Cdigo: UPT-PIB-01BIM-ES Pgina 1 de 4

Fecha Rev.: 01-09-2013 Nm. Rev.: 02

Elabor:
Dr. Eric Ortega Snchez Dr. Ricardo
!ernndez "art#nez
Revi$: %cademia de &iotecnolog#a
%'rob: Dr. Sal (lec)ilt &eri$tain
Prctica 1. Efecto de la temperatura o!re la acti"idad # la "elocidad e$%imtica
1. &!'eti"o( )utificaci*$ # +lca$ce.
1.1 &!'eti"o.
P*E: Eval)ar el e+ecto de la tem'erat)ra $obre la actividad la velocidad enzimtica de )na
,ilana$a
1.2 )utificaci*$.
En las ltimas dcadas, las xilanasas han recibido gran importancia por las mltiples
aplicaciones en la industria de la panadera, repostera, papelera, textilera etc. Debido a su
amplio campo de aplicacin, es primordial conocer las variables de proceso (temperatura,
pH, concentracin de sustrato, etc) que afectan la actividad de las enzimas para encontrar
las condiciones ptimas para la aplicacin industrial ya que actualmente, las xilanasas
representan el 20% del mercado de las enzimas (Sivarmakrishnan et al, 2006)
1.3 +lca$ce.
-a 'rctica $e realizar en el laboratorio de biotecnolog#a .-(/0 de la 1niver$idad
Polit2cnica de (la,cala
2. Se,uridad # declaracio$e
2.1 I$dicacio$e de e,uridad
3 (oda$ la$ actividade$ 4)e $e realicen debern e$tar $)'ervi$ada$ 'or el docente
re$'on$able.
3 E$ obligatorio 4)e todo$ lo$ integrante$ del e4)i'o )$en bata5 calzado adec)ado
g)ante$.
2.2 T-rmi$o epec.fico
%mila$a$. Enzima$ encargada$ de hidrolizar el almidn. -a gl)co$a e$ el 'rod)cto de la
hidrli$i$ del almidn
%lmidn. Princi'al 'oli$acrido de re$erva en la$ 'lanta$ $emilla$. Con$tit)ido de
monmero$ de gl)co$a.
%ctividad enzimtica. "edida de la cantidad de enzima activa 're$ente 4)e denota la
cantidad de 'rod)cto liberado o $)$trato tran$+ormado 'or )nidad de tiem'o. -a actividad
e$ de'endiente de la tem'erat)ra5 '!5 concentracin de $)$trato5 etc.
2.3 /i,e$cia
Inicio 01/09/2014 al 10/12/2014
3. 0earrollo de la prctica
3.1 Material # e1uipo de la!oratorio re1uerido para la prctica
2+3TI0+0 M+TE4I+5 M+TE4I+5 0E5
ESTU0I+3TE
6 E$'t)la
6 Piceta 78 g de $alvado de trigo
Doc)mento Controlado
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Prctica 1. Efecto de la temperatura o!re la acti"idad # la "elocidad e$%imtica
6 "echero 1ni+orme a'ro'iado
6 9a$o de 'reci'itado$ /78 ml :)ante$
6 %gitador 1ni+orme a'ro'iado
1 "icro'i'eta$ 6ml
6 Parrilla de agitacin
; P)nta$ az)le$
6 :radilla
6 (ermmetro
6 Potencimetro
6 E$'ectro+otmetro
3.2 Material de vidrio.
2+3TI0+0 M+TE4I+5 M+TE4I+5 0E5
ESTU0I+3TE
< ()bo$ de en$ae con ro$ca ancha :)ante$
6 9a$o de 'reci'itado$ de 688m- 1ni+orme a'ro'iado
6 "atraz a+orado de 688ml
3.3 Suta$cia o i$umo
2+3TI0+0 4E+2TI/&S M+TE4I+5 0E5
ESTU0I+3TE
6 =ilano 8.7> :)ante$
/ ?cido c#trico citrato de $odio 1ni+orme a'ro'iado
6 DNS Reactivo$ 're'arado$
6 E,tracto enzimtico 'reviamente
6 !Cl
6 NaO!
6 (@een
3. 4 Procedimiento experimental.
Primera parte: Obtencin del extracto enzimatico
Propagar la cepa fngica en matraz con medio PDA.
Recuperar las esporas con Tween 0.05% y ajustar el inoculo.
Definir una altura y ajustar la umedad !"0%# del leco !sal$ado de trigo o olote de ma%z#
&nocular e incu'ar en c(mara umeda a )0 *+.
Recuperar el e,tracto enzim(tico- con agua destilada y centrifugar a 5000 rpm por .0 min.
