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REACCIONES ANTGENO ANTICUERPO

TEMA 10

REACCIONES ANTGENO / ANTICUERPO Y SUS APLICACIONES.

OBJETIVOS ESPECFICOS

Al finalizar el tema el estudiante podr:

1. Explicar el papel de la respuesta inmune en las enfermedades infecciosas.

2. Citar los factores que afectan la reaccin antgeno anticuerpo.

3. Discutir brevemente el fundamento, la aplicacin e interpretacin de los resultados de las
siguientes reacciones antgeno / anticuerpo.

Neutralizacin
Precipitacin
Aglutinacin
Inmunofluorescencia

4. Sealar las caractersticas y actividades biolgicas del complemento.

5. Discutir brevemente el fundamento, la aplicacin e interpretacin de los resultados de la
prueba de fijacin de complemento.

6. Elaborar un cuadro comparativo de las reacciones antgeno / anticuerpo, incluyendo:

Tipo de antgeno, clase de Anticuerpo involucrado, sensibilidad y aplicaciones.
REACCIONES ANTGENO-ANTICUERPO


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REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO

Las reacciones antgeno-anticuerpo se estudian ms fcilmente "in vitro" utilizando prepara-
ciones de antgenos y antisueros.

El estudio de las reacciones antgeno-anticuerpo "in vitro" se denomina serologa y es de
especial importancia en la microbiologa diagnostica.

En las reacciones antgeno-anticuerpo se distinguen 2 fases: la primera consiste en la unin
del antgeno con el anticuerpo y la segunda en las manifestaciones que resultan de dicha
unin. La primera fase se realiza por la combinacin de reas pequeas tanto del antgeno
como del anticuerpo, denominadas respectivamente determinante antignico y sitio activo,
que al unirse forman un complejo antgeno-anticuerpo. La reaccin es reversible, siguiendo,
por consiguiente, la ley de accin de masas y existen factores externos que pueden modifi-
car dicha unin, como son: el pH, la temperatura y la fuerza inica.

Dependiendo de la naturaleza del antgeno y del anticuerpo y de las condiciones de la reac-
cin se pueden observar diferentes tipos de reacciones serolgicas:

Neutralizacin

Mediante anticuerpos especficos se pueden neutralizar toxinas, virus o enzimas, Los anti-
cuerpos neutralizantes requieren un solo tipo de combinacin con el antgeno para poder
actuar y as pueden ser univalentes, aunque anticuerpos bivalentes o multivalentes pueden
neutralizar tambin. Un antisuero que contiene anticuerpos neutralizantes contra una toxina
se denomina "antitoxina".





















(a) Accin de una toxina (b) Neutralizacin

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Precipitacin

La reaccin de precipitacin ocurre cuando se combina un anticuerpo, por lo menos divalen-
te, con un antgeno soluble y esto conlleva a la formacin de agregados que precipitan. Co-
mo las reacciones de precipitacin son fcilmente observables "in vitro", stas resultan prue-
bas serolgicas muy tiles, especialmente para medir concentraciones de anticuerpos. Para
que la precipitacin ocurra en forma mxima se necesita que tanto el antgeno como el anti-
cuerpo estn en concentraciones ptimas, cuando cualquiera de los reaccionantes estn en
exceso no se pueden formar grandes agregados antgeno-anticuerpo.



























Reaccin de precipitacin


Aglutinacin

Cuando un antgeno particulado reacciona con su anticuerpo especfico (divalente por lo me-
nos) se observa la formacin de grumos o agregados de estas partculas, esto se conoce
como aglutinacin. En estas reacciones el determinante antignico est sobre la superficie
de una partcula o de una clula.

Estas reacciones son ms sensibles que las de precipitacin para detectar pequeas canti-
dades de anticuerpos, debido a que relativamente pocas molculas de anticuerpo pueden
unir efectivamente un gran nmero de partculas de antgeno en grumos gruesos macrosc-
picamente visibles. Es por esto que cuando queremos aumentar la sensibilidad de una reac-
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cin de un antgeno soluble con su anticuerpo especfico, se transforma el antgeno soluble
en particulado adsorbiendolo o unindolo qumicamente a estructuras particuladas tales co-
mo esferas de ltex o arcilla coloidal y de esta manera pueden ser detectados los anticuer-
pos por reacciones de aglutinacin, estos ensayos se conocen como ensayos de AGLUTI-
NACION PASIVA.

Tambin se pueden aglutinar glbulos rojos y este fenmeno se conoce como HEMAGLU-
TINACION. Los anticuerpos pueden reaccionar con antgenos de los glbulos rojos, u otros
antgenos que se pueden adsorber a los glbulos rojos y observarse hemaglutinacin cuan-
do se una el anticuerpo especfico.




























Apariencia de clulas bacterianas aglutinadas por anticuerpos contra (a) Antgenos somti-
cos (b) Antgenos flagelares

Inmunofluorescencia

Es una tcnica donde las molculas de anticuerpos son convertidos en sustancias fluores-
centes, unindoles qumicamente a compuestos orgnicos fluorescentes tales como isotio-
cianato de fluorescencia o rodamina B Esto no altera la especificidad del anticuerpo pero
hace posible su deteccin cuando est unido a clulas o tejidos usando un microscopio para
fluorescencia. Los anticuerpos fluorescentes son de considerable utilidad en microbiologa
diagnstica.

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Preparacin de anticuerpos fluorescentes acoplando el colorante fluorescente isotiocianato
de fluorescena al anticuerpo

Para demostrar la presencia de antgenos o clulas bacterianas utilizando anticuerpos fluo-
rescentes, existen dos procedimientos: el mtodo directo y el indirecto.

En el mtodo directo, el anticuerpo marcado es especfico contra el antgeno .




















