1

Comportamiento del Cromo en el proceso de

fitoacumulacin utilizando Azolla filiculoides
en un medio acuoso.
Lourdes F. Orellano
a
, Edson M. Aranda
a

a
Universidad Nacional de Trujillo (UNT), Trujillo, Per.
INFORMACION DE ARTCULO
Historia del Artculo:
Recibido el 2 de Abril del 2014
Recibido en forma revisada
2 de Junio del 2014
Aceptada 15 Julio del 2014
Disponible online 14 Julio del 2014

Keywords:
Azolla Filiculoides
Fitorremediacin
Cr(III)
Cr(IV)


1. Introduccin

La gran expansin de la actividad humana
causada por el crecimiento industrial ha dado
lugar a un aumento grave y complejo en los
escenarios de la contaminacin ambiental por
compuestos orgnicos (herbicidas, plaguicidas,
taninos, pesticidas, etc.) y compuestos
inorgnicos (As, Cd, Cu, Pb, Cr, Hg, etc.) (Volke,
Seplveda y Velasco Trejo, 2002). Estos ltimos
metales pesados se encuentran entre las
sustancias ms peligrosas en el medio
ambiente, debido a su alto nivel de durabilidad
y la nocividad de los organismos vivos (Henry,
2000).
El cromo es biolgicamente inactivo en estado
metlico. Los organismos dbilmente absorben
Cr (III), pero el Cr (VI) es ms peligroso porque
sus compuestos penetran fcilmente a travs
de las barreras fisiolgicas (Mortvedt and
Giordano, 1975; Hossner et al.,1998).
En los ltimos aos, han surgido una serie de
tecnologas biolgicas de descontaminacin
entre las que se puede destacar la
biorremediacin. Dentro de la
biorremediacin, recientemente, la
fitorremediacin ha emergido como una
fitotecnologa de gran potencial para la
remediacin de suelos, aire, sedimentos y
aguas contaminadas, esta nueva tecnologa
est recibiendo una gran atencin debido a
que es una opcin ms barata fcil y
respetuosa con el medio ambiente (Cisneros,
2008) (Barcel y Poschenrieder, 2003).

ABSTRACT
El objeto de este trabajo fue investigar la capacidad de la
Azolla filiculoides (Azollaceae) y el comportamiento del
cromo dentro de ella. Se experiment con el helecho en 7
peceras con soluciones nutritivas a la cuales se aadi Cr
(III) y Cr (VI) cada uno en concentraciones de 0.1, 0.5 y 1
mg/dm
3
por 12 das para posteriormente ser analizadas por
ICP-AES. La disposicin del cromo en la planta fue
principalmente en la raz y se advirti una mayor toxicidad
y velocidad de adsorcin del Cromo(IV) frente al Cromo(III),
La Azolla mostr un comportamiento como gran
acumuladora de este metal, presentando concentraciones
de hasta 964 mg/kg dm, y rango de remocin entre 74-
100%.
2

La fitorremediacin se refiere bsicamente a la
utilizacin de plantas y los microbios del suelo
asociados para reducir las concentraciones o
txicos efectos de los contaminantes en los
ambientes (Ali, Khan, y Anwar Sajad, 2013)
(Greipsson, 2011). Se puede utilizar para la
eliminacin de metales pesados y
radionclidos as como de los contaminantes
orgnicos (hidrocarburos aromtico
polinuclear, bifenilos policlorados y pesticidas).
Es una nueva, rentable, eficiente y respetuosa
tcnica con el medio ambiente; apta para ser
aplicable in situ (Ali, Khan, y Anwar Sajad,
2013) (Clemens, 2001) (Vithanage, Dabrowska,
Mukherjee, Sandhi y Bhattacharya, 2012). Es
definida tambin como una tecnologa
emergente que utiliza diversas plantas vivas,
microorganismos o enzimas asociados a su
rizsfera, as como la aplicacin de tcnicas
agronmicas para tolerar, degradar, extraer,
inmovilizar, metabolizar o desintoxicar metales
pesados. Compuestos orgnicos, hidrocarburos
y compuestos radioactivos para hacerlos ms
biodisponibles o transformarlos a formas
menos txicas para la planta (Environmental
Protection Agency, 2000).
Las tcnicas de Fitorremediacin incluyen
fitoextraccin, fitofiltracin, fitoestabilizacin,
fitovolatilizacin, y fitodegradacin (Alkorta,
Hernndez-Allica, Becerril, Amezaga, Albizu y
Garbisu, 2004).

Fitoextraccin (tambin conocido como
fitoacumulacin o fitoabsorcin) es la
absorcin de contaminantes del suelo o del
agua por las races de las plantas y su
translocacin y acumulacin hacia la biomasa
area, es decir, sus brotes (Sekara,
Poniedzialeek, Ciura y Jedrszczyk, 2005) (Yoon,
Cao, Zhou, y Ma, 2006) (Rafati, Khorasani,
Moattar, Shirvany, Moraghebi y Hosseinzadeh,
2011). La translocacin del metal a los brotes
es un proceso bioqumico crucial y deseable
para una fitoextraccin efectiva porque la
cosecha de la biomasa de la raz generalmente
no es factible (Zacchini, Pietrini, Mugnozza,
Iori, Pietrosanti y Massacci, 2014) (Tangahu,
Abdullah, Basri, Idris, Anuar y Mukhlisin,
2011). La absorcin de cromo por las plantas es
no especfica, probablemente se da como
resultado de la absorcin de nutrientes
esencial y agua. Las plantas pueden absorber
tanto Cr (VI) y Cr (III). El cromo (VI) es ms
txico que el Cr (III) y se transporta ms
fcilmente dentro de la planta (Mortvedt y
Giordano, 1975).

Una especie muy usada en fitorremediacin es
la especie Azolla filiculoide este helecho tiene
la habilidad de fijar nitrgeno atmosfrico
gracias a su asociacin en simbiosis con una
cianobacteria que lo fija, Anabaenaazollae. La
Anabaenaazollae, que vive en las cavidades de
las frondas del helecho, es capaz de usar su
propia energa fotosinttica para fijar el
nitrgeno atmosfrico y producir amonio, lo
que es aprovechado por la Azolla para cubrir
sus propios requerimientos de nitrgeno
(Garca, 2012). Se realiz un estudio
comparativo acerca de la capacidad
depuradora de nutrientes presentes en las
aguas residuales, de tres plantas acuticas
flotantes, Azolla filiculoides, Lemnaminor y
Eichhorniacrassipes; donde sus partes
fotosintetizadoras se ubican sobre la superficie
del agua y sus races se extienden hacia abajo
dentro de la columna de agua. Se desarroll
una evaluacin de Azolla filiculoides cultivada
en el efluente de la PTAR-Suderburgo
(Alemania) utilizando sistemas por tandas
compuesto por un estanque; y otro sistema
de flujo continuo (Garca, 2012).
Las plantas de la especie Azolla se ha
convertido hoy en da en una planta
cosmopolita (Hussner, 2010). Siendo una
variedad de helecho que flota en agua y que
puede acumular metales pesados como nquel,
cadmio, mercurio o cromo (Arora, Saxena y
Kumar Sharma, 2006); estas plantas son fciles
de recolectar y se secan muy rpido (Wagner,
1997). Estas caractersticas la convierten en el
candidato perfecto para la fitorremediacin
(Cohen, Yamasaki y Mazzola, 2004).

El objetivo de este trabajo es analizar el
comportamiento del metal cromo en sus dos
3

estados ( Cr (III) y Cr (IV) )durante el proceso
de fitoacumulacin en el helecho acutico
Azolla filiculoides y con esto explicar la
capacidad de absorcin de esta ltima.

2. Materiales y Mtodos
2.1. Descripcin del Helecho
Azolla filiculoide (1-4 cm) pertenece a la
familia Azollaceae. Es comnmente famosa
como el helecho de agua, helecho mosquito y
terciopelo de agua. A. filiculoide es un helecho
acutico que se presenta en acequias y agua
estancada, aunque puede crecer en las
superficies de barro hmedo. (Fig. 1) Se
dispersa por esporas o fragmentos madre. A.
filiculoide forman una relacin simbitica con
la cianobacteria Anabaena azollae (Alga verde-
azulada fijadora de nitrgeno) que fija el
nitrgeno atmosfrico y crece en una cavidad
del lbulo dorsal de la hoja de helecho. A.
filiculoide se distribuye ampliamente en
templadas regiones del mundo, subtropicales y
tropicales.

2.2. Tratamiento y Anlisis de la planta

El experimento se realiz en 7 acuarios, cada
uno contiene una solucin de 3 dm
3
de agua de
nutrientes IRRI (Ladha et al., 1992) sin nitratos
(Azolla utiliza nitrgeno proporcionado por las
cianobacterias A. azollae). Los metales que se
examinan, Cr(III) y Cr (VI) se introdujeron
(CrCl3.3H2O y K2Cr2O7), cada uno en cantidad
de 0.1; 0.5 y 1.0 mg dm
3
respectivamente. Uno
de los acuarios, que contiene slo medio
nutriente IRRI, se utiliz como control. Al
comienzo del experimento se aadi 20 g
(peso fresco) de A. filiculoide a cada acuario.
Durante 12 das del experimento se
mantuvieron los siguientes parmetros: el aire
atmosfrico, pH entre 5.5 6 y la temperatura
del agua (25 C), La humedad de la atmsfera
(70-75%), fotoperiodo de 13/11. Despus de 12
das de cultivo se recogi la biomasa obtenida,
y se pes (peso fresco), se sec a 80 C por 24
horas (masa seca). La materia seca de A.
filiculoide fue mineralizada (en HNO3) para la
preparacin de soluciones para la
determinacin del contenido de metales en la
biomasa. La determinacin de concentracin
de iones particulares en la solucin se llevaron
a cabo mediante mtodo ICP-AES
(espectroscopia de emisin atmica de plasma
acoplado por induccin).

3. Resultados y Discusiones:
Los resultados obtenidos se presentan en la
Tabla 1, Fig. 2y Fig. 3.
Los experimentos realizados con el cromo se
caracterizan por una alta disminucin de este
elemento en la solucin de nutrientes. La
concentracin de Cr (III) se redujo a 0.02 mg
/dm
3
en el acuario con 0.1 mg de Cr/ dm
3
. La
concentracin de este metal cay de 0.3 a
0.06 mg/dm
3
en el experimento con cromo
(III) a 0.5 mg/dm
3
. En el de 1,0 mg/dm
3
, la
concentracin disminuy 0.78 a 0.25. Estas
disminuciones significaron un 91%, 90% y 74%
de la concentracin inicial de Cr (III) para los
tratamientos de 0.1, 0.5 y 1 mg/ dm
3

respectivamente (Fig. 2A).
En el acuario con 0.1 mg /dm
3
de Cr (VI), en el
cuarto da del experimento la concentracin








Fig. 1. Azolla filiculoide en estado natural en un estanque (A). A.filiculoide en vista ampliada y su
distribucin en el agua

A
B
4

de Cromo estaba por debajo del lmite de
deteccin. En el experimento con 0.5 mg/dm
3

de Cr (VI) la concentracin de este metal se
redujo desde 0.37 hasta 0.08 mg/dm
3
y en el
acuario con 1.0 mg/dm
3
el cromo disminuy a
0.124 mg/dm
3
.
La disminucin de Cr (VI) a partir de la solucin
de nutrientes constituye un 100%, 84% y 88%
para los tratamientos con Cr (VI) de 0.1, 0.5 y 1
mg/ dm
3
respectivamente (Fig. 2B).

El aumento de biomasa dependi de la
composicin del medio nutriente. La biomasa
aument hasta tres veces en el acuario de
control (aproximadamente 60 gmf). El mayor
incremento en la biomasa vegetal se observ
en los experimentos con 0.1 y 0.5 mg/ dm
3
de
cromo (III) . El helecho cultivado en ellos era
de color verde claro y tena hojas grandes y
convexas.
Un nivel de 1.0 mg/dm
3
de Cr (III) en la
solucin de nutrientes caus una disminucin
del crecimiento de A. filiculoides en alrededor
del 34%. El aumento de la biomasa vegetal en
los experimentos con Cr (VI) fue menor que
con los de Cr (III). Cr (VI) caus la inhibicin del
crecimiento de la biomasa A. filiculoides en
aproximadamente 20-27%.
Esto confirma los resultados de otros
experimentos, que a menores concentraciones
de Cr (VI) se produce mayor toxicidad en
organismos vivos en comparacin al Cr (III)
(Mortvedt y Giordano, 1975; Mukherji y Roy,
1978;. Hossner et al, 1998).


Los datos obtenidos y mostradas en la Fig 3
demuestran una mayor adsorcin de Cromo
depositada en las races, 607 y 198 mg/kg dm
para Cromo (III) y Cromo (VI) respectivamente;
para las hojas , 357 y 158 mg/kg dm para
Cromo (III) y Cromo (VI) respetivamente
(Bennicelli et al., 2004). Se sabe que el cromo
tiene un efecto directo sobre la raz y un efecto
indirecto sobre las hojas, y su transporte por el
interior de la especie se debe a los mecanismos
que este adopte en su interior.
A
Tabla 1. Biomasa y concentracin de cromo en A. filiculoides despus de 12 das de cultivo
Fig. 2 La concentracin de los metales en medio
nutriente para 12 das: (A) Cr (III), (B) Cr (VI)
5


B


Fig.3. (A) Concentracin de Cr
+3
despus de 12
das en la raz y en la fronda (tallos y hojas),
(B) Concentracin de Cr
+6
despus de 12 das
en la raz y en la fronda (Tallos y hojas).
La absorcin de Cr (VI) ha sido reportada como
la aparicin de un mecanismo activo, mientras
que el Cr (III) es pasivo (porque no origina
gasto de energa a la planta), esto indica que
las dos formas no comparten un mecanismo de
captacin en comn (Skeffington et al., 1976;
Hossner et al.,1998).
El cromo puede compartir mecanismos
similares al Fe y Ni, este se puede trasportar a
la membrana plasmtica de la raz (la mayor
parte de plantas vasculares absorben los
metales pesados y txicos a travs de sus
races). La correlacin positiva indica que
algunos Fe o Ni de plantas hiperacumuladoras
tambin pueden ser hiperacumuladoras de Cr,
e implica que el Cr puede tener translocacin y
compartir mecanismos similares a los de Fe y
Ni (Hossner et al., 1998).
El Cromo (III) se absorbe mnimamente por la
raz y su transporte desde la raz hasta otras
partes es baja (Streir y Stumm, 1993, Shukla et
a, 2012). Una vez en el xilema, CrO
4
-2
es ms
fcilmente transportado que el Cr (III) porque
este ltimo est obligado a un intercambio
inico con las paredes de los vasos o se haya
precipitado como Cr(OH)
3
(Hossner et al.,
1998).
La absorcin de Cr (VI) se produce rpidamente
y reacciona con compuestos orgnicos
reducindose rpidamente a Cr (III) (Hossner et
al,1998). De ah la acumulacin de Cr(III) es
mayor a la de Cromo (VI) al pasar los das. La
fitotoxicidad del cromo aparece como
marchitamiendo grave o clorosis en las plantas.
(Turner y Rust, 1971). La clorosis, la cual
aparece en las hojas superiores de la planta, ha
sido propuesta como un efecto indirecto del
cromo, probablemente debido a la
translocacin retardada por Fe y Zn. El
principal efecto txico es el dao a la
membrana debido al alto potencial de
oxidativo de Cr (VI). (Hossner et al,1998).
4. Conclusiones:
Los resultados obtenidos sugieren que la A.
filiculoides tiene la capacidad de acumular
grandes cantidades de cromo en su biomasa.
(83-964 mg/kgdm), depositndose
principalmente en las races. El cromo es
absorbido por la planta confundido como uno
de sus nutrientes y posteriormente
transportado por el xilema.
El Cromo (VI) advierte un mecanismo activo de
absorcin frente al mecanismo pasivo del
Cromo (III).La toxicidad del Cromo (VI) reside
en su alta capacidad oxidativa una vez en
contacto con el tejido orgnico.
El aumento de biomasa dependi de la
composicin del medio nutriente. El
crecimiento de la biomasa se vio inhibida
0
100
200
300
400
500
600
700
m
g
/
K
g

d
e

d
m

Cr III
Raiz
Hojas y
Tallo
0
50
100
150
200
250
m
g
/
K
g

d
e

d
m

Cr IV
Raiz
Hojas y
Tallo
6

entre un 20 al 34% por la presencia de Cromo
en el medio.
Se observa una reduccin significativa del
cromo en los diferentes medios
experimentados, porcentajes entre los 74-
100% de remocin, respaldando la capacidad
fitoextractora de la Azolla filiculoide.

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