A

AO DE LA INVERSIN
PARA EL DESARROLLO
RURAL Y LA SEGURIDAD
ALIMENTARIA

UNIVERSIDAD
CONTINENTAL
ACCION DE AGENTES FISICOS SOBRE
LOS MICROORGANISMOS

BUSTRILLOS RIVERA LUIS 2009207396

CARRION BARTOLO JEUS 2010207271
CONDOR POMA LUIS HENRY
LIMA HUACHO LILIANA

2010118791

SOTACURO MARTINEZ CINTHYA 2011117766

DOCENTE: CORDERO AZABACHE JORGE

admin
SECCION: BI 1002
SEMESTRE: 2013-1
GRUPO:MESA 3

INDICE

Contenido
INTRODUCCIN ............................................................................................................................. 3
OBJETIVOS ..................................................................................................................................... 4
GENERAL.................................................................................................................................... 4
ESPECFICO .................................................................................................................................... 4
I.

MARCO TEORICO ................................................................................................................... 5

1.1

CONDICIONES QUE AFECTAN EL CONTROL DE LOS MICROORGANISMOS ................... 5

1.1.1 TEMPERATURA ............................................................................................................. 5

1.1.2 CLASES DE MICROORGANISMOS.................................................................................. 5
1.1.3 ESTADO FISIOLOGICO DEL MICROORGANISMO........................................................... 6
1.1.4 MEDIO AMBIENTE ........................................................................................................ 6
1.2 CONTROL DE MICROORGANISMOS POR AGENTES FISICOS Y QUIMICOS........................... 6
1.1.1 DEFINICION................................................................................................................... 6
1.3 CONDICONES QUE INFLUYEN SOBRE LA EFICIENCIA DE LA ACTIVIDAD DE UN AGENTE
ANTI MICROBIANO .................................................................................................................... 7
1.4 CONTROL MICROBIANO POR METODOS FISICOS ............................................................... 8
1.5 CONTROL MICROBIANO POR AGENTES QUIMICOS ............................................................ 8
1.6
II.

EVALUACION DE LA EFICACIA DE LOS AGENTES ANTI MICROBIANOS .......................... 9

MATERIALES ........................................................................................................................ 10
2.1 EQUIPOS ............................................................................................................................ 10
2.2 MATERIALES DE LABORATORIO ........................................................................................ 11
2.3 MATERIALES REACTIVOS ................................................................................................... 12

III.

PROCEDIMIENTO: ............................................................................................................ 13

3.1 EFECTO DE LA TEMPERATURA........................................................................................... 13

3.2 ACCIN DE LA PRESIN OSMTICA .................................................................................. 14
3.3 ACCIN GERMICIDA DE LA LUZ ULTRAVIOLETA................................................................ 14
IV.

RESULTADOS ................................................................................................................... 15

EFECTO DE LA TEMPERATURA ................................................................................................ 15

ACCION DE LA PRESION OSMOTICA ........................................................................................ 15
ACCION GERMICIDA DE LA LUZ ULTRA VIOLETA .................................................... 17
V:DISCUSIONES............................................................................................................................ 18
EFECTO DE LA TEMPERATURA .................................................................................................... 18

2: ACCIN DE LA PRESIN OSMTICA: ................................................................................... 20

3: ACCIN GERMICIDA DE LA LUZ ULTRAVIOLETA.................................................................. 22
VI: CONCLUSIONES ...................................................................................................................... 24
1: EFECTO DE LA TEMPERATURA ................................................................................................ 24
2: ACCION DE LA PRESIN OSMOTICA .................................................................................... 24
3:ACCIN GERMICIDA DE LA LUZ ULTRAVIOLETA................................................................... 24
VII: ANEXOS ................................................................................................................................. 25
VIII: BIBLIOGRAFA....................................................................................................................... 26
VIII: CUESTIONARIO ..................................................................................................................... 27

INTRODUCCIN
Como se ha visto anteriormente los microorganismos deben ser capaces

de

responder a variaciones en los niveles nutricin .los microorganismos se desarrollan

notablemente en la naturaleza qumica y fsica que la rodea.
El conocimiento de estas influencias ambientales permitir controlar el crecimiento
microbiano, para ello se conocer tres de los factores limitantes sobre el crecimiento
bacteriano: como

los microorganismos son conocidos por su alta resistencia en

comparacin a los dems reinos, sin embargo tienen ciertas limitaciones con respecto
a algunos factores fsico - qumicos, estos podrn ser usados para limitar, alterar o
inactivar su crecimiento.
Para ello redactamos todo lo sucedido en la prctica de laboratorio de microbiologa,
que tuvo como finalidad Inhibir el crecimiento microbiano por accin de agentes
qumicos fsicos desarrollados en tres sesiones el primer efecto de la temperatura,
aqu las bacterias son capaces de sobrevivir amplios lmites de temperatura, en un
rango entre los 0-90C. Segunda accin de la presin osmtica factor que viene a
ser la presin desbalanceada que da lugar a los fenmenos de difusin y osmosis, en
una solucin que tiene diferentes de concentraciones. Y por ltima accin germicida
de la luz ultravioleta son componentes invisibles de la radiacin solar, todos los
microorganismos son sensibles al tratamiento UV
Finalmente en dicha redaccin presentaremos una estructura detallada de las
sesiones realizadas en laboratorio, resaltando los resultados, discusiones y
recomendaciones para tener un mejor ensayo de prctica de laboratorio.

OBJETIVOS

GENERAL
Identificar los efectos producidos por los agentes
fsicos sobre microorganismos.