Inmunofluorescencia. Mtodo directo

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En el mtodo indirecto, la presencia del anticuerpo especfico sobre la superficie de la clula
es detectado por el uso de otro anticuerpo fluorescente dirigido contra el anticuerpo espec-
fico.


















Complemento

Adems de las reacciones antgeno-anticuerpo ya descritas, existen otros tipos de reaccio-
nes de gran importancia en inmunidad donde participa el Complemento.

El complemento acta junto con los anticuerpos especficos para llevar a cabo varios tipos
de reacciones antgeno-anticuerpo que de otra manera no podran ocurrir, tales como: lisis
de clulas bacterianas, muerte de clulas bacterianas, hemlisis, etc.

El complemento no es un anticuerpo (por lo tanto no aumenta con la inmunizacin), sino una
serie de enzimas que se encuentran en el suero normal y que atacan a las clulas bacteria-
nas u otros agentes extraos. Estas enzimas, que se encuentran an en individuos no
inmunizados, son normalmente inactivas, pero se activan cuando ocurre una reaccin ant-
geno-anticuerpo.Una de las principales funciones del anticuerpo es reconocer las clulas
invasoras y activar el sistema del complemento para que acte. Ciertos componentes del
complemento son muy termolbiles, se destruyen por calentamiento a 56C por 30 minutos,
por otra parte los anticuerpos son termoestables.

Acciones del complemento

Entre las principales acciones del complemento tenemos:

Lisis de los glbulos rojos (hemlisis)

Si un antisuero contra glbulos rojos se mezcla con una suspensin de glbulos rojos y se le
aade suero normal como fuente de complemento ocurre la lisis a los 30 minutos de incuba-
cin a 37C. La hemlisis se usa a menudo como prueba de la presencia de complemento
en sueros desconocidos o para medir la fijacin de complemento.

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Lisis bacteriana

Especialmente de bacterias Gram negativas, cuando los anticuerpos especficos se combi-
nan con el antgeno de la superficie bacteriana en presencia de complemento.

Muerte microbiana

En ausencia de lisis ocurre la muerte microbiana cuando los anticuerpos especficos se
combinan con los antgenos de la superficie bacteriana en presencia de complemento.

Promocin de la accin fagocitaria:

Cuando se combinan bacterias capsuladas con el anticuerpo especfico en presencia de
complemento se promueve la accin fagocitaria Este proceso en el cual los anticuerpos es-
pecficos ms complemento hacen una clula susceptible a la fagocitosis se llama OPSONI-
ZACION.

Prueba de fijacin de Complemento

Una propiedad importante del sistema del complemento es que sus componentes son enzi-
mticamente alterados durante la reaccin, de modo que no reaccionarn en una nueva se-
cuencia de reacciones, es decir si el complemento es consumido durante las reacciones
antgeno-anticuerpo esto es llamado FIJACION DE COMPLEMENTO y ocurre cuando un
anticuerpo de tipo IgG o IgM reacciona con el antgeno en presencia de complemento, an
cuando ste no sea requerido en la reaccin.

La prueba de fijacin de complemento se lleva a cabo en dos fases. En la fase primera se
mezclan el suero del paciente (previamente calentado a 56C) y el antgeno en presencia de
una cantidad determinada de complemento; esta mezcla es generalmente incubada durante
30 minutos a 37C. Si se forman los complejos antgeno-anticuerpo, el complemento es fija-
do. En la segunda fase se aade el sistema indicador que consiste en glbulos rojos de
carnero y anticuerpos contra glbulos rojos de carnero. La ocurrencia de hemlisis indica
que el complemento no fue utilizado por lo tanto, en la fase 1 no se ha producido una reac-
cin Ag-Ac especfica. En cambio, la ausencia de hemlisis, indica que el complemento ha
sido fijado y por lo tanto que en la fase 1

se ha producido una reaccin Ag-Ac, en este caso se considera una reaccin de fijacin del
complemento positiva, mientras que en el primer caso se considera negativa la reaccin de
fijacin de complemento. (Fig. 11.16). Utilizando un antgeno conocido, esta tcnica puede
ser empleada para detectar y medir anticuerpos presentes en sueros. Al ocurrir la reaccin
del antgeno con los anticuerpos del suero, sta reaccin Ag-Ac se puede poner de mani-
fiesto mediante una prueba de fijacin de complemento.








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Fijacin de complemento positiva
No hay hemlisis
37C x 30
Incubacin
Fijacin de complemento negativa
Hay hemlisis
37C x 30 Incubacin
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BIBLIOGRAFA

Madigan M.T, Martingo J . M. y J ack Parker. 2004. Dcima Edicin. Brock Biologa de los
Microorganismos Prentice Hall

Tortora G. J ., B. R. Funke and Ch. L. Case 2007. Introduccin a la Microbiologa 9
na
Edicin.
Editorial Mdica Panamericana.


Magaly Pedrique de Aulacio
Norma De Castro.
Universidad Central de Venezuela
Facultad de Farmacia
Departamento de Microbiologa y Parasitologa
Marzo 2000
Revisin 2008

ACTIVIDADES ADICIONALES

Qu se conoce como mtodo ELISA?. Seal dos aplicaciones.

Qu se conoce como anticuerpos monoclonales? Cite algunas aplicaciones.

Haga un esquema donde seale la ubicacin del timo, bazo, y principales ganglios linfticos.

Busque en un diccionario de ingls tcnico la traduccin al espaol de las siguientes pala-
bras:

Abscess
Agranulocyte
Attack
Barrier
Blood vessel
Burns
Chemotaxis
Cytokine
Damaged cells
Erytrocite
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Harmful
Injury
Insect bites
Lymph nodes
Mast cell
Platelet
Skin
Spleen
Tissues
Tonsil