosa con que se encuentra en sus formas
aldehdica y enlica. Tiene un peso molecular de 180 y es muy hidroscpica, siendo uno de los
principales componentes de la presin osmtica de la sangre. El control de la glicemia, es decir
la glucosa en sangre, est finamente regulada por la insulina y el glucagn que son producidas
las clulas beta de los islotes de Langerhans del pncreas. Valores Normales de glucosa en
suero: 70 a 110 mg/dL en sangre. Fundamento de la reaccin: La glucosa por accin de la
glucosa oxidasa produce cido glucnico y peroxido de hidrgeno; este ltimo por accin de la
peroxidasa oxida a la 4-aminofenazona generando la oxazona de color rosado, color que es
proporcional a cantidad de glucosa y medible a 505 nm.
Glucagn: es una hormona producida por las clulas alfa de los islotes de Langerhans en el
pncreas endocrino, es una hormona Hiperglicemial que se incrementa en la sangre al disminuir
el nivel de glucosa, cuando llega al hgado causa la Glucogenolisis (degradacin de glucgeno
para obtener glucosa)=
Cuando la necesidad de glucosa es muy grande en el organismo y no se dispone de cantidad en
la dieta, se puede formar glucosa a partir de la gluconeognesis ( obtencin de glucosa a partir
de otras vas : lactato, aminocidos glicerol, cidos grasos. Otros)
Este proceso tiene lugar en las clulas hepticas, clulas renales, tejido muscular.
Insulina: es una hormona producida por las clulas beta del pncreas ( islotes de LANGERRHANS)
se considera Hipoglucemiante porque cuando los niveles de sangre incrementa , tambin se
incrementa la insulina.
Fundamento:
La glucosa se oxida enzimticamente por la glucosa oxidasa a acido gluconico y agua oxigenada
C6H12O6
+ O2
------------ Acido gluconico + H2O2
Luego
peroxidasa
H2O2 +Acido para hidroxibenzoico -------- Cromgeno rojo cereza + H 2O
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