ESPECFICO

Inhibir el crecimiento microbiano por accin de agentes

qumicos
Conocer los cambios producidos en la bacteria problema
por la temperatura, presin osmtica y radiacin
ultravioleta.

I.

MARCO TEORICO

1.1 CONDICIONES QUE AFECTAN EL CONTROL DE LOS

MICROORGANISMOS
Normalmente si queremos esterilizar un objeto como un matraz de laboratorio no
necesitamos identificar las especies de microorganismos que hay en l. En su
lugar realizamos un ataque general que sea lo suficientemente fuera como parara
matar a alas formas microbianas ms resistentes que pudieran estar presentes
(las endosporas). En cualquier momento el matraz puede contener una multitud de
microorganismo en diferentes fases se du ciclo de crecimiento, con diferentes
estados metablicos e incluyo en distintos microambientes. Por ello es posible un
que un agente anti microbiano no mate inmediatamente a toda la poblacin
microbiana. El tiempo que se tarda en reducir o eliminar el crecimiento microbiano
sobre cualquier objeto depende del nmero y especies de microbios que se
encuentren en l y tambin de muchos otros factores.

1.1.1 TEMPERATURA

Todo el mundo esta familiarizado con el uso del hielo y de la refrigeradora

mecnica para controlar el crecimiento microbiano. Como todas la reacciones
bioqumicas necesarias para el crecimiento disminuyen considerablemente a
bajan temperaturas. Ya que su actividad est en funcin de reacciones
qumicas dependientes de la temperatura, los desinfectantes trabajan mejor en
soluciones templadas. Es normal que las instrucciones de los envases
desinfectantes especifiquen que se utilice una temperatura media.

1.1.2 CLASES DE MICROORGANISMOS

Muchas desinfecciones y antispticos tiendes a tener mayor efectos sobre las

bacterias Gram-positiva, aunque esta diferencia no es tan significativa como
ocurre con la actividad antibitica. Por ejemplo, un cierto grupo pseudomonas ,
presentan una resistencia poco comn a los agentes desinfectantes y
antispticos , estas bacterias son capaces de

mantenerse en sustrato tan

inverosmiles como una solucin salina simple y son tambin resistentes a

muchos antibiticos. Esta resistencia a agentes antimicrobianos est

relacionada probablemente con el tamao de las porinas (estructuras en forma
de poros que hay en l pared) de psudomonas. Las porinas son mucho ms
pequeas en este grupo de microorganismo
Las micro bacterias son grupos de bacterias no formadoras de endosporas que
muestren una resistencia a los desinfectantes mayor de lo normal, este incluye
a los grupos Mycobacterium tuberculosis.
Las endosporas bacterianas y los quistes de los protozoarios so tambin muy
resistibles a los agentes qumicos, como ocurre con algunos virus. Su
resistencia a la desinfeccin por cloro en el tratamiento de las aguas es un
factor particularmente importante a considerar en las estrategias de salubridad
pblica.
1.1.3 ESTADO FISIOLOGICO DEL MICROORGANISMO

Los microorganismos que crecen activamente son ms sensibles a los agentes

qumicos que las clulas viejas. Esto podra ser debido a que una clula activa
metablica y reproductivamente tiene ms puntos vulnerables que una clula
vieja, posiblemente latente. Cuando los microorganismos han formado
endosporas estas suelen ser ms resistentes que las clulas vegetales.
1.1.4 MEDIO AMBIENTE

La metera orgnica interfiere frecuentemente en la actividad de los agentes

qumicos. En los hospitales la presencia de materia orgnica en vmitos y
heces influye en la eleccin de un desinfectantes, y que unos son ms eficaces
que otros en esas condiciones. Incluso las bacterias que en cuentan en los
alimentos tienden a estar protegidas por la materia orgnica del mismo. El calor
en muchos ms eficaz en condiciones acidas que a un pH neutro.1

1.2 CONTROL DE MICROORGANISMOS POR AGENTES FISICOS Y

QUIMICOS
1.1.1 DEFINICION

La terminologa tiene una sencilla importancia cuando se discute sobre el control

microbiano porque hay trmino como desinfectante y anti sptico que se empela a
1

TORTORA FUNKE CASE. Introduccin a la Microbiologa EDITORIAL Acribia Pg. 172-173

menudo libremente. Esta situacin incluso ms confusa para que un tratamiento

particular pueda inhibir el crecimiento o destruir los microorganismos segn las
condiciones.
La capacidad para controlar las poblaciones microbianas en objetos inanimados como
utensilios de alimentacin o instrumentos quirrgicos tienes una importancia practica
considerable.

La esterilizacin: es el proceso porque l todas la clulas vivas, esporas

visibles, virus y viroides con destruidos o eliminados de un objeto o habitad.
Un objeto esterilizado esta totalmente libre de microorganismo visible.

La desinfeccin: consiste en la destruccin inhibicin o eliminacin de, al

menos, los microorganismos que puedan causar enfermedad, estos son
agentes normalmente agentes qumicos, empleados para desinfectar y se
emplean normalmente sobre objetos inanimados.

1.3 CONDICONES QUE INFLUYEN SOBRE LA EFICIENCIA DE LA

ACTIVIDAD DE UN AGENTE ANTI MICROBIANO
La destruccin de los microorganismos la inhibicin de su crecimiento no son asuntos
sencillos por que la eficacia de un agente antimicrobiano (agente que destruye o inhibe
su crecimiento) depende al menos seis factores
1.- tamao de la poblacin es cada intervalo de tiempo se destruye una fraccin igual
de poblacin microbiana, por tanto, una poblacin mayor necesitara ms tiempo para
morir que una ms pequea.
2.- composicin de la poblacin: la eficiencia de un agente vara considerablemente
con la naturaleza de los organismos que se van a tatar porque estos digieren
sustancialmente en cuanto a su susceptibilidad
3.- concentracin o intensidad de un agente microbiano: a menudo pero no siempre,
cuando ms concentrado este un agente qumico o ms intenso sea uno fsico, ms
rpidamente se destruyen los microorganismos.
4.- duracin de la exposicin: cuanto ms tiempo se exponga una poblacin a un
agente microbicida ms organismo se destruyeran.

