CARACTERIZACIN DE CLONES DE CACAO POR RESPUESTA A MONILIA

(MONILIOPHTHORA RORERI (CIF & PAR) EVANS ET AL) EN SANTANDER

Resumen
La moniliasis es el principal problema fitosanitario en el cultivo de cacao en Colombia y
ocasiona prdidas en produccin cercanas al 40%. La bsqueda de resistencia
gentica es una alternativa para el manejo de la enfermedad. La respuesta a la
inoculacin artificial con M. roreri fue determinada por inoculacin artificial de 10
genotipos de cacao en la Estacin Experimental La Suiza (500 m.s.n.m, 25 C, 2000
m.m), ubicada en Rionegro (Santander), durante el segundo semestre del ao 2004.
Los genotipos fueron evaluados con la utilizacin de dos tcnicas de inoculacin
artificial (conidias secas y conidias en suspensin); las variables de evaluacin fueron
cuantificadas por muestreo destructivo de las mazorcas ocho semanas despus de la
inoculacin (incidencia, severidad externa, y severidad interna). La calificacin por
respuesta a M. roreri fue establecida con base en la variable severidad interna. El
mtodo de conidias secas se mostr como el ms apropiado para el seguimiento del
tipo del desarrollo de los sntomas de la enfermedad. Los dos mtodos de inoculacin
fueron eficientes, presentndose una incidencia de enfermedad superior al 90%.
Existi una correlacin positiva y significativa entre el ndice de severidad interna (ISI)
e ndice de severidad externa (ISE) con valores de (r=0.95) para el mtodo de
conidias secas y (r=0.88) para el mtodo de conidias en suspensin. Se presentaron
diferencias significativas (P<00.5) para la reaccin de resistencia a M. roreri, es as
como los clones ICS-39, TSH-565, ICS-40, IMC-67, ICS-1, ICS-60, CAP-34, EET-8
fueron calificados como susceptibles (ISI > 3.76), CCN-51 moderadamente susceptible
(3.75 > ISI > 2.51) y ICS-95 moderadamente resistente (2.51 > ISI >1.25). La
identificacin del genotipo ICS-95, sugiere la posibilidad de utilizar la resistencia de
campo como herramienta de seleccin de genotipos con resistencia estable a M.
roreri.
Palabras clave: theobroma cacao, resistencia de campo
Summary
Moniliasis is the main phytosanitary problem in cocoa farming in Colombia and it
causes the production losses close to 40% (Barros, 1982). The resistance genetic
search is a valuable alternative to control the disease. The response to the artificial
inoculation of ten cocoa genotypes in the Experimental Station La Suiza (500
m.s.n.m), 25 C, 2000 mm) located in Rionegro (Santander), during the second
semester of 2004. The genotypes were evaluated by destructive sampling of the cobs
eight weeks after the inoculation (incidence, external severity an internal severity) the
qualification by response to M. roreri was established based in the changeable internal
severity.
Introduccin
La produccin de cacao en el pas est severamente afectada por la presencia de las
enfermedades, entre estas la ms limitante es la moniliasis, considerada como la ms
limitante por cuanto ocasiona prdidas en produccin alrededor del 40% o ms
(Barros, 1982). La moniliasis se encuentra distribuida en la totalidad de las zonas
productoras, su efecto es devastador pues se estima que el pas pierde ms del 40%

de su cosecha anual, equivalente en trminos de grano comercial a 28.000 toneladas

mtricas sobre una produccin promedia de 42.000 toneladas en los ltimos seis aos.
En Colombia la investigacin en problemas patolgicos del cacao ha venido siendo
relegada desde los aos 90, por no ser este un sistema de produccin en crecimiento
en el pas. Aunque se hicieron algunos estudios de evaluacin de tolerancia a monilia
(Snchez y Cubillos, 1984; Crdenas y Giraldo, 1986; Arguello, 1997), estos no son
suficientes, adems los mtodos que utilizaron son menos eficientes que las utilizadas
en la actualidad. Las metodologas de evaluacin basadas en el anlisis de los
diferentes grados de severidad presentes en materiales de cacao, an no han sido
aplicadas para determinar diferencia entre respuesta en la bsqueda de tolerancia en
clones de cacao; por tanto se est produciendo y entregando a los agricultores
materiales de cacao que poseen rendimientos superiores, pero an no han sido
evaluados por resistencia a monilia.
El manejo de la enfermedad con la bsqueda de la resistencia de campo en los
materiales debe ser considerado; estudios de inoculacin artificial evidenciaron la
posibilidad de encontrar resistencia a la enfermedad en algunos cultivares.
Para la realizacin de los ensayos de evaluacin de resistencia a lo largo de los aos
se ha modificado y perfeccionado continuamente la metodologa de inoculacin y las
escalas clasificacin (Porras y Galindo, 1984; Enrquez et al, 1982; Snchez, 1982,
Snchez et al, 1987; Phillips-Mora y Galindo, 1987, Phillips-Mora, 1986).
En el pas, investigaciones preliminares manifestaron que es factible encontrar
materiales resistentes o con tolerancia dilatoria, el clon IMC-67 y algunos hbridos
donde este clon interviene, ofrecen comportamientos aceptables y promisorios ante la
enfermedad (Snchez y Cubillos, 1984). Los genotipos E1 IMC-67 y P7 fueron
calificados como tolerantes por su mediano dao interno y por presentar mayor tiempo
de duracin en la expresin de sntomas (resistencia dilatoria) (Crdenas et al, 1986).
De acuerdo con Arguello, 1997, los clones ICS-39, ICS-95, EET-400 fueron
considerados como resistentes, CAP-34 e ICS-60 moderadamente resistentes, UF-613
e IMC-67 tolerantes, EET-62, ICS-60 e ICS-6 susceptibles y TSA-641, TSA-654, TSH792, TSH-565 e ICS-1 como muy susceptibles.
La propuesta del gobierno central dentro del plan de sustitucin de cultivos con cacao,
aumentando el rea de siembra en ms de 50.000 Has, basado en la propagacin
clonal de materiales requiere de manera indispensable, realizar una evaluacin
preliminar del comportamiento de estos materiales frente a los principales problemas
fitosanitarios con nfasis en monilia, para poder entregar a los agricultores materiales
validados por niveles de resistencias superiores, por tanto, los objetivos de este
trabajo fueron:

Validar la eficiencia y funcionalidad de dos metodologas de inoculacin

artificial de M. roreri en cacao.
Evaluar 10 clones de cacao universales por respuesta a monilia (M. roreri) en
cacao.

Materiales y mtodos
La evaluacin de respuesta a monilia (M. roreri) en 10 clones de cacao, se realiz en
la Estacin Experimental La Suiza (Rionegro-Santander), ubicada a 500 m.n.s.m, con
temperatura promedio anual de 25 C, precipitacin anual de 2000 mm y una humedad
relativa promedio del 77%, durante el segundo semestre del ao 2004.
Se evaluaron dos mtodos de inoculacin artificial: el mtodo de conidias secas y el
mtodos de conidias en suspensin.
Mtodo de conidias secas
El desarrollo de la metodologa consisti en inocular pepinos, con edad cercana 60
das utilizando conidias seca de M. roreri, adherida a la cabeza con un alfiler
entomolgico depositndolas en una zona depositndolas en una zona de dos
centmetros cuadrados de la zona previamente marcada con esmalte y humedecida
con agua estril. Posterior a la inoculacin los pepinos fueron protegidos en una
cmara hmeda constituida por una bolsa de polietileno y una toalla de papel
empapada con agua estril, con el propsito de humedecer el ambiente interno y
favorecer la germinacin de las esporas; la toalla de papel se retir dos das despus
cortando uno de los extremos de la bolsa y con ayuda de una pinza. El sitio de
inoculacin se marc para facilitar el seguimiento del desarrollo de la enfermedad y la
aparicin de los sntomas iniciales y finales en el ensayo.
El inoculo (conidias) se obtuvo a partir de mazorcas provenientes del campo en estado
de mancha, estas se lavaron, desinfectaron y colocaron a esporular en una cmara
hmeda ubicada en el laboratorio, una vez la mazorca esporul y las conidias
alcanzaron la madurez (coloracin crema), estas se colectaron por gravedad en cajas
de Petri colocadas en la base de la cmara (Merchn, 1991).
Para determinar la concentracin de inoculo presente en la cabeza de un alfiler
entomolgico, se realizaron 10 conteos, disolviendo las conidias adheridas a la cabeza
del alfiler en 200 ml de agua destilada con 2 gotas de Twen 80 al 0.1% esta solucin
se llev a agitacin por un tiempo aproximado de 10 minutos. En la cmara de
Neubauer se determin una concentracin promedio de esta solucin en 121.000
esporas/ml.
Para finalizar el ensayo, nueve semanas despus de la inoculacin, se realiz un
muestreo destructivo de las mazorcas de cada clon con el propsito de medir las
variables incidencia, severidad externa y severidad interna, los datos fueron
analizados estadsticamente por anlisis de varianza y comparacin de promedios por
Tukey.
Mtodo de conidias en suspensin
El inculo fue preparado a partir de aislamientos de M. roreri contenidos en cajas petri
con medio de cultivo V8 en 12 das de sembrados; las conidias fueron desprendidas
aplicando 20 ml de agua esterilizada por caja petri y con ayuda de un pincel se hizo un
barrido suave en el medio, esta solucin fue disuelta con 180 ml de agua destilada
estril y dos gotas de Twen 80 al 0.1%; la solucin fue agitada por 10 minutos;

