Problema 1)

Para la fabricacin de un medicamente oncolgico se desea obtener una bacteria recombinante que contenga el gen
Onc. Para ello se recurre a una biblioteca genmica, debindose primero extraer el gen Onc del plsmido pSX. Una
vez extrado el gen Onc, debe ser insertado en el plsmido pV125 que es el vector de clonacin a incorporar en la
bacteria (husped). A continuacin se describe el mapa de restriccin de ambos plsmidos.
Sau3A (1216) BamHI (0)

BamHI (0)
Sau3A (3339)

HinfI (1013)

Ori

EcoRI (632)

Onc

Sau3A (645)

Pr

NotI (301)

BamHI (651)

ZR

pV125
3569

HinfI (689)

pSX
1258

Luc

Kan

Ampi
EcoRI (2423)
EcoRI (518)

BamHI (745)
HinfI (632)

Referencias en pV125 (vector de clonacin):

-Ori: zona de origen de la replicacin.
-Ampi: gen de resistencia, que aporta resistencia al antibitico ampicilina.
-ZR: zona de restriccin.
-Luc: gen reportero, que manifiesta bioluminiscencia cuando se expresa el gen de inters.
-Pr: promotor, que regula la expresin del gen de inters y del gen reportero. Se trata de un promotor constitutivo.
Referencias en pSX (plsmido en biblioteca genmica):
-Onc: gen de inters.
-Kan: gen de resistencia, que aporta resistencia al antibitico kanamicina.

Nota 1: al generar el plsmido recombinante, considerar hidrlisis total cuando hay ms de un sitio de restriccin.
Se desea saber:
a) qu enzima o enzimas de restriccin deben ser empleadas?. Justifique.
b)qu tamao tendr el plsmido a incorporar en el husped?. Grafique el mapa de restriccin.
c) qu antibitico o antibiticos deben ser empleados en el medio de cultivo para la seleccin de las bacterias que
incorporaron al vector con el gen Onc?. Justifique.