5.- temperatura: La actividad de los agentes qumicos aumenta con la temperatura.

Con frecuencia, concentraciones bajas de un desinfectante pueden ser eficaces a
temperaturas ms altas.
6.- ambiente local: la poblacin microbiana que debe ser controlada no est aislada,
sino en el contexto de una serie de factores ambientales que puedes ofrecerle
proteccin o facilitar su destruccin

1.4 CONTROL MICROBIANO POR METODOS FISICOS

El calor y otros agentes fsicos se suelen utilizar para esterilizar objetos, como lo
demuestra el uso que todava tiene la autoclave en todos los laboratorios de
microbiologa. Los cuatro agentes empleados con ms frecuencia como agentes
fsicos son: calor, bajas temperaturas, filtracin y radiacin.

CALOR: el fuego y el agua en ebullicin se han utilizado para esterilizar,

desinfectar desde la poca de los griegos, siendo el calor uno de los mtodos
ms comunes para destruir microorganismos bajas temperaturas

aunque

hasta ahora se estn discutiendo los sistemas para la destruccin de

microorganismo, a menudo, la tcnica de control ms conveniente es el inhibir
sus multiplicacin mediante el empleo de la refrigeracin o congelacin

FILTRACION: es un mtodo excelente para reducir, incluso esterilizar la

poblacin microbiana en

soluciones termo sensibles. Ms que destruir

directamente los organismos contaminantes, el filtro simplemente lo retira.

RADIACION: los tipos de radiacin y las formas en que dao o destruye a los
microorganismos se han destruido

ya previamente .las aplicaciones de las

radiaciones ultravioleta e ionizante para estelarizar.

1.5 CONTROL MICROBIANO POR AGENTES QUIMICOS

Aunque los objetos se desinfectan a veces con agentes

fsicos, las sustancias

qumicas se utilizan con ms frecuencias para la desinfeccin y la antisepsia.

Compuestos fenlicos: el fenol fue el primer antisptico y

desinfectante

de uso

generalizado. En 1967, Joseph Lister lo empleo para reducir el riego de desinfeccin

en las operaciones quirrgicas, actualmente el fenol y sus derivados como cresoles,
xilenos, torios y hospitales

ALCOHOLES: se encuentran entre los desinfectantes y antispticos ms

utilizados. Son bactericidas y fungicidas pero no esporicidas; destruyen
tambin algunos virus con envoltura lipdica. Los dos alcoholes germicidas ms
comunes son el etanol y el isopropanol , empleados normalmente en
concentracin de 70% o 80%

DETERGENTES: son molculas orgnicas que actan como agentes

humectantes y emulsionantes porque poseen tanto extremos hidrfilos polares
y como tambin hidrfilos no polares debido a su naturaleza antiptica, los
detergentes son capaces de solubilizar residuos que son insolubles en agua,
por lo que se les considera agentes limpiadores muy eficaces.

GASES ESTERILIZANTES: muchos objetos termo sensibles como placas de

Petri y jeringas desechables, piezas de mquinas. El xido de etileno es tanto
micro sida como esporicida, destruye los microorganismos para cambiarse con
las protenas celulares. Es particularmente eficaz como agente esterilizante por
que penetra rpidamente atreves de materiales embalados incluso envolturas
de plstico.
La esterilizacin se lleva a cabo en unos esterilizados especial de xido de
etileno que recuerda bastante aun auto clave que controla la concentracin de
xido de etileno, temperatura y la humedad.

1.6

EVALUACION DE LA EFICACIA DE LOS AGENTES ANTI

MICROBIANOS

El anlisis de los agentes anti microbianos es un proceso complejo regulado en los

estados unidos. Por dos organismo federales diferentes. El departamento de
proteccin ambiental controla los desinfectantes, mientras que los agentes que se
utiliza en seres humano y animales estn bajo en control de la administracin de
alimentos frmaco, (FDA). El anlisis de agentes anti microbianos comienza a menudo
con una

prueba de investigacin inicial para ver si son eficaces y a que

concentraciones. Esto puede continuar con un ensayo en condiciones ms propinadas

a su uso real.
El mtodo ms utilizado para el estudio de desinfectantes es la prueba del coeficiente
fenlico en la que compra la eficacia de un desinfectante con la del fenol.2

PRESCOTT HARLEY KLEIN. Microbilogia Pg. 147-160

II.

MATERIALES

2.1 EQUIPOS
Descripcin

Descripcin

Horno
elctrico
Sirve para llevar o elevar
a altas temperaturas las
diferentes muestras que
se desean someter.

Instrumento que sirve

para
poder
calentar
compuestos o ponerlos
en bao mara.

Es un mtodo empleado
en, en laboratorio de
qumica, para conferir
temperatura uniforme a
una sustancia lquida o
slida o para calentarla
lentamente.

Estufa

Bao maria.

Radiacin
ultravioleta.
Se denomina radiacin
ultravioleta o radiacin
UV a la radiacin
electromagntica cuya

Imagen

2.2 MATERIALES DE LABORATORIO

DESCRIPCIN

MATERIAL

IMAGEN

Se utiliza en los
laboratorios
para
contener
pequeas
muestras
lquidas,
realizar reacciones en
pequea escala, entre
otras cosas

Tubos de
ensayo

Es utilizada en
laboratorios para
variados fines.

Mechero

Un
instrumento
volumtrico
de
laboratorio
que
permite medir alcuota
de
lquido
con
bastante
precisin.
Suelen ser de vidrio.

Pipeta

Recipiente cilndrico
de vidrio fino que se
utiliza muy
comnmente en el
laboratorio, sobre
todo, para preparar o
calentar sustancias y
traspasar lquidos.

Vasos
precipitados

Instrumento destinado
a medir temperaturas
con escalas en
grados centgrados o
Fahrenheit.

Termmetro

 Placas estriles.
Es un recipiente
redondo, de cristal o
plstico, con una
cubierta de la misma
forma que la placa, pero
algo ms grande de
dimetro, para que se
pueda colocar encima y
cerrar el recipiente,
aunque no de forma
hermtica
Carton culquiera
requerido para este
trabajo en laboratorio.

Un cartn circular
de 12 cm. de
dimetro, cortado
en uno de los
cuadrantes.

2.3 MATERIALES REACTIVOS

Descripcin
El medio de cultivo es un
polisacrido sin ramificaciones
obtenido de la pared celular de
varias especies de algas rojas
de los gneros Gelidium,
Euchema y Gracilaria

Contenido de bacterias de E.
Coli listas para ser difundidas
en cualquier medio donde se
requiera

material

Imagen
.

1 frasco con 100

ml. de agar
fundido

Cultivo en caldo
de E. coli.

 Es un mtodo empleado en las

industrias, en laboratorio de
qumica,
para
conferir
temperatura uniforme a una
sustancia lquida o slida o
para calentarla lentamente,
sumergiendo el recipiente que
la contiene en otro mayor con
agua que se lleva a o est en
ebullicin.
4 placas con concentraciones
crecientes de sacarosa o NaCl
al 5%, 10%, 20%, 40%. Placas
contenidas
con
diferentes
porcentajes
de
sacarosa
dispuestos a ser utilizados en
cualquier medio donde se los
requiera

III.

Bao de maria

4 placas con
concentraciones
crecientes de
sacarosa o
NaCl al 5%,
10%, 20%,
40%.

PROCEDIMIENTO:

3.1 EFECTO DE LA TEMPERATURA

Distribuir el cultivo de e. Coli en los 8 tubos en cantidades de 2 ml. Cada uno
(enumerar tubos).
Llevar el primer tubo a bao mara por 10 minutos a 45 c.
Transcurrido este tiempo, enfriarlo bruscamente en agua fra.
Una vez enfriado, tomar 1 ml y vaciar en una placa petri estril.
Verter en la placa el agar fundido, mezclar bien y dejar solidificar.
Rotular datos.

Incubar a 37 c durante 24-48 hrs. Proceder en igual forma con los 7 tubos
restantes, pero elevando la temperatura del bao mara (10) cada vez que se
coloca un nuevo tubo; por lo tanto, para el tubo 8 la temperatura del bao
mara ser de 115 c.

Hacer las lecturas y determinar la zona trmica letal.

3.2 ACCIN DE LA PRESIN OSMTICA

En las placas con diferentes concentraciones de naci o sacarosa, sembrar la
cepa de e. Coli.
Rotular datos.
Incubar a 37c por 24-48 hrs.
Comparar con crecimiento en placa con agar nutricio (concentracin normal de
naci) de e.coli.

3.3 ACCIN GERMICIDA DE LA LUZ ULTRAVIOLETA

Con la pipeta capilar colocar de 1 a 2 gotas de uno de los cultivos en el centro
de la placa.
Con la esptula de drigalsky extender la siembra por toda la superficie del
medio.
Trazar con el lpiz graso cuatro cuadrantes perpendiculares sobre el dorso de
la placa, enumerndolos del 1 al 4.
Colocar la placa sembrada a 32 cm de la lmpara de rayos uv.
Cambiar la tapa por el circulo de cartn.
Exponer el cuadrante libre (1) a la radiacin por 30 seg. Apagar la lmpara.
Rotar el crculo de cartn dejando libre el cuadrante (2) y exponer a la luz uv
por 60 seg. Apagar la lmpara.
Rotar el crculo de cartn dejando libre el cuadrante (3) y exponer a la luz uv
por 90 seg. Apagar la lmpara.
El cuadrante (4) no se expone.
Cubrir con su tapa el cultivo e incubar a 37c por 24 hrs.
Anotar los resultados.

IV.

RESULTADOS

EFECTO DE LA TEMPERATURA

A los 45C Despus de las 48

horas de incubacin, se
observaron pequeos puntos
en la siembra.

A los 55CA diferencia del

anterior se observaron en
menor proporcin
crecimiento bacteriano.

A 65C
A 75C
A 80C

No se pudo observar ni un microorganismo en las muestras.

ACCION DE LA PRESION OSMOTICA

A. NaCl al 5%

Respecto al crecimiento bacteriano, el staphylococcus aureus fue quien tuvo

mayor crecimiento, luego fue el bacillus y ultimo el E.coli

B. NaCl al 10%

En esta muestra se observa que el bacillus presenta mayor crecimiento,

luego el staphylococcus aureus, y el que no presenta abundante
crecimiento es la E.coli.

C. NaCl al 15%

El bacillus aun a este porcentaje de NaCl , mantiene un gran crecimiento de

bacterias, y el staphylococcus aureus de igual forma, la E.coli an sigue con
poco crecimiento.

D. NaCl al 20%

El bacillus es quien tiene mayor crecimiento y le sigue el staphylococcus

aureus, y la E.coli presenta menor crecimiento respecto a los 3 anteriores.

ACCION GERMICIDA DE LA LUZ ULTRA VIOLETA

A. Escherichia coli

OBSERVACIONES

Primer
cuadrante

Segundo
cuadrante

Tercer
cuadrante

Cuarto
cuadrante

Existe mayor
presencia de
poblacin
bacteriana
esto se debe
por el tiempo
expuesto que
no era lo
suficiente en el
primer y el
ultimo que no
se expuso

En el segundo
cuadrante
existe una
pequea
poblacin de
E.coli porque
se super la
dosis de la luz
UV que es de
6.600 micro
watt x
segundo/cm2

Igual que el
tercer
cuadrante
existe una
pequea
poblacin de
bacteria

Al igual que el
primer
cuadrante
existe mayor
poblacin
bacteriana

Se observa el
crecimiento de
bacterias pero
en una sola
colonia de
1.5mm.

No se observa
crecimiento de
bacterias.

Tambin se
observa
crecimiento de
bacterias de
medidas de
4mm, 4mm y
3.5mm.

B. Staphylococcus aureus

Observamos que no hay presencia de este microorganismos en los diferentes

cuadrante dado que la luz ultravioleta destruyo un 99.9% porque se obtuvo una dosis
superior a 7 micro watt x segundo/cm2 que es la mnima para destruir esta bacteria.

V:DISCUSIONES

EFECTO DE LA TEMPERATURA
FUENTE:

MATERIALES
Laboratorio de ciencias bsicas
Hidrxido de sodio
cido actico puro. pa
Cultivos puros de bacilos y Cocaceas
Tubos de ensayo taponados estriles (2 por alumno)
Pipetas pasteur taponadas y estriles (2 por alumno)
Chupetes gomas (uno por alumno)
Estufa de cultivo a 37C
Bao mara regulable
Guantes
Jabn desinfectante
Toalla nova
Caldo de cultivo Tripticase soya (distribuido en alcuota de 3 ml por tubo)
Papel indicador de pH
Tubos sometidos a proceso y con modificaciones
Lpiz marcador
PROCEDIMIENTO:
Paso 1: El docente realiza y explica proceso de efecto temperatura, Ph.
Paso 2: Los alumnos organizados en grupo realizan los procedimientos demostrados
por el docente.
Paso 3: Se entregara a cada grupo una alcuota de cultivo puro.
Paso 4: Inocular en dos tubos de caldo Tripticase soya.
Paso 5: Tubo prueba se deber incubar en bao mara a 56C durante 24 horas .
Paso 6.- Tubo control se deber incubar en estufa de cultivo a 37C.

Paso 7: Transcurridas las 24 horas se debiera analizar los resultados obtenidos en

referencia, a visualizar desarrollo microbiano. (en estos talleres se observaran tubos
que han sufrido el proceso)
DISCUSION:
Teniendo como gua los resultados de esta sesin, llevamos a un anlisis y
comparacin, donde podemos decir que en el instituto de DOUCOC realizan un
procedimiento muy a la que fue desarrollada por la universidad continental ya que
en el DOUCOU realizan Con una muestra de un caldo Tripticase soya donde
podemos que estas bacterias contienen sus cepas bacterianas mientras que en la
universidad continental se utiliz la muestra de la bacteria e .coli adems de ello
pudimos obtener bacterias al llevarlas a una temperatura 45Cy 55C, y una vez
realizad este proceso podemos decir que el procedimiento y el mtodo utilizado en el
DOUCOC contiene la misma eficaz en cuanto a la eliminacin de bacterias

Fuente 2: Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2. Pg. 8.

DISCUSIN DE RESULTADOS
Segn la base terica tomada del libro se observa que el rango de temperatura
ptimo para el E. Coli es de 37 - 45C y como mnimo 10C y mximo 55C.
Comparando con nuestros resultados realizados en la universidad continental
observamos mayor crecimiento en las temperaturas de 35C y 45C, no se observ a
25C y se observ poco a 55C, a la sazn podemos decir que nuestros resultados
son vlidos, adems podemos decir que el tipo de agar influye tambin en el desarrollo
microbiano.

2: ACCIN DE LA PRESIN OSMTICA:

FUENTE: UNIVERSIDAD CONTINENTAL

MATERIALES

Cepa de E. coli.
4 placas con: NaCl al 5%NaCl al 10%NaCl al 15%

NaCl al 20%

PROCEDIMIENTOS:
En las placas con diferentes concentraciones de NaCI o sacarosa, sembrar
la cepa de
Rotular datos.
Incubar a 37C por 24-48 hrs.
Comparar con crecimiento en placa con agar nutricio (concentracin normal
de NaCI) de E. coli.
RESULTADOS
NaCl a 5%. Observamos que no hay crecimiento en esta placa Petri, tanto
en el estriado con la E. Coli y St. Aureus.
NaCl a 10%. Observamos que si hay crecimiento en esta placa Petri tanto
en el estriado con la E. coli y St aureus pero en poqusimas cantidades.
NaCl a 15%. Observamos que si hay abundante crecimiento en esta placa
Petri tanto en el estriado con la E.coli y St aureus, ya que est bien
estriado.
NaCl a 20%. Observamos que no hay crecimiento en esta placa Petri tanto
en el estriado con la E.coli y St aureus.

Fuente 2: INFLUENCIA DE LA ACIDEZ Y CONCENTRACIN DE NACL SOBRE EL

CRECIMIENTO DE LEUCONOSTOC MESENTEROIDES Cayr, Mara E. - Garro, Oscar A
Facultad de Agroindustrias - UNNE.

MATERIALES

EN LAS GUIAS REALIZADAS TANTO DE LA UNIVERSIDAD CONTINENTAL Y

FUENTE DE LA BASE TEORICA DEL LIBRO PODEMOS DECIR QUE

en ella

observando la tablas del anlisis percibimos que cuando aumenta la concentracin de

NaCl (1% a 3%)en los cultivos de Leuconostoc Mesenteroides hay un descenso de su
crecimiento, lo mismo ocurre con la E. Coli

por lo que ambos no son halfilos (viven

en condiciones de presin osmtica normal) y la concentracin de sales en exceso

(medio hipertnico) genera su muerte por plasmlisis mientras que en la universidad
continental se observo observa que solo la E.coli presenta poco crecimiento y las
otras muestras es igual la cantidad de crecimiento.

3: ACCIN GERMICIDA DE LA LUZ ULTRAVIOLETA

Fuente: H. B. Wright y W. L. Cairns Trojan Technologies Inc.
Manual de prcticas de microbiologa bsica y microbiologa de alimentos, autores
Evangelina Olivas y Luis Alarcn

Materiales:
Cultivo de escherichia coli en caldo.
Placa con agar nutritivo
Lampara de luz ultravioleta germicida

Procedimiento:
1: inocular mediante un agotamiento de asa un cultivo mixto en una placa con agar
nutritivo.

2: levantamos la tapa y cubriremos la mitad con el papel de aluminio (sin que ste
toque la superficie del medio).
3: Colocar la placa abierta bajo la accin de la lmpara ultravioleta durante 5 minutos.
Transcurrido este tiempo, quitar el papel de alumnio, cerrar la placa y llevar a incubar a
37C.
4:Tras 24 horas de incubacin observaremos el desarrollo microbiano en la parte
protegida de la radiacin, frente a la ausencia de crecimiento en la parte expuesta.
Resultados
En este estudio los resultados fueron: La parte donde se cubri con

papel aluminio se presento un crecimiento muy normal de las bacterias

y en la parte que se expuso ala radiacin UV
presento

ningn

crecimiento

debido

que

por 5 minutos
la

radiacin

no
UV

desnaturalizan las bacterias as inhiben su crecimiento (a mas radiacin

UV se presentara menor crecimiento bacteriano).
DISCUSION:
A diferencia de la fuente de informacin que encontramos podemos decir que en el
experimento desarrollado en la universidad continental , se observ que en la muestra
del primer y cuarto cuadrante se vio mayor cantidad de crecimiento de bacteriana
mientras que en el segundo y tercero menor porcentaje, en el E.coli. Asimismo de
la fuente mencionada podemos mencionar que se us otro tipo de bacteria en la
muestra que la parte que se tap se presenta un crecimiento muy normal de las
bacterias y en la parte que se expuso a la radiacin UV

no presento ningn

crecimiento debido a que la radiacin UV desnaturalizan las bacterias as inhiben su

crecimiento.

VI: CONCLUSIONES

1: EFECTO DE LA TEMPERATURA
La temperatura es un agente fsico que influye bastante en el crecimiento de la
muestra utilizada (E. coli), es decir puede provocar la muerte trmica de acuerdo a la
resistencia de las bacterias la cual es normalmente de 0-90 para lo cual concluimos
que la temperatura optima de optima de crecimiento para esta bacterias segn lo
observado fue entre los valores de 35 y 45C.

2: ACCION DE LA PRESIN OSMOTICA

Para observar una reaccin destructiva es necesario que las bacterias sean grandes
como en el caso de la prctica realizada la placa Petri que contena un agar con 20%
de NaCl,.ya que esta no presento una mayor crecimiento bacteriano.

Segn lo observado de la prctica realizada se observado que hubo crecimiento en las

placas de 5% y 10% de concentracin NaCl, mientras que en las placas que contenan
un porcentaje de 15% y 25% no hubo crecimiento, esto se debe a que a mayores
concentraciones de un soluto en relacin al fluido que rodea a la clula (solucin
hipertnica), esto genera mayor presin osmtica dando lugar a la muerte celular por
plasmlisis

3:ACCIN GERMICIDA DE LA LUZ ULTRAVIOLETA

La luz ultravioleta (se utiliza longitudes de onda inferiores a 300nm para matar
superficie de bacteria y virus) se utiliza para matar a los microorganismos en diversos
medios ambientales, daando su ADN de estos y si las bacterias no pueden reparar
el dao producido y mueren. Cuando mayor sea la exposicin de los rayos ultravioleta,
mejor ser el resultado, asegurando as la destruccin de todos.

La destruccin de los microorganismos se debe hacer con accin de agentes fsico,

que superen las dosis recomendada para eliminarlos, si no fuera el caso as estos
evolucionaran y se volveremos resistente a cualquier medicamento o tratamiento que
se le d, como tenemos el E.coli que no es perjudicial cuando lo tenemos propio de
nuestro organismo, pero si lo adquirimos de otro lado y por medios diferentes, este es
fatal. De igual manera el S.aureus.

VII: ANEXOS

Figura n1: esquema para

realizar el procedimiento 1 y 2

Figura n2: esquema para

realizar el procedimiento 3

Figura n3: crecimiento

bacteriano
Figura n1: crecimiento
bacterianao

VIII: BIBLIOGRAFA

TORTORA FUNKE CASE. Introduccin a la Microbiologa EDITORIAL

Acribia Pg. 172-173

PRESCOTT HARLEY KLEIN. Microbilogia Pg. 147-160

Introduccin a la microbiologa . TOTORA FUNKE CASE PAG. 176

Prescoot . microbiologa. pag 152

Radiaciones ionizantes: Utilizacin y riesgos, Volumen 2, Escrito por

Xavie Inte Ortega Aramburu,Jaume Jorba Bisbal, Xavier Ortega
Aramburu

http://www.quiminet.com/articulos/como-funciona-el-autoclave22563.htm

http://es.scribd.com/doc/6851390/Virologia-Practica-04-Accion-de-losagentes-fisicos-y-quimicos-sobre-la-particula-viral

http://egg.umh.es/frvalera/manualDePracticas.pdf
http://www.zerbitzu-orokorrak.ehu.es/p258shprevct/es/contenidos/informacion/sp_legislacion/es_leg_upv/adjuntos/
Gu%C3%ADa%20t%C3%A9cnica%20del%20INSHT%20agentes%20qu
%C3%ADmicos.pdf

VIII: CUESTIONARIO

1. Defina; punto de muerte trmica (PMT). Tiempo de muerte trmica

(TMT). tiempo de reduccin decimal (o valor D), valor z y valor F.

PUNTO DE MUERETE TERMICA: es la menor temperatura a la que

mueren todas las bacterias de un cultivo lquido en 10 minutos.

TIEMPO DE MUERTE TRMICA: es el menor tiempo necesario para que

todas las bacterias de un cultivo lquido mueran a temperaturas
determinadas. Tanto el PTM como el TMT son guas tiles que indican la
severidad del tratamiento requerido para tratar una poblacin dada de
bacterias.

TIEMPO DE REDUCCIN DECIMAL (TRD O VALOR D): es un tercer

concepto relacionado con el grado de resistencia al calor de las bacterias.
Es el tiempo, en minutos, en el que se destruye 90% de la poblacin
bacteria a una temperatura determinada. El valor de es especialmente til
en la industria de conservas enlatadas.

Valor z: este valor es el aumento de temperaturas necesarias para reducir

de 1/10 de su valor o en un logaritmo, cuando se presenta logaritmo DE
frente a la temperatura.

Valor f: es el tiempo
en minutos y a una temperatura determinada
(normalmente a 121c necesario para destruir una poblacin de clulas o
esporas 3,4

2. Describa el funcionamiento del autoclave. Qu condiciones se

requieren para esterilizar con calor hmedo y cules son los factores
que hay que realizar cuando se trabaja con un autoclave con el fin de
garantizar un resultado positivo?
El FUNCIONAMIENTO DEL AUTOCLAVE DESCRITO POR CHAMBERLAND
se hierve agua para producir vapor, que pasa a travs de una cubierta al
interior de la cmara del autoclave.
Se expulsa el aire que inicialmente se encuentra en la cmara hasta que
este quede llena o de vapor saturado y se cierran las salidas
El vapor saturado y caliente continua entrando a la cmara hasta que se
alcanza la temperatura y presin deseada normalmente a 121c y 6.8 kg de
presin.

3
4

Prescott harley klein . microbiologa . qunta edicin .pag

INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA .TOTORA FUNKE CASE PAG. 174

 A esta temperatura el vapor saturado puede destruir en 10 y 12 minutos

todas las clulas vegetativas y endosporas presentes en un volumen
pequeo de muestra.
El tratamiento se contina durante 15 minutos para conseguir un margen de
seguridad
LAS CONDICIONES QUE SE REQUIEREN:
La esterilizacin con calor hmedo se debe a realizarse a temperaturas
superiores a 100c para destruir las endosporas bacterianas, esto requiere la
utilizacin de vapor saturado bajo presin desarrollada en un autoclave.
LOS FACTORES:
Si no se extrae todo e aire de la cmara no se alcanzar la temperatura de
121c
Los contenedores o recipientes no deben compactarse demasiado porque
el vapor tiene que circular libremente y entrar este en contacto con lo que
este dentro del autoclave.

3. Cmo se realizan la pasteurizacin. Pasteurizacin rpida.

Esterilizacin con temperatura ultra elevada y esterilizacin por calor
seco? D algunas aplicaciones prcticas de cada uno de estos
mtodos.
La pasteurizacin se utiliza a una temperatura alta durante tiempo corto (72c
durante 15 minutos) para destruir los patgenos sin alterar el sabor de los
alimentos.5

LA PASTEURIZACIN RPIDA O DE ALTAS TEMPERATURAS O

TEMPO CORTO: consiste en calentar rpidamente a 72c durante 15
segundos. Este mtodo es aplicada en la industria lctea.

TEMPERATURAS ULTRAELEVADAAS (UHT): la leche y los derivados

lcteos se calientan a una Temperatura de 140c y 150c durante 1 o 3
segundos. La industria lctea utiliza tambin a veces este mtodo.

ESTERILIZACION POR CALOR SECO: Esta esterilizacin donde los

objetos son introducidos a una estufa a temperatura de 160c -170c
durante 2 a 3 horas. Ejem. La esterilizacin de las endosporas clostridium
botulinum que son destruidas en 5 minutos a 160c en 2 horas.

4: De qu manera se pueden emplear las bajas temperaturas para el

control microbiano?

Introduccin a la microbiologa . TOTORA FUNKE CASE PAG. 176

El efecto de las bajas de temperaturas sobre los microorganismos, dependen de

la especie particular y de la intensidad de su aplicacin. La tcnica de control ms
conveniente es inhibir su multiplicacin mediante el empleo de la refrigeracin o
congelacin. Una de las causan por lo que los microorganismos no se
multiplicacin a temperaturas bajas es la por la usencia de agua lquida libre. 6
5. Qu son los filtros de profundidad y filtros de membrana y como se
emplean para esterilizar lquidos? Describa el funcionamiento de una cabina
de seguridad biolgica.

FILTROS DE PROFUNDIDAD: estos consisten en materiales fibrosos o

granulosos que forman una capa gruesa rellena de canales retorcidos de
un dimetro pequeo.

FILTROS DE MEMBRANA: estos han sustituido a los de profundidad en

muchas aplicaciones estos filtros circulares son membranas porosas, con
un grosor de aproximadamente de o.1mm de acetato de clula de nitrato de
celulosa, policarbonato. Cloruro de polivinilo u otros materiales sintticos.

CABINA DE SEGURIDAD BIOLOGICA DE FLUGO LAMINAR: Utilizan

filtros de alta eficacia de retencin de partculas del aire, son uno de los
sistema de filtracin de aire ms importante, capaces de elimina l 9997% de
las partculas de 0.3um. 7

6. Exponga las ventajas e inconvenientes de la luz ultravioleta y de la

radiacin ionizante como agentes esterilizantes. Indique algunos ejemplos de
cmo se utiliza cada una con ese propsito.

LUZ ULTRAVIOLETA

RADIACIONES
IONIZANTES
6

VENTAJAS Y
DESVENTAJAS

EJEMPLOS

Es una de radiacin no
ionizante Tiene un bajo grado
de penetracin y produce
lesiones celulares formando
DIMEROS DITIMINA EN
ADN que interfieren su
relacin, la longitud de onda
ms eficaz es como
germicida es la 260 nm

Se utiliza este para

esterilizar vacunas , sueros y
toxinas y ocasionalmente
para las aguas residuales y
de bebidas

TIENEN un alto grado de

penetracin y ejerce

Prescoot . microbiologa. pag 152

Prescoot . microbiologa. pag 126
8
Introduccin a la mirobiologia . tortora funke case .pag 178-179
7

La radiacin ionizante ,
especialmente los haces de

principalmente sus efectos

ionizando el agua y
formando radicales hidroxilos
altamente radiactivos.

electrones de alta energa ,

se utilizan cada vez ms par
la esterilizacin de materiales
farmacuticos , dentales y
clnicos , como jeringas de
platico , guantes quirrgicos ,
hilos de sutura y cateteras

7. Porque el calor es el agente ms eficaz, que pasos son necesarios para

esterilizar un material que puede ser contaminado con endosporas
bacterianos?

Porque esta eficacia

Se expresa con el punto de muerte trmica, como el PMT que implica que una
temperatura es letal a pesar de sus condiciones ambientales. Pero la
destruccin decimal D es ms precisa y tiene ms aceptacin, esta tiene un
tiempo de reduccin decimal en un tiempo para destruir el 90% de los
microorganismo.
Pasos para esterilizacin
Las endosporas bacteriana se destruyeran solamente si se mantiene una
temperatura de 121C durante 10 a 12 minutos, cuando hay que esterilizar un
volumen grande, hay que alarga el tiempo de esterilizacin para que el centro
de alcance la temperatura de 121C; cinco litros de lquido pueden precisar
casi 70 minutos, debidos a estos posible inconvenientes, se suele esterilizar en
el auto clave un indicador biolgico junto con el resto de material. Este
indicador consiste normalmente en una ampolla estril con un medio y una
tirada papel cubierta de esporas de bacillius stearothermophilus o clostridium9
8. Defina la dosis reducciones decimal para la radiacin.

La seleccin de la dosis esterilizante para los productos mdicos se basa en los

resultados de investigaciones fundamentales y aplicadas en microbiologa, y est
respaldada hoy en da por una considerable experiencia prctica.
Como la esterilizacin es una funcin de probabilidad y nunca se consigue
(matemticamente) una esterilizacin absoluta, es ms exacto enfocar el proceso de
esterilizacin absoluta, es ms exacto enfocar el proceso de esterilizacin desde el
punto de vista de la tasa de destruccin que desde el ngulo del tiempo necesario para
la destruccin total. Esta TASA SE EXPRESA MATEMATICAMENTE COMO VALOR D
(factor de reduccin decimal). En este contexto son importantes las siguientes
actividades:
Obtencin experimental de datos sobre radiosensibilidad.

Prescott. microbiologa. pg. 150

Elaboracin de una curva de supervivencia en funcin de la dosis para calcular

el valor D (D10) del elemento o elementos ms resistentes de la poblacin
contaminante.
Determinacin de la influencia de los distintos factores ambientales sobre el
valor D

9. Por qu la radiacin ionizante es ms eficaz que la radiacin ultravioleta

para esterilizar productos alimentarios?
Las radiaciones ionizantes, de alta energa rayos gama o los haces de electrones
, de alta energa tienen una longitud de ondas ms cortas que la de las
radiaciones no ionizantes ,menor de 1 nm y transportan por ello mucha ms
energa.10
10. Por qu los filtros de profundidad no se usan habitualmente para
esterilizar?

La filtracin puede usarse para esterilizar lquidos termos sensibles o gases. Los filtros
pueden ser clasificados como de profundidad, de superficie o filtros de membrana
dependiendo de su composicin y caractersticas de construccin, de sus interacciones con
fluidos y partculas y de sus mecanismos de filtracin.
Porque cuando se utilizan en forma independiente, ningn tipo de filtro es lo suficientemente
efectivo y rentable para lograr los estndares o grados de esterilizacin que requiere la
industria farmacutica. La mejor manera para lograr su efectividad, a costos moderados, es
utilizar primero filtros de profundidad y de superficie para remover grandes partculas,
seguidos posteriormente de una filtracin de alta eficiencia con filtros de membrana.11

1010

Introduccin a la microbiologa. tortora funke case. pag 178

11

http://tecnologiafarmaceuticabuap.blogspot.com/p/esterilizacion-de-formas-farmaceuticas.html