posteriormente se determin la concentracin de conidias en la cmara de Neubauer y

la solucin fue ajustada a una concentracin de 1.2 x 10 conidias/ml, cada fruto fue
asperjado con 0,5 ml de esta solucin (Phillips-Mora, 1987).
Para medir la respuesta de los genotipos a la inoculacin artificial con M. roreri, nueve
semanas despus de la inoculacin se midieron las variables:
Incidencia: porcentaje de frutos enfermos en relacin al total de frutos inoculados.
Esta variable califica la eficiencia del mtodo de inoculacin artificial, los valores de
incidencia son generalmente cercanos al 100% an ms para cultivares resistentes.
Severidad externa: basada en la experiencia externa del fruto y los signos del
patgeno, utilizando la escala propuesta por Brenes, 1983, donde: grado 0=fruto sano,
1= puntos aceitosos; 2= tumefaccin o clorosis; 3= mancha (necrosis); 4= micelio
hasta un 25% de la mancha; 5= micelio en ms del 25% de la mancha. Esta variable
mide el nivel de dao externo causado por el hongo y su habilidad para producir
propagulos.
Severidad interna: basada en el porcentaje de necrosis interna observada en el fruto
cuando este cortado longitudinalmente y medido con relacin a la escala desarrollada
por Snchez, et al 1987, donde: grado 0= creo rea necrosada; 1=1-20% del rea
necrosada; 2= 21-40% rea necrosada; 3= 41-60% rea necrosada; 4= 61-80% rea
necrosada; 5=100% rea necrosada. Esta variable muestra la capacidad de dao
interno que puede causar el hongo en la mazorca afectando los granos.
Los cultivares son clasificados de acuerdo con la severidad interna, ya que esta
variable refleja mejor el dao causado por el hongo a los granos, y adems se ha
demostrado una buena correlacin entre la severidad interna y externa (Phillips-Mora y
Galindo, 1987). La cuantificacin de la severidad interna es medida por replica y por
cultivar (utilizando 10 frutos/cultivar/replica y cuatro rplicas).
Resultados y discusin
Mtodo de conidias secas
Se encontraron diferencia estadstica significativa (P<0.05), para el ndice de
severidad interna (ISI) e ndice de severidad externa (ISE) en los clones evaluados.
Existi una correlacin positiva y significativa entre ISI e ISE (r=0.95).
Aunque la correlacin entre las variables ISI e ISE es significativa, la utilizacin del ISI
para calificar la reaccin de un cultivar de cacao a M. roreri, se explica ya que permite
estimar mejor la capacidad del dao que puede causar del dao que puede causar el
hongo afectar los granos (Phillips-Mora, 1987; Surez Capello, 1996), adems el
ndice de severidad externo no permite identificar infecciones ocultas comnmente
observadas en el cacao (Ampuero, 1967; Evans, 1981), y es muy difcil identificar
sntomas anteriores a la formacin de la mancha sobre todo en genotipos de color
rojo.
El patgeno tuvo la habilidad de causar infeccin en todos los clones evaluados
alcanzando una incidencia de la enfermedad superior al 90%, esto permite explicar la

gravedad del dao que origina M. roreri en las regiones donde est presente y el
efecto devastador que puede tener para la produccin del grano, la diseminacin del
patgeno reas productoras de importancia, hoy libres de la enfermedad (Roger, 1926,
Enrquez et al, 1982, Krauss y Soberanis, 2001). Este comportamiento puede ser
atribuido a una alta especializacin que M. roreri ha alcanzado como producto de un
largo periodo de coevolucin con sus hospederos, los gneros Theobroma y Herrania
(Whitlock y Baum, 1999).
La diferencia estadstica (P< 0.05) en las variables ISE e ISI, en los distintos clones
evaluado, demuestra la variabilidad gentica en respuesta a la infeccin con M. roreri.
La variacin en el tiempo de expresin de los sntomas, evidencia su dependencia del
componente gentico de los clones y no el efecto del ambiente ya que el ensayo se
llev a cabo en las mismas condiciones ambientales y con igual mtodo de
inoculacin.
El mtodo de conidias secar permite la inoculacin en un fruto especfico del fruto,
localizando el punto exacto de penetracin del hongo, el sitio de origen de la infeccin
y el mtodo de inoculacin es recomendado para investigaciones especficas y el
mtodo de aspersin es ms conveniente para la evaluacin de genotipos por
resistencia.
Mtodo de conidias en suspensin
Se observaron diferencias estadsticas significativas (P<0.05), para el ndice de
severidad interna (ISI) y el ndice de severidad externa (ISE) en los clones evaluados.
Existi una correlacin significativa y positiva (r=0.88) entre estas dos variables. La
incidencia corrobor la eficiencia del mtodo de inoculacin y la especializacin del
patgeno respecto a su husped.
Aunque la diferencia estadstica (P<0.05) estuvo presente en el ISI, la escala de
calificacin de respuesta a la inoculacin considera que los valores ubicados dentro
del rango 3,76 < ISI < 5 son estimados como susceptibles y presentan porcentaje de
dao interno superior al 50% y esporulacin de ms del 25% de la mancha, por tanto
los clones IMC-67; ICS-1; ICS-60; CAP-34 y EET-8 no hay variabilidad gentica con
respecto a M. roreri y se consideran susceptibles.
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