INSTITUTO

NACIONAL DE
SALUD

PROTOCOLO TOMA Y ANLISIS DE MUESTRAS DE AGUA PARA DETERMINACIN DE VIBRIO

CHOLERAE

Elaborado por: rea Microbiologa de Aguas. Grupo Salud Ambiental SRNL. Actualizado 01- 02 - 2011
Este procedimiento se aplica al muestreo de aguas superficiales, agua potable, aguas subterrneas, aguas
residuales, crudas, tratadas y marinas.
La obtencin de la muestra se realiza mediante la utilizacin del hisopo de Moore en aguas:
superficiales, subterrneas, residuales, marinas.
Elaboracin del hisopo de Moore Modificado por el INS

Se cortan tiras de gasa de 60 cm de largo por 45 cm de ancho.

Doblar la gasa varias veces longitudinalmente, y tres veces seguidas a lo ancho cortando en cada
costado.

Avenida calle 26 No. 51-20, Bogot, D.C., Colombia

Conmutador (1) 220 77 00 fax 2200914
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Nuestra misin: somos un establecimiento pblico nacional de

referencia cientfico-tcnica, que contribuye a proteger y mejorar
las condiciones de salud de las personas, mediante la prestacin
de servicios y produccin de bienes en pro de la salud pblica, en
el marco del sistema general de seguridad social en salud y del
sistema de ciencia y tecnologa.

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Obtener tiras de aproximadamente 5 cm de ancho y 30 cm de largo, que se atan del extreme superior.

Atar firmemente con una Pita calibre 12. (usada en el juego del trompo)

Envolver en papel kraft y esterilizar en autoclave, 20 minutos a 120C y 15 PSI.

Toma de la muestra utilizando el hisopo de Moore

Colocar el hisopo en el lugar seleccionado a una profundidad de 20-30 cm en el sitio representativo.

El largo de la pita que sujeta el hisopo debe ser de 1 metro lineal, con el fin de facilitar su manipulacin.
El hisopo debe permanecer sumergido de 24 a 48 horas.
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Al retirar el hisopo, este debe colocarse en un recipiente hermtico estril de boca ancha que contenga
300 ml de agua peptonada alcalina (pH entre 7.5 9).
Identificar la muestra con fecha, hora de iniciado el muestreo, hora de finalizacin del muestreo, lugar
del muestreo, origen de la fuente y responsable del muestreo (para cada toma diligenciar un formato
sobre los datos de la muestra).
Empacar adecuadamente el recipiente hermtico para evitar ruptura prdida de muestra durante el
transporte.
Enviar al laboratorio que realizara el anlisis, lo ms pronto posible. No deben transcurrir ms de 6
horas despus de la toma para su procesamiento en el laboratorio, manteniendo la muestra refrigerada.
Si el Laboratorio de Salud Pblica donde se remite la muestra cuenta con los medios para hacer el
aislamiento primario y las pruebas presuntivas, ests deben ser realizadas.

Para el caso de aguas tratadas y para consumo humano se recomienda la utilizacin de la

tcnica de filtracin por membrana.
Filtrar a travs de una membrana (Millipore) de poro 0,22 a 0,45 de diametro, 100 ml a 300 ml de
muestra (o una cantidad mayor si es posible).
Una vez realizada la filtracin, colocar el filtro en un frasco con 100 ml de APA (agua peptonada
alcalina).
Incubar entre 35C a 37C por 6 a 8 horas.
Continuar desde el paso 2. del procedimiento de Aislamiento e identificacin presuntiva de V.cholerae.
descrito a continuacin.
Aislamiento e identificacin presuntiva de V.cholerae

1. El recipiente con el agua peptonada alcalina que contiene el hisopo de Moore, se incuba a una
temperatura de 35C - 37C durante 6 8 horas.
2. Luego de la incubacin, y evitando mezclar el recipiente, utilizando un asa, se toma de la porcin
superior del caldo, incluida la superficie, y se siembra en agar TCBS (medio selectivo) en estria. De
igual forma, se realiza la siembra en un agar gelatina con 1% de NaCl (medio no selectivo para pruebas
preliminares).
3. Incubar al agar TCBS y el agar gelatina con 1% de NaCl de 18 24 horas a una temperatura de 35C 37C.
4. Observar las colonias caractersticas de V.cholerae en cada medio de cultivo, as:
Agar TCBS: colonias amarillas brillantes, pegajosas con centro opaco y periferia traslcida, lisas de 2
3 mm de dimetro.
Agar gelatina con 1% de NaCl: colonias translcidas de bordes regulares de 2 3 mm de dimetro.

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5. Tomar una colonia caracterstica del agar gelatina con 1% de NaCl para realizar la prueba de oxidasa
que debe dar POSITIVA y la prueba del hilo mucoide o cuerda, que debe dar como resultado la
FORMACIN DEL HILO MUCOIDE.
6. Los aislamientos de V.cholerae sospechosos se deben someter a la prueba de aglutinacin en lmina
con antisuero polivalente contra V.cholerae O1.
7. Los Laboratorios de Salud Pblica Departamentamentales deben enviar todos los aislamientos positivos
con el antisuero polivalente O1 al Grupo Salud Ambiental de la Red Nacional de Laboratorios del
Instituto Nacional de Salud para ser confirmados.

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