Preparaci*$ de la uta$cia6
a7 Prepare 50 mL de 82l 23 # 3a&8 23. Realice lo$ clc)lo$ nece$ario$.
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Prctica 1. Efecto de la temperatura o!re la acti"idad # la "elocidad e$%imtica
!7 Prepare 100mL de amortiguador de citratos 50mM, pH 66 Realice lo$ clc)lo$
'ertinente$ tomando en c)enta la$ con$ideracione$ 'ara $eleccionar )n amortig)ador.
%A)$tar el '! con !Cl /N NaO! /N5 $egn $ea el ca$o 'ara obtener el '! de$eado de <.
c7 Prepare 90m5 de :ila$o de a!edul al 0.9;6 Caliente la $ol)cin de amortig)ador de
citrato$ ante$ mencionado a 78 BC 'or 67 min l)ego di$)elva el ,ilano lentamente en
condicione$ de agitacin de /88r'm 'or 67min.
d7 Prepare 100mL de DNS: Di$olver en ;8m- de ag)a de$tilada 6g de NaO! l)ego lo$
$ig)iente$ com'onente$ en el orden de a'aricin. 6g de DNS5 8./g Fenol5 8.87g $)l+ito de
$odio .Na/SOC05 /8g (artrato de $odio de 'ota$io. %+orar ha$ta 688m-
e7 Prepare una curva estndar de glucosa Proporcionada por el docente!
2ulti"o para producir e$%ima
a0 S)$trato. %dicione 7 g de $alvado de trigo a matrace$ de /78m- .4ealice por duplicado0
b0 Dnc)lo. "ezcle ;ml de $)$'en$in de e$'ora$ .proporcio$ado por el doce$te0 con ;ml
de ag)a
c0 Dnoc)lacin. %dicione el vol)men de inc)lo al $)$trato mezcle con )na e$'t)la
d0 Fermentacin. Ponga ta'n de algodn a lo$ matrace$ e inc)be lo$ matrace$ a C8BC 'or ;
o 7 d#a$.
4ecolecci*$ de e$%ima
a0 %dicione C8 a ;8 m- de ag)a de$tilada a lo$ matrace$ donde creci el microorgani$mo
b0 %gite 'or 68min a tem'erat)ra ambiente5 +iltre centri+)g)e el l#4)ido rec)'erado
+cti"idad e$%imtica6
a0 Poner baEo$ mar#a a tem'erat)ra$ de C75 ;85 785 775 <8 <7BC $egn $e tenga la
di$'onibilidad de lo$ e4)i'o$.
b0 Por cada tem'erat)ra a en$aar $e deben eti4)etar do$ t)bo$ como % &. %gregar a
ambo$ F88G- del ,ilano 8.7> 4)e $e 're'ar 'reviamente.
c0 Poner lo$ do$ t)bo$ a la tem'erat)ra de$eada agregar /88G- de e,tracto enzimtico
rec)'erado.
d0 DeAar inc)bar lo$ t)bo$ a la tem'erat)ra re$'ectiva 'or 68min.
e0 % lo$ do$ t)bo$ agregar 6.7m- del reactivo DNS5 mezclar en 9rte,
+0 "antener lo$ do$ t)bo$ en eb)llicin 'or 7min en baEo "ar#a
g0 En+riar todo$ lo$ t)bo$ $)mergi2ndolo$ en ag)a corriente
h0 -eer la ab$orbancia de la$ m)e$tra$ a <;8nm.
i0 Calc)lar la actividad .%b$ <;8nm , 70*.8.6F,68,'endiente de la c)rva e$tndar0H 1*m-
A0 :ra+icar actividad contra tem'erat)ra
3.4 +3&T+4 5&S 4ESU5T+0&S 0E5 E<PE4IME3T&6
1.- P=E6 >rfico( E1uema( etc.
2.- 2o$cluio$e del etudia$te
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IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII
4. 4efere$cia
4.17 Procedimie$to relacio$ado
No existen procedimientos relacionados
0ocume$to de refere$cia
Neelima %rora et al. ./88J0 Com'arative characterization o+ commerciall im'ortant ,lana$e
enzme$. &ioin+ormation C.680: ;;<K;7C.
9. +$e:o
2omparati"o de lo "alore o!te$ido
9.17 ?ormato # dia,rama6
T.tulo 2*di,o
9.27 I$formaci*$6
"a'a de 'roce$o del 'rocedimiento
Olvide mencionarle$ 4)e tienen 4)e entregarme )na bitcora el d#a 4)e entren al laboratorio.
Contenido: (it)lo5 introd)ccin .revi$in bibliogr+ica realizada 'or )$tede$05 obAetivo5 metodolog#a5
re+erencia$ e$ta$ deben e$tar como re+erencia$ en el te,